沉淀型AB双液TMB 显色液
单组份TMB显色液
单组份TMB显色液
目录
1. 产品说明 (1)
2. 需要准备的材料 (1)
3. 操作步骤 (1)
4. 产品订购信息 (1)
1.产品说明
单组份TMB显色液主要用于辣根过氧化物酶(HRP)为标记的酶联免疫吸附实验(ELISA)。
单组份TMB显色液的主要成分是3, 3’5 ,5’-四甲基联苯胺,在辣根过氧化物酶的作用下与氧化剂反应生成蓝色物质。
本产品采用独特的配方,避免常规AB液分开使用前再混合的方法,方便快捷,减少实验误差。
2. 需要准备的材料
酶标仪;终止液:1M硫酸或盐酸
3. 操作步骤
3.1 样品显色
1) 样品孔在加完HRP标记物并孵育一段时间后,用PBST货PBS洗板3-5次。
2) 每孔加入100μL TMB 溶液。
反应体系孵育10min。
3) 每孔加入50μL 反应终止液终止。
4) 终止后5-10min内检测波长450nm。
如果出现较高的背景或沉淀,可在终止后马上读
数,或进一步稀释一抗和/或HRP标记物。
3.2结果分析
1) 观察样品显色结果,空白和阴性应无色,含有HRP标记物的孔应为蓝色,终止液终止
后为黄色,颜色越深浓度越高。
2) 根据450nm检测结果绘制标准曲线,计算出待测样品的浓度。
1 / 1常州天地人和生物科技有限公司。
一管式TMB显色液说明书
一管式TMB显色液说明书产品编号:BTN91101规格:100mL(A)/100mL(B)产品及特点:四甲基联苯胺,即TMB(3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine),是辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase、HRP)的显色底物,在辣根过氧化物酶和H2O2存在时,TMB会产生可溶性蓝色产物(光吸收在370nm),加入硫酸后,溶液呈黄色,此时可以在450nm测定吸光度,因此TMB和H2O2一起常用于检测HRP的存在。
跟HRP的其他底物(如ABTS和OPD)相比,TMB不但灵敏,而且无毒,所以在ELISA中的应用日趋广泛。
传统的TMB显色试剂一般由两个组份组成(另一个是H2O2),必须在使用前新鲜配制,并且容易产生沉淀,使用相对不太方便,并且也容易导致操作误差。
为克服这些缺点,本公司开发了只有一个溶液的一管式TMB显色液,它具有下列特点:1.即开即用,操作简单,用户不需要配制任何溶液。
2.显色液只是单一溶液,简化了操作步骤,降低了操作误差,结果更加稳定。
3.既可用于ELISA等的显色液,也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。
4.该底物溶液含TMB、H2O2和特殊的稳定剂,可以在4℃长期放置。
5.分沉淀可溶型(A型,适用于ELISA)和沉淀不可溶型(B型,使用于Western印迹膜免疫检测)两种。
规格及成分:成分A型B型本产品A型(ELISA专用)100ml无本产品B型(Western专用)无100ml说明书1份1份保存条件:常温运输、2-8℃避光保存,有效期一年。
自备试剂:A型:ELISA相关试剂,TMB终止液(1-2M H2SO4)。
B型:Western印迹杂交相关试剂。
使用方法:可溶型(A型)使用方法:1.在酶标板的每个孔中直接加入100μL或150μL本产品(A型)。
2.室温温育5-30分钟。
3.向每个孔中加入100μL或150μL终止液。
TMB可溶性底物TMBSolubleSubstrate-北京梅科万德生物科技
北京梅科万德生物科技有限公司地址:北京市海淀区西小口路27号西三旗生态园商服北楼2203号TMB 显色液(双组份,用于ELISA )产品编号:1001 AB TMB 显色液双组份,用于标记物为辣根过氧化物酶的ELISA ;超稳定,使用方便,高灵敏度。
TMB 显色液(双组份)分为A 液、B 液两部分,A 液主要成分是过氧化氢,包装于白色瓶中;B 液的主要成分是3,3’,5,5’ –四甲基联苯胺(3,3’,5,5’ - tetramethylbenzidine (TMB)),包装于棕色瓶中,避光保存; TMB 是辣根过氧化物酶(HRP )的底物,在辣根过氧化物酶的作用下,与氧化剂过氧化氢反应生成蓝色产物。
颜色的强弱与HRP 的活性呈正比,从而可以用于检测基于HRP 标记物的检测。
规格本产品包装规格(A+B )为100ml 、500ml 、1000ml 、2000ml运输、储存和有效期常温运输(勿超过30°C), 2-8°C 储存,在有效期内使用。
正常储存条件下自生产之日起有效期2年。
注意事项∙应用: 本品适合于标记物为HRP 的ELISA 实验,本品中含有的TMB 和过氧化氢,在HRP 的作用下,TMB 被氧化形成水溶性蓝色产物,在370nm 和650nm 有吸收峰。
进行动力学实验时,可直接检测650 nm 的吸光度。
加入终止液,可进行终点法检测。
终止液可以选择0.1%NaF ,终止后TMB 的颜色不变,在650nm 检测,也可肉眼观察定性判断。
加入酸性终止液后变成黄色,检测波长为450 nm ,吸光度值可较不酸化增加数倍。
∙ 注意事项: 1. 本产品对各种氧化剂敏感,应在使用过程中避免污染,切忌将枪头直接插入瓶中取液,应倒出所需要液量,剩余溶液不要倒回原包装瓶中以免污染。
2. 操作过程中避免阳光的直射,分装的容器建议用塑料容器,避免使用金属容器以及细菌和氧化还原剂污染的容器。
单组分TMB显色液
背景介绍
酶联免疫分析技术(ELISA)广泛应用于抗原、半抗原或抗体的定量或定性分析,辣根过氧化物酶(HRP)是 ELISA 技术最常用的一种酶,能催化底物如 3,3'5,5'-四甲基联苯胺(TMB)发生显色反应,从而进行定量或定性分析。
由于 TMB 比其他显色底物具有更高的灵敏度且无致癌性、故而被广泛使用,TMB 主要应用于 ELISA、WB、免疫斑点杂交或免疫组化等实验,也有报道将其用于氯的检测分析等。
TMB工作原理
HRP 或其他适当过氧化物酶能催化TMB生成可溶的蓝色产物,此时通常可在 370nm 测定吸光度。
当显色反应被酸性溶液(如 0.5-2M H2SO4,0.5M HCl,1M H3PO4)终止后,产物由蓝色转为黄色,此时可在 450nm 测定吸光度。
传统TMB显色液(双组分)
通常 TMB 显色试剂以双组分(A/B液)的形式提供,分别含H2O2和TMB,需要在使用前按1:1比例配制,具有以下缺点:
▲较容易产生沉淀;
▲使用起来相对不便;
▲较易导致检测结果误差。
爱必信单组分TMB显色液优势
作为高品质生命科学产品的中国品牌,爱必信生物研发推出的abs9178 单组分TMB显色液,显色试剂由单一溶液组成,有效简化了操作步骤,并且检测结果更加稳定可靠。
其具有以下优势:
▲即用型溶液,含H2O2和TMB,单组分溶液形式,无需混合,方便快捷减少误差;
▲检测灵敏度高,线性浓度范围宽;。
PH0410 TMB显色液 沉淀型组化或膜HRP显色使用手册
PH0410|TMB显色液(沉淀型,组化或膜HRP显色用)TMB Color Development Solution for IHC or BlottingCatalog No:PH0410Size:☐100mL|500mL Storage:Store@4℃◆产品简介TMB,即3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine,是辣根过氧化物酶(HRP)的常用底物。
在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下,TMB会产生蓝色产物。
Phygene的TMB显色液(沉淀型,组化或膜HRP显色用,TMB Color Development Solution for IHC or Blotting)采用最新的单一溶液的TMB显色技术,用于Western或免疫组化等HRP的显色检测,简化了操作步骤,并且使检测结果更加稳定可靠。
本显色液具有高灵敏性,与HRP反应后产生蓝紫色沉淀,沉淀吸附于印迹膜上,不会脱落,方便显色结果的保存和观察。
由于产生的是沉淀型蓝色产物,不适用于ELISA检测。
*用于免疫组化检测时,如果每个样品的显色液用量为0.1ml,则可以检测1000个样品;对于膜的显色检测,如果每次使用2.5ml显色液,则可以检测40次。
特点:方便:无需其他试剂,直接使用;也无需特别的设备,能直接观察;灵敏:独特的配方,显色时间短,对超微量的HRP都能检测,不像4-CN等那样会褪色;安全:不含任何有机溶剂,也无需用有机溶剂稀释;稳定:4℃避光保存至少1年有效。
◆产品保存4℃避光保存;一年有效。
◆使用参考如果发现TMB显色液出现混浊或颜色变成蓝色,应该停止使用。
一.免疫组化检测:1.参考免疫组化的实验步骤,在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后,用适当洗涤液(如PBS)洗涤3-5次,每次3-5分钟。
2.洗涤完毕后,去除洗涤液,滴加约100微升TMB显色液。
3.室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可在湿盒中显色过夜),直至显色至预期深浅。
Elisa 显色液配方
配方一底物显色A液:醋酸钠13.6g ,柠檬酸1.6g,30%双氧水0.3ml,蒸馏水加至500ml.底物显色B液:乙二胺四乙酸二钠0.2g,柠檬酸0.95g,甘油50ml,0.15g TMB蒸馏水加至500ml.如果是普通的TMB,而非盐酸盐,要先用DMSO溶解后再加入水中。
本产品可以用水溶解。
配方二TMB母液:用DMSO将TMB配成1%浓度,4°C保存.TMB工作液:在pH5.0柠檬酸缓冲液9.9ml中加入0.1ml1%TMB液。
pH5.0柠檬酸缓冲液配方:0.1mol/L柠檬酸 24.3ml0.2mol/L Na2 HPO4 25.7mlH2O 50ml配方三A液:先配1mol柠檬酸。
柠檬酸2.1g乙二胺四乙酸二钠0.372g水800ml室温搅拌待溶解后调PH3.0。
再配三水合乙酸钠13.6g30%H2O2 0.27ml1mol柠檬酸7.5ml水定容500mlB液:量取丙三醇100ml水定容至953ml量取10mg/mlTMB 47ml配方四底物显色A液:醋酸钠13.6g ,柠檬酸1.6g,30%双氧水0.3ml,蒸馏水加至500ml.底物显色B液:乙二胺四乙酸二钠0.2g,柠檬酸0.95g,甘油50ml,取0.15g溶于3mlDMSO中,蒸馏水加至500ml.配方五底物缓冲液 pH5.0的磷酸-柠檬酸缓冲液,配制方法为:0.1mol/L柠檬酸C6H8O7•H2O),即称取柠檬酸19.2g,加水至1000mL,为甲液;0.2mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4),即称取磷酸氢二钠71.7g,加水至1000mL,为乙液;取甲液24.3mL,乙液25.7mL,加水至100mL,即可底物溶液:取50μL TMB(10mgTMB溶于1mLDMSO中)溶液+10mL底物缓冲液+10μL30%过氧化氢,混匀。
市售单组分TMB显色液质量比较
e i g n r e a g e n t s , b u t t h e b a c k g r o u n d wa s a l s o h i g h e r t h a n t h e d o me s t i c r e a g e n t s . Al l t h e r e a g e n t s we r e s t a b l e a f t e r a c — c e l e r a t e d s t a b i l i t y t e s t a t 3 7℃ f o r 5 d a y s 。 b u t t h e b a c k g r o u n d o f t h e f o r e i g n r e a g e n t s i n c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y c o mp a r e d t o t h a t o f t h e d o me s t i c r e a g e n t s . Co n c l u s i o n Th e q u a l i t y o f t h e c o mme r c i a l l y a v a i l a b l e 3 , 3 , 5, 5 一t e t r a me t h y l b e n z i — d i n e l i q u i d s u b s t r a t e i s f a r d i f f e r e n t , a n d t h e p r i c e i s v e r y d i f f e r e n t .
u i d s u bs t r a t e .M e t ho ds Th e ap pe ar a nc e, s e ns i t i v i t y a nd s t a bi l i t y o f f o ur r e pr e s e n t a t i ve pr od uc t s ma d e i n Ch i n a a n d o t he r c ou nt i e s we r e c o m pa r e d. Re s u l t s The s e ns i t i v i t y of t wo ki nd s of d om e s t i c r e a ge nt we r e hi gh er t h a n t ha t o f f or —
TMB 单组分显色液使用说明
TMB单组分显色液使用说明货号:PR1200规格:100ml保存:4℃避光保存,复检期为3年。
产品简介:目前酶免疫分析(EIA)技术,已被广泛应用于抗原,半抗原或抗体的定量或定性检测分析。
辣根过氧化物酶(HRP)及其偶联物是酶联免疫分析技术中常用的一种酶,由于3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)在HRP的显色反应体系中,比其它色原具有更高的灵敏度且无致癌性而被广泛应用。
TMB主要应用于酶联免疫吸附实验(ELISA),免疫斑点杂交或者免疫组化以及氯和过氧化氢的检测分析。
为了满足不同的试剂盒产品研发与生产以及科研需求。
产品特点:即用型:无需混合,方便快捷,减少误差灵敏度高:不低于A、B液稳定性好:2-8℃保存,有效期不低于36个月;显色终止后读数稳定背景低:底物溶液在650nm检测时检测OD值小于0.04质量可靠:产品批间差异小外观:本试剂一般情况下为无色,有时略显浅蓝色或浅黄色使用方法:用适当的干净容器(用纯净水反复冲洗),倒出适量的单组分TMB显色液,待达到室温后即可使用。
加液:加完HRP结合物并孵育一定时间后,用适当洗涤液洗板3-5次,每孔加TMB显色液100ul。
根据个人实验需要,在室温(15-25℃)或37℃下避光温育10-30分钟或更长时间,直至显色至预期深浅。
终止:加入等体积的1M盐酸或硫酸溶液终止反应,孔中反应液由蓝色变为黄色。
读数:终止反应后30分钟内在450nm处测定吸光值。
注意:如果出现高的反应背景或沉淀,表明TMB底物反应过于强烈。
为了避免产生沉淀,可在终止后马上读数;或者进一步稀释一抗和/或HRP结合物。
相关试剂:SE13羊抗小鼠IgG-HRPP103310×PBSTC1050ELISA包被液(1×)C1058ELISA终止液A1800抗体稀释液A1820HRP标记抗体稀释液。
TMB双组分显色液使用说明
TMB双组分显色液使用说明货号:PR1210规格:PR1210-50PR1210-100PR1210-250PR1210-500显色液A50ml100ml250ml500ml显色液B50ml100ml250ml500ml保存:2-8℃避光保存,有效期1年。
产品简介:目前酶免疫分析(EIA)技术,已被广泛应用于抗原,半抗原或抗体的定量或定性检测分析。
辣根过氧化物酶(HRP)及其偶联物是酶联免疫分析技术中常用的一种酶,由于3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)在HRP 的显色反应体系中,比其它色原具有更高的灵敏度且无致癌性而被广泛应用。
TMB主要应用于酶联免疫吸附实验(ELISA),免疫斑点杂交或者免疫组化以及氯和过氧化氢的检测分析。
为了满足不同的试剂盒产品研发与生产以及科研需求,本公司专门研制了针对不同类型的基于HRP的免疫分析用TMB显色液。
外观与结构:显色液A应为无色或淡黄色透明液体,显色液B应为无色透明液体。
均无沉淀、颗粒及絮状物。
用于酶联免疫实验中的显色阶段:可于样本反应,生成深蓝色产物。
使用方法:加液:待样品孔中加完HRP结合物并孵育一定时间后,用适当洗涤液洗板3-5次,每孔加底物显色液A、显色液B各50ul(A、B液先混合再加入孔中),轻轻混匀,根据个人实验需要,在室温(15-25℃)或37℃下避光温育10-30分钟或更长时间,直至显色至预期深浅。
终止:每孔加入等体积的1M盐酸或硫酸溶液终止反应,孔中反应液由蓝色变为黄色。
读数:终止反应后15分钟内在450nm处测定各孔溶液的吸光值。
对照:空白对照不加HRP标记的抗体/抗原和阴性对照结果应无色。
阳性对照及加HRP标记的抗体/抗原产生深蓝色产物。
注意:如果出现高的反应背景或沉淀,表明TMB底物反应过于强烈。
为了避免产生沉淀,可在终止后马上读数;或者进一步稀释一抗和/或HRP结合物。
注意事项:1、实验用品应该专一,避免交叉污染。
AB TMB 显色液
等
一步即用型溶液,无需混合,方便快捷
使用方法: 加液 1、8ml 滴瓶包装(少量试验首选)
滴瓶垂直滴加每滴 50ul,每孔 A 液 B 液 各一滴。 2、100ml、500ml或更大包装。 根据需要A液B液等量混合,每孔 100ul。 注意混合马上使用 温育:上述加液后,根据个人试验需要,可温育 5~ 30 分钟 终止:加等体积的 1N 的 HCl 或者 2N 的 H2SO4 来终止反应。酶标孔中反应液从蓝色变为 黄色。 读数:终止反应后,30 分钟内在 450nm 处读数 不加终止液可以在 620-650nm 处读数
用。单组分 TMB 过氧化物酶底物与辣根过氧化物
酶连接物反应时产生一种深蓝色的产物,适用于
定量以及定性分析的酶联免疫分析当中。又分
可溶型和沉淀型
可溶型
沉淀型
可溶性蓝褐色产物 沉淀性蓝褐色产物
适用于 ELISA 及其 适用于 Western Blot
他通过液体反应检 及其免疫沉淀化学等
测 HRP 的应用
注意: 降低底物强度:如果出现高的反应背景和/或沉 淀,表明 TMB 底物反应过于强烈。为了避免产生 沉淀,可以在加入终止液后马上读数;另外,可 以进一步稀释一抗和/或 HRP 结合物。为了降低非 特异性背景颜色,推荐进一步降低一抗和/或 HRP 结合物的浓度,尽量避免降低底物浓度。动力学 检测:TMB 单组分底物在与过氧化物酶反应时产生 一种蓝色,可以在加底物后 620-650nm 处读数, 不需终止反应
A B 双液 TMB 底物液
A B 双液 TMB141
A6mlx10
B6mlx10
ME142
A100ml
B100ml
ME143
A500ml
tmb应用及显色机理
tmb应用及显色机理四甲基联苯胺(TMB):一种新型安全的色原试剂;TMB已在逐步取代强致癌物联苯胺和其他致癌性的联苯胺衍生物,应用于临床化验、法医检验、刑事侦破及环境监测等领域;尤其是在临床生化检验方面,TMB作为过氧化酶的新底物,在酶免疫分析法(EIA)和酶联免疫吸附检验法(ELISA)中获得了广泛的应用。
主要应用于如下项目:潜血指纹检测;唾液中酒精的快速检测;尿联试纸的配制;肝炎病毒检测:妊娠检测试验:血液和尿液中葡萄糖、血红蛋白、白蛋白的快速测定;粪便隐血试验:血液中粒细胞值的测定、类固醇、性激素的检测:酶活性的测定;抗原、抗体及遗传物质的分析、检测;生物样品的染色;水质检测(余氯、亚硝酸盐等)。
TMB是一种优于0PD的新型HRP色原底物。
其氧化产物联苯醌360问答在波长450nm处有最大消久线九善天胡光系数,假如HRP量少,过氧化氢溶液和TMB过量次情那侵失言时,则形成蓝色的阳离子根。
降低pH,即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌。
显色反应是将试样中被测组分转变成有色化合物的化学反应。
在无机分析中,足我白统攻展输输谁很少利用金属水合离子本身的颜色进行光度分析,因为它们的吸光系数值都很小。
一般都是选适当的试剂,将待测离子转化为有色化合物,再进行测定。
这种将试样中被测组分转变成有色化合物的化学反应,叫显色反应。
显色反应有氧化还原反应和配位反应。
显色反应能否满足光广浓九台早务度法的要求,除了主要与显色剂的性质有关系外,控制好显色反应的条件也是十分重要的。
显色条件包括显色剂用量、酸度、显色温度、显色时间及干扰的消除。
TMB溶液;TMB游离酸;四甲基联苯二胺;TMB游离酸溶液;钡硫氰酸盐三水合物;四甲基联苯胺,TMB;AB双液TMB显色液;四甲基联苯胺盐分而校吸找酸盐二水;3,3',映维请5,5'-四甲基联苯胺考;3,3,5,5-四甲基联苯胺溶液。
tmb显色原理
tmb显色原理TMB显色原理。
TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯二胺)是一种常用的显色底物,在酶标仪、免疫组化和免疫印迹等实验中被广泛应用。
TMB显色原理是指在特定条件下,TMB底物与酶催化产生的氧化物质发生反应,产生可见的颜色变化。
本文将介绍TMB显色原理的相关知识,帮助您更好地理解和应用TMB底物。
1. TMB显色原理的基本过程。
TMB显色原理的基本过程包括底物氧化和颜色生成两个主要步骤。
首先,TMB底物在酶的作用下被氧化,生成一个具有较高氧化还原电位的阳离子自由基。
随后,这个阳离子自由基在酸性条件下与TMB分子中的双键结构发生反应,形成蓝色产物。
最终,通过加入停止液(如硫酸)中和反应体系,使得产物转变为黄色,完成显色过程。
2. 影响TMB显色的因素。
TMB显色的效果受到多种因素的影响,主要包括底物浓度、pH 值、反应时间和温度等。
底物浓度的变化会直接影响显色的强度,一般来说,底物浓度越高,显色强度越大。
而pH值的变化则会影响显色产物的稳定性,一般来说,酸性条件下TMB显色产物较为稳定。
此外,反应时间和温度也会对TMB显色产物的形成产生影响,需要根据具体实验条件进行合理的控制。
3. TMB显色在酶标仪和免疫组化中的应用。
TMB显色在酶标仪和免疫组化中被广泛应用,主要用于检测酶标记的抗体或蛋白。
在酶标仪中,TMB显色可用于检测酶标记的抗体与抗原结合后的信号产生,通过测定显色强度来定量分析样品中的抗原含量。
在免疫组化中,TMB显色可用于检测组织切片中特定蛋白的表达情况,通过显色强度和位置来分析组织样品中的蛋白表达水平和分布情况。
4. TMB显色的优缺点。
TMB显色作为一种常用的显色底物,具有较多的优点,如显色强度高、稳定性好、操作简便等。
同时,TMB显色也存在一些缺点,如显色产物易受光照和氧化影响、显色时间较长等。
因此,在实际应用中需要根据具体实验要求和条件选择合适的显色底物。
TMB配方
TMB配方使用的TMB配方:TMB储备液:60mgTMB溶于10mL DMSO柠檬酸0.1M磷酸氢二钠0.2M显色液:TMB储备液:0.125ml柠檬酸:2.5ml磷酸氢二钠:2.5ml二次水:5ml30%双氧水:0.005ml其他:这个配方不好。
推荐你用这个配方:B液配的时候要充分搅拌,大约三四个小时,避光。
底物显色液A液:醋酸钠13.6g柠檬酸1.6gH2O2(30%)0.3mldH2O 至500ml底物显色液B液(避光保存):EDTA-Na 0.2g柠檬酸0.95g甘油50mlTMB(四甲基联苯胺) (用DMSO溶解为10mg/ml后在加)0.2g dH2O 至500ml如果这个配方还不好,你可以试试下列配方:1 。
称取TMB 17.2mg(固体),加DMSO1ml 溶解,然后加醋酸钠缓冲液(0.1mol/l,pH5.5)66ml,此为底物A底物B ,取双蒸水100ml,加30%H2O217微升使用时A:B 液等体积混匀即可.称取TMB 20mg(固体),先用无水乙醇10ml 溶解,充分振荡(试剂瓶要干净,干燥),加双蒸水定容到100 ml,此为底物A 底物B ,取1水柠檬酸 2.1g,无水Na2HPO4 2.82g,0.75%的过氧化氢尿素0.64ml,双蒸水定容至100ml(无须调PH值,应在4.5-5.0范围。
使用时A:B 各取5ml 混匀,可用于一块96孔板显色。
过氧化氢脲比H2O2稳定,不必如H2O2现用现配,都起供氢体的作用。
2TMB(10mg/5m无水l乙醇) 0.5ml底物缓冲液10ml0.75%过氧化氢32ul这样的配方已经很好,为什么要用尿素?底物缓冲液:0.2M磷酸氢二钠25.7ml0.1M柠檬酸24.3ml加蒸馏水50mlTMB使用液:TMB (10mg/5ml,无水乙醇)0.5ml底物缓冲液10ml0.75% H2O2 32 Ul3.TMB加入2.5ml无水酒精中,可加热至37℃~40℃直到TMB完全溶解。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
3. 置于平式摇荡仪上,在室温下孵育 2 至 5 分 钟,直至深蓝色沉淀出现。
4. 用镊子夹起固相膜,放进无离子水里清洗 。 5. 空气中晾干。
6. 拍照记录 。 二、 免疫化学染色
1. 准备好含有待测蛋白的组织切片:包括固着、 封阻、一抗(或生物素)处理、辣根过氧化 酶(HRP)标记的二抗(或链霉亲和素)处 理、清洗等步骤
A 液 500ml
适合排
B 液 500ml
枪加样
保存: 2℃~8℃ A 和 B 液均采用稳定技术,不需要 冷冻保存,甚至可以室温保存。
实验步骤 一、 免疫印迹染色
1. 准备好含有待测蛋白的固相膜:包括电泳、 转印、封阻、一抗(或生物素)处理、辣根 过氧化酶(HRP)标记的二抗(或链霉亲和 素)处理、清洗等步骤
相对于DAB来说,有以下优点。 1.敏感,要比DAB敏感许多倍。 2.色泽稳定,不必避光显色 3.色带为蓝色,易于观测 4.无致癌性
包装:
货号 包装
规格
备注B 液 6ml×10
WB1120 园盖瓶
A 液 100 ml
适合排
B 液 100 ml
枪加样
WB1130 大瓶
沉淀型 AB 双液 TMB 显色液
沉淀型 A B 双液 TMB 显色液
产品说明: TMB 因其灵敏度较高及无致癌性而得到广泛应用。 本产品采用稳定敏感的配方,辣根过氧化物酶接物 反应时产生一种深蓝色的沉淀产物,适用于 Western Blot 及其适用于蛋白质杂交和免疫化学, 以及原位杂交染色等。产品即到即用,性能稳定, 操作便捷,敏感度高,显色清晰,重复性好。 产品特点:
注意事项 1.加入 1 滴 A 液和 1 滴 B 液,可按比例增减 2.如果封闭欠佳,易造成背景颜色过深 3.固相膜显色后数小时将会褪色,不能永久 存在。 4.该显色液只能用于辣根过氧化酶(HRP)标 记的杂交和沉淀反应。 5.染色后可用甲基绿或苏木素复染,增强对 照。
2.加入 1 滴 A 液和 1 滴 B 液,铺满整个固相膜 表面(可按比例增减).
3. 室温下,小心加上上述显色工作液铺满整个 切片样品表面 。
4. 室温下孵育 5 至 10 分钟,或直至样本出现 深蓝色
5. 小心移去切片上显色工作液 6. 室温下,小心将切片置入 50 毫升 PBS 缓冲
液中浸泡 5 秒 7.小心移去切片上的 PBS 缓冲液 8. 放上盖玻片或封片 9.(选择步骤)进行甲基绿复染 10.即刻在一般光学显微镜下观察:阳性呈现深 蓝色