大小剂量盐酸异丙肾上腺素诱发大鼠心肌损伤模型的研究

大小剂量盐酸异丙肾上腺素诱发大鼠心肌损伤模型的研究李晓华;刘凯;张宁;李世文;高海成;苗春生;尹殿胜
【摘要】目的：探究大剂量盐酸异丙肾上腺素（ISO，15 mg／kg）与小剂量盐酸异丙肾上腺素（3 mg／kg）诱发大鼠心肌损伤模型，阐明心肌损伤程度，为本科教学提供好的模具。

方法Wistar 大鼠30只，随机分为6组，正常对照组，ISO-2h （15 mg／kg）；ISO-3 weeks （15 mg／kg）；ISO-2h （3 mg／kg）；ISO-3weeks （3 mg／kg）。

除正常组外，其余各组大鼠皮下多点一次性分别注射 ISO 15 mg／kg 和3 mg／kg。

通过死亡率，形态学及胶原的表达比较两种剂量模型的损伤程度。

结果注射15 mg／kg ISO，心肌在2 h 即出现较大的点状坏死，3周出现明显的纤维化，大鼠死亡率亦较低；注射3 mg／kg ISO，心肌在2 h 出现少量点状坏死，3周出现纤维增生。

结论多点皮下一次性注射 ISO 15 mg／kg 较注射 ISO 3 mg／kg 病灶清晰，可出现明显的纤维化，为本科教学提供较好的模具。

%Objective To investigate the model on large dose of Isoprenaline Hydrochloride (15 mg/kg)and small dose of Isoprenaline Hydrochloride (3mg/kg)-induced myocardial injury.To clarify the degree of myocardial injury,and provide good mould for undergraduate teaching.Methods 30 Wistar male rats were randomly divided into 6 groups, control group (two groups),ISO-2h (15 mg/kg),ISO-3weeks (15 mg/kg),ISO-2h (3mg/kg),ISO-3weeks (3mg/kg). In addition to normal group,the other rats were injected with ISO 15 mg/kg and 3
mg/kg,respectively.The damage de-gree of the model was determined by morphology and Masson staining.Results the myocardium appeared necrosis after injection 15 mg/kg ISO in 2h and appeared the fibrosis at 3
weeks,the mortality of rats was lower.The myocardial tis-sue had a small amount of necrosis after injection ISO in 2h and appeared fiber hyperplasia.Conclusion The model of myocardial injury in injection 15
mg/kg ISO was clearer than the injection of 3 mg/kg,which could appear obvious fi-brosis,could provide better mould for undergraduate teaching.【期刊名称】《中国实验诊断学》
【年(卷),期】2016(000)002
【总页数】4页(P185-188)
【关键词】盐酸异丙肾上腺素;心肌损伤;动物
【作者】李晓华;刘凯;张宁;李世文;高海成;苗春生;尹殿胜
【作者单位】吉林大学第二医院，吉林长春 130041;吉林大学药学院，吉林长春130021;吉林大学药学院，吉林长春 130021;吉林大学药学院，吉林长春130021;吉林大学药学院，吉林长春 130021;吉林大学药学院，吉林长春130021;吉林消防总队医院，吉林长春 130061
【正文语种】中文
【中图分类】Q617
文献报道，ISO 可引发大鼠心肌损伤[1，2]，该损伤能够评价药物抑制心肌损伤模型[3，4]。

以往多注射 ISO 2 mg/kg-5 mg/kg 诱发心肌损伤[5-7]，其最高剂量也不过10 mg/kg[8]。

随能诱发心肌损伤，但很难达到判定早期心肌损伤的程度和较好地运用本科教学。

我室曾用3 mg/kg ISO诱发大鼠心肌损伤模型，其成模率较低，且程度较轻。

因此，构建结构清晰的心肌损伤模型，成为科学人员迫切解
决的问题。

我室摸索出多点皮下一次性注射15 mg/kg ISO，死亡率较3 mg/kg ISO无明显增高，病变程度明显优于3 mg/kg ISO诱导的心肌模型，且出现明显的纤维化。

由此，大剂量ISO诱发心肌损伤模型明显优于小剂量ISO诱发大鼠心肌损伤模型，为本科教学奠定坚实的基础。

1.1 实验动物雄性(Wistar)大鼠30只，体重180-220 g，购自吉林大学实验动物中心。

1.2 主要仪器与试剂莱卡切片机(德国)；0.9%生理盐水注射液；ISO注射液由上海禾丰制药有限公司生产。

(浓度1 mg/2 ml)
1.3 方法
1.3.1 动物模型的建立30只(Wistar)大鼠分成ISO组和正常对照组(两组)。

ISO
2 h、
3 w组(皮下多点一次性注射ISO 15 mg/kg)。

ISO 2 h、3 w ((皮下多点一次性注射ISO 3 mg/kg)
1.3.2 HE染色取材经10%甲醛固定30 min，常规石蜡包埋。

用二甲苯脱腊10 min，用100%乙醇置换二甲苯2 min、95%乙醇置换1 min、80%乙醇置换1 min及用75%乙醇置换1 min，蒸馏水冲洗 2 min。

苏木素染色5 min，自来水冲洗。

盐酸乙醇分化30 s。

自来水浸泡15 min。

伊红染2 min。

常规脱水，透明，中性树胶封闭剂封片。

1.3.3 Masson 三色染色切片常规脱蜡至水。

苏木素染核2 min，流水冲洗。

丽春红品红液染5 min，显微镜下控制。

0.5%冰醋酸水溶液快速冲洗。

1%磷钼酸水溶液快速处理，其切片由深红色至鲜红色至粉红色，其颜色的掌握度必须在显微镜下控制。

直接用苯胺蓝染色。

0.5% 冰醋酸水溶液快速冲洗。

常规脱水，二甲苯透明，封片。

1.4 统计学处理数据以表示，采用SPSS15.0软件进行分析。

P<0.05有显著性差异。

2.1 HE染色(小剂量)
在正常组中，心肌排列整齐，横纹清晰，胞核明显，无细胞肿胀(图1A)。

注射
ISO2h后，心尖及心内膜仅有少量的变性和水肿，局限于心内膜下(图1B)。

注射ISO3w后，出现局部小坏死病灶，局部出现增生组织(图1C)。

2.2 Masson三色染色(小剂量)
在正常组中，仅见少量胶原蛋白；注射ISO2h后，胶原蛋白含量增加P<0.05；随注射时间的延长，胶原蛋白含量有所增加P<0.01，且坏死面轮廓较轻(图2)。

2.3 HE染色(大剂量) 在对照组中心肌排列整齐，横纹清晰，胞核明显(图3A)。

注射ISO2h后，心内膜即有明显的变性和水肿，且出现点状坏死(图3B)。

注射ISO3w后，坏死面积达到最大，病灶内出现明显的纤维化(图3C)。

2.4 Masson三色染色(大剂量)
在正常组中，仅见少量胶原蛋白；注射ISO2h后，胶原蛋白表达量明显增加
P<0.05； 3周时胶原蛋白含量增加明显P<0.01，坏死面轮廓清晰可见图4。

随着人口老龄化的增加，现代生活节奏的加快，饮食习惯的改变以及社会、心理等因素的影响，我国心血管疾病的发病率呈现逐年升高的趋势[5]。

因此，探究心血
管疾病已成为当前研究的热门话题。

由此建立心肌损伤模型便成为研究的首要问题，当前通过尾加压素强烈收缩冠状动脉作用引起心肌缺血坏死；注射儿茶酚胺类药物促进冠状动脉收缩、增强心肌收缩力和增加心肌耗氧量等多方面机制诱发心肌缺血坏死。

其中，儿茶酚胺类药物诱导的心肌缺血坏死模型具有方法简单、时间易于掌握、效果稳定可靠、心肌缺血坏死的病理特点和发生机制与人类缺血性心肌缺血坏死有较多类似之处等优点，故我室选择多点皮下一次性注射ISO的方法[3]。

经预
实验探究，剂量为3mg/kgISO方法复制的大鼠心肌缺血坏死模型，结果表现为病变轻微及病变发生时间较为分散，很难捕捉早期病变的出现时间和病变情况。

为捕捉早期心肌缺血坏死灶内的病变过程和细胞变化情况，我室参考了以往实验剂量
[5-8]，但其病变结果未出现纤维化。

为引起病变后纤维化，我室摸索出注射15 mg/kg ISO诱发心肌损伤模型，注射ISO 2 h后，心肌表现为变性、水肿及较重的点状坏死，随注射时间的延长缺血坏死面积明显增加，3w达高峰，且出现明显的纤维化，提示注射15 mg/kg ISO可成功地复制大鼠心肌损伤模型。

而注射3 mg/kg ISO大鼠心肌组织出现点状坏死和增生，但很难达到教学的标准。

由此注射15 mg/kg ISO能为本科教学提供有效效的模具。

【相关文献】
[1]Rona G,Chappel CI,Balazs T,et al.An infarct like myocardiallesion and other toxic manifestations produced by Isoproterenol in therat[J].Arch Pathol,1959,67:443-455.
[2]徐叔云.药理学实验方法[M].第2 版.北京:人民卫生出版社,1991：897.
[3]朱彤莹，黄国英，顾勇，等.两种心衰模型大鼠心功能的比较[J].中国实验动物学报，2002，10:51.
[4]边长勇，秦永文，郑兴，等.大鼠充血性心力衰竭模型的制备[J].第二军医大学学报，2001，22:693.
[5]王玉霞.老年人心血管疾病及相关危险因素综述[J].当代医学，2012，5(18)：61.
[6]谷新荣，姜丽红，李艾丽，等加味阳和汤对实验性心肌缺血鼠心肌的保护作用[J].长春中药医药大学学报，2007，2(23):23.
[7]白冰，顾明，滕宗艳，等.异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤肥大时骨架蛋白的变化及意义[J].中国地方学杂志，2005，3(24):281.
[8]冯琳，孟丹，陈相健，等.黄芪总皂苷对异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤的保护作用[J].中国药学杂志，2006，17(41):1313.
[9]贾广乐，董培智.对肾上腺素性心肌缺血模型大鼠相关指标的探讨[J].中国实验动物学报.2005，2(13).106.。