原创5：5.1 DNA的粗提取与鉴定
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DNA
实验设计
【3】除去滤液中的杂质(纯化) 【方案二】
直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10~15min，嫩肉粉中的 木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。
【方案三】 将滤液放在60~75℃的恒温水浴箱中保温10~15min，注意严格控制 温度范围。
思考题：方案二与方案三的原理有什么不同？ 方案二：利用蛋白酶分解杂质蛋白，使提取的DNA与蛋白质分开 方案三：利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，使蛋白质变性，
使细胞吸水涨破，释 放胞内物质
实验设计
【2】破碎细胞，获取含DNA的滤液 (1)制备鸡血细胞液 防止血液凝固
取0.1g/ml的柠檬酸钠溶液100ml置于500ml烧
杯中，加鸡血180ml，用玻璃棒缓慢搅拌，离
心2~3min，除去上清液。 (2)破碎细胞，获取含DNA的溶液
加入洗涤剂后，动作要轻缓、 柔和，否则容易产生大量的泡 沫，不利于后续步骤的操作
①蛋白酶——水解蛋白质， ——对DNA无影响
②高温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃ ——而DNA在80℃以上才会变性
③洗涤剂——瓦解细胞膜 ——但对DNA没有影响
基本知识
一、DNA的溶解性
基本知识
二、DNA的鉴定
试剂： 二苯胺 条件： 沸水浴 现象： 沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色
(2)破碎细胞，获取含DNA的溶液
向鸡血中加入20ml蒸馏水，单向快速搅拌， 最后用1~2层纱布过滤。
使细胞吸水涨破， 释放胞内物质
核液
实验设计
【3】除去滤液中的杂质(纯化) 【方案一】利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，可以通
过控制NaCl溶液的浓度去除杂质。 向溶液中加___2_m_o_l_/L__N_a_C__l_溶液40ml，并缓慢搅拌。在滤液中加入 NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再加入 蒸馏水，调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤除去溶 液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。
观
与DNA分离
实验设计
【4】DNA的析出与鉴定 (1)DNA的析出 与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体积分数95％)，静置2－3min，溶 液中会出现白色丝状物。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并 用滤纸吸取上面的水。
动作要轻缓，以免加剧DNA 分子的断裂，导致DNA分子 不能形成絮状沉淀。
由于玻璃表面带电荷，DNA中的磷酸基业带电荷而被吸 附于玻璃表面，故实验中用塑料杯和试管可减少损失。
同步练习
2.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加蒸馏水的作用是 ( B) A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA
同步练习
3.关于DNA在NaCl溶液中的溶解度，下面的叙述哪一个是正确的 （ D） A.随着NaCl溶液浓度的增大，DNA在NaCl溶液中的溶解度也增大 B.随着NaCl溶液浓度的减小，DNA在NaCl溶液中的溶解度也减小 C.DNA在NaCl溶液中的溶解度与NaCl溶液的浓度无关 D.当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低
DNA的粗提取与鉴定
问题导入
DNA从哪提取？
怎样将DNA与细胞 中的其他物质分离？
DNA的粗提取与鉴定
怎样鉴定我们提取的DNA？
基本思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面 的差异，提取DNA，去除其他成分。
基本知识
一、DNA的Cl溶液
实验设计
实验材料的选取
破碎细胞，获取含DNA的滤液
除去滤液中的杂质(纯化)
DNA的析出与鉴定
实验设计
【1】实验材料的选取 鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋 葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌 你会选哪种材料进行实验？ 原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对 较高的生物组织，成功的可能性更大。 常用材料：新鲜的鸡血
实验设计
实验设计
本实验中有三次过滤 ,获得什么？
➢ 过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液 ----获得含核物质的滤液
➢ 过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液 ----获取纱布上的DNA粘稠物
➢ 过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液 ----得到含DNA的滤液
实验设计
实验中有五次用玻璃棒搅拌?分别有什么作用?
若是植物细胞需要先用一定的洗涤剂溶解细胞膜。提 取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和 食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液
有利于DNA的溶解
实验设计
【2】破碎细胞，获取含DNA的滤液 (1)制备鸡血细胞液 防止血液凝固 取0.1g/ml的柠檬酸钠溶液100ml置于500ml烧 杯中，加鸡血180ml，用玻璃棒缓慢搅拌，离 心2~3min，除去上清液。
实验设计
【4】DNA的析出与鉴定
(2)DNA的鉴定
现配现用
鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L 的NaCl溶液 5ml于两只试管中，其中一只加入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml 试 剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，比较 两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否有蓝色。
思考题：能否选用牛、羊、猪红细胞血做实验材料？为什么？ 不能，哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核
实验设计
【2】破碎细胞，获取含DNA的滤液 (1)制备鸡血细胞液 防止血液凝固 取0.1g/ml的柠檬酸钠溶液100ml置于500ml烧 杯中，加鸡血180ml，用玻璃棒缓慢搅拌，离 心2~3min，除去上清液。 (2)破碎细胞，获取含DNA的溶液 向鸡血中加入20ml蒸馏水，单向快速搅拌，最后用1~2层纱布过滤。
DNA在NaCl溶液中的 溶解度曲线
析出 溶解
蛋白质在NaCl溶液中的 溶解度曲线
溶解
析出
提取思路：选择适当的盐浓度使DNA充分溶解，而杂质沉淀，或者 相反，以初步分离的目的。
基本知识
一、DNA的溶解性
➢ DNA不溶于酒精，但细胞质中某些蛋白质溶于酒精。 ——将DNA与蛋白质进一步分离
➢ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。
➢ 第五次搅拌体积分数为95%的酒精 ----卷起DNA丝状物，获取含杂质较少的DNA
实验设计
本实验两次析出DNA： ➢ 第一次：用0.14 mol／L 的NaCI溶液析出DNA。
----除去溶液中的杂质
➢ 第二次：用冷却的95％的酒精，获得含杂质较少的DNA 丝状物
同步练习
1.做DNA粗提取和鉴定实验时,实验材料用鸡血而不用猪血的原 因是（ B ） A.鸡血的价格比猪血的价格低 B.猪的红细胞没有细胞核,不易提取到DNA C鸡血不凝固.猪血会凝固 D.用鸡血提取DNA比用猪血提取操作简便
➢ 第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液 ----加速了鸡血细胞的破裂，从而释放出DNA
➢ 第二次搅拌加2mol/LNaCl溶液的滤液 ----目的是使DNA充分溶解在2mol/LNaCl溶液中
➢ 第三次搅拌加蒸馏水至0.14mol/LNaCl溶液 ----稀释NaCl溶液,析出DNA黏稠物
➢ 第四次搅拌放入2mol/LNaCl溶液中纱布上的粘稠物 ----使DNA黏稠物充分溶解在2mol/LNaCl溶液中
实验设计
【3】除去滤液中的杂质(纯化) 【方案二】
直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10~15min，嫩肉粉中的 木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。
【方案三】 将滤液放在60~75℃的恒温水浴箱中保温10~15min，注意严格控制 温度范围。
思考题：方案二与方案三的原理有什么不同？ 方案二：利用蛋白酶分解杂质蛋白，使提取的DNA与蛋白质分开 方案三：利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，使蛋白质变性，
使细胞吸水涨破，释 放胞内物质
实验设计
【2】破碎细胞，获取含DNA的滤液 (1)制备鸡血细胞液 防止血液凝固
取0.1g/ml的柠檬酸钠溶液100ml置于500ml烧
杯中，加鸡血180ml，用玻璃棒缓慢搅拌，离
心2~3min，除去上清液。 (2)破碎细胞，获取含DNA的溶液
加入洗涤剂后，动作要轻缓、 柔和，否则容易产生大量的泡 沫，不利于后续步骤的操作
①蛋白酶——水解蛋白质， ——对DNA无影响
②高温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃ ——而DNA在80℃以上才会变性
③洗涤剂——瓦解细胞膜 ——但对DNA没有影响
基本知识
一、DNA的溶解性
基本知识
二、DNA的鉴定
试剂： 二苯胺 条件： 沸水浴 现象： 沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色
(2)破碎细胞，获取含DNA的溶液
向鸡血中加入20ml蒸馏水，单向快速搅拌， 最后用1~2层纱布过滤。
使细胞吸水涨破， 释放胞内物质
核液
实验设计
【3】除去滤液中的杂质(纯化) 【方案一】利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，可以通
过控制NaCl溶液的浓度去除杂质。 向溶液中加___2_m_o_l_/L__N_a_C__l_溶液40ml，并缓慢搅拌。在滤液中加入 NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再加入 蒸馏水，调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤除去溶 液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。
观
与DNA分离
实验设计
【4】DNA的析出与鉴定 (1)DNA的析出 与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体积分数95％)，静置2－3min，溶 液中会出现白色丝状物。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并 用滤纸吸取上面的水。
动作要轻缓，以免加剧DNA 分子的断裂，导致DNA分子 不能形成絮状沉淀。
由于玻璃表面带电荷，DNA中的磷酸基业带电荷而被吸 附于玻璃表面，故实验中用塑料杯和试管可减少损失。
同步练习
2.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加蒸馏水的作用是 ( B) A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA
同步练习
3.关于DNA在NaCl溶液中的溶解度，下面的叙述哪一个是正确的 （ D） A.随着NaCl溶液浓度的增大，DNA在NaCl溶液中的溶解度也增大 B.随着NaCl溶液浓度的减小，DNA在NaCl溶液中的溶解度也减小 C.DNA在NaCl溶液中的溶解度与NaCl溶液的浓度无关 D.当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低
DNA的粗提取与鉴定
问题导入
DNA从哪提取？
怎样将DNA与细胞 中的其他物质分离？
DNA的粗提取与鉴定
怎样鉴定我们提取的DNA？
基本思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面 的差异，提取DNA，去除其他成分。
基本知识
一、DNA的Cl溶液
实验设计
实验材料的选取
破碎细胞，获取含DNA的滤液
除去滤液中的杂质(纯化)
DNA的析出与鉴定
实验设计
【1】实验材料的选取 鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋 葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌 你会选哪种材料进行实验？ 原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对 较高的生物组织，成功的可能性更大。 常用材料：新鲜的鸡血
实验设计
实验设计
本实验中有三次过滤 ,获得什么？
➢ 过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液 ----获得含核物质的滤液
➢ 过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液 ----获取纱布上的DNA粘稠物
➢ 过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液 ----得到含DNA的滤液
实验设计
实验中有五次用玻璃棒搅拌?分别有什么作用?
若是植物细胞需要先用一定的洗涤剂溶解细胞膜。提 取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和 食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液
有利于DNA的溶解
实验设计
【2】破碎细胞，获取含DNA的滤液 (1)制备鸡血细胞液 防止血液凝固 取0.1g/ml的柠檬酸钠溶液100ml置于500ml烧 杯中，加鸡血180ml，用玻璃棒缓慢搅拌，离 心2~3min，除去上清液。
实验设计
【4】DNA的析出与鉴定
(2)DNA的鉴定
现配现用
鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L 的NaCl溶液 5ml于两只试管中，其中一只加入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml 试 剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，比较 两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否有蓝色。
思考题：能否选用牛、羊、猪红细胞血做实验材料？为什么？ 不能，哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核
实验设计
【2】破碎细胞，获取含DNA的滤液 (1)制备鸡血细胞液 防止血液凝固 取0.1g/ml的柠檬酸钠溶液100ml置于500ml烧 杯中，加鸡血180ml，用玻璃棒缓慢搅拌，离 心2~3min，除去上清液。 (2)破碎细胞，获取含DNA的溶液 向鸡血中加入20ml蒸馏水，单向快速搅拌，最后用1~2层纱布过滤。
DNA在NaCl溶液中的 溶解度曲线
析出 溶解
蛋白质在NaCl溶液中的 溶解度曲线
溶解
析出
提取思路：选择适当的盐浓度使DNA充分溶解，而杂质沉淀，或者 相反，以初步分离的目的。
基本知识
一、DNA的溶解性
➢ DNA不溶于酒精，但细胞质中某些蛋白质溶于酒精。 ——将DNA与蛋白质进一步分离
➢ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。
➢ 第五次搅拌体积分数为95%的酒精 ----卷起DNA丝状物，获取含杂质较少的DNA
实验设计
本实验两次析出DNA： ➢ 第一次：用0.14 mol／L 的NaCI溶液析出DNA。
----除去溶液中的杂质
➢ 第二次：用冷却的95％的酒精，获得含杂质较少的DNA 丝状物
同步练习
1.做DNA粗提取和鉴定实验时,实验材料用鸡血而不用猪血的原 因是（ B ） A.鸡血的价格比猪血的价格低 B.猪的红细胞没有细胞核,不易提取到DNA C鸡血不凝固.猪血会凝固 D.用鸡血提取DNA比用猪血提取操作简便
➢ 第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液 ----加速了鸡血细胞的破裂，从而释放出DNA
➢ 第二次搅拌加2mol/LNaCl溶液的滤液 ----目的是使DNA充分溶解在2mol/LNaCl溶液中
➢ 第三次搅拌加蒸馏水至0.14mol/LNaCl溶液 ----稀释NaCl溶液,析出DNA黏稠物
➢ 第四次搅拌放入2mol/LNaCl溶液中纱布上的粘稠物 ----使DNA黏稠物充分溶解在2mol/LNaCl溶液中