土壤酶活性测定
土壤酶活性的测定方法
土壤酶活性的测定方法
土壤酶活性的测定方法主要包括测定土壤中的蔗糖酶、脲酶、过氧化氢酶和过氧化物酶等多种酶活性，这些酶活性的测定可以反映土壤的微生物代谢能力和土壤质量。本文将详细介绍几种常用的土壤酶活性测定方法。
一、酶活性测定方法的准备工作
1. 样品处理：收集土壤样本后，将其放在4C冷藏保存，保持样品活性，避免酶的降解。
2. 取样：根据需要，从土壤样品中取出一定量的湿重或干重样品。
3. 土壤处理：依据实验要求，对土壤样品进行处理，如水分调整、添加营养物质等。
二、蔗糖酶活性测定方法
蔗糖酶是一种常见的土壤酶，可反映土壤中的碳循环能力。蔗糖酶活性的测定方法如下：
1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤，去除杂质。
2. 准备培养基：其中包括蔗糖作为底物、缓冲液、指示剂等。
3. 加入适量的土壤样品和培养基到离心管中，混匀后，放置在恒温摇床上培养一定时间。
4. 培养结束后，通过离心将土壤颗粒沉淀到底部。
5. 取沉淀后的上清液，用酚酞指示剂进行比色检测，根据比色结果计算蔗糖酶活性。
三、脲酶活性测定方法
脲酶是一种重要的土壤酶，参与土壤中尿素的分解过程。脲酶活性的测定方法如下：
1. 取一定量的土壤样品，在10C恒温条件下接种脲酶底物，使底物完全被土壤降解。
2. 在一定时间后，通过添加草酸溶液阻止进一步反应，停止脲酶的活性。
3. 取样品，加入酚硫酸溶液，进行比色测定。
4. 根据比色结果计算脲酶活性。
四、过氧化氢酶活性测定方法
过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，可反映土壤的抗氧化能力。过氧化氢酶活性的测定方法如下：
土壤酶活性
土壤酶活性
土壤酶活性是土壤生物学中的一个重要指标，它能反映出土壤的活性水平，是衡量土壤健康状况的重要指标。土壤酶活性能够反映土壤中所发生的生物化学反应和肥力变化，同时也能反映出土壤肥力状态，是研究土壤有机质变化的重要手段。因此，土壤酶活性的研究分析对于科学研究土壤肥力、土壤可持续利用和环境保护具有重要的意义。
一、土壤酶活性的研究
土壤酶活性的测定包括反映土壤有机质变化的酶组，如淀粉酶、半胱氨酸酶、脲酶、脱氢酶、过氧化物酶、还原酶等，这些酶在土壤中具有不同的结构和活动水平，可以反映出环境因子对其影响的程度。土壤酶活性的度量能够探究土壤有机质和肥力的变化情况，从而提供科学的指导意见，研究土壤肥力的变化及其对作物生长发育的影响。常用的测定方法有实验室沉淀法、放射性标记法、水解法、色谱法和试管反应法等。
二、土壤酶活性的调控
土壤酶活性的变化受多种环境因子的影响，包括：土壤中的微生物类型和数量、土壤中温度、湿度、pH值等，还受到土壤有机质及其组分、种植植物种类等的影响。土壤肥力调控方面，可以通过施用有机肥、化肥和微量元素肥料，以及改良土壤成分，减少农药和植物保护剂，控制土壤有机质组分，来优化土壤酶活性，从而提高农作物的产量和质量。
三、土壤酶活性的应用
土壤酶活性的研究不仅有助于科学地解决土壤的有机质变化问题，而且在应用方面还有着重要意义。目前，土壤酶活性的研究已经被广泛用于农业、园艺、植物保护、土壤调查和生态修复等领域。首先，土壤酶活性的研究可以用于确定土壤质量及其可能的生物效应，从而为合理施肥、防治土壤污染、改良土壤环境及园林植物生长发育提供科学参考依据。其次，对土壤酶活性的研究可以帮助我们更好地理解土壤的有机质积累和释放，促进土壤的优化、可持续利用和生态修复，为可持续农业发展提供有力支持。
土壤酶活性测定的实验步骤
土壤酶活性测定的实验步骤
土壤酶的测定
1.将三角瓶在稀释的硝酸（3-5%）或洗衣粉中浸泡24小时，然后刷洗，然后用蒸馏
水湿润并在空气中干燥。2.土样应细磨并袋装。土壤量：2G+2.5G+5G+5G=14.5G，重复一次，14.5×2=29g
一、过氧化氢酶（容量法）（关松荫p323）
1.试剂制备：
(1)0.3%过氧化氢溶液：
① （1:10030%过氧化氢和水）② （0.5mol H2O2+49.5ml蒸馏水）③ （1ml
30%H2O2+99ml蒸馏水）（2）3N硫酸：（10ml硫酸+50ml水）（3）0.1N高锰酸钾溶液：（1.58gkmno4+100ml蒸馏水）
2．操作步骤：
将2G风干土壤放入100个三角形烧瓶中→ 40毫升蒸馏水和5毫升0.5毫升蒸馏水注入3%过氧化氢（现配备）→ 在往复式振动筛上振荡20分钟→ 添加5ml 3N硫酸（以稳定未溶解的H2O2）→ 用慢滤纸过滤→ 吸取25ml滤液，用0.1N高锰酸钾滴定至淡粉色
3．结果计算
过氧化氢酶活性（m），20分钟后在1g土壤中以毫升0.1nkmno4表示：m=（a-b）×T，其中：
a：空白消耗的0.1nkmno4毫升数
b：滤液消耗的0.1nkmno4 ml T：高锰酸钾滴定的校正值
备注：
H2O2的酶活性是用容量法测定的：kappen（1913）首先介绍了在硫酸存在下用高锰酸钾滴定残余过氧化氢的方法。根据H2O2与土壤相互作用过程中未分割H2O2的含量，采用
容量法（常用高锰酸钾滴定未分割H2O2）2kmno4+5h2o2+3h2so4测定H2O2的酶活性→
土壤酶指标测定
土壤酶指标测定
土壤生物化学指标测定
一、土壤脱氢酶(dehydrogenase)活性测定（比色法）
（一）分析意义脱氢酶能酶促发展过氧化氢充分反映，它起至着氢的中间传达题的促
进作用。在土壤中，碳
水化合物和有机酸的脱氢酶作用比较活跃，他们可以作为氢的工体。脱氢酶能自基质
中析出氢而进行氧化作用。
（二）方法挑选与原理lenhard(1956)最先明确提出用ttc做为氢的受体分解成红色
的tf，入
行闭塞测定，以溶液的光密度值表示酶活性。
后来对上述的方法搞了相同的改良和健全。用土壤有机质做为氢的供体或用葡萄糖搞
氢的供体，用分解成的tf数量或折算成氢的体积去则表示脱氢酶的活性。
（三）试剂配制
1、0.5%ttc溶液
2、甲苯
3、tris-hcl缓冲液ph7.6：0.1m三羟甲基氨基甲烷（12.114g/l）50ml与
0.1mhcl38.5ml混合后，用水稀释至100ml。
4、硫化钠
5、0.1mol/l葡萄糖溶液。
（四）实验步骤
1、标准曲线的绘制：称取相当于50mg纯品量的已烘干的ttc于50ml比色管中，定容，制成1mg/l的母液。分别向6支50ml比色管中依次注入1、
2、
3、
4、
5、6mlmg/ml
标准ttc溶液，用蒸馏水定容，是为工作液：取7只带塞比色管（50ml）依次加入
2mltris-hcl演算缓冲液，1ml不同浓度的ttc工作液，1ml10%硫化钠新配溶液，摇匀，
放置20分钟；反应完全后，准确加入10ml甲苯，振摇。完全提取tf，稳定数分钟，取上层有机溶液在紫外分光光度计492nm处闭塞（在比色皿中也需稳定2分钟）绘制标准曲线。
土壤酶活活性测定方法
土壤脲酶（urease）活性的测定方法：靛酚比色法
（一）方法原理
土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。（二）试剂
1）甲苯
2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100mL。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184克和147.5克氢氧化钾溶于蒸馏水。将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释至1000毫升。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升（A），存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水（B）。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前将2溶液各20毫升混合，用蒸馏水稀释至100毫升。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000mL，得到1mL含有0.1mg氮的标准液。
（三）测定步骤
（1）标准曲线绘制
吸取配置好的氮溶液10mL，定容至100mL，即稀释了10倍，吸取1，3，5，7，9，11，13mL移至50mL容量瓶，加水至20mL，再加入4mL苯酚钠，仔细混合，加入3mL次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟,用水稀释至刻度。将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。
（2）土壤中脲酶活性的测定
称取10 g土壤置于100mL容量瓶中。用2mL甲苯处理15分钟。往瓶中加入10mL 10%尿素溶液和20mL柠檬酸缓冲液（pH6.7）。仔细混合后，将瓶放在37℃恒温箱中，放置3 h。与此同时，进行以水代替基质，及无土壤的基质对照测定。
土壤酶活性测定方法综合
土壤酶活性测定方法
1、土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）
一、原理
脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。
二、试剂
1）甲苯
2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg 氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（0.01mg/ml）。
土壤酶活性测定方法综合
土壤酶活性测定方法
1、土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）
一、原理
脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。
二、试剂
1）甲苯
2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg 氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（0.01mg/ml）。
土壤学酶活性实验报告
土壤学酶活性实验报告
实验目的：
本实验的目的是通过测定土壤样品中的酶活性，了解土壤中酶活性对土壤养分转化和有机质降解的影响，为土壤肥力评价提供参考依据。
实验原理：
土壤是一个复杂的微生物生态系统，其中微生物和土壤酶活性对于土壤有机质降解和养分转化起着关键作用。本实验选择常用的酶活性指标进行测定，包括脲酶、过氧化氢酶和蔗糖酶活性。
脲酶是土壤中一种主要的氨氧化酶，催化氨离子氧化为亚硝酸离子。本实验采用亚硝酸盐评价方法，根据脲酶催化下苏亚硝酸盐的生成量来测定酶活性。
过氧化氢酶是一种氧化酶，催化过氧化氢（H2O2）分解为水
和氧气。在本实验中，加入过氧化氢和酶作用后，通过测定生成的氧气体积来计算酶活性。
蔗糖酶是一种糖酶，催化蔗糖降解为葡萄糖和果糖。在实验中，将土壤样品与蔗糖溶液反应，再通过添加硫酸酸化，使用菲林试剂测定生成的还原糖量来测定酶活性。
实验步骤：
1. 收集土壤样品，并将其空气干燥后研磨成粉末状。
2. 准备酶活性测定所需的荧光素磷酸盐、过氧化氢、蔗糖等试
剂，按照说明书配制所需的溶液。
3. 酶活性测定前，先将土壤样品与适量的氯仿进行均匀摇匀，以杀死微生物活性。
4. 进行脲酶活性的测定，依次将土壤样品溶液、反应液和荧光素磷酸盐溶液加入96孔板中，放入荧光光度计中进行测量。
5. 进行过氧化氢酶活性的测定，将土壤样品溶液、过氧化氢和缓冲液加入96孔板中，加入过氧化氢酶溶液后，用气泡计测定产生的气体体积。
6. 进行蔗糖酶活性的测定，将土壤样品溶液、蔗糖溶液和酸化剂加入96孔板中，加入菲林试剂后，使用分光光度计测定溶液的吸光度。
(生物科技行业)土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法
土壤酶活性及微生物测定
土壤酶活性测定
取样工具及取样方法
在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。土样在自然条件下烘干装入袋中备用。
所需试剂：
酒石酸钠、NaCl、阿拉伯胶、纳氏试剂、硫酸铵[(NH4)2SO4]、甲苯、苯磷酸二钠、NaAc.3H2O、HAc、酚、铁氰化钾、4-氨基安替吡啉、碘化钾、氯化汞、氢氧化钾、、
配置方法：
铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100µg N。往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在490nm下比色，并绘制标准曲线。
醋酸缓冲液：PH5.0，NaAc.3H2O50g，溶于适量水中，加6mol/LHAc34ml，稀释至500ml。
硼酸缓冲液：PH9.0，80毫升0.05mol/l硼砂（Na2B4O7.10H2O）和0.2mol/l的硼酸混合。
纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱和水溶液，直至生成的红色沉淀不再溶解为止。加入氢氧化钾30g并溶解之，再加入氯化汞饱和溶液1ml，加水至200ml。静置，取上层清液，贮于棕色瓶中
酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升，溶液在暗色中稳定，（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含0.05mg酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35毫克酚），待颜色稳定后，570nm比色绘制标准曲线。
测土壤酶活方法
测土壤酶活方法
酶活性是评价土壤质量和生物活性的重要指标之一。测定土壤酶活性可以帮助我们了解土壤中微生物的活动水平和土壤中有机物的分解能力，从而判断土壤的肥力和健康状况。本文将介绍几种常用的测土壤酶活性的方法。
一、脲酶法测定土壤酶活性
脲酶法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。该方法是通过测定土壤中脲酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。脲酶是一种催化尿素分解的酶，可以将尿素分解为氨和二氧化碳。测定土壤中脲酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水平和有机物的分解能力。
脲酶法的操作步骤如下：
1. 取一定质量的土壤样品，将其与含有尿素和缓冲液的试剂混合。
2. 反应一段时间后，加入酸性试剂停止反应。
3. 用碱性试剂滴定未反应的尿素，计算出脲酶的活性。
二、过氧化氢酶法测定土壤酶活性
过氧化氢酶法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。该方法是通过测定土壤中过氧化氢酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，可以将过氧化氢分解为水和氧气。测定土壤中过氧化氢酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水
平和有机物的分解能力。
过氧化氢酶法的操作步骤如下：
1. 取一定质量的土壤样品，将其与含有过氧化氢和缓冲液的试剂混合。
2. 反应一段时间后，加入酸性试剂停止反应。
3. 用碱性试剂滴定未反应的过氧化氢，计算出过氧化氢酶的活性。
三、醋酸红法测定土壤酶活性
醋酸红法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。该方法是通过测定土壤中醋酸红酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。醋酸红酶是一种催化醋酸红分解的酶，可以将醋酸红分解为醋酸和二氧化碳。测定土壤中醋酸红酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水平和有机物的分解能力。
土壤脂肪酶活性检测
迪信泰检测平台
土壤脂肪酶活性检测
脂肪酶（Lipase, LPS），又称为甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯），普遍存在于动植物组织及微生物中。土壤脂肪酶在土壤生物动力学中具有重要的作用。
迪信泰检测平台采用生化法，可高效、精准的检测土壤脂肪酶活性。此外，我们还提供其他土壤酶类检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定土壤脂肪酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. 土壤脂肪酶活性信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
(完整)土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法
土壤脲酶的测定方法(苯酚钠—次氯酸钠比色法）
一、原理
脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量,也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。
二、试剂
1）甲苯
2)10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）:184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。将两溶液合并，用1mol/LNaOH 将PH调至6。7，用水稀释定容至1000ml。
4)苯酚钠溶液(1。35mol/L）：62。5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml
（A液)，存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂,至活性氯的浓度为0。9％，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml)制成氮的工作液（0.01mg/ml）.
土壤酶活指标缩写
土壤酶活指标缩写
土壤酶活指标（Soil Enzyme Activity Index，SEAI）是评估土壤健康和生态系统功能的重要指标之一。土壤酶活性是指土壤中特定酶在一定条件下催化底物的能力，它反映了土壤中微生物活性和土壤有机质分解的速度。通过测定土壤酶活性，可以了解土壤中生物学、生化和生态过程的活跃程度，从而评估土壤质量和生态系统健康状况。
土壤酶活性具有很高的灵敏度和特异性，可以反映土壤中微生物群落结构、数量和功能的变化。常用的土壤酶活指标包括脲酶、葡萄糖醛酸酶、过氧化氢酶和脱氢酶等。这些酶在土壤中发挥着重要的生态功能，如有机质分解、养分循环、有害物质降解等。通过测定这些酶的活性，可以评估土壤肥力、抗逆性和环境质量。
土壤酶活指标的测定方法一般采用底物法或色谱法。底物法是将特定底物加入土壤中，通过测定酶催化产生的产物的浓度来反映酶活性。色谱法则是通过检测酶催化底物的消耗或产物的生成来测定酶活性。这些方法操作简单、快速，并且具有较高的精度和准确性。土壤酶活指标的测定结果可以用于评估土壤质量和生态系统健康状况，指导土壤管理和农业生产。例如，在农田中测定土壤酶活性可以评估土壤肥力和农作物生长状况，指导施肥和调控措施的制定。在自然生态系统中，测定土壤酶活性可以评估土壤有机质储量、养分循环和生物多样性状况，为生态保护和恢复提供科学依据。
土壤酶活指标是评估土壤健康和生态系统功能的重要工具，它可以反映土壤中微生物活性和有机质分解的速度。通过测定土壤酶活性，可以评估土壤质量、生态系统健康状况和农业生产潜力，为土壤管理和生态保护提供科学依据。
土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法
一、蔗糖酶: 3，5-二硝基水杨酸比色法
1. 试剂配制
（1）2N氢氧化钠200mL：称取16g 氢氧化钠，用蒸馏水溶解，定溶于200mL容量瓶中。
（2）3，5-二硝基水杨酸溶液1000mL：称5g二硝基水杨酸，溶于200mL2N氢氧化钠和500mL蒸馏水中，再加300g酒石酸钾钠，用蒸馏水稀释至1000mL（不超
过7天）。
（3）1/15M 磷酸氢二钠1000mL：23.867g N a2HPO4·12H2O 溶于1000mL蒸馏水中。
（4）1/15M 磷酸二氢钾1000mL：9.078g KH2PO4溶于1000mL蒸馏水中。
（5）pH5.5磷酸缓冲液100mL：5 mL磷酸氢二钠(1/15M)加95mL磷酸二氢钾(1/15M) （6）8%蔗糖1000mL：称取80g蔗糖，用水溶解，稀释至1000mL。
（7）甲苯。
（8）标准葡萄糖溶液（1mg/mL）1000mL：取少量葡萄糖在真空干燥箱中，于55℃条件下真空干燥至恒重。然后取1.00g葡萄糖溶于100ml蒸馏水中成标准葡萄
糖母液（10mg还原糖/ml）。取此母液10ml, 用蒸馏水定容至100mL即成标准
葡萄糖液（1mg/ml）；
2. 操作步骤
（1）标准曲线绘制：分别取标准葡萄糖液0.4mL，0.8 mL，1.2mL, 1.6mL, 2.0mL,2.8mL, 3.2mL于50 mL比色管中，另取一管做空白对照。用蒸馏水补足至10mL。加入3.0mL 3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5min，随即在自来水流下冷却。最后用蒸馏水稀释至50mL，
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法
土壤中的微生物是维持土壤生态系统健康的重要组成部分，土壤酶活
性则可以作为评价土壤肥力和生物活性的重要指标。因此，在土壤微生物
量和土壤酶活性测定方面的研究非常重要。本文将介绍几种常用的土壤微
生物量和土壤酶活性的测定方法。
一、土壤微生物量测定方法
1.铺平法：将土壤样品铺平在玻璃板上，使用显微镜对土壤中的微生
物进行直接观察和计数。这种方法的优点是简单易行，但需要大量的时间
和人力。
2.累积碳法：通过测定土壤中的有机碳含量来间接估算土壤微生物量。有机碳水平与微生物量密切相关，所以可以通过测定土壤中的有机碳来推
测微生物的数量和活性。
3.培养法：将土壤样品接种到适当的培养基上进行培养，然后通过菌
落计数或直接计数来估算微生物的数量。这种方法适用于数量较多的微生物，如细菌和真菌。
4.傅里叶变换红外光谱法（FTIR）：通过测量土壤样品的傅里叶变换
红外光谱，分析土壤中的微生物量。该方法具有快速、准确、非破坏性等
优点。
1.浊液法：通过观察测定液中的混浊度来测定土壤中的脲酶、过氧化
氢酶等氧化酶的活性。这种方法简单易行，但对于不同种类的土壤酶效果
不一样。
2.比色法：采用酶底物与酶催化产物之间的化学反应，通过测定反应产物的颜色来估算土壤酶活性。比色法可以用于测定脱氢酶、脱氢酶、脱氧核苷酸酶等酶的活性。
3.荧光法：将有机物和荧光试剂一起加入土壤样品中，经过反应后，在荧光分析仪中测定产生的荧光强度来测定土壤酶的活性。荧光法适用于测定蔗糖酶、酚氧化酶和脱氢酶等酶的活性。
4.比浊法：通过加入酶底物后，观察土壤样品的混浊度来测定土壤中酶的活性。比浊法适用于黄酶、脱氢酶等酶的活性测定。
土壤酶活性的测定
土壤酶活性的测定
1.土壤样品采集与制备
取根际土壤为土壤样品，同时挖取根系周围0-20cm和20-40cm土样，分层充分混合后作为非根际土壤样品。充分混匀后取样，用于土壤酶活性测定的土壤经风干后，过1mm筛，测定多酚氧化酶活性土样过0.25mm筛。供微生物分析的鲜土样装入已消毒过的密封塑料袋，带回实验室，磨细过2mm筛后，置于4℃冰箱内保存备测土壤微生物种群、数量等。
2.土壤酶活性的测定方法
2.1.土壤脲酶比色法测定
多酚氧化酶、过氧化物酶活性采用邻苯三酚比色法测定；过氧化氢酶活性采用高锰酸钾滴定法；碱性磷酸酶活性采用磷酸苯二钠比色法（2）测定
操作步骤：称2g过1mm筛风干土，置于100mL三角瓶中，注入40mL蒸馏水和5mL 0.3%过氧化氢溶液，振荡(120次/分钟)20分钟。随即加入3N硫酸5mL，稳定未分解的过氧化氢并终止反应。用慢速型滤纸过滤瓶中的土壤悬浊液，吸取25nil滤液，用0.01N高锰敏钾滴定至淡粉红色终点。
结果计算：
设滴定土壤滤液所消耗的高锰酸钾量(mL数)为B
滴定25而原始的过氧化氢混合液所消耗的高锰酸钾量(mL数)为A
高锰酸钾滴定度的校正值为T=(A-B)×T/2
等于20分钟土壤的过氧化氢酶活性(mL 0.lmol KMnO4/g)
2.2.脲酶采用靛酚蓝比色法
操作步骤：取2.5g风干土，置于50mL三角瓶中，加0.5mL甲苯，15min后加5mL 10%尿素液和10mL pH6.7柠檬酸盐缓冲液。摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。过滤后取0.5mL滤液注入25mL容量瓶中，然后按绘制标准曲线显色方法进行比色测定。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
土壤酶活性测定
几种水解酶：芳基硫酸酯酶（Arylsulphatase(EC 3.1.6.1)）, 葡萄糖苷酶（β-glucosidase(EC 3.2.1.21) ）和磷酸单酯酶（phosphmonoesterase(EC 3.1.3)）测定：这三种酶的测定都是依据人工合成底物（p-nitrophenyl sulphate, p-nitrophenyl glucoside and p-nitrophenyl phosphate,respectively）裂解后释放的p-nitrophenol 的量来测定。
Arylsulphatase(EC 3.1.6.1)：称取1g土（湿重），与4ml 500mM乙酸缓冲液（acetate buffer）（pH5.8）和1ml底物（25mM）混匀。对照为4ml乙酸缓冲液加1ml灭菌蒸馏水。土壤稍作涡旋振荡，置于旋转摇床20℃，200rpm培养2h。然后，往样品中加1ml 无菌蒸馏水，往对照中加1ml底物。再加入1ml 500mM 氯化钙和4ml 500mM 氢氧化钠以终止反应。悬浮液在旋转摇床上20℃，200rpm振荡30min。9464×g离心5min，然后在400nm波长下测定上清夜中所提取的p-nitrophenol 的颜色深度。如果是在中性条件下测定，则用蒸馏水取代乙酸缓冲液。标准曲线制作：用蒸馏水配制p-nitrophenol溶液，浓度范围0-50ug/ml。
β-glucosidase(EC 3.2.1.21)：缓冲液换为改进的通用缓冲液（modified universal buffer）(pH6.0);底物浓度25mM，提取液用Tris缓冲液（pH12.0）.
phosphmonoesterase(EC 3.1.3): 缓冲液换为改进的通用缓冲液（modified universal buffer）(pH4.0和9.0)（分别测定酸性和碱性磷酸酯酶），底物浓度为15mM。
脲酶Urease (EC 3.5.1.5):
称取5g土（湿土），加2.5ml脲（80mM）和20ml 75mM 硼酸缓冲液（pH10.0）。涡旋振荡，旋转摇床20℃，200rpm振荡反应4h。对照为加2.5ml灭菌蒸馏水和20ml硼酸缓冲液。4h后，处理中加2.5ml灭菌蒸馏水，对照中加2.5ml脲。然后用30ml酸化的2M氯化钾提取。悬浮液在旋转摇床20℃，200rpm振荡30min。9464×g离心5min，取1ml上清夜与9ml 蒸馏水、5ml水杨酸钠（sodium salicylate）/ 氢氧化钠溶液和2ml dichloroisocyanuric acid(Na+盐)混允，20±2℃静置1h，在690nm波长下测定溶液的颜色强度。对于中性土壤用用蒸馏水取代硼酸缓冲液。标准曲线用氯化铵标准溶液制作，浓度范围0-2.5ug/ml。
脱氢酶（Dehydrogenase）：
INT（2(p-iodophenyl)-3-(p-nitrophenyl)-5-phenyl tetrazolium chloride）还原酶活性（既脱氢酶活性）采用Von Mersi 和Schinner（1991）的方法测定。1g鲜土置于带盖的玻璃瓶中，加入1.5ml 1M Tris缓冲液（pH 7.0）和2ml INT（5mg/ml，溶于2%体积比的二甲替甲酰胺（N，N-dimethylformamide）中）。对照土壤加1.5ml Tris缓冲液和2ml蒸馏水。旋转摇床20℃，200rpm培养24h。然后，往样品中加2ml蒸馏水，而往对照土样中加2ml INT。然后加10ml N，N-dimethylformamide/ 甲醇（1：1，v/v）提取液终止反应，20℃，200rpm振荡1h。9464×g离心5min，464nm波长下测定上清夜的吸光值。对于中性土壤用蒸馏水取代Tris缓冲液。用INTF（iodonitrotetrazolium chloride）（Sigma）制作标准曲线，浓度范围0-27ug/ml提取液。
荧光素二乙酸酯水解（Fluorescein diacetate hydrolysis）：
称取3g鲜土，悬浮于50ml 磷酸盐缓冲液，加入250ul FDA（2mg/ml，溶于丙酮）。对照加250ul蒸馏水。土壤悬浮液在20℃，200rpm培养4h。培养结束后，样品中加250ul 蒸馏水，而对照中加250ul FDA。悬浮液涡旋振荡，取5ml置于含5ml丙酮的试管中以终
止反应。9464×g离心5min，在490nm波长下测定上清夜的光密度。FDA水解值通过以荧光素浓度对光密度值制作的标准曲线查得（浓度范围0-10ug/ml）。
参考文献
Taylor, J.P., Wilson, B., Mills, M.S., Burns, R.G., 2002. Comparison of microbial numbers and enzymatic activities in surface soils and subsoils using various techniques. Soil Biology and Biochemistry, 34, 387-401.