DNA提取制备
提取dna方法
提取dna方法
DNA提取的方法主要有以下几种：
1. 物理法：包括机械粉碎、超声波处理和玻璃片研磨等。
这些方法可以破坏细胞结构，释放出DNA。
2. 化学法：包括碱变性法和尿素变性法等。
这些方法通过改变DNA的理化性质使其解链，从而易于被提取出来。
3. 生物酶法：包括蛋白酶K法和纤维素酶法等。
这些方法利用特定的酶来降解蛋白质和纤维素等物质，从而释放出DNA。
4. 基因工程法：通过构建表达载体并导入宿主细胞中，使目的基因在宿主细胞内得到表达，从而产生可溶性或不可溶性的DNA片段。
5. 其他方法：包括电泳分离法和超速离心法等。
这些方法可以通过分离和纯化DNA片段来实现对DNA的提取。
需要注意的是，不同的方法和材料可能存在不同的风险和注意事项，因此在提取DNA时应该遵循正确的操作规程，确保安全和有效。
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA提取是生物学和遗传学研究中的一项基础操作，它是获取DNA样本的过程。
DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. 高盐法高盐法是一种简单且常用的DNA提取方法。
其原理是利用高盐溶液中DNA与其他细胞组分（如蛋白质）之间的亲和性差异。
在高盐环境下，DNA更容易溶解而不与蛋白质结合，从而实现DNA的提取。
具体步骤包括细胞破碎、加入高盐溶液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用酚和氯仿两种溶剂的密度差异，将DNA从细胞中分离出来。
具体步骤包括细胞破碎、加入酚/氯仿混合液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性差异。
DNA样本在经过一系列处理后，通过硅胶柱，DNA能够与硅胶颗粒结合，而杂质则被洗脱。
最后，通过洗脱DNA，即可获得高纯度的DNA。
硅胶柱法的优点是提取纯度高、操作简单，适用于分子生物学研究和临床诊断。
4. 磁珠法磁珠法是一种高效、快速的DNA提取方法。
其原理是利用带有亲和基团的磁珠与DNA之间的亲和性，实现DNA的选择性吸附和洗脱。
具体步骤包括磁珠悬浮液制备、样本加入、磁珠与DNA结合、磁珠分离、洗脱DNA等。
除了上述常用的DNA提取方法外，还有其他一些特殊的DNA提取方法，如酶解法、离心法、凝胶切割法等。
这些方法在不同的实验和应用中具有各自的特点和优势。
总结起来，DNA提取的方法多种多样，选择适合的方法取决于实验目的、样本类型和实验条件等。
无论采用哪种方法，都需要严格控制实验操作，以确保提取到高质量的DNA样本。
DNA提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此在进行DNA提取时，需要注意样本的保存、细胞破碎的方式、溶解液的选择等因素，以获得可靠且高纯度的DNA。
dna的提取方法与步骤
dna的提取方法与步骤DNA的提取方法与步骤DNA提取是分子生物学中的重要实验步骤，它可以从细胞中分离出DNA，为后续的实验研究提供基础。
本文将介绍DNA的提取方法与步骤。
一、材料准备1. 细胞样本：可以是动物组织、植物组织或微生物培养物等。
2. 细胞裂解缓冲液：常用的裂解缓冲液包括Tris-HCl缓冲液和EDTA缓冲液。
3. 蛋白酶K：用于降解蛋白质。
4. 盐溶液：如NaCl溶液，用于沉淀DNA。
5. 异丙醇：用于沉淀DNA。
6. 酚-氯仿混合液：用于分离DNA。
二、DNA提取步骤1. 细胞裂解：将细胞样本加入细胞裂解缓冲液中，使用均质器或超声波仪器对细胞进行裂解，使细胞壁破裂释放出细胞内的DNA。
2. 蛋白酶处理：加入适量的蛋白酶K，将蛋白质降解，使DNA从蛋白质中解离出来。
3. 盐沉淀：加入盐溶液，通过离心将DNA沉淀下来。
盐溶液中的离子会中和DNA分子上的电荷，使其变得不溶于水，从而沉淀下来。
4. DNA纯化：将DNA沉淀物用异丙醇洗涤，去除杂质。
然后使用乙酸溶解DNA沉淀物，使其变为可溶于水的形式。
5. DNA分离：将DNA溶液与酚-氯仿混合液混合，酚层中的蛋白质和DNA杂质会与酚结合，而DNA会在水相中。
通过离心分离酚相和水相，得到纯净的DNA溶液。
6. DNA沉淀：将DNA溶液加入异丙醇中，通过离心使DNA沉淀下来。
7. DNA溶解：将DNA沉淀物用适量的缓冲液溶解，获得最终的DNA溶液。
三、实验注意事项1. 实验操作要严格遵守无菌技术，避免DNA的污染。
2. 实验过程中要注意温度的控制，避免DNA的降解。
3. 实验器材要干净，以免杂质对DNA提取的影响。
4. 实验过程中要轻柔操作，避免DNA的断裂。
四、常见问题及解决方案1. DNA溶解不完全：可以加热溶解，或者使用酶切酶处理。
2. DNA沉淀量低：可以增加盐溶液的浓度，或者加入载体DNA增加DNA的沉淀量。
3. DNA质量差：可以使用纯化试剂盒进行纯化处理，或者使用Phenol-Chloroform-Isoamyl Alcohol（PCI）进行提取。
DNA的提取方法
DNA的提取方法DNA提取是在分子生物学研究和临床诊断中非常重要的步骤。
DNA提取的目的是获取足够纯净的DNA样本，以供后续实验和分析使用。
这篇文章将介绍几种常用的DNA提取方法。
1.高盐法：高盐法是最常用的DNA提取方法之一、它通过加入高盐浓度的缓冲液来破坏细胞膜并释放DNA。
首先，待提取的细胞或组织样本被收集并转移到离心管中。
接下来，加入裂解缓冲液，通常含有高浓度的盐并对抗离子泵，从而使细胞膜破裂并释放DNA。
裂解后，使用酒精或酚/氯仿萃取法来分离DNA与其他细胞组分。
最后，通过旋转沉淀法或乙醇沉淀法从溶液中提取DNA。
2.CTAB法：CTAB法是一种适用于植物和真菌等高纤维、低DNA含量的样品提取方法。
CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）作为一种阴离子表面活性剂，可以结合在DNA和脂质上，并形成沉淀，从而使DNA分离出来。
首先，样本被粉碎并浸泡在CTAB缓冲液中，含有CTAB、盐和EDTA等。
接下来，DNA与其他细胞组分一起沉淀，通过聚乙二醇进行沉淀，并通过离心分离。
然后，洗涤DNA沉淀并通过乙醇沉淀法或旋转沉淀法提取DNA。
3.柱式纯化法：柱式纯化法是一种用于高质量DNA提取和纯化的流程。
该方法基于DNA与硅胶膜吸附和洗脱的原理。
首先，细胞或组织样品经过裂解后，溶液经过去蛋白酶和去RNA酶处理。
然后，将样品通过柱子，DNA与硅胶膜相互作用，并形成强烈的结合，同时其他细胞组分被清除。
接着，使用洗涤缓冲液去除杂质，最后使用低盐缓冲液来释放DNA。
这种方法可以提供高纯度的DNA样本，适用于大规模DNA提取和高通量分子生物学实验。
4.磁珠法：磁珠法是一种基于磁性珠子的DNA提取方法。
该方法使用特定大小和表面修饰的磁性珠子将DNA选择性地吸附到表面上。
首先，待提取的细胞或组织样本被裂解，并加入磁珠和DNA结合缓冲液。
接下来，通过磁力将磁珠与DNA结合物分离出来，并洗涤去除杂质。
最后，通过低盐缓冲液将DNA释放出来并收集。
提取dna的方法
提取dna的方法提取DNA的方法是从一种物质中检索出DNA分子的过程，包括酶切、基因工程等。
DNA提取方法有核酸沉淀法、缓冲溶液法、植物提取法、实验室提取法等。
下面将对这些方法进行详细介绍。
1、核酸沉淀法：核酸沉淀法是一种常用的DNA提取方法，它的原理是通过pH调节使DNA沉淀，然后将DNA从溶液中收集。
步骤如下：首先，将样品用盐水或蛋白酶/胰蛋白酶消化；其次，加入超纯水、EDTA缓冲液和NaCl，调节pH至5.5；然后，加入乙醇，溶解DNA并沉淀；最后，在0℃-4℃维持1小时，收集沉淀的DNA。
2、缓冲溶液法：缓冲溶液法是通过改变溶液的pH值来提取DNA的一种方法，它利用DNA的结合能力和电性作用力，将DNA结合到某种特定的溶剂上，然后从溶剂中提取出来。
步骤如下：首先，将样品加入缓冲溶液，消化；其次，加入非离子表面活性剂，使DNA脱水；然后，加入离子表面活性剂，将DNA与其他组分分离；最后，用低温冷藏保存，以便收集DNA。
3、植物提取法：植物提取法是通过一系列物理和化学步骤，从植物细胞中提取DNA的一种方法。
步骤如下：首先，将植物细胞磨碎，用盐水悬浮；其次，加入碱性溶液，使细胞膜脱落；然后，加入非离子表面活性剂，溶解脱落的细胞膜，将DNA沉淀；最后，加入乙醇，将DNA沉淀，冷却保存，然后收集DNA。
4、实验室提取法：实验室提取法是一种基于细菌的实验室方法，它利用发酵的细菌细胞中的DNA进行提取。
步骤如下：首先，将细菌细胞加入特定的溶剂液中，使细胞膜脱落；其次，加入特定的酶和蛋白酶，将细胞内的DNA 溶解；然后，加入非离子表面活性剂，将溶解的DNA沉淀；最后，用乙醇沉淀DNA，将沉淀的DNA精细收集。
以上就是提取DNA的方法，主要有核酸沉淀法、缓冲溶液法、植物提取法和实验室提取法四种方法，它们都具有不同的优点和缺点，因此，在实际应用中，应该根据样品的不同，选择适当的提取方法。
各种DNA提取方法
各种DNA提取方法提取方法提取方法提取方法一，基因组DNA提取方法制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。
主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。
2化学方式：异硫氰酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。
根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等试验步骤：1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。
2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。
试验步骤2再重新作一边。
3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/%SDS)混匀。
4、加入25ul 蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml 混匀，50℃水浴3h 5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。
加入等体积的5mol/L的LiCL混匀，冰浴，10min.。
7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。
加入等体积的异丙醇。
室温10min。
2500rpm离心10min。
弃上清。
8、加入倍体积3mol/L乙酸钠与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。
-20℃20min。
9、12000r/min室温离心5min。
弃上清。
将DNA 溶于适量TE中。
二，外周血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法：试验步骤：1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm 离心10min。
2、小心吸取上层血浆，分装到3个离心管中。
3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。
4、2500rpm离心10min，弃上清。
5、加入10ml 溶血液，摇匀，冰浴15min。
6、3000rpm离心10min，弃上清。
7、倒置离心管，去掉残液。
8、得白细胞，－80℃冻存。
DNA提取原理和方法
DNA提取原理和方法1.细胞破裂：细胞膜是由脂质双层构成的，通过物理方法（如振荡、搅拌、超声波等）或化学方法（如洗涤缓冲液、去溶液等）可以破坏细胞膜，使得细胞中的DNA能够被提取出来。
2.核膜的溶解：核膜是由核孔复合体构成的，核孔复合体可以选择性地允许一些小分子进入或离开细胞核。
通过添加一些化学物质，如柠檬酸、盐酸或洗涤缓冲液，可以使核膜溶解，从而使DNA能够被提取出来。
3.蛋白质去除：细胞核中存在许多蛋白质，如组蛋白、核酸酶等，这些蛋白质会干扰DNA的提取和后续实验。
通过加入试剂，如蛋白酶K、SDS溶液等，可以将蛋白质去除，从而得到纯净的DNA。
1.苏亮溶液法：将待提取的细胞悬浮于苏亮溶液中，通过加热、浸泡、振摇等方法破裂细胞膜，然后加入蛋白酶K和洗涤缓冲液进行蛋白质去除，最后经过酚/氯仿提取和乙醇沉淀，得到纯净的DNA。
2.酚/氯仿法：将细胞破裂后的混合物加入等体积的酚/氯仿溶液中，通过离心将混合物分为上层DNA和下层蛋白质/核酸碎片的两个相。
然后将上层DNA转移到新的离心管中，加入等体积的异丙醇沉淀DNA，再经过洗涤和离心，得到纯净的DNA。
3.膜柱法：将细胞破裂后的混合物加入DNA结合柱中，经过多次洗涤去除杂质，然后通过加入洗脱缓冲液使DNA从膜柱中洗脱，最后经过乙醇沉淀和洗涤，得到纯净的DNA。
这种方法可以自动化操作，更方便快捷。
1.使用无菌技术和无菌试剂，避免污染DNA样品。
2.细胞溶解和处理的时间应尽可能缩短，以减少DNA的降解。
3.加入酶类试剂时，应在适当的温度和时间范围内进行，以保证酶的最佳活性。
4.完成DNA提取后，应使用紫外线分光光度计检测DNA的浓度和纯度，以确保提取的DNA质量符合实验要求。
综上所述，DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的基础步骤，通过破裂细胞膜、溶解核膜和去除蛋白质，可以从细胞中提取出纯净的DNA。
常用的DNA提取方法包括苏亮溶液法、酚/氯仿法和膜柱法。
DNA提取实验方案
DNA提取实验方案
材料与试剂：
1.细胞样本（如血液、组织等）
2.细胞裂解缓冲液（含有蛋白酶K）
3.蛋白酶K
4.乙醇
5.蛋白质沉淀液
6.正丁醇
7.氯仿
8.等离子水
9.TE缓冲液
10.离心管
11.磁珠
12.磁珠悬浊液
13.热拌器
14.离心机
实验步骤：
1.细胞破裂：将细胞样本加入细胞裂解缓冲液中，加入适量蛋白酶K，放入热拌器中破裂细胞，使DNA溶解在缓冲液中。
2.蛋白质沉淀：加入等体积的蛋白质沉淀液，轻轻混匀，离心使蛋白
质沉淀。
3.DNA沉淀：将上清液转移至新的离心管中，加入适量的乙醇，轻轻
混匀，使DNA沉淀。
4.DNA纯化：将DNA沉淀用等离子水悬浊，加入等体积的正丁醇和氯仿，混匀后离心，取上清液，加入等量的等离子水和TE缓冲液。
5.纯化DNA：将上清液转移至带有磁珠的离心管中，加入磁珠悬浊液，混匀后在离心机中进行离心，使DNA和磁珠结合。
6.洗涤DNA：将离心管中的上清液丢弃，加入70%乙醇洗涤DNA，多
次洗涤后去除乙醇，干燥磁珠。
7.溶解DNA：最后用等离子水或TE缓冲液溶解DNA，即可用于后续的
实验。
通过上述步骤，可以从细胞样本中提取出纯净的DNA，用于后续的分
子生物学实验。
DNA提取是一项基础而重要的技术，在分子生物学和遗传
学研究中具有广泛的应用价值。
希望以上方案可以帮助您顺利进行DNA提
取实验。
简述dna提取过程及原理
简述dna提取过程及原理
DNA提取是从细胞中分离纯化DNA的过程，常用于生物学研究、基因检测、法医学等领域。
DNA提取的原理基于细胞膜的破裂和DNA
的溶解、沉淀、洗涤等步骤。
DNA提取的一般步骤如下：
1. 细胞破裂，通过物理或化学方法破坏细胞膜，使DNA暴露在
溶液中。
物理方法包括机械剪切、超声波破碎等，化学方法包括洗
涤剂、酶等的使用。
2. 蛋白质消化，加入蛋白酶或蛋白酶K等，消化蛋白质，使其
不干扰DNA的提取。
3. DNA溶解，加入盐溶液和螯合剂，使DNA从蛋白质中解离出来。
4. DNA沉淀，通过加入酒精或其他沉淀剂，使DNA在溶液中沉
淀下来。
5. DNA洗涤，用酒精洗涤去除杂质，使DNA纯化。
6. DNA溶解，用缓冲液溶解沉淀下来的DNA，得到纯化的DNA 溶液。
DNA提取的原理主要依靠细胞膜的破裂和DNA与其他物质（如蛋白质、RNA等）的物理化学性质差异。
细胞破裂方法可以通过机械剪切细胞壁或超声波破碎细胞膜，使DNA释放到溶液中。
蛋白质消化通过加入蛋白酶或蛋白酶K等酶类，消化蛋白质，以防止其干扰DNA的提取。
DNA溶解过程中，盐溶液和螯合剂的加入可以使DNA 从蛋白质中解离出来。
DNA沉淀是通过加入酒精或其他沉淀剂，使DNA在溶液中沉淀下来。
洗涤步骤则利用酒精洗涤去除杂质，以获得纯化的DNA。
最后，通过溶解沉淀下来的DNA，得到纯化的DNA溶液。
总结而言，DNA提取的过程和原理主要包括细胞破裂、蛋白质消化、DNA溶解、DNA沉淀、DNA洗涤和DNA溶解等步骤，通过这些步骤可以从细胞中分离纯化DNA。
DNA和RNA提取方法及原理
DNA和RNA提取方法及原理DNA提取方法：1.酚/氯仿方法：这是最早应用的DNA提取方法之一，适用于绝大多数生物样本。
原理是利用酚酸抽提DNA，酚酸能溶解细胞膜和蛋白质，而DNA在酚相沉淀。
然后用氯仿提取，分离DNA与酚相中的蛋白质和RNA。
最后通过乙醇沉淀纯化DNA。
这种方法可以得到高质量的DNA，但操作过程相对繁琐。
2.硅胶基质法：硅胶基质可吸附DNA，该方法使用硅胶膜或硅胶粉末来固定DNA，通过洗涤去除杂质，最后用洗脱液从硅胶上洗脱DNA。
这种方法具有简便和高纯度的优点，适用于大规模提取DNA。
3.盐酸法：盐酸法以酸性条件下使DNA变为不溶性沉淀物的原理，通过加入盐酸将DNA沉淀下来，然后经过洗涤和乙醇沉淀纯化。
这种方法适用于提取纯度要求不高的DNA。
RNA提取方法：1.酚酸提取法：这是最常用的RNA提取方法之一、原理类似于DNA的酚/氯仿法，通过酚酸将核酸与蛋白质和其他杂质分离。
然后通过氯仿脱脂，去除酚相中的蛋白质，并且获得RNA水相。
最后通过乙醇沉淀纯化RNA。
这种方法适用于大多数样品，得到的RNA纯度较高。
2.硅胶基质法：与DNA提取类似，它也适用于RNA的提取。
通过硅胶膜或硅胶粉末结合RNA并洗脱，用洗脱液分离RNA与杂质。
这种方法适用于大规模提取RNA。
3.氯仿法：这是一种较为简便的RNA提取方法，它通过氯仿脱脂去除脂质和其他杂质，并且能够同时去除DNA。
最后用乙醇沉淀纯化RNA。
这种方法适用于需要较快速提取RNA的情况。
DNA和RNA提取的基本原理都是通过分离和纯化DNA或RNA与其他杂质的物质。
酚酸提取法和硅胶基质法同属于酚酸法，都是通过酚酸和氯仿来分离DNA或RNA与蛋白质和其他杂质。
其中酚酸能溶解细胞膜和蛋白质，并且DNA或RNA在酚相中沉淀，而蛋白质和RNA在氯仿相中溶解。
然后通过洗脱和纯化步骤，从酚酸相中提取DNA或RNA。
盐酸法与酚酸法不同，它是通过酸性条件下使DNA变为不溶性沉淀物来分离DNA与其他杂质。
dna提取方法
dna提取方法DNA提取方法。
DNA提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，它是从生物样本中分离出DNA分子的过程。
DNA提取的目的是为了获得足够纯度和浓度的DNA样本，以便进行后续的实验操作，比如PCR扩增、测序等。
在实际操作中，DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法。
1. 酚/氯仿提取法。
酚/氯仿提取法是最早的DNA提取方法之一，它利用酚和氯仿两种有机溶剂的密度差异来分离DNA。
首先，将生物样本经过细胞裂解，然后加入酚/氯仿混合溶液，混合均匀后离心，DNA会在上清液中，而蛋白质和其他杂质则会沉淀在底部。
接着将上清液转移到新的离心管中，加入等体积的异丙醇，再次离心，DNA会沉淀在离心管底部。
最后将上清液倒掉，用70%乙醇洗涤DNA沉淀，最后溶解于适量的缓冲液中。
酚/氯仿提取法简单易行，适用于各种类型的生物样本。
2. 离心柱法。
离心柱法是一种基于硅胶膜或硅胶颗粒的DNA提取方法，它利用DNA与硅胶的亲和性来实现DNA的分离纯化。
首先，将样本加入裂解缓冲液，然后加入蛋白酶和蛋白酶K进行细胞裂解。
接着将裂解液加入离心柱中，经过离心后，DNA会在离心柱上残留，而其他杂质则会通过离心柱底部的滤膜排除。
然后用洗涤缓冲液洗涤离心柱，最后用去离子水或低盐缓冲液洗脱DNA。
离心柱法操作简便，能够快速、高效地获得纯度较高的DNA样本。
3. 硝酸盐法。
硝酸盐法是一种利用硝酸盐沉淀DNA的提取方法。
首先，将生物样本进行细胞裂解，然后加入等体积的乙醇和适量的硝酸盐溶液，混合后DNA会沉淀出来。
接着用乙醇洗涤DNA沉淀，最后溶解于适量的缓冲液中。
硝酸盐法操作简单，适用于大规模DNA提取。
4. 磁珠法。
磁珠法是一种利用磁珠颗粒与DNA的亲和性来实现DNA的分离纯化的方法。
首先，将生物样本进行细胞裂解，然后加入磁珠颗粒，DNA会在磁场的作用下与磁珠结合，然后用磁场将DNA与磁珠分离出来。
接着用洗涤缓冲液洗涤磁珠，最后用去离子水或低盐缓冲液洗脱DNA。
提取dna的方法
提取dna的方法提取DNA的方法。
DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的一项基础工作，它是分析DNA序列、进行PCR扩增、测序等实验的前提。
本文将介绍几种常用的DNA提取方法，希望能为科研工作者提供一些参考。
首先，我们来介绍化学法提取DNA的方法。
化学法是最常用的DNA提取方法之一，其原理是利用蛋白酶K和盐酸胍等试剂破坏细胞膜和蛋白质，使DNA从细胞中释放出来。
具体操作步骤为，首先，将待提取的细胞样品加入含有蛋白酶K 的溶液中，经过一定时间的消化后，再加入盐酸胍等试剂，使DNA沉淀出来。
最后，用乙醇洗涤和溶解，即可得到纯净的DNA。
其次，机械法也是一种常用的DNA提取方法。
机械法主要利用机械力破碎细胞壁，释放DNA。
常用的机械法包括玻璃珠研磨法和超声波破碎法。
玻璃珠研磨法是将样品和玻璃珠一起加入管中，通过高速震荡使细胞破碎，释放DNA。
超声波破碎法则是利用超声波的高能量震荡作用，破坏细胞壁，释放DNA。
这两种方法操作简单，适用于大批量的样品提取。
另外，磁珠法也是一种高效的DNA提取方法。
磁珠法利用表面修饰的磁珠与DNA的亲和性，通过磁力场控制DNA的分离和纯化。
操作步骤为，首先，将待提取的细胞样品与表面修饰的磁珠混合，使DNA与磁珠结合；然后，通过磁力场的作用，将磁珠与结合的DNA沉淀到管底；最后，去除上清液，用洗涤缓冲液洗涤，即可得到纯净的DNA。
最后，有机溶剂法也是一种常用的DNA提取方法。
有机溶剂法利用有机溶剂与DNA的亲和性，将DNA从细胞溶液中提取出来。
操作步骤为，首先，将待提取的细胞样品加入有机溶剂中，使DNA与有机相结合；然后，通过离心将DNA沉淀到管底；最后，去除上清液，用洗涤缓冲液洗涤，即可得到纯净的DNA。
综上所述，化学法、机械法、磁珠法和有机溶剂法是常用的DNA提取方法，每种方法都有其适用的场合和特点。
在实际操作中，可以根据实验需要和样品性质选择合适的提取方法。
希望本文对DNA提取方法有所帮助，谢谢阅读！。
dna提取实验步骤
dna提取实验步骤DNA提取是分子生物学中的一项重要实验技术，它可以从细胞中提取出DNA，并用于后续的分子生物学研究。
本文将介绍DNA提取的实验步骤。
一、实验前准备1.1 材料准备为了进行DNA提取实验，我们需要准备以下材料：- 细胞样本：可以是动物组织、细菌、植物组织等。
- 细胞裂解缓冲液：含有离子洗涤剂、蛋白酶K等。
- 高盐溶液：用于沉淀DNA。
- 各种浓度的酒精：用于沉淀DNA。
- 离心管、试管等实验器材。
1.2 实验环境准备- 实验室应保持清洁整洁，避免污染DNA样本。
- 使用无菌技术进行操作，避免外源DNA的污染。
二、细胞裂解2.1 细胞破碎将细胞样本放入离心管中，加入适量的细胞裂解缓冲液，用振荡器或超声波进行细胞破碎，使细胞膜破裂，释放出细胞内的DNA。
2.2 蛋白酶处理加入适量的蛋白酶K，使其降解细胞中的蛋白质，释放出DNA。
同时，离子洗涤剂可以使DNA保持在溶液中，避免沉淀。
三、DNA纯化3.1 加入高盐溶液为了沉淀DNA，需要加入高盐溶液。
高盐溶液中的离子浓度较高，可以与DNA中的离子结合，使DNA形成沉淀。
3.2 离心沉淀将样品离心，沉淀下的DNA会在离心管底部形成一个白色沉淀。
去除上层液体后，可以看到这个沉淀。
四、DNA沉淀4.1 加入酒精为了进一步沉淀DNA，可以加入适量的酒精。
酒精会使DNA分子凝聚在一起，形成可见的白色沉淀。
4.2 离心沉淀再次进行离心操作，将上层的液体去除后，可以看到沉淀。
注意，沉淀的DNA非常脆弱，操作时要轻柔避免破坏。
五、洗涤和溶解5.1 洗涤为了去除沉淀中的杂质，可以使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀。
将乙醇加入离心管中，轻轻摇晃，使DNA充分溶解。
5.2 溶解将洗涤后的DNA沉淀用适量的缓冲液溶解，使其完全溶解。
六、质量检测为了确保提取到的DNA质量良好，可以使用紫外可见光谱仪或凝胶电泳进行质量检测。
通过测量DNA的吸光度或检测DNA在凝胶上的迁移情况，可以评估提取到的DNA的纯度和完整性。
dna提取方法
dna提取方法
DNA提取是分离和纯化细胞内的DNA分子的过程。
以下是常用的DNA提取方法：
1. 经典的酚-氯仿提取法：将细胞裂解并溶于酚-氯仿溶液中，通过离心分离DNA上清液和蛋白质/ RNA/酚相，然后分别用异丙醇沉淀和洗涤 DNA，最后用缓冲液溶解 DNA。
2. 盐溶解法：将细胞裂解并使用盐水缓冲溶解 DNA，然后离心去除蛋白质和碎细胞碎片。
最后，通过异丙醇沉淀 DNA，洗涤和溶解 DNA。
3. 磁珠法：利用表面修饰的磁珠、离心和磁场来分离和纯化DNA。
磁珠上会吸附 DNA，然后用缓冲液洗涤和溶解 DNA。
4. 硅胶柱法：利用硅胶膜在碱性条件下与 DNA 结合，然后用缓冲液洗涤和溶解 DNA。
5. 腐蚀酶法：通过腐蚀细胞壁和细胞膜来释放细胞内 DNA，然后离心去除细胞渣。
最后，通过异丙醇沉淀 DNA，洗涤并溶解 DNA。
这些方法都可以从不同来源（如细菌、动植物组织和血液）中提取 DNA，以便分析、克隆或测序。
提取的 DNA 可用于分子生物学研究、犯罪鉴定、基因组学研究等各种应用。
提取dna的方法及步骤
提取dna的方法及步骤提取DNA的方法及步骤DNA（脱氧核糖核酸）是构成生物遗传信息的基本单位，因此，准确提取DNA样本是进行遗传研究、基因工程和犯罪侦查等领域的重要步骤。
以下将介绍几种常见的DNA提取方法及其步骤。
方法一：酚氯仿法酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，其步骤如下：1. 收集样本：可以是人体组织、血液、细胞培养物等。
确保样本新鲜，并避免受到污染。
2. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
3. 酚氯仿提取：将沉淀加入酚氯仿混合液中，轻轻混匀，并离心以分离DNA。
4. 沉淀DNA：将上清液转移到新的离心管中，加入冷乙醇沉淀DNA。
5. 洗涤：用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法二：盐析法盐析法是一种简单易行的DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
2. 盐析提取：加入高盐缓冲液使DNA与其他核酸和蛋白质分离。
3. 沉淀DNA：将上清液转移到新的离心管中，加入冷乙醇沉淀DNA。
4. 洗涤：用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除杂质。
5. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法三：硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
2. 硅胶柱处理：将细胞沉淀加入硅胶柱中，经过洗涤和离心，将DNA吸附在硅胶柱上。
3. 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤硅胶柱，以去除杂质。
4. DNA洗脱：加入低盐缓冲液，使DNA从硅胶柱上洗脱出来。
5. 洗涤：用70%乙醇洗涤洗脱后的DNA，以去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法四：酶解法酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
DNA提取原理和方法
DNA提取原理和方法DNA提取是指从细胞、组织或物质中分离纯化出DNA的过程。
DNA提取的目的是得到足够纯度和数量的DNA样品，以便进行后续的分子生物学实验如PCR、DNA测序等。
本文将详细介绍DNA提取的原理和常用方法。
1.细胞破碎：通过破坏细胞壁、膜结构和核膜来释放DNA。
这可以通过物理力学方法如机械剪切、研磨、高压破碎等实现，也可以通过化学方法如溶解细胞膜或核膜来实现。
2.蛋白质去除：DNA提取过程中要去除蛋白质、核酸酶等杂质，以保持DNA的完整性和纯度。
常用的蛋白质去除方法包括蛋白酶K处理、酸性酚/氯仿萃取等。
3.DNA纯化：通过离心、柱层析或溶剂沉淀等方法去除杂质，纯化DNA。
1. 高盐法（Salting out）：高盐法是最常用的DNA提取方法之一，适用于多种样品类型。
该方法利用高浓度盐溶液沉淀DNA，蛋白质和其他杂质则溶解于上清液中。
经过离心后，可得到沉淀的DNA。
该方法操作简单、成本低，提取的DNA质量较高。
2. 硅胶柱层析法（Silica column method）：硅胶柱层析法是一种常见的PCR级别DNA提取方法。
该方法利用硅胶柱吸附DNA，去除其他杂质。
样品首先与硅胶柱连接，经过洗涤和离心，DNA负载在硅胶柱上，然后通过洗脱液溶解DNA，最终得到纯化的DNA。
该方法提取的DNA质量较高，适用于小样本量、高纯度要求的实验。
3. 酚/氯仿法（Phenol/chloroform method）：酚/氯仿法是一种传统的DNA提取方法，适用于多种样品类型。
该方法通过酚与蛋白质结合，氯仿溶解蛋白质，并去除其他有机溶剂和杂质。
经过离心，得到上清液含有DNA，再经过异丙醇沉淀，可得到DNA。
该方法提取的DNA质量较高，但操作相对复杂且使用有机溶剂。
4.商业试剂盒：商业DNA提取试剂盒已被广泛使用，提供了便捷、快速、高效的DNA 提取方法。
这些试剂盒采用特定的缓冲液和离心柱，通过离心步骤去除杂质，并在柱上固定DNA，最后用洗脱液溶解DNA。
强碱提取dna的方法
强碱提取dna的方法
强碱提取DNA是一种常用的DNA提取方法，它利用强碱溶液来
破坏细胞膜和核蛋白，从而释放DNA。
以下是详细的步骤和解释：
1. 样品制备，首先，需要准备含有DNA的样品，比如细胞或组织。
2. 细胞破碎，将样品加入到含有强碱（如氢氧化钠）的溶液中，强碱的作用是破坏细胞膜和核蛋白，释放DNA。
这个步骤需要在碱
性条件下进行，通常在pH 12左右。
3. 蛋白质沉淀，接下来，可以通过加入盐或其他方法使得DNA
沉淀，而蛋白质和其他杂质则保持在上清液中。
4. 沉淀和洗涤，沉淀的DNA可以通过离心或其他分离方法进行
分离，然后用缓冲盐溶液进行洗涤，去除残留的盐和碱液。
5. 最后的DNA溶解，最后，沉淀的DNA可以用适当的缓冲液
（比如Tris-EDTA缓冲液）进行溶解，以便后续的分子生物学实验。
强碱提取DNA的方法优点是简单、快速，适用于大量样品的提取。
然而，强碱提取方法可能会导致DNA降解，因此在操作过程中需要小心，避免过长时间的暴露在强碱条件下。
此外，强碱提取方法也可能会带入一些碱性物质，需要进行适当的洗涤步骤以去除这些杂质。
总的来说，强碱提取DNA是一种常用的提取方法，但在操作过程中需要注意保护DNA的完整性和纯度。
DNA和RNA提取方法及原理
DNA和RNA提取方法及原理DNA提取方法及原理：1.酚/氯仿法：酚/氯仿法是最常用的DNA提取方法之一、其原理是通过酚类物质将细胞质膜破坏，使DNA从细胞内溶解出来，然后利用氯仿的重度稠化剂作用，将DNA上层的蛋白质、脂类等杂质与下层的DNA分离。
2.盐溶液法：盐溶液法是一种温和的DNA提取方法，适用于多种植物和动物样品。
其原理是将样品细胞裂解后，加入高浓度盐溶液中，通过离心分离出DNA上层液相。
3.硅胶柱法：硅胶柱法是一种高效纯化DNA的方法，可去除杂质并提高DNA的纯度。
该方法利用硅胶柱对DNA进行吸附，去除杂质，然后通过洗脱得到纯净的DNA。
这种方法常用于分离较小的DNA片段。
4.酶解法：酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法，通过特定的酶切酶对细胞膜进行消化，将DNA释放出来。
常用的酶解酶有蛋白酶K和蛋白酶E等。
RNA提取方法及原理：1.酚酸法：酚酸法是最常用的RNA提取方法之一、它基于RNA和DNA的相对稳定性差异，利用酚酸破坏细胞膜、沉淀RNA，然后利用酚酸与蛋白质和DNA 形成复合物，分离RNA。
2.硅胶柱法：硅胶柱法也适用于RNA提取。
与DNA的硅胶柱法不同的是，RNA在硅胶柱上结合后会进行一系列的洗脱步骤，除去污染物。
该方法能有效去除DNA、蛋白质、盐和其他杂质。
3.离心收集法：离心收集法是一种简便、快速的RNA提取方法。
根据RNA在水相中的溶解性，通过离心将细胞裂解液中的RNA分离出来，然后加入酒精沉淀纯化。
4.硅酸盐法：硅酸盐法是一种特异性较高的RNA提取方法，通过利用试剂中的硅酸盐吸附RNA，并在洗涤步骤中去除杂质，从而得到纯净的RNA。
DNA提取和制备
核酸洗脱或溶解
硅胶膜吸附法 1. 用去蛋白液、漂洗液将膜上的核酸漂洗后，将不加溶液的吸附柱离心 以去除残留的液体及挥发乙醇成分。加入适量洗脱液TB buffer（或自己 配制的buffer）后放置5-10 min后再进行离心得到基因组DNA。 溶液法
1. 使用70-75％乙醇对核酸沉淀进行洗涤。溶解DNA前需要室温或37℃放
等等释放出来的游离核酸和蛋白质产物，在临床
上被广泛应用于病原微生物和肿瘤标志基因的检
测.
三、DNA的收率
样本类型
20mg肝脏组织
基因组DNA收率
8 g
100mg豆苗
100l全血 2106培养细胞
10 g
2 g 10 g
四、DNA提取的基本步骤
1、核酸的释放： 破裂细胞 2、核酸的分离与纯化 3、核酸的浓缩、沉淀与洗涤 4、DNA鉴定：浓度鉴定 纯度鉴定 完整性鉴定 释放核酸（机械法与非机械法）
OD260-320 /OD280-320 > 1.9
得率 紫外分光光度计进行测量
说明有部分降解或有RNA污染
Yield＝ OD260×50ng/ul×稀释倍数
Tiangen 产品提取得率
样本 处理量 100μl
200μl 哺乳动物全血 600μl DNA/RNA得率 （μg）
推荐试剂盒
DP327-磁珠法基因组提取试剂盒 DP316-微量样品基因组DNA提取试剂盒
五、DNA提取试验中常遇到的问题
基因组DNA收率较低或无基因组DNA
样本材料太少 细胞破裂不够充分，DNA释放不完全 离心力偏小 两相分离不完全… …
DNA降解的原因 样本不够新鲜，采集材料过陈旧 样本本身存在大量DNA酶
DNA的分离制备
DNA的分离制备
不同来源的DNA分子，由于分子量、形状及细胞定位的不同提取的方法也不尽相同。
一、酚抽提法
以含有EDTA、SDS及RNA酶的裂解缓冲液裂解细胞，经蛋白酶K处理后，酚抽提DNA。
EDTA 可以抑制DNA酶的活性，还可降低细胞膜的稳定性；SDS为阴离子去污剂，可降解细胞膜和乳化脂质及蛋白质；蛋白酶K可水解蛋白质，消化DNA酶和细胞中的蛋白质；RNA酶降解RNA;酚使蛋白质变性或变成不溶性物质，经离心后沉淀，但由于酚不使核酸变性，所以核酸溶解在水相溶液中，加入氯仿后，能加速有机相与液相的分层，从而达到抽提DNA的目的。
二、甲酰胺解聚法
甲酰胺是一种离子化溶剂，既可以裂解蛋白质与DNA的复合物，还可使释放的蛋白质变性。
裂解细胞及水解蛋白质(方法同酚抽提法)后，使用高浓度的甲酰胺裂解DNA与蛋白质的复合物，再通过火棉胶袋的充分透析以除去蛋白酶和有机溶剂。
此方法操作步骤少，适用于大于200kb的大分子量DNA片段的提取。
三、玻棒缠绕法
以盐酸胍裂解细胞，基因组DNA沉淀于细胞裂解液与乙醇液的交界面，将沉淀的DNA缠绕于带钩玻棒上，并转移到pH值8.0的TE溶液重溶。
适用于大约80kb
的DNA片段的制备。
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高盐一低pH法 DNase Ⅰ法
核酸提取的一般过程：
I.材料准备
裂解细胞
II.破碎细胞或包膜－内容物释放 III.核酸分离、纯化 IV.沉淀或吸附核酸，并去除杂质
核酸分离提取
纯化
V.核酸溶解在适量缓冲液或水中
6
一.破碎和裂解细胞：
①物理方法：研磨法、匀浆法、超声波处理法；
②化学法：SDS处理细胞法、CTAB裂解细胞法； ③生物法： 蛋白酶K法 、溶菌酶处理法。
◆ （5）将上清转移到新1.5ml 离心管中，向上清中加入1 倍体积异丙醇（可加入
1/10 体积3 mo l/ L NaAc（p H5. 2）），充分颠倒混匀，使 DNA从溶液中析出， 形成絮状沉淀（可室温或- 20℃放置1- 2h促进DNA沉淀）；4℃离心，12000rpm， 20min ； (6）弃上清，加入500μ l 4℃预冷的70℅乙醇，颠倒混匀，静置5-10min至沉淀 悬起；（洗3次-即7,8步骤） (7）4℃，12,000rpm 离心5 min，倒上清；再用500μ l 70％乙醇洗涤一次； (8）4℃，12,000rpm 离心5 min，倒上清。 （9）倒置于吸水纸上晾干，弃酒精，将剩余的液体尽量吸净并干燥，超净台真空 干燥。 （10）加入适量TE缓冲液或ddH2 O 充分溶解DNA；如果DNA溶解困难，可以37℃温 育30min ； （11）DNA溶解后，可按样品体积加入1/10 体积的浓度为10 mg/ ml 的RNase A 并在37℃处理10 min，除去RNA；取1ul进行N a noDrop 检测浓度和纯度， 另取3~5ul于0.8%琼脂糖凝胶电泳检测； （12）置-20℃保存备用。
DNA提取的常见方法：
基因组DNA的提取
SDS裂解法——动物组织和酵母染色体DNA;
CTAB法——植物组织和真菌组织，对产生大 量多糖的生物体的核酸提纯非常有效的； 其他
非基因组DNA的提取 质粒DNA的提取
• 碱裂解法 • 煮沸法
线粒体、叶绿体DNA的提取
• 蔗糖梯度差速离心结合SDS裂解法
试剂盒提取法
一次提取的量相对较少，为几 十到几百微升； 步骤简单，方便，纯度高； 提取时间较短，大约1h;
试剂盒是有针对性的，通常只对 某些规定实验材料有效。并且通 常大部分厂家的试剂盒成分组成 不公布，导致无法从具体原理和 过程引起结果的分析；
试剂盒相对昂贵，对于需制备大 量DNA的实验不合算。
三.核酸沉淀、溶解
a) 转移上清至new EP中，用预冷的无水乙醇或异丙醇沉淀。沉淀时加入 1/10体积的NaAc（pH5.2，3M），有利于充分沉淀。
b) 沉淀后应用70％的乙醇洗涤，以除去盐离子等。（重复洗涤3次）
c)
d)
晾干DNA，让乙醇充分挥发（不要过分干燥）。
若长期储存建议使用TE缓冲液溶解，如果溶解困难，可以37℃温育 30min。
酚作，为一种弱酸，是微溶于水的有机物，所以为除去酚，需加氯仿作 为萃取剂，使酚进入氯仿有机相，从而与DNA水溶液分离成互不相容的 两相。异戊醇可以降低表面张力，减少抽提产生的泡沫，并能使离心后 水相、变性蛋白质和有机相维持分层稳定。
II.DNA提取试剂盒
8
两种方法比较：
传统酚氯仿抽提法
一次提取的DNA量可较大，可 供研究员多次使用； 步骤相对繁杂，需要配制较多 的溶剂，且酚氯仿为有毒挥发 物质，对人体有害。 提取时间较长，至少4h. 提取的模板质量较好，保存时 间也长，DNA纯度有保证，技 术比较成熟可靠
针对不同材料，选择适当的裂解预处理方式：
• 植物材料－－液氮研磨 • 动物组织－－匀浆或液氮研磨 • 组培细胞－－蛋白酶K • 细菌－－溶菌酶破壁 • 酵母－－破壁酶或玻璃珠
7
二.核酸分离纯化：
由于DNA抽提物中往往含有大量的RNA、蛋白质、多糖、 酚类物质、盐离子、裂解化合物等杂质，因此需要进一步的 分离。 一般采取方法： I.有机相抽提法（加等量酚／氯仿／异戊醇）——去除蛋白 质。其原理：加入苯酚，可使细胞裂解后的上清液中蛋白质变性，但
用分子生物学技术研究复杂的基因组， 首先必须制备纯净的高分子质量DNA。按制备 对象的不同，一般分为3种：动物组织基因组 DNA提取、植物组织基因组DNA提取、细菌基 因组DNA提取。
但是不同的研究目的对DNA的纯度和量的要求不 尽相同。从某种程度上讲，分子生物学的所有方法都需 要分离核酸。色谱技术常用于质粒与基因组的分离，以 及从细胞裂解液分离基因组DNA。凝胶电泳技术因其更 高的分离度，成为一般情况下首选的分离方法。凝胶电 泳技术既可以用于分析，又可用于制备，其分离的核酸 片段的分子质量范围从小于10³Da到大于108Da。另外还 有脉冲电场凝胶电泳、DNA毛细管电泳、Southern杂交 技术等。
问题一：DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应。
1.
DNA中含有蛋白、 多糖、多酚类杂质 DNA在溶解前，有 乙醇残留，乙醇抑 制后续酶解反应 DNA中残留有金属 离子
1.重新纯化DNA，加入酚后
2.
要剧烈震荡，从而去除蛋 白、多糖、多酚等杂质 （具体方法见前）
对 策 2.重新沉淀DNA，让乙醇挥
问题三：DNA提取量少。
1.尽量选用新鲜（幼嫩）的材料
1.实验材料不佳或量少 2.破壁或裂解不充分 3.沉淀不完全 4.洗涤时DNA丢失
2.动植物要匀浆研磨充分；G＋
对 策
菌、酵母裂解前先用生物酶或 机械方式破壁 3.高温裂解时，时间适当延长 （对于动物细胞、细菌可增加 PK的用量） 4.低温沉淀，延长沉淀时间 5.加辅助物，如NaAc促进沉淀 6.洗涤时，最好用枪头将洗涤液 吸出，勿倾倒
DNA的制备和分析
为什么需要制备DNA? 解决了什么问题？
◆ 20世纪50年代以后，随着分子遗传学的发展，尤其是沃森和克里克提出 双螺旋结构以后，人们才真正认识了基因的本质，即基因是具有遗传效 应的DNA片断。 ◆ 随着“人类基因组计划”测序的完成，人们不再满足于对基因结构的认 知，逐渐转向对功能基因组学、蛋白质组学的研究上。DNA作为遗传的 基本单位，发挥着重要作用。 ◆ 基于不同的研究目的，大部分的分子实验都需要制备高质量的DNA，用 于各种各样的后续实验。例如：通过引物PCR获得目的基因、酶切、克 隆、连接转化和转染和研究DNA-蛋白质的相互作用等。因此核酸的提 取是分子生物学实验技术中最重要、最图、进化分析、模式生物体进行基 因的剔除或转基因的研究。在分子医学领域，制备DNA的基因检测可以 用于法医鉴定﹑亲子鉴定﹑遗传病早期检测﹑感染疾病检测﹑肿瘤的诊 断和预测 ﹑产前诊断和新生儿筛查 等。
◆ ◆ ◆ ◆
◆
◆ ◆ ◆ ◆
常规纯度和定量检测方法：
DNA含量测定，测A260/A280值，其A260/A280 比值在 1.80左右，说明DNA纯度很高。若大于2.0，说明存在 RNA污染；若小于1.8，说明存在蛋白质或酚等杂质。 琼脂糖凝胶电泳检测。 PCR扩增特异性条带。
DNA提取常见问题
3.
发完全，不能有残留
3.增加70％乙醇洗涤的次
数（2-3次）
问题二：DNA降解。
1.材料不新鲜或反复
1.尽量取新鲜材料，低温保存材料避免
冻融 2.未很好抑制内源核 酸酶的活性 3.提取过程操作过于 剧烈，DNA被机械打 断 4.外源核酸酶污染 5.反复吹打DNA水溶液 6.反复冻融
对 策
反复冻融 2.液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻前 加入裂解缓冲液 3.在提取内源核酸酶含量丰富的材料的 DNA时，可增加裂解液中螯合剂的含量 4.细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔 5.所有试剂用无菌水配制，耗材经高温 灭菌，避免空气中的核酸酶、DNA、RNA 带入，防止造成DNA的污染。 6.不能反复吹打，特别是线性长链染色 体DNA，易在剪切力下被切断。 7.将DNA分装保存于缓冲液中，避免反复 冻融
TE中的EDTA能螯和Mg2+或Mn2+离子，抑制Dnase； pH值为8.0，可防止DNA发生酸解； 为了除去RNA，DNA溶解后可加入RNase A 处理。
• • •
e) 臵-20 ℃保存备用。
具体实验步骤：（以CTAB法提取植物组织为例）
应提前将研钵及研杵清洗干净，锡纸包裹，烘箱内200℃，2h后待冷却；提前检查 试剂是否有效充分；提前将组织在塑料袋内用液氮完全冷冻，放置于- 80℃冷冻保存； ◆(1）提前清理实验台，铺双层保鲜袋，准备防冻手套等，称取一定质量的样品，将样品 置于研钵中，倒入液氮，充分研磨至粉末状。提前称量50 ml离心管重，将样品粉末小心 倒入50 ml离心管中，室温放置1- 2min；再称量50 ml离心管重，计算样品质量； ◆（2）按照1g样品加入5 ml 2℅ CTAB 的比例加入65℃预热的2℅CTAB；充分混匀，置 65℃水浴1h，期间可适当摇匀，期间每隔5- 10 min 混匀一次，取出后，放至室温； 注： 先将除巯基乙醇之外的药品配好, 高压蒸汽灭菌之后加入巯基乙醇 （ 100ml加入 0.2ml巯基乙醇）。 ◆(3）加入等体积的酚/氯仿/异戊醇25:24:1（通风橱操作，先加苯酚，再加氯仿/异戊醇， 各1/2 体积，苯酚易氧化变色），充分颠倒混合至少15min，将提取液中含有的蛋白质杂 质变性，分装至1.5ml离心管内，室温下4℃，12,000rpm 离心10 min； ◆(4）将all上清转移到新1.5ml 离心管中，注意不要吸到中间的蛋白质层，加入等体积 氯仿/异戊醇（通风橱操作，可为吸取充分，将吸到的蛋白质层再离心），充分颠倒混合， 抽提提取液中含有的蛋白质，并萃取出其中的酚；室温下12,000 rpm 离心10 min ；