丹参口服液对口腔种植体骨结合的影响及机制探讨

丹参口服液对口腔种植体骨结合的影响及机制探讨
杨洪涛;常维巍;吕林
【摘要】目的：通过建立家兔种植体模型，检测转化生长因子‐β1（TGF‐β1）的表达量，探讨丹参口服液对口腔种植体骨结合的影响及分子机制。

方法：将18只家兔随机分为实验组和对照组，每组各9只，均在家兔下颌双侧同一位置植入种植体各1枚。

植入种植体的同时对实验组的家兔给于复方丹参口服液服用3周，分别于术后7 d、14 d、及21 d取种植体周围组织通过RT‐PCR、West‐ern blot 检测TGF‐β1 mRNA和蛋白表达水平，并观察两组家兔种植体的稳定性，于术后21 d时处死家兔做骨切片，采用HE染色通过图像分析系统进行骨组织形态学面积测量分析新生骨面积。

结果：经口服复方丹参液治疗后实验组TGF‐β1 mRNA 和蛋白表达水平、新骨组织形成量及新生骨面积明显增加，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。

结论：复方丹参口服液能促进口腔种植体骨结合作用，其机制与上调TGF‐β1 mRNA和蛋白表达相关。

【期刊名称】《陕西医学杂志》
【年(卷),期】2016(045)010
【总页数】3页(P1279-1280,1291)
【关键词】牙种植体 ,单牙;骨结合;丹参口服液;转化生长因子β1
【作者】杨洪涛;常维巍;吕林
【作者单位】山东省青州市潍坊护理职业学院青州262500;山东省青州市潍坊护理职业学院青州262500;山东省青州市潍坊护理职业学院青州262500
【正文语种】中文
【中图分类】R783.3
钛种植体能与骨组织产生骨性结合且具有良好的组织相容性,目前在口腔种植上应
用越来越多。

由于牙周疾病、创伤等造成的骨缺损，以及牙槽骨吸收而导致的骨量不足从而影响种植体-骨结合率下降及种植体成功率。

在实施种植后种植体与骨结合的牢固如否,会直接影响种植牙的质量及效果,为更好的促进种植体与骨结合能力
和提高成功率,本实验探讨通过丹参口服液上调组织中TGF-β1的表达,对家兔口腔
种植体骨结合的促进作用,为临床口腔种植体修复治疗提供新的思路和方法。

1 材料实验动物：健康成年家兔18只,体重1500～1550 g(购自山东大学医学院动物中心)，雌雄各半单笼饲养,分为实验组和对照组每组9只；HE染色液(南京建成)；Trizol试剂盒(Invitrogen)；反转录试剂盒(Promegea)；PCR试剂盒(Promegea)；羊抗兔TGF-β1单克隆抗体(Santa Cruz)；辣根酶标记二抗(博士德)；ECL发光试剂盒(Santa Cruz)；超净工作台(海尔)；低温高速离心机(Sigma)；台
式离心机(Sigma)；恒温摇床(Thermo)；PCR仪(ABI 7200型)；DNA电泳仪(BioRad)；蛋白电泳仪(BioRad)；自动凝胶成像分析仪(天能)；-86 ℃冰箱(Fuma)；钛种植体(北京莱顿生物材料公司)；显微镜(Nikon)。

2 种植体植入在家兔下颌双侧同一位置植入钛种植体各1枚,植入种植体的同时对
实验组的家兔给于复方丹参口服,服用3周。

3 新生骨面积计算骨基质呈嗜酸性染色,成骨细胞、骨细胞核呈嗜碱性染色。

每组
随机选取2张切片,每张切片于光镜下(100倍)采图3张,使用Adobe photoshop CS5将所采集的各组HE染色图片中非骨组织部分删去，只留余骨组织部分对成骨面积检测。

使用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统对上面所得图像进行骨组
织形态学面积测量,分析新生骨面积(Sbone)占成骨区总面积(Stotal)的相对百分比,
计算公式:S= Sbone/Stotal。

4 定量PCR检测mRNA表达引物由上海生工生物工程公司设计合成。

TGF-β1上游引物：5，-GCAGTGGTTGAGCCGTGG-3，；下游引物：5，-GCTGAAGCAATAGTTGGTGTCC-3，；GAPDH上游引物：5，-AACGGATTTGGTCGTATTGGG-3，；下游引物：5，-TCGCTCCTGGAAGATGGTGAT-3，。

采用trizol法提取组织总RNA，取2 μg
反转录成cDNA,定量PCR检测TGF-β1mRNA表达,以GAPDH为内参照。

反应
体系为:SYBR Green mi x12.5μl,ddH2O 8.0 μl,上下游引物各1 μl,cDNA,2.5 μl,总体积25 μl。

以2-△△Ct值表示各基因相对表达量。

5 Western blot检测蛋白表达取适当大小组织块加细胞裂解液裂解,经蛋白定量变性后取样品上样电泳,转膜、封闭、加一抗、二抗,加ECL发光试剂液X光片曝光显色,进行灰度分析。

6 统计学方法采用SPSS 13.0统计分析软件进行统计学处理，数据以±s表示，采用单因素方差分析，以P<0.05表示差异有统计学意义。

1 新骨生成情况 7 d时对照组骨髓腔中发现有大量的颗粒,颗粒之间可见新生的纤
维性基质和类骨质，周围有许多成骨细胞以及部分骨髓组织,骨组织含量相对较少。

实验组骨髓腔中发现复合颗粒溶解吸收,骨基质开始形成骨小梁,其周围有大量的成
骨细胞。

而且与对照组相比,实验组形成的新骨较多,新生骨组织中成骨细胞较少,骨组织相对成熟。

14 d时对照组形成的骨小梁开始连成网状结构，新骨内可见大量
骨细胞，新骨形成量增加。

实验组新骨组织形成量明显增加,骨小梁数目增加,变粗,粗大的骨小梁连接成较密集的网状结构,均匀充填骨髓腔。

21 d时对照组骨小梁粗大较密集,有大量骨细胞。

实验组骨组织相对成熟,可见明显的钙化,纤维基质基本吸收,骨细胞数多。

2 新生骨面积见附表。

新生骨面积随观察时间延长而增加,实验组与对照组比较差
异有统计学意义(P<0.05)。

3 TGF-β1 mRNA及蛋白表达见图1、2。

mRNA相对表达量：对照组7 d、1
4 d、21 d分别为0.553±0.012；1.043±0.018；1.77±0.021；实验组7 d、14 d、21 d分别为0.957±0.024；2.653±0.032；3.857±0.063。

蛋白表达：对照组7 d、
14 d、21 d分别为1.167±0.015；2.107±0.014；2.54±0.011；实验组7 d、14
d、21 d分别为2.44±0.018；4.253±0.021；5.39±0.024。

两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

丹参为临床常用药,具有抗心肌缺血,扩冠状动脉,抗心律失常和活血化瘀等药理作用[1]。

有研究报道[2]复方丹参可以促进家兔骨折中期骨愈合,在骨折愈合的中期复方丹参可以促进TGF-β1的表达,其可能是通过增加TGF-β1的表达而促进家兔骨折
中期骨愈合。

然而,复方丹参是否能促进口腔种植体骨结合未见有报道，种植体-骨界面骨整合的获得是种植体成功的关键。

研究表明,转化生长因子β(TGF-β)超家族成员在发育和组织内具有多功能生长因子作用,能调节细胞生长、死亡或凋亡、细
胞分化及细胞外基质合成等生物学功能[3-4]。

TGF-β1是重要的促纤维生长因子,
能直接促进成纤维细胞的增殖,并促使肌细胞、上皮细胞等合成分泌细胞外基质,促
进胶原、骨结合蛋白、糖蛋白等合成，参与体内生理生化、信号转到与调控,及促
进成骨细胞的分化增殖[5]。

关于TGF-β1与很多相关疾病的报道较多并引起关注,
有关中药对TGF-β1调控研究报道较少。

因此，本研究采用中药复方丹参口服液治疗及观察家兔种植体的稳定性,探讨其对口腔种植体骨结合的促进作用。

实验结果
显示7 d时对照组骨髓腔中发现有大量的颗粒，颗粒之间可见新生的纤维性基质
和类骨质，周围有许多成骨细胞以及部分骨髓组织，骨组织含量相对较少。

实验组骨髓腔中发现复合颗粒溶解吸收，骨基质开始形成骨小梁，其周围有大量的成骨细胞。

而且与对照组相比，实验组形成的新骨较多，新生骨组织中成骨细胞较少，骨组织相对成熟。

14 d时对照组形成的骨小梁开始连成网状结构，新骨内可见大量
骨细胞，新骨形成量增加。

实验组新骨组织形成量明显增加，骨小梁数目增加，变粗，粗大的骨小梁连接成较密集的网状结构，均匀充填骨髓腔。

21 d时对照组骨
小梁粗大较密集，有大量骨细胞。

实验组骨组织相对成熟,可见明显的钙化，纤维
基质基本吸收,骨细胞数多。

新生骨面积随术后观察时间延长而增加,实验组与对照
组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

TGF-β1 mRNA和蛋白表达相同也随术后时
间延长而增加,实验组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

表明复方丹参口
服液能上调TGF-β1 mRNA的表达有利于新骨生成,TGF-β1对上皮细胞具有趋化
增殖作用,促进胶原基质黏附及创伤愈合[6-7]。

提示中药复方丹参口服液可以上调
转化生长因子-β1的表达从而间接促进种植体骨结合。

与文献报道[2]基本相同,但
不同的是本研究结果显示复方丹参口服液对术后各期的TGF-β1 mRNA和蛋白的
表达都有上调和促进作用。

参与促进种植体骨结合作用的可能有多种因子有待于进一步深入研究和探讨。

将中医常用药物丹参口服液运用到现代口腔种植骨结合的治疗,有利于促进口腔种植体的治疗及技术的完善和提高种植体的稳定性,拓展传统中
医药与现代医学技术的结合,让传统中医药应用有广阔的前景。

DNArelease thataggravated systemic inflammatory response and lung injury inducedby elderly hip fractu[J].Mediators Inflamm,2015,15：387-578．。