天行健之卵黄抗体
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卵黄抗体IgY分离、提纯方法
◆ 卵黄中的主要成分是蛋白质和脂肪，其比例为1：2。 ◆ 大部分蛋白质都是脂蛋白，存在于卵黄颗粒中，不溶于水，只有卵黄
球蛋白(α、β、γ)是水溶性的，而IgY是γ卵黄球蛋白。 ★ 因此IgY的分离纯化首先需要有效地去除卵黄中的脂类，从水溶性蛋
白中分离卵黄抗体 IgY。
河南天行健生物科技有限公司
◆ 当机体受到外来抗原刺激后，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，分 泌特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体(主要是 IgG)在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体IgY ；
◆ 当卵细胞分泌进入输卵管时，流经输卵管的血液中含有的特异性抗体 (主要是IgA和IgM)进入卵清中，形成卵清抗体。
河南天行健生物科技有限公司
河南天行健生物科技有限公司
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卵黄抗体
中文名称：卵黄抗体 英文名称：vitelline antibody 定义：
★ 工业上大规模生产IgY的方法有：超临界二氧化碳气体抽提法、卡 拉胶法、硫酸铵盐析法。
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卵黄抗体IgY在动物疾病防治方面的应用
1、研究表明，IgY能抵抗幼龄动物肠道中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的消化。
3、一部分卵黄抗体在肠道消化酶作用下，降解为可结合片段，这些片 段含有抗体的可变小肽(Fab)部分，这些小肽很容易被肠道吸收，进 入血液后能与特定的病原菌黏附因子结合，使病原菌不能黏附易感 细胞而失去致病性，而IgY的稳定区(Fe部分)留在肠内。
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卵Байду номын сангаас抗体IgY的作用机理
1、特定病原菌的卵黄抗体能直接黏附于病原菌的细胞壁上，改变病原 细胞的完整性，直接抑制病原菌的生长；
2、卵黄抗体可黏附于细菌的菌毛上，使之不能黏附于肠道黏膜上皮细 胞；
卵黄抗体
（yolk antibody, IgY），通过免疫注射产蛋鸡，即可由其生产的蛋黄中提取 相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗，这类制剂称为卵黄抗体。
1、卵黄抗体（IgY）的形成
卵
2、卵黄抗体（IgY）的性质
3、卵黄抗体（IgY）的作用机理
黄
4、卵黄抗体（IgY）分离、提纯方法
抗
5、卵黄抗体（IgY）在动物疾病防治方面的应用
3.5%和12%的PEG分步沉淀，用硫酸铵盐析法去除PEG。 ◆ 1985年，在此基础上提出了冷乙醇沉淀的改进方法，使产量提高，而
且能有效地去除残留PEG。 ◆ 1981年Jensensius等提出了硫酸葡聚糖沉淀法(DS法)，PEG法和DS法的产
量相当，但提取的IgY制品含有一定量的杂蛋白。 ◆ Bade和Stegemann(1984)用预冷的丙烷和丙酮(-20℃)沉淀蛋白质并去除脂质，经
故常在幼畜饲料或添加剂中加入一定量的针对某些特定疾病的IgY，以使其获得有 效的被动免疫。
2、卵黄抗体己被广泛应用于许多疾病的防治。
用抗鸭病毒性肝炎(DHV)的卵黄抗体治疗人工感染的鸭时，当用1万倍LD50强毒 时保护率可达到100%。用抗小鹅瘟的卵黄抗体治疗发病鹅群，治愈率为95.2%。
3、应用多种病原菌免疫制备的卵黄抗体还可以防治多种病原菌的感染。
*灌装
*灭活剂配制
检测
疫苗瓶灭菌
胶塞灭菌
铝盖灭菌
压盖
*
标签 贴签
纸箱 包装
灭活 灭活检测
免疫原制 备
负压10000级 正压10000级 负压区 局部100级
成品检验
入库
河南天行健生物科技有限公司
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★
综上所述，鸡卵黄免疫球蛋白是一种高产、优质的多克隆抗 体，而且鸡大规模工业化饲养成本低，经济方便，同时制备 IgY的工艺相对简单。因此，IgY在生物制品的开发和疾病的 防治方面具有广阔的前景。应用卵黄抗体防治疾病也有不可 避免的缺点，如可能带有蛋传染性疾病的病原，对养禽业存 在潜在的威胁。
禽精 致卵 黄抗 体生 产工 艺流 程及 环境 区域 划分 示意 图
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公司地址：郑州市经三路北鑫苑金融广场银座28楼 公司网址：http://www.txjswkj.com/ 公司电话：0371-65705333 公司传真：0371-86617212
Henan Tianxingjian biological technology co.,LTD.
多年来，已建立了许多较为高效而经济的方法，这些方法大多以PEG、 硫酸葡聚糖、天然胶，如藻酸钠、角叉聚糖或乙醇沉淀等方法初步纯化蛋 白质。 ◆ 1980年，Polson首先提出聚乙二醇(PEG)两步沉淀法：分别用终浓度为
卵黄抗体IgY在动物疾病诊断方面的应用
◆ 卵黄抗体和哺乳动物免疫球蛋白有许多不同之处
1、它不与金色葡萄球菌A蛋白结合； 2、不与哺乳动物Fc受体结合； 3、对哺乳动物补体无固定作用等。
★ 这使得卵黄抗体在检测诊断上具有更强的特异性和灵敏度。
所以卵黄抗体可以应用于： 1、免疫荧光试验 2、 ELISA试验 3、免疫扩散 4、免疫电泳等。
3、IgY在pH4.0-11.0时比较稳定，pH3.0-3.5时活性迅速下降，pH12时 活性亦有所下降。
IgY对胃蛋白酶有较高的抵抗力，但对胰蛋白酶十分敏感。将胃蛋白酶和 IgY在pH2.0温育1h后，几乎所有活性丧失，但在pH4.0时1h后可保持91%的 活性，甚至温育10h后仍有63%活性。IgY分别与胰蛋白酶和胰凝乳酶温育 8h，活性分别保持39%和41%。
体
6、卵黄抗体（IgY）在动物疾病诊断方面的应用
7、卵黄抗体（IgY）在公司的开发应用
河南天行健生物科技有限公司
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卵黄抗体IgY的形成
★ 禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊 的控制。
用IBD、ND和EDS-76三联高免卵黄抗体治疗上述三种疾病，总有效率可达50%以 上。从鸡蛋中提取出能够杀死幽门螺旋杆菌的抗体，这种抗体能杀死人体内的幽 门螺旋杆。
4、用卵黄抗体治疗疾病，安全、高效且无公害，我国已有商品化的卵黄抗 体供应。
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从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，是一种具有较强免疫功 能的蛋白质，多为IgG。禽类免疫后在其卵黄中产生的大量高纯度IgG， 其对某些禽类疫病具有明显治疗和紧急预防作用。
应用学科：
免疫学（一级学科）；畜牧免疫（二级学科）
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E-mail: txjswkj@sina.com 全国免费电话：400-6780-567
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3、用卵黄琼扩试验替代血清琼扩试验检测IBD抗体水平是可行的，并且具有经济、省力、 省时的特点。
4、使用IgY技术生产免疫球蛋白，可以减少对动物的应激，减少对动物的副反应，提高动 物的福利。
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DEAE柱层析进一步纯化，其IgY抗体活性与用Polson法提纯的IgY之间无明显差 别，且稳定性好，经3次以上冻融，抗体活性未见改变。
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◆ 1992年Akita等用水稀释法(WD)提纯IgY，每个卵黄可获得100mg 以上的IgY。
★ 此后，Akita等比较了WD法、PEG法、DS法和黄原胶法(Xanthan 法)的提纯效果，结果表明：WD法产量最高，其次为DS法，WD法 更适合大规模生产。
◆ 1993年，Horikoshi提出了冷乙醇分级离心的方法，分别用60%、 30%、25%的冷乙醇沉淀离心，得到纯度达99%以上的IgY。此法 适用于大规模制备IgY。
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卵黄抗体IgY的性质
1、IgY的性质与哺乳动物的IgG相似。
正常鸡IgY的分子量约为180KDa，由两条轻链(2L)和两条重链(2H)组成，分 子量分别为60-70KDa和22-30KDa。其等电点约为5.2。
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◆ IgG移行进入卵细胞是受体作用的结果，因而IgG可在卵细胞中大量蓄积，浓 度高于血液中的IgG。
◆ 与卵黄抗体相比，卵细胞在输卵管中移行的时间较短，因而卵清抗体含量极 微。
◆ 卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫 保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用，但同时也会干扰鸡疫苗的免疫效果。
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Henan Tianxingjian biological technology co.,LTD. 种毒制备 检测
收集高免蛋
免疫鸡群
乳化
水相制备
种蛋整理 消毒蛋壳
检测
*打蛋分离蛋 黄
灭活Ⅰ
油相配制灭菌
吐
温
灭
硬
注
司
菌
脂
射
本
酸
用
铝
白
油
萃提 灭活Ⅱ
检测 *灭活剂配制
过滤 灭活Ⅲ
组批
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卵黄抗体IgY开发
1、IgY作为替代抗生素的新型饲料添加剂正在引起人们的关注，IgY取代抗生素用作生长 促进剂，不会产生药物残留，是一种安全的绿色添加剂。
2、生产技术较为成熟， IgY产量高，价格低廉。用鸡卵黄大量生产、制备多克隆抗体是 近年来抗体制备技术中新兴的研究领域。卵黄抗体有望取代传的多克隆抗体的生产，获取 大量更有效的抗体。
2、IgY与一般哺乳动物IgG相比，IgY具有较强的耐热、耐酸、抗离子 强度和一定的抗酶降解能力。
在低于75℃条件下，IgY具有良好的热稳定性。IgY制剂在4℃贮存5年或在 室温贮存6个月其活性仍无明显变化或下降，65℃时可保持24h以上，70℃ 时加热90min后其活性才明显下降60℃，30min条件下巴氏消毒不影响IgY； 高于80℃，大部分IgY失去活性。
◆ 卵黄中的主要成分是蛋白质和脂肪，其比例为1：2。 ◆ 大部分蛋白质都是脂蛋白，存在于卵黄颗粒中，不溶于水，只有卵黄
球蛋白(α、β、γ)是水溶性的，而IgY是γ卵黄球蛋白。 ★ 因此IgY的分离纯化首先需要有效地去除卵黄中的脂类，从水溶性蛋
白中分离卵黄抗体 IgY。
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◆ 当机体受到外来抗原刺激后，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，分 泌特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体(主要是 IgG)在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体IgY ；
◆ 当卵细胞分泌进入输卵管时，流经输卵管的血液中含有的特异性抗体 (主要是IgA和IgM)进入卵清中，形成卵清抗体。
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卵黄抗体
中文名称：卵黄抗体 英文名称：vitelline antibody 定义：
★ 工业上大规模生产IgY的方法有：超临界二氧化碳气体抽提法、卡 拉胶法、硫酸铵盐析法。
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卵黄抗体IgY在动物疾病防治方面的应用
1、研究表明，IgY能抵抗幼龄动物肠道中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的消化。
3、一部分卵黄抗体在肠道消化酶作用下，降解为可结合片段，这些片 段含有抗体的可变小肽(Fab)部分，这些小肽很容易被肠道吸收，进 入血液后能与特定的病原菌黏附因子结合，使病原菌不能黏附易感 细胞而失去致病性，而IgY的稳定区(Fe部分)留在肠内。
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1、特定病原菌的卵黄抗体能直接黏附于病原菌的细胞壁上，改变病原 细胞的完整性，直接抑制病原菌的生长；
2、卵黄抗体可黏附于细菌的菌毛上，使之不能黏附于肠道黏膜上皮细 胞；
卵黄抗体
（yolk antibody, IgY），通过免疫注射产蛋鸡，即可由其生产的蛋黄中提取 相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗，这类制剂称为卵黄抗体。
1、卵黄抗体（IgY）的形成
卵
2、卵黄抗体（IgY）的性质
3、卵黄抗体（IgY）的作用机理
黄
4、卵黄抗体（IgY）分离、提纯方法
抗
5、卵黄抗体（IgY）在动物疾病防治方面的应用
3.5%和12%的PEG分步沉淀，用硫酸铵盐析法去除PEG。 ◆ 1985年，在此基础上提出了冷乙醇沉淀的改进方法，使产量提高，而
且能有效地去除残留PEG。 ◆ 1981年Jensensius等提出了硫酸葡聚糖沉淀法(DS法)，PEG法和DS法的产
量相当，但提取的IgY制品含有一定量的杂蛋白。 ◆ Bade和Stegemann(1984)用预冷的丙烷和丙酮(-20℃)沉淀蛋白质并去除脂质，经
故常在幼畜饲料或添加剂中加入一定量的针对某些特定疾病的IgY，以使其获得有 效的被动免疫。
2、卵黄抗体己被广泛应用于许多疾病的防治。
用抗鸭病毒性肝炎(DHV)的卵黄抗体治疗人工感染的鸭时，当用1万倍LD50强毒 时保护率可达到100%。用抗小鹅瘟的卵黄抗体治疗发病鹅群，治愈率为95.2%。
3、应用多种病原菌免疫制备的卵黄抗体还可以防治多种病原菌的感染。
*灌装
*灭活剂配制
检测
疫苗瓶灭菌
胶塞灭菌
铝盖灭菌
压盖
*
标签 贴签
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免疫原制 备
负压10000级 正压10000级 负压区 局部100级
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禽精 致卵 黄抗 体生 产工 艺流 程及 环境 区域 划分 示意 图
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多年来，已建立了许多较为高效而经济的方法，这些方法大多以PEG、 硫酸葡聚糖、天然胶，如藻酸钠、角叉聚糖或乙醇沉淀等方法初步纯化蛋 白质。 ◆ 1980年，Polson首先提出聚乙二醇(PEG)两步沉淀法：分别用终浓度为
卵黄抗体IgY在动物疾病诊断方面的应用
◆ 卵黄抗体和哺乳动物免疫球蛋白有许多不同之处
1、它不与金色葡萄球菌A蛋白结合； 2、不与哺乳动物Fc受体结合； 3、对哺乳动物补体无固定作用等。
★ 这使得卵黄抗体在检测诊断上具有更强的特异性和灵敏度。
所以卵黄抗体可以应用于： 1、免疫荧光试验 2、 ELISA试验 3、免疫扩散 4、免疫电泳等。
3、IgY在pH4.0-11.0时比较稳定，pH3.0-3.5时活性迅速下降，pH12时 活性亦有所下降。
IgY对胃蛋白酶有较高的抵抗力，但对胰蛋白酶十分敏感。将胃蛋白酶和 IgY在pH2.0温育1h后，几乎所有活性丧失，但在pH4.0时1h后可保持91%的 活性，甚至温育10h后仍有63%活性。IgY分别与胰蛋白酶和胰凝乳酶温育 8h，活性分别保持39%和41%。
体
6、卵黄抗体（IgY）在动物疾病诊断方面的应用
7、卵黄抗体（IgY）在公司的开发应用
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★ 禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊 的控制。
用IBD、ND和EDS-76三联高免卵黄抗体治疗上述三种疾病，总有效率可达50%以 上。从鸡蛋中提取出能够杀死幽门螺旋杆菌的抗体，这种抗体能杀死人体内的幽 门螺旋杆。
4、用卵黄抗体治疗疾病，安全、高效且无公害，我国已有商品化的卵黄抗 体供应。
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从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，是一种具有较强免疫功 能的蛋白质，多为IgG。禽类免疫后在其卵黄中产生的大量高纯度IgG， 其对某些禽类疫病具有明显治疗和紧急预防作用。
应用学科：
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4、使用IgY技术生产免疫球蛋白，可以减少对动物的应激，减少对动物的副反应，提高动 物的福利。
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DEAE柱层析进一步纯化，其IgY抗体活性与用Polson法提纯的IgY之间无明显差 别，且稳定性好，经3次以上冻融，抗体活性未见改变。
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◆ 1992年Akita等用水稀释法(WD)提纯IgY，每个卵黄可获得100mg 以上的IgY。
★ 此后，Akita等比较了WD法、PEG法、DS法和黄原胶法(Xanthan 法)的提纯效果，结果表明：WD法产量最高，其次为DS法，WD法 更适合大规模生产。
◆ 1993年，Horikoshi提出了冷乙醇分级离心的方法，分别用60%、 30%、25%的冷乙醇沉淀离心，得到纯度达99%以上的IgY。此法 适用于大规模制备IgY。
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1、IgY的性质与哺乳动物的IgG相似。
正常鸡IgY的分子量约为180KDa，由两条轻链(2L)和两条重链(2H)组成，分 子量分别为60-70KDa和22-30KDa。其等电点约为5.2。
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◆ IgG移行进入卵细胞是受体作用的结果，因而IgG可在卵细胞中大量蓄积，浓 度高于血液中的IgG。
◆ 与卵黄抗体相比，卵细胞在输卵管中移行的时间较短，因而卵清抗体含量极 微。
◆ 卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫 保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用，但同时也会干扰鸡疫苗的免疫效果。
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免疫鸡群
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水相制备
种蛋整理 消毒蛋壳
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*打蛋分离蛋 黄
灭活Ⅰ
油相配制灭菌
吐
温
灭
硬
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过滤 灭活Ⅲ
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卵黄抗体IgY开发
1、IgY作为替代抗生素的新型饲料添加剂正在引起人们的关注，IgY取代抗生素用作生长 促进剂，不会产生药物残留，是一种安全的绿色添加剂。
2、生产技术较为成熟， IgY产量高，价格低廉。用鸡卵黄大量生产、制备多克隆抗体是 近年来抗体制备技术中新兴的研究领域。卵黄抗体有望取代传的多克隆抗体的生产，获取 大量更有效的抗体。
2、IgY与一般哺乳动物IgG相比，IgY具有较强的耐热、耐酸、抗离子 强度和一定的抗酶降解能力。
在低于75℃条件下，IgY具有良好的热稳定性。IgY制剂在4℃贮存5年或在 室温贮存6个月其活性仍无明显变化或下降，65℃时可保持24h以上，70℃ 时加热90min后其活性才明显下降60℃，30min条件下巴氏消毒不影响IgY； 高于80℃，大部分IgY失去活性。