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Western Blot技术详细操作步骤
Western Blot技术详细步骤蛋白质印记（Western Blot）是一种常用的生物技术，用于检测特定蛋白质在细胞提取物中的存在。
Western Blot基本步骤如下：1. 准备样品和设备：收集细胞或组织样品，然后使用适当的细胞裂解缓冲液将细胞破碎。
前处理样本并测定蛋白质浓度。
准备凝胶电泳设备，包括聚丙烯酰胺凝胶和Tris-glycine SDS运行缓冲液。
2. 凝胶电泳：将处理好的样品与样品缓冲液混合并加热，然后将其加载到凝胶孔中。
接着将预染蛋白质分子量标记也加载至凝胶中。
开始分子量依赖的电泳，使蛋白质在凝胶中分离。
3. 转印：将蛋白质从凝胶转移到结构更加稳定的膜载体，如聚偏氟乙烯 （PVDF）或者硝酸纤维素膜。
使用电转印或半干转印设备进行转移。
4. 封闭：为防止非特异性结合，使用5%无脂奶粉或BSA溶于TBST （Tris-缓冲的盐水加Tween 20）在膜上进行封闭。
一般封闭时间约为1小时，根据实验需求可调整。
5. 第一抗体孵育：将特异性的一抗稀释 （通常为多克隆或单克隆抗体），然后在封闭液中孵育膜。
根据抗体浓度与孵育时间进行相应优化。
6. 清洗：使用TBST清洗膜，以去除未结合的一抗。
通常需要清洗3次，每次5-10分钟不等，避免一抗非特异性结合。
7. 第二抗体孵育：将标记有荧光或酶的二抗稀释后，再次孵育膜。
封闭液中的二抗通常是与一抗长在不同宿主动物中的特异性抗体。
孵育时间需要优化。
8. 清洗：再次清洗膜，以去除未结合的二抗。
重复步骤6的清洗方法。
9. 检测：将膜放入检测设备中，如化学发光仪、荧光扫描仪等。
等待信号产生并记录结果。
测定蛋白质相对表达量的强度并进行定量分析。
10.数据分析：使用图像处理软件进行定量分析，如ImageJ等软件，并进行归一化处理，一般以内参蛋白（如β-actin, GAPDH等）数据为基准。
以上就是蛋白印记的基本操作步骤，具体细节及操作条件可能因实验室环境和试剂不同而有所差异。
《westernblot精华》课件
《Western Blot精华》PPT 课件
在这份《Western Blot精华》PPT课件中，我们将深入讲解Western Blot的原 理、步骤和应用，并探讨其与其他生物技术的联系与区别。
Western Blot简介
Western Blot是一种常用的生物技术，通过将目标蛋白质从多种混合物中分离和定位，帮助研究者分析 蛋白质的表达水平和特征。
蛋白质转移
蛋白质转移是Western Blot实验的关键步骤之一，将电泳分离得到的蛋白进行转移到蛋白转移膜上。
1
原理和步骤
详细解释蛋白质转移的原理和具体的步骤。
2
蛋白质转移膜的选择和处理
讨论选择合适的蛋白质转移膜和相关的处理技巧。
3
蛋白质转移的效果和监测
讲解蛋白质转移后的效果评估和监测方法。
Western Blot研究
SDS-PAGE电泳
SDS-PAGE电泳是Western Blot实验的关键步骤，用于分离蛋白质并定位目标蛋白带。
1
原理和步骤
解释SDS-PAGE电泳的原理和具体的操作步骤。
2
PAGE电泳分离和定位目标蛋白带。
3
凝胶染色和去染色
介绍凝胶染色和去染色的方法和常用技巧。
总结
这一节将总结Western Blot实验的要点和注意事项，并探讨其技术的优点和局限性，为进一步的研究提 供思考和展望。
实验的要点和注意事项
总结进行Western Blot实验时 需要特别注意的关键要点。
技术的优点和局限性
分析Western Blot技术的优点 和当前的局限性。
进一步思考和展望
提出关于Western Blot实验的 更深入思考，并展望可能的 未来发展方向。
western blot原理
western blot原理
Western blot是一种常用的蛋白质分析技术，用于检测目标蛋
白质在样品中的存在和定量。
其原理基于蛋白质的分子量以及特异性抗体的结合能力。
首先，将待测样品经过蛋白质电泳分离，根据蛋白质的分子量大小在凝胶中形成条带。
然后，将凝胶中的蛋白质转移到固定在膜上的尼龙或聚vinylidene fluoride(PVDF)膜上，这个过程
称为电转印。
转移完成后，将膜进行封闭以防止非特异性结合，并将膜与特异性的抗体经过孵育。
接着，使用次级抗体与被检测蛋白质特异性抗体进行结合。
这些次级抗体通常是将小鼠或兔抗体注入到其他动物中产生的。
并且，次级抗体通常标记有一种酵素，如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)。
通过这种方式，当次级抗体与特异
性抗体结合并与目标蛋白质形成复合物时，可以通过化学反应产生可见的信号。
最后，通过一系列实验步骤，利用比色法或化学发光方法检测蛋白质与特异性抗体的结合情况，从而确定待测样品中目标蛋白质的存在和定量。
综上所述，Western blot利用蛋白质电泳和特异性抗体的结合
原理来检测目标蛋白质在样品中的存在和定量。
通过将蛋白质从凝胶转移到膜上，并使用特异性抗体和次级抗体进行结合，然后通过化学反应产生可见信号，最终确定目标蛋白质的存在。
westernblot原理及步骤
westernblot原理及步骤Western blot原理及步骤。
Western blot（简称WB）是一种常用的蛋白质分析技术，通过检测特定蛋白在混合物中的存在和量来研究蛋白质的表达和功能。
它是一种通过特异性抗体对蛋白质进行识别和检测的方法，具有高灵敏度和高特异性的特点。
本文将介绍Western blot的原理及步骤，希望能对初学者有所帮助。
一、原理。
Western blot的原理基于蛋白质的电泳分离和免疫检测。
首先，待检样品经过SDS-PAGE凝胶电泳分离，然后将蛋白质转移到聚丙烯酰胺膜（PVDF）或硝酸纤维素膜上。
接下来，膜上的蛋白质与特异性的一抗结合，再与二抗结合，形成特定的免疫复合物。
最后，通过化学发光或染色等方法检测蛋白质的存在和量。
二、步骤。
1. 样品制备。
将待检样品加入SDS-PAGE样品缓冲液，并在100℃水浴中煮沸5分钟，使蛋白质变性。
然后冷却至室温，并离心去除沉淀物。
2. 凝胶电泳。
将样品加载到SDS-PAGE凝胶孔中，进行电泳分离。
根据蛋白质大小选择合适的分离凝胶浓度和电泳条件。
3. 转膜。
将凝胶中分离的蛋白质转移到PVDF或硝酸纤维素膜上，通常使用半干法或湿法转膜。
4. 封闭。
将转膜浸泡在牛血清蛋白（BSA）或非脂奶粉的封闭缓冲液中，阻断非特异性结合位点。
5. 抗体孵育。
将特异性的一抗加入封闭转膜的缓冲液中，孵育一定时间，使一抗与目标蛋白结合。
6. 洗涤。
用洗涤缓冲液洗涤转膜，去除未结合的一抗。
7. 二抗孵育。
将与目标蛋白特异性结合的二抗加入转膜的缓冲液中，孵育一定时间，形成特异性的免疫复合物。
8. 洗涤。
用洗涤缓冲液洗涤转膜，去除未结合的二抗。
9. 检测。
通过化学发光或染色等方法检测蛋白质的存在和量，最终得到Western blot结果。
总结。
Western blot技术是一种重要的蛋白质分析方法，具有高灵敏度和高特异性的优点。
掌握其原理及步骤对于科研工作者来说至关重要，希望本文能够对初学者有所帮助。
western blot原理
western blot原理
Western Blot是一种常用的分子生物学实验技术，旨在检测和
分离特定蛋白质的方法。
该技术基于蛋白质的分子量差异和亲和性分离效应。
首先，蛋白质样品需要经过电泳分离，通常是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行分离。
SDS-PAGE中，样品中的
蛋白质会被不带电的SDS包膜所覆盖，使得蛋白质带有负电荷。
之后，这些带有负电荷的蛋白质会被电场引力依据其分子量大小而迁移，从而在聚丙烯酰胺凝胶上分离得到。
然后，将经过分离的蛋白质转移到一个膜上，通常是聚乙烯二醇或聚维尼尔丙烯酰胺膜。
这个过程被称为电转移。
转移到膜上的蛋白质保持了相同的排列方式，以便进行后续的检测。
接下来，膜被孔隙充满的非特异性蛋白质、胶原蛋白等阻塞物浸泡，以防止非特异性的蛋白质与特定抗体非特异地结合。
在这之后，将特定的一抗（一种针对感兴趣蛋白质的抗体）加入膜上与特定的蛋白质结合形成复合物。
经过洗涤，使非特异性抗体被彻底洗除。
为了检测复合物，通常需要给予一抗一个标记。
通常使用放射性同位素（如^125I），酶（如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶）或荧光标记剂。
标记剂的选择取决于进一步检测的方法。
最后，利用放射活性计数器、酶连显色法或荧光显微镜等设备
对膜进行成像，可量化检测特定的蛋白质。
总之，Western Blot技术利用蛋白质的分子量差异和亲和性分离效应，将蛋白质分离、转移到膜上、与特定抗体结合，并通过标记剂检测来获得特定蛋白质的信息。
这是一种广泛应用于生物学研究中的分析工具。
westernblot原理及过程
westernblot原理及过程
1、Western Blot的原理是：蛋白质是带电的，在聚丙烯酰胺凝胶中通过SDS-PAGE分离蛋白质后，蛋白质被固定在凝胶中。
当凝胶被转移到支持物（例如NC膜或PVDF膜）上时，蛋白质在膜上保留其电荷。
通过针对特定氨基酸序列的特异性抗体作为探针检测蛋白质的位置。
这种技术的作用是对细胞或组织提取的蛋白混合物中的某一特异蛋白进行鉴别和半定量分析。
2、Western Blot的过程大致分为以下几步：
蛋白提取：从细胞或组织中提取总蛋白质混合物。
蛋白定量：确定凝胶中蛋白质的浓度。
SDS-PAGE电泳：通过SDS-PAGE分离蛋白质混合物。
电转印：将分离的蛋白质从凝胶转移到支持物（例如NC膜或PVDF 膜）上。
封闭：用含有去污剂和牛血清白蛋白的溶液处理膜，以封闭膜上的任何未结合位点。
抗原-抗体免疫反应：使用特异性抗体检测目标蛋白质的位置。
蛋白检测：使用化学发光剂检测膜上的目标蛋白质。
(最新整理)westernblot详解
蒸馏水至 1000ml
溶解后室温保存,用时稀释10倍，并加入甲醇至
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20%
（2）夹子黑的一面：海绵-3张滤纸-胶-NC膜-3张滤纸海绵
①将夹子打开使黑的一面保持水平。在上面垫一张海绵 垫。在垫子上垫三层滤纸，固定滤纸,擀去其中的气泡。
②刮去玻璃板上的浓缩胶，小心剥下下层胶，用手调整 使其与滤纸对齐，轻轻用玻棒擀去气泡。将NC膜盖于 胶上，要盖满整个胶并除气泡。在膜上盖3张滤纸并除 去气泡。膜盖下后不可再移动。最后盖上另一个海绵垫， 擀几下就可合起夹子。
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具体情况依照说明书
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灌分离胶： 用1ml的移液枪吸取1ml胶沿玻璃放出，溶液缓 慢加入到装配好的玻璃板中至凝胶高度为6cm左 右，预留1.5cm高度配制浓缩胶。 用1ml的移液枪吸取1ml左右的异丙醇，压平。 沿玻璃放出，注意速度要慢，否则胶会被冲变形 。 温箱放置0.5-1h左右至聚合完全。
注意：边配边平摇烧杯混匀，配好胶后迅速灌胶， 灌胶速度须缓慢，避免产生气泡 灌胶之上轻轻加一层异丙醇，用来压平
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灌制分离胶
隔绝空气
ddH2O 0.1%SDS:<8% 异丁醇：>8%
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二 配制浓缩胶
准备物品： 移液枪 烧杯（ 1 ml 200ul 20ul） Tips： 30%Acrylamide 1M （4度冰箱）， Tris-HCL 溶液（PH=6.8）， ddH2O 10%AP （-20冰箱） ， TEMD（4度） ，SDS（常温）
制作标准曲线 （插入表格）
检 测 样 品 蛋 白 含 量 ： 取 一 管 考 马 斯 亮 蓝 +95 l
最详细的Western_Blot过程步骤详解
Western Blot详解(原理、分类、试剂、步骤及问题解答)Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。
对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。
本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:一、原理二、分类i.放射自显影ii。
底物化学发光ECLECFiv。
底物DAB呈色三、主要试剂四、主要步骤五、实验常见的问题指南1.参考书推荐2。
针对样品的常见问题3。
抗体4.滤纸、胶和膜的问题5。
Marker的相关疑问6。
染色的选择7。
参照的疑问8。
缓冲液配方的常见问题9。
条件的摸索10。
方法的介绍11。
结果分析一、原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。
经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜）上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分.该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
二、分类现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法,目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。
只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单,原理如下(二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP,即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带.三、主要试剂1、丙烯酰胺和N，N’—亚甲双丙烯酰胺,应以温热（以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v）丙稀酰胺和1％（w/v）N,N'-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。
westernblot的原理
westernblot的原理嘿呀，宝子，今天咱来唠唠Western Blot这个超有趣的东西。
Western Blot呢，就像是一场蛋白质的大追踪游戏 。
你想啊，细胞里有各种各样的蛋白质，就像一群小怪兽，它们每个都有自己的特点，但是我们怎么才能把其中一种或者几种小怪兽给找出来呢？这就轮到Western Blot上场啦。
它的基本原理呢，就像是给这些蛋白质小怪兽做标记。
首先呢，我们得把细胞给弄破，就像是打开小怪兽们住的房子一样。
这时候，细胞里的蛋白质就都跑出来啦。
然后我们把这些蛋白质放在一种特殊的胶里，这个胶就像是一个跑道，不同大小的蛋白质在这个跑道上跑的速度不一样哦。
大个儿的蛋白质跑起来就比较费劲，小个儿的呢就跑得比较快。
这就好像是在一场趣味赛跑里，大胖子和小瘦子一起跑，小瘦子肯定先到终点呀 。
等蛋白质在胶里跑好之后呢，我们得把它们从胶里转移到一种膜上，这个过程就像是把小怪兽从一个地方转移到另一个地方。
这个膜就像是一个大舞台，我们要在这个舞台上对小怪兽进行标记啦。
我们会用一种特殊的抗体，这个抗体就像是一个超级侦探 ，它只认识一种特定的蛋白质小怪兽。
比如说，我们想找一种叫“小A”的蛋白质，那我们就用专门认识“小A”的抗体。
这个抗体就会紧紧地抱住“小A”蛋白质，就像两个好久不见的好朋友紧紧拥抱一样 。
但是呢，这个拥抱我们看不到呀，所以还得再给这个抗体做点标记。
通常我们会用一种能显色或者能发光的东西标记在抗体上。
就像是给这个紧紧拥抱的组合穿上一件闪闪发光的衣服 。
如果是显色的标记呢，最后就会在膜上出现一个条带，就像一个小尾巴一样。
这个小尾巴所在的位置就代表了那种蛋白质的大小，条带的深浅呢，就表示这种蛋白质的多少啦。
如果是发光的标记呢，我们就可以用一种特殊的仪器去检测这个光，也能知道这种蛋白质的情况。
你看，Western Blot就这么神奇地把细胞里的蛋白质小怪兽给找出来啦。
它在科学研究里可太重要啦。
比如说，科学家们想知道一种疾病会不会让某种蛋白质变多或者变少，就可以用Western Blot来检测。
weatern blot原理
weatern blot原理嘿呀，宝子们！今天咱们来唠唠Western Blot这个超有趣的东西的原理哈。
Western Blot呢，就像是在蛋白质的小世界里玩一场“捉迷藏”兼“身份识别”的游戏。
想象一下啊，细胞里那些蛋白质就像是一群有着不同个性和身份的小居民。
我们呢，想要把其中某些特定的小居民给找出来，好好研究研究它们。
然后呢，我们要把这些蛋白质按照大小个排排队。
这时候就要用到凝胶电泳啦。
凝胶就像是一个超级神奇的跑道，蛋白质们在电场的作用下开始在这个跑道上跑起来。
小个的蛋白质跑起来就轻快，像小瘦子似的，一下子就跑老远；大个的蛋白质呢，就像有点胖嘟嘟的家伙，跑起来就慢腾腾的。
这样呢，不同大小的蛋白质就在凝胶上分成了不同的条带，就好像是按照身高给小朋友们排好了队。
接下来呀，就像是要把这些排好队的蛋白质从这个跑道转移到一个新的地方。
这个新地方呢，是一张膜，就像把小朋友们从操场转移到一个新的教室一样。
这个转移的过程可不能乱了队形哦。
通过一种特殊的方法，蛋白质就整整齐齐地跑到膜上去啦。
现在呢，膜上有了我们想要研究的蛋白质，但是它们都还没有表明自己的身份呢。
这时候就要请出我们的“识别小能手”——抗体啦。
抗体就像是专门来找特定小伙伴的小侦探。
我们会先加入一种叫做一抗的抗体，这个一抗是专门针对我们想要研究的那种蛋白质的。
一抗就会像小磁铁一样，紧紧地吸附在它对应的蛋白质上。
这就像是小侦探找到了自己要找的那个小朋友，然后紧紧地拉住他的手，说：“哈哈，找到你啦！”可是呢，一抗自己我们还看不到呀。
这就需要再请出二抗啦。
二抗就像是一抗的小跟班，而且这个小跟班还有个特殊的本事，就是能发出信号，让我们可以看到它。
二抗会和一抗结合起来，就像小跟班紧紧跟着小侦探一样。
当二抗结合上去之后呢，我们就可以通过一些特殊的方法，比如化学发光或者显色反应，让这个结合的地方发出亮光或者显示出颜色。
这样我们就能看到我们要找的蛋白质在哪里啦，就像在一群小朋友里，那个被小侦探拉住的小朋友身上亮起了一盏小灯，一下子就被我们发现了。
Western_Blot详解及问题分析课件
Western Blot 流程
蛋白样品的制备
•SDS-PAGE •转膜 •封闭 •一抗杂交 •二抗杂交 •底物显色
Western Blot
蛋白样品的提取
Western Blot
通过有机溶剂或水溶法制备总蛋白 水溶液提取法
针对水、稀盐、稀酸或碱溶液中的蛋白质。稀盐和缓冲系 统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质 最常用的溶剂 。 有机溶剂提取法
太高。转膜过程注意降温
Western Blot
转移到膜上的蛋白很少
原
1. 蛋白因分子量< 10KD
2. 蛋白的等电点< 9
对
3. SDS浓度不合适
策
4. 凝胶太厚
1. 蛋白分子量<10KD时，减 少转膜时间；使用小孔径 的膜
2. 更换高pH值Buffer 3. 在阴极buffer中加入
0.005 - 0.01% SDS 可提 高转膜效率 4. 延长转膜时间
1M Tris-HCl(pH6.8)
1M DTT SDS
甘油 溴酚蓝 总体积
10 ml
20 ml 4g
20 ml 0.2 g 100ml
DTT可临用前以1：4比例混合加入，亦可全部配好分装，-20℃冻存。
按1:1比例与蛋白质样品混合，95～100℃加热5～15min， 冰上冷却后再上样，上样量一般为20-25μl，总蛋白量20～ 50μg。
工作浓度
Western Blot
杂交信号很弱
原 1. 抗体保因存不当
2. 抗原不充足 3. 膜的漂洗过度
1. 抗体长期保存应在－70℃
，使用前做效价检测
对 2. 增加蛋白上样量，做已知
western blot 独家配方(全套)
2×loading buffer（50ml） 1M Tris-HCl （pH6.8）：5ml SDS : 2g BPB : 0.1g 甘油：10ml 加水定容至50ml，分装500μl/份， 用前加10μl 2-mer
5%脱脂奶粉（封闭缓冲液） 脱脂奶粉 ：2.5g TBST buffer ：至50ml 充分混匀溶解er（1L） Tris : 72.5g Glycine : 36.25g SDS : 4.625g 溶于1L去离子水，混匀，室温保存 使用时，量取80ml，加720ml去离子 水，然后加200ml甲醇
10%SDS（100ml） SDS : 10g 去离子水至100ml 50℃水浴下溶解，室温保存 若出现沉淀，水浴溶化，仍可使用
10%APS<!> APS ：0.1g 溶于1ml去离子水 4℃，避光保存2-3周
5×running buffer（1L） Tris : 15.1g Glycine : 94g SDS : 5g 溶于1L去离子水，混匀，室温保存
4×Tris-Cl/SDS,pH6.8(500ml) 1M Tris-HCl，pH6.8 ：250ml 10%SDS ：20ml 去离子水 ：230ml
1M Tris-HCl pH6.8（1L) Tris ：121.1g 800ml去离子水充分溶解 浓HCl调节pH=6.8，约 ml 定容至1L，高压灭菌，室温保存
配置不同体积和浓度凝胶所需各成分的体积 3ml 4ml 5ml 6ml 1.8ml 2.4ml 3ml 3.6ml 400μl 536μl 664μl 800μl 750μl 1ml 1.25ml 1.5ml 12μl 16μl 20μl 24μl 6μl 8μl 10μl 12μl
8ml 4.8ml 1ml 2ml 32μl 16μl
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丙稀酰胺（Acr）
甲叉双丙稀酰胺（Bic） 1g
超纯水至
溶解后 4℃保存。使 20％Tween20
混匀后 4℃保存。
1.2 使用液配制
Tween20 蒸馏水至
20ml 100ml
37.5g
100ml
29g
100ml
2006年经省农业厅，南平市政府19批41准年，毛南泽平东农在校《与改建造阳我农们业的工学程习学》校一合文署中办，学把，这强句强原联指合治，学实态行度一的套话班古子为，今两用个，校从区哲的学管的理高体度制做，了从新而的使分学析校，的深办化学了规对模实，事办求学是实的力理都解有，长并足为的其发提历展出史，了的逐一经步个验发经教展典训成的告为注诉有释我着，们广指：泛出什发：么展“时空‘候间实坚和事持良’实好就事发是求展客是前观，景存党的在和闽着国北的家唯一的一切事一事业所物就集，会文第‘顺理一是利、个’发农问就展工题是；商，客什实贸实观么事为事事时求一求物候是体是的背是，地内离一面看部实个向待联事老全我系求话国们，是题招的即，，生学规党实和校律和事就。性国求业职，家是的业‘的一，教求事一语办育’业、，学明就就实出规显是会事自模不我遭求东最同们遇是汉大于去挫地班、高研折看固师等究。待所资教”同学著力育。时校《量和毛，、汉最中泽只学书雄学东有生河厚教对坚和间、育中持学献办，国实校王学不社事当传质同会求前》量点、是工。和就中，作书办在国党以中学于革和及称声职命人存赞誉业的民在刘高教分的的德的育析事问“综所无业题修合有不才学性工贯能好国作穿顺古家和着利，级任实前实重何事进事点事求，求中情是一是专都的旦。和必精背”省须神离其级靠。实意文自因事思明己而求是学完他是根校成才就据。。能必实而找然事这到遭求些中到索成国挫真绩革折理的命甚。取的至得规倒是律退得，。益制实于定事学出求校适是党合是政中马领国克导国思的情主坚的义强路世领线界导方观，针的得政根益策本于，要全指求体导，党中是员国马干革克部命思和走主教向义职胜的工利精的，髓辛实。勤事工求作是和是共中同国努革力命的实结践果经，验但的最高主度要总的结一和条概是括得，益中于国学革校命始和终建坚设持的实经事验求表是明的，原实则事，求可是以是说胜，利坚之持本实，事只求要是坚原持则实是事我求们是学，校我各们项党事就业会健永康远、立稳于定不和败谐之发地展。的重要保证。
2006年经省农业厅，南平市政府19批41准年，毛南泽平东农在校《与改建造阳我农们业的工学程习学》校一合文署中办，学把，这强句强原联指合治，学实态行度一的套话班古子为，今两用个，校从区哲的学管的理高体度制做，了从新而的使分学析校，的深办化学了规对模实，事办求学是实的力理都解有，长并足为的其发提历展出史，了的逐一经步个验发经教展典训成的告为注诉有释我着，们广指：泛出什发：么展“时空‘候间实坚和事持良’实好就事发是求展客是前观，景存党的在和闽着国北的家唯一的一切事一事业所物就集，会文第‘顺理一是利、个’发农问就展工题是；商，客什实贸实观么事为事事时求一求物候是体是的背是，地内离一面看部实个向待联事老全我系求话国们，是题招的即，，生学规党实和校律和事就。性国求业职，家是的业‘的一，教求事一语办育’业、，学明就就实出规显是会事自模不我遭求东最同们遇是汉大于去挫地班、高研折看固师等究。待所资教”同学著力育。时校《量和毛，、汉最中泽只学书雄学东有生河厚教对坚和间、育中持学献办，国实校王学不社事当传质同会求前》量点、是工。和就中，作书办在国党以中学于革和及称声职命人存赞誉业的民在刘高教分的的德的育析事问“综所无业题修合有不才学性工贯能好国作穿顺古家和着利，级任实前实重何事进事点事求，求中情是一是专都的旦。和必精背”省须神离其级靠。实意文自因事思明己而求是学完他是根校成才就据。。能必实而找然事这到遭求些中到索成国挫真绩革折理的命甚。取的至得规倒是律退得，。益制实于定事学出求校适是党合是政中马领国克导国思的情主坚的义强路世领线界导方观，针的得政根益策本于，要全指求体导，党中是员国马干革克部命思和走主教向义职胜的工利精的，髓辛实。勤事工求作是和是共中同国努革力命的实结践果经，验但的最高主度要总的结一和条概是括得，益中于国学革校命始和终建坚设持的实经事验求表是明的，原实则事，求可是以是说胜，利坚之持本实，事只求要是坚原持则实是事我求们是学，校我各们项党事就业会健永康远、立稳于定不和败谐之发地展。的重要保证。
溶解后，分装于 1.5ml 离心管中，-20℃保存。 1.1.3 0.2mol/L NaH2PO4
NaH2PO4（MW119.98） 12g 蒸馏水至 500ml 溶解后，高压灭菌，室温保存。 1.1.4 0.2mol/LNa2HPO4 Na2HPO ·12H2O（MW 358.14） 71.6g 蒸馏水至 1000ml 溶解后，高压灭菌，室温保存。 1.1.5 10％SDS SDS 10g 蒸馏水至 100ml
HCl
约 17ml
约 16m
约 15ml
约 10ml
50℃水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。 1.1.6 10％过硫酸胺（AP）
过硫酸胺 0.1g 超纯水 1.0ml 溶解后，4℃保存，保存时间为 1 周。 （可先将过硫酸胺干粉称好分量后放在 EP 管中，一次性多装几管，使用时加入超纯水即可）
15.14g 200ml
溶解后，用浓盐酸调 pH 至 6.8，最后用超纯水定容至 250ml，室温下保存。
1.1.9 40％Acr/Bic（37.5:1）
丙稀酰胺（Acr）
甲叉双丙稀酰胺（Bic） 1g
超纯水至
溶解后 4℃保存。使用时恢复至室温且无沉淀。 1.1.10 30％Acr/Bic（29:1）
1.1.7 1.5mol/L Tris·HCl（pH8.8）
Tris (MW121.14) 超纯水
45.43g 200ml
溶解后，用浓盐酸调 pH 至 8.8，最后用超纯水定容至 250ml，室温下保存。
1.1.8 0.5mol/L Tris·HCl（pH6.8）
Tris (MW121.14) 超纯水
1. 试剂配制 1.1 母液
1.1.1 1.0mol/L Tris·HCl
Tris (MW121.14)
蒸馏水
Western-Blot 操作流程
30.29g
200ml
溶解后，用浓盐酸调 pH 至所需点（见下所示），最后用蒸馏水定容至 250ml，高温灭菌后
室温下保存。
PH
7.4
7.5
7.6
8.0
1.1.2 1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF PMSF 0.174g 异丙醇 100ml