生物技术制药整理

⽣物技术制药整理
多克隆抗体（polyclonal antibody）:指由不同B细胞克隆产⽣的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混合物。

如:免疫⾎清。

单克隆抗体（monoclonal antibody McAb）:单克隆抗体是将抗体产⽣细胞与具有⽆限增殖能⼒的⾻髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯⼀的单克隆细胞系⽽产⽣的。

由于这种抗体是针对⼀个抗原决定族的抗体，⼜是单⼀的B 淋巴细胞克隆产⽣的，故称为单克隆抗体。

简述基因⼯程操作流程答：
基因⼯程的操作流程：
（1）分：分离⽬的基因；
（2）切：对⽬的基因和载体适当切割；
（3）接：⽬的基因与载体连接；
（4）转：重组DNA转⼊受体细胞；
（5）筛：筛选出含有重组体的受体细胞；
（6）表：⽬的基因在受体细胞中表达，受体细胞成长为基因改造⽣物。

简述微⽣物发酵制药的基本流程。

答：微⽣物发酵制药基本流程：
菌种选育（⾃然界选种、诱变育种、基因⼯程、细胞⼯程）培养基配制（根据培养基的配制原则制备，实践中需多次试验配⽅）灭菌（杀灭杂菌（胞体、孢⼦及芽孢）扩⼤培养和接种
发酵过程（检测进程，满⾜营养需要；严格控制温度、pH、溶氧、转速等）分离纯化（菌体：过滤、沉淀；代谢产物：蒸馏、萃取、离⼦交换）
简述⽣物药物的优点和缺点。

答：⽣物药物是指利⽤各种⽣物材料，综合采⽤各种⽣物技术的原理和⽅法制造的⼀类⽤于预防、治疗和诊断的制品。

优点：
（1）⽤量少，药理活性⾼；
（2）特异性强，治疗的⽣理⽣化机制合理，疗效可靠；（2）毒副作⽤⼩、价值⾼；（3）缺点：
（1）成分复杂：⼤多数是混合物；（2）不稳定：易变性，易失活，易降解。

（3）提取纯化⼯艺复杂、⽣产技术难度⾼；（4）⽣理副作⽤常有发⽣。

第⼆章基因⼯程制药
填空题
1.基因⼯程药物制造的主要步骤是：⽬的基因的获得；构建DNA重组体；构建⼯程菌；⽬的基因的表达；产物的分离纯化；产品的检验。

2.⽬的基因获得的主要⽅法是反转录法、反转录-聚合酶链反应法和化学合成法。

3.基因表达的微⽣物宿主细胞分为2⼤类。

第⼀类为原核细胞，⽬前常⽤的主要有⼤肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉素；第⼆类为真核细胞，常⽤的主要有酵母、丝状真菌。

4.基因⼯程菌在传代过程中经常出现质粒不稳定性的现象，质粒不稳定分为分裂不稳定性和结构不稳定性；基因⼯程菌的不稳定性⾄少维持 25 代以上。

5.基因⼯程菌的培养⽅式主要有分批培养；补料分批培养；连续培养；透析培养和固定化培养；
6.⾼密度发酵⼀般是制培养液中⼯程菌的浓度在 50g DCW/L 以上，理论上的最⾼值可达 200g DCW/L 。

7.影响⾼密度发酵的因素有培养基；溶氧浓度； PH ；温度和代谢副产物。

8.基因⼯程药物的分离纯化⼀般不应超过5个步骤，包括细胞破碎；固液分离；浓缩与初步纯化；⾼度纯化和成品加⼯。

9.在基因⼯程药物分离纯化过程中，分离细胞碎⽚⽐较困难，可⽤离⼼；膜过滤和双⽔相分配的⽅法，使细胞碎⽚分配在⼀相，⽬标药物分配在另⼀相从⽽达到初步分离的⽬的。

10. ⼈⼯化学合成DNA新形成的核苷酸链的合成⽅向是 3’→ 5’，合成的DNA 5’末端是磷酸酯键， 3’末端是 -OH
选择题
1、凝胶过滤法是依赖（A ）来分离蛋⽩组分。

A、分⼦⼤⼩ B、带电状态 C、分⼦质量 D、解离状态
2、在⼯程菌发酵过程中，选⽤那种糖会对lac启动⼦有阻遏作⽤。

（A ） A、⽢油 B、葡萄糖 C、⽢露糖 D、饴糖
3. 可⽤于医药⽬的的蛋⽩质和多肽药物都是由相应的（ B ）合成的 A RNA B 基因 C 氨基酸 D 激素
4. ⽤反转录法获得⽬的基因，⾸先必须获得（D） A tRNA B cDNA C rRNA D mRNA
5.那⼀类细菌不属于原核细胞（ C ） A ⼤肠杆菌 B 枯草芽孢杆菌C 酵母D 链霉菌
6.基因⼯程菌的⽣长代谢与（ D ）⽆关 A 碳源 B RNA聚合酶C 核糖体 D产物的分⼦量
7.基因⼯程菌的稳定性⾄少要维持在（B ）以上 A 20 B 25 C 30 D 40
8.基因⼯程菌的⾼密度发酵过程中，⽬前普遍采⽤（ A ）作为发酵培养基的碳源
A 葡萄糖
B 蔗糖
C ⽢油 D⽢露醇
9. 基因⼯程药物多为胞内产物，分离提取时需破碎细胞。

化学破碎法是常⽤的⽅法，但（ D ）不是化学破碎细胞的⽅法。

A 渗透冲击B 增溶法C 脂溶法D 酶溶法
10 下列那种⾊谱⽅法是依据分⼦筛作⽤来纯化基因⼯程药物（C） A 离⼦交换⾊谱 B 亲和⾊谱C 凝胶⾊谱 D⽓相⾊谱
名词解释
1.基因⼯程技术
也可称为DNA重组技术，将所要重组对象的⽬的基因插⼊载体、拼接、转⼊新的宿主细胞，构建⼯程菌，实现遗传物质的重新组合，并使⽬的基因在⼯程菌内进⾏复制和表达的技术。

2.基因⼯程药物
利⽤DNA重组技术⽣产出来的药物被称为基因⼯程药物。

3.基因表达
基因表达是指结构基因在⽣物体中的转录、翻译以及所有加⼯过程。

3.⾼密度发酵
⼀般是指培养液中⼯程菌的菌体浓度在 50g DCW/L 以上的发酵过程，理论上的最⾼值可达 200g DCW/L。

简答题
1.简述基因⼯程⽣产药品的优点
（1）利⽤基因⼯程技术可⼤量⽣产过去难以获得的⽣理活性蛋⽩和多肽，为临床使⽤建⽴有效的保障；
（2）可以提供⾜够数量的⽣理活性物质，以便更深⼊的进⾏研究，从⽽扩⼤这些物质的应
⽤范围；
（3）可以挖掘更多的内源性⽣理活性物质；
（4）可对内源性⽣理活性物质的不⾜之处进⾏改造；（5）可获得新型化合物，扩⼤药物筛选来源。

2. 根据真核基因在原核细胞中表达的特点，表达载体必须具备那些条件？表达载体必须具备下列条件：（1）能够独⽴的复制；
（2）具有灵活的克隆位点和⽅便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选；（3）应具有很强的启动⼦，能为⼤肠杆菌的RAN聚合酶所识别；（4）应具有阻遏⼦（5）应具有很强的终⽌⼦
（6）所产⽣的mRNA必须具有翻译的起始信号。

3.简述影响⽬的基因在⼤肠杆菌中表达的因素影响⽬的基因在⼤肠杆菌中表达的因素：（1）外源基因的剂量
（2）外源基因的表达的表达效率（3）表达产物的稳定性（4）细胞的代谢负荷（5）⼯程菌的培养条件
4.为了提⾼基因⼯程菌的质粒稳定性，可采⽤那些主要⽅法？为了提⾼基因⼯程菌的质粒稳定性，可采取：（1）选择合适的宿主菌；（2）选择合适的载体；（3）选择压⼒；
（4）分阶段控制培养；（5）控制培养条件；（6）固定化技术。

5.影响基因⼯程菌培养⼯艺的主要因素有那些？主要因素有：
（1）培养基的影响（2）接种量的影响（3）温度的影响（4）溶解氧的影响（5）诱导时机的影响
（6）诱导表达程序的影响（7）PH的影响
6.建⽴基因⼯程药物分离纯化⼯艺时，应该考虑那些因素？应考虑下列因素：
（1）含⽬的的产物的初始物料的特点；（2）物料中杂质的种类和性质；（3）⽬的产物特性；（4）产品的质量要求
7.基因⼯程技术⽣产的⽬标产物是多肽和蛋⽩质类化合物，这些产品有什么特点？
（1）⽬的产物在初始物料中含量低（2）含⽬的产物的初始物料组成复杂
（3）⽬的产物的的稳定性差，对酸碱热等外界因素敏感；（4）种类繁多
（5）产品的质量要求
8、基因⼯程菌的发酵与传统的微⽣物发酵有什么不同？简单分析其温度对发酵的影响。

9.分离纯化基因⼯程药物常⽤的⾊谱⽅法有那些？它们的原理是什么？
分离纯化基因⼯程药物常⽤的⾊谱⽅法有：离⼦交换⾊谱，疏⽔⾊谱，亲和⾊谱和凝胶过滤⾊谱；
离⼦交换⾊谱，以离⼦交换剂为固定相，依据流动相中的组分离⼦和交换剂上的平衡离⼦进⾏可拟交换时的结合⼒⼤⼩的差别⽽进⾏分离的⼀种⾊谱⽅法；
疏⽔⾊谱，利⽤蛋⽩质表⾯的疏⽔区域与固定相上疏⽔性基团相互作⽤⼒的差异对蛋⽩质组分进⾏分离的⾊谱⽅法；
亲和⾊谱：利⽤固定化配体与⽬的蛋⽩质之间⾮常特异的⽣物亲和⼒进⾏吸附，这种结合既是特异的⼜是可逆的，改变条件可以使这种结合解除的原理分离纯化蛋⽩质；
凝胶过滤⾊谱，是以多孔性凝胶填料为固定相，按分⼦⼤⼩对溶液中各组分进⾏分离的液相⾊谱⽅法。

10. 影响⾼密度发酵的因素有那些？（1）培养基为满⾜菌体⽣长和外源蛋⽩表达的需求，常需投⼊⼏倍于⽣物量的基质，为了达到理想的效果，需要对培养基的营养物质的配⽐进⾏优化。

（2）溶氧浓度溶解氧的浓度过⾼或过低都会影响细菌的代谢，因⽽对菌体⽣长和产物表达影响很⼤。

要保持适宜的溶氧浓度，需要确定发酵罐的通⽓量和搅拌速度。

（3）
PH 在⾼密度发酵的过程中，PH的改变会影响细胞的表达和基因产物的表达，因此⼀定要考虑细菌的最适PH范围。

（4）温度温度是影响细菌⽣长和调控细胞代谢的重要因素。

较⾼的温度有利于细菌的⽣长，提⾼菌体的⽣物量。

（5）代谢副产物⼤肠杆菌在发酵过程中都会产⽣⼀些有害的代谢副产物，这些副产物积累到⼀定量会抑制菌体的⽣长和蛋⽩的表达，可通过填加某些物质如氨基酸可减轻某些有害物质如⼄酸的抑制作⽤。

第四章抗体制药填空
1．Ig分⼦是由⼆硫键连接起来的 4条（两对）条多肽链构成的。

2．单克隆抗体制备时对动物的免疫⽅法分为体内免疫和体外免疫。

3．⼀般来说PEG的相对分⼦质量和浓度越⼤，细胞的融合率越⾼。

1.Ig分⼦的抗原结合部位是由（ B ）共同构成。

A VL和CL区
B VL和VH的CDR区
C VL和CH区
D VH和 CL区 2.制备单克隆抗体时⼀般采⽤与（ D ）供体同⼀品系的动物进⾏免疫。

A 淋巴细胞 B肝细胞 C脾细胞 D⾻髓瘤细胞
3. ⽣物药物检验要求（ D ）。

A 要求有理化检验指标
B ⽣物活性指标
C 药代动⼒学指标 D理化指标和⽣物活性指标缺⼀不可
4.下列不属于基因产品液态保存的⽅法是（ B ）
A 低温保存
B 低浓度保存
C 在稳定pH条件下保存
D 加保护剂保存 5.⽬前预防⼄型肝炎使⽤的⽣物制品属于（ A ）。

A疫苗 B菌苗 C类毒素 D⾎液制品
单克隆抗体
多克隆抗体病原微⽣物含有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体。

抗体是指能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋⽩。

免疫球蛋⽩将具有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋⽩统称为免疫球蛋⽩
改形抗体 Ig 分⼦中参与构成抗原结合部位的区域是H和L链V区中的互补决定区（CDR 区），⽽不是整个可变区。

H和L链各有三个CDR，其它部分称框架区。

⽤⿏源单抗的CDR 序列替换⼈Ig 分⼦中CDR序列，则可使⼈的Ig 分⼦具有⿏源单抗的抗原结合特异性。

可消除免疫源性。