PRRSVN基因的原核表达、蛋白纯化及间接ELISA方法的初建的开题报告
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PRRSVN基因的原核表达、蛋白纯化及间接ELISA
方法的初建的开题报告
题目：PRRSVN基因的原核表达、蛋白纯化及间接ELISA方法的初
建
研究背景与意义：
PRRSVN（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Nucleocapsid）是猪繁殖与呼吸综合症病毒的核衣壳蛋白，是PRRSV病
毒基因组中最丰富、最保守的病毒抗原之一。
由于PRRSV病毒对猪的危
害性极高，因此开发快速检测PRRSVN抗体的ELISA方法有着重要的研
究意义。
研究内容与方法：
本研究旨在通过对PRRSVN基因的原核表达和纯化，初步建立检测PRRSVN抗体的间接ELISA方法。
具体实验步骤如下：
1. 从PRRSV-A分离活跃的PRRSVN基因，并进行PCR扩增和回收。
2. 克隆PRRSVN基因到表达载体pET-30a(+)中，构建重组表达质
粒pET-30a(+)-PRRSVN。
3. 将pET-30a(+)-PRRSVN质粒转化至大肠杆菌Bl21(DE3)中，利
用IPTG进行诱导表达PRRSVN蛋白。
4. 收获大肠杆菌Bl21（DE3）中表达的PRRSVN蛋白，并经过Ni-NTA亲和层析柱纯化。
5. 利用Western blot验证PRRSVN蛋白的纯化效果。
6. 基于PRRSVN蛋白建立间接ELISA方法，进行PRRSVN抗体检测。
预期结果与分析：
本研究通过对PRRSVN基因的原核表达和纯化，建立了检测PRRSVN抗体的间接ELISA方法。
通过Western blot验证PRRSVN蛋白的纯化效果，并进行PRRSVN抗体检测。
预期结果为该方法可以灵敏、快速地检测PRRSVN抗体，有望为PRRSV病毒的病原学研究和临床诊断提供新的方法和思路。