流感病毒专题2008-6-10

流感病毒的侵入
病毒吸附至宿主细胞 表面后，其包膜可通 过与宿主细胞质膜融 合形成包囊，并通过 受体介导的胞吞作用 进入细胞内。
流感病毒的脱壳
进入宿主细胞的包囊很快与 细胞的溶酶体结合，此时包 囊中的pH可降至5左右。在 这样的低pH环境下，病毒的 HA裂解为HA1和HA2两个亚 单位，激活存在于HA2氨基 酸末端的溶解多肽，导致外 壳的溶解，使病毒的内容物 （vRNP）释放入胞浆中， 在ATP供能的条件下通过宿 主细胞的核孔复合物转运至 细胞核内。
反向遗传技术-8 plasmids system
Symptoms of Influenza
fever (usually high) headache extreme tiredness dry cough sore throat runny or stuffy nose muscle aches Stomach symptoms, such as nausea, vomiting, and diarrhea, also can occur but are more common in children than adults
包膜上抗原蛋白突变，逃避体液免疫。
How Is the Flu Spread?
Flu viruses spread mainly from person to person through coughing or sneezing of people with influenza. Sometimes people may become infected by touching something with flu viruses on it and then touching their mouth or nose.
流感病毒的表达、复制及装配
病毒蛋白的合成，NP、 P蛋白和NS1在感染后数 小时即生成，其它蛋白 如HA、NA、M1、M2和 NS2合成较晚。病毒蛋 白合成时间的控制可能 受到病毒mRNA向核外 运输的调节，并可能与 病毒蛋白NS1的功能有 关。
流感病毒的成熟及释放
病毒成熟前，各种病 毒成分已结合在细胞 表面，最后通过出芽 的方式，使局部的细 胞膜向外隆起，包围 住结合在细胞膜上的 核衣壳，成为新合成 的有感染力的病毒。
流感病毒的成熟及释放
？子代病毒包膜上的的HA分子是否会与宿主细 胞表面的唾液酸分子结合，从而病毒无法释放？ ？子代病毒是否会因包膜上既有HA分子又有唾 液酸分子而彼此吸附形成聚集？
病毒包膜上的NA分子可水解去处细胞膜表面的唾 液酸残基，促使完整的病毒颗粒从细胞释放。
反向遗传技术12 plasmids system
流感的预防措施
疫苗接种
流感疫苗接种是世界公认的预防流感的有 效方法。实践证明，免疫预防是减少流感 危害的一种重要措施和手段，对高危人群、 易感人群接种流感疫苗是预防流感的有效 方法。
The inactivated vaccine 灭活疫苗
Short lived protective; Usually given in the fall so that protection is high in December/January; Only certain formulations of the vaccine are FDA certified for young children
香港1997年H5N1禽流感病毒感染人引起18 人发病，至今，已有数百人感染H5N1引起死 亡的报道。
流感病毒扩增与检测
扩增： 接种9日龄鸡胚，收获尿囊液； MDCK细胞 (依赖胰蛋白酶)
检测：
1、血球凝集试验，鸡红细胞(快)豚鼠，人红细胞(慢) 2、ELISA(需要流感病毒抗体) 3、RT-PCR检测病毒的RNA 4、Real-Time PCR确定病毒RNA的数量
关于禽流感（AIV）
流感病毒的结构
HA（右上）能引起红细 胞凝集，是病毒吸咐于敏 感细胞表面的工具。NA （右下）则能水解蛋白，
水解细胞表面受体特异 性糖蛋白末端的N-乙酰 神经氨酸，是病毒复制完 成后脱离细胞表面的工具。
HA和NA均有变异特性，故 只有株特异的抗原性，其
抗体具பைடு நூலகம்保护作用。
流感病毒的抗原性变异
流感病毒的抗原性变异就是指HA和NA抗原结构的改变，主要是 HA。
Normal mucosa
3 DAYS pi
7 DAYS pi
逃逸免疫系统杀伤的机制
产生NS1蛋白，抑制PKR激活。
NS1蛋白与双链RNA结合，防止双链RNA激活 PKR*。
*流感病毒的双链RNA可诱导细胞产生干扰素（INF）， INF结合至细胞相应受体，使细胞产生大量蛋白激酶即 PKR，PKR可磷酸化真核细胞翻译起始所必需的eIF2α蛋 白，从而关闭细胞蛋白合成，使病毒无法合成蛋白而死亡。
Influenza Virus infection in MDCK cells 狗肾细胞
What Is Influenza Virus Like?
流感病毒的结构
由三层构成 内层为病毒核衣壳，含 核蛋白（NP）、P蛋白 和RNA。 NP是可溶性抗原，具有
型特异性，抗原性稳定。 P蛋白（PB1、PB2、PA） 是病毒RNA聚合酶亚单位。
流感病毒的分类
根据NP抗原性，将流感病毒分为A、B、C(甲、 乙、丙）三型,三型病毒具有相似的生化和生物学 特征 。
A型流感病毒常以流行形式出现，能引起世界性流感大 流行，它在动物中广泛分布，并也能在动物中引起流感 流行和造成大量动物死亡。 B型流感病毒常常引起局部爆发，不引起世界性流感大 流行，至今尚未找到它存在于人之外其它动物中的确凿 证据。 C型流感病毒主要以散在形式出现，主要侵袭婴幼儿， 一般不引起流行，猪也是它天然宿主之一。
流感病毒的基因组
8个独立的RNA片段（A型、B型）或7个独立 的RNA片段（C型） 核酸总长度为约13.6 kb 所有RNA片段5’末端的13个核苷酸及3’末端的 12个核苷酸高度保守，且5’端与3’端反向互补 结构。 共编码10种蛋白质，其中8种（PB1、PB2、 PA、HA、NA、NP、M1、M2）为结构蛋白， 2种（NS1、NS2）为非结构蛋白。
The live, attenuated influenza virus (LAIV) vaccine
减毒活疫苗
Only approved for healthy individuals；Given nasally and should provide mucosal, humoral and cell-mediated immunity； It needs to be given every year；ontraindicated for those allergic to eggs；Contraindicated for children and adolescents on any therapy containing aspirin
流感病毒的感染及复制过程
吸附
侵入
脱壳
表达、复制及装配
成熟及释放
流感病毒的感染及复制过程
流感病毒的吸附
流感病毒的NA可破坏宿主 呼吸道的神经氨酸，使蛋白 水解，暴露出呼吸道上皮表 面特异性的含唾液酸的糖蛋 白受体。这种受体与病毒包 膜上HA中的糖蛋白成分可 专一地结合，从而使病毒粘 附至呼吸道上皮表面。
Influenza pandemic in history
H1N1: The "Spanish" flu that killed 50 million people worldwide from 1918 to 1919 (scientists identified its proteins long after the pandemic was over) H2N2: The "Asian" flu that caused a pandemic from 1957 to 1958 H3N2: The "Hong Kong" flu, which caused the world's most recent pandemic in 1968
病理
人体通过呼吸吸入病毒颗粒 病毒通过HA进入呼吸系统的表皮细胞 由于病毒导致细胞死亡，产生了炎症反应，咳嗽进一步加速了病 毒的传播 由于dsRNA的出现触发了干扰素的生成，更多流感的症状 (打喷 嚏，热病，冷颤，肌肉酸疼，头疼，疲劳)产生 因为流感对呼吸系统的伤害，更多严重的疾病(如肺炎)并发。
流感病毒及SARS病毒感染 及其致病性研究
Influenza/ SARS-CoV Virus Infection and Its Pathogenesis
流感病毒流行历史与现状
希波拉底(古希腊医生，被誉为医学之父)记载 的流感疫情最早始于公元前412年。 1933年英国人威尔逊· 史密斯（Wilson Smith） 第一次分离出人流感病毒。 流感病毒每隔一定的时间就会在世界不同地区 发生。 自1997-至今，在亚洲及全世界暴发H5N1血清 亚型的高致病禽流感
流感病毒的基因组
流感病毒的基因组
RNA1～3 编码PB2、PB1和PA蛋白。
RNA4 编码HA蛋白。 RNA5 编码NP蛋白。 RNA6 编码NA蛋白。 RNA7 编码M1，M2蛋白。 RNA8 编码NS1，NS2蛋白
Influenza A viral genome
NS1,NS2 检测目标?
1918～1919年世紀西班牙流感病毒 死亡人数估计2000 ~ 5000万人
An Emergency Hospital for Influenza Patients
流感病毒简介
Influenza Virus
有包膜的单链负义RNA 病毒 正黏病毒科 直径80～120nm ，呈球 形或丝状 分A、B、C（甲、乙、 丙）三型
流感病毒的传播
患者一个激烈的咳嗽反射能
将含有病毒的微液滴以每小 时约100英里的速度排出， 且每个微液滴中含有上百万 个病毒颗粒，而启动一个个 体的感染仅仅需要几个或几 十个病毒颗粒。这就导致了 流感病毒可快速高效地传播。
流感的预防措施
自我保护 保持良好的个人及环境卫生。 勤洗手，使用肥皂或洗手液并用流动水洗手，不用污浊的 毛巾擦手。双手接触呼吸道分泌物后（如打喷嚏后）应立 即洗手。 打喷嚏或咳嗽时应用手帕或纸巾掩住口鼻，避免飞沫污染 他人。流感患者在家或外出时佩戴口罩，以免传染他人。 均衡饮食、适量运动、充足休息，避免过度疲劳。 每天开窗通风数次（冬天要避免穿堂风），保持室内空气 新鲜。 在流感高发期，尽量不到人多拥挤、空气污浊的场所；不 得已必须去时，最好戴口罩。
在亚型内部经常发生小变异 （量变），称为抗原漂移 （antigenic drift）。 大的抗原变异出现的亚型 （质变）即称抗原转变 （antigenic shift），其为H 和（或）N都发生了大的变 异，由此而产生新的亚型， 可引起世界性大流行。
流感病毒的抗原性变异
HA：15种亚型变异。NA：9种亚型变异。 A型流感病毒的抗原变异较快，2～3年可发生 一次。 B型流感病毒的抗原变异很慢，未划分成亚型 转变。 C型流感病毒尚未发现抗原变异。
流感病毒的结构
中层为基质蛋白，它构成了 病毒的外壳骨架。实际上骨 架中除了基质蛋白 (M1)之 外还有膜蛋白 (M2)。基质 蛋白与病毒最外层的包膜紧 密结合起到保护病毒核心和 维系病毒空间结构的作用。 M1抗原性稳定，也具有型 特异性。
流感病毒的结构
外层为病毒包膜，是 包裹在基质蛋白之外 的一层磷脂双分子层 膜，其上具有两种不 同糖蛋白构成的辐射 状突起，即血凝素 （hemagglutinin， HA）和神经氨酸酶 (neuraminidase，NA)