灵芝主要有效成分超声提取工艺的优化
鹿角灵芝有效成分提取工艺研究
鹿角灵芝有效成分提取工艺研究鹿角灵芝（Ganoderma lucidum）是一种珍贵药用真菌，其具有多种药用价值，并被广泛应用于中医药领域。
其有效成分的提取是研究的重点之一。
有效成分的提取工艺可以对灵芝产品的药效和品质进行优化，提高其药用价值。
本文将对鹿角灵芝有效成分提取工艺的研究进行探讨。
鹿角灵芝主要的有效成分包括多糖、三萜类化合物和多酚类化合物等。
多糖是鹿角灵芝的主要生物活性成分，具有抗肿瘤、抗炎和免疫增强等功效。
三萜类化合物是鹿角灵芝的次要生物活性成分，具有抗氧化、抗菌和抗肿瘤等作用。
多酚类化合物是鹿角灵芝的次要活性成分，具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等功效。
鹿角灵芝有效成分的提取工艺可以分为传统提取和现代提取两种方法。
传统提取方法主要包括水煮提取、酶解提取和酒精提取等。
水煮提取是最常用的提取方法之一，其原理是通过煮沸鹿角灵芝粉末来提取有效成分。
酶解提取是利用酶解剂来分解鹿角灵芝细胞壁，以释放有效成分。
酒精提取是使用酒精溶液来提取鹿角灵芝中的有效成分，然后通过浓缩、溶剂萃取和干燥等步骤来获取纯度较高的有效成分。
现代提取方法主要包括超声波提取、微波辅助提取和超临界流体提取等。
超声波提取是利用超声波的物理效应来破坏鹿角灵芝细胞壁，以释放有效成分。
微波辅助提取是利用微波的热效应来提高提取效率和提取速度。
超临界流体提取是利用超临界流体的物理特性来提取鹿角灵芝中的有效成分，其提取效果较好且不会引起有效成分的破坏。
鹿角灵芝有效成分的提取工艺还可以通过提取温度、提取时间、提取溶剂种类和浓度、鹿角灵芝粉末的粒度和质量等因素进行优化。
提取温度是提取工艺中的重要参数，可以影响有效成分的提取效率和提取速度。
提取时间也是影响有效成分提取的重要因素，提取时间过长或过短都会影响有效成分的提取效果。
提取溶剂种类和浓度会影响有效成分的溶解度和提取效果。
鹿角灵芝粉末的粒度和质量会影响有效成分的释放和提取效果。
总结而言，鹿角灵芝有效成分的提取工艺是一个复杂的过程，需要综合考虑多个因素的影响。
响应曲面优化超声波提取灵芝多糖工艺研究
解平衡外，还存在吸附平衡，低温有利于吸附。由于 水料比的增大，在产生相同热量的条件下，提取液温 度下降，吸附作用增强导致得率下降［１２］。考虑到水料比 太高对后续的浓缩以及纯化工作带来不便。因此，本 试验认为 ２０：１ 为合适的水料比。
２．１．２ 超声波功率对灵芝多糖得率的影响
１９．５
多糖得率（ｍｇ／ｇ）
Effects of ratio of water to solid on yield of Ganoderma lucidum polysaccharides
图 １ 显示，在开始阶段多糖的含量随着水料比的增 大而增大，当水料比大于 ２０：１ 时，浸提液中多糖的含 量降低。溶剂用量越多，传质动力越大，扩散到溶剂 里的多糖就越多［ １ １ ］ 。但是在固液两相间，除了扩散溶
响应曲面法（ Ｒ Ｓ Ｍ ） 已被广泛用于生物过程的优化， 但在灵芝多糖提取工艺研究方面的报道较少［９］。本研究
拟在前期单因素试验基础上，采用 ＲＳＭ 进一步综合分 析比较影响超声波提取灵芝多糖的关键因素，确定最佳 工艺参数。
１ 材料与方法
１．１ 材料、试剂与仪器 灵芝由江苏通惠生物科技有限公司提供，品种为赤
食品科学
※工艺技术
显著性（Ｐ＝０．０００６ ＜ ０．０１）。失拟项 Ｐ＝０．０５３２，不显著； 模型的调整确定系数 Ｒ２＝０．８９７８，该模型能解释 ８９．７８％ 响应值的变化，因而该模型拟合程度比较好，试验误 差小，可以用此模型对超声波提取灵芝多糖进行分析和 预测。
响应面法优化超声波循环提取灵芝孢子多糖工艺
响应面法优化超声波循环提取灵芝孢子多糖工艺摘要：以破壁灵芝（Ganoderma lucidum）孢子粉为材料，采用响应面法优化其多糖的超声波循环提取工艺。
结果表明：超声波功率与提取时间对灵芝孢子多糖的提取效果有显著影响；最佳超声波提取时间为2 h，提取温度为40 ℃，提取功率为400 W，在该工艺条件下超声波循环提取灵芝孢子多糖含量可达2.19%。
关键词：灵芝孢子；粗多糖；响应面法；超声波循环提取灵芝（Ganoderma lucidum）孢子是灵芝成熟后弹射出来的担孢子，具有多种功效[1]，这些功效与其中的活性物质息息相关。
多糖是灵芝孢子粉中的主要活性成分之一[2]，具有抗氧化与免疫调节等活性[3-4]。
福建省农业科学院食用菌研究所已完成灵芝孢子油脂超临界萃取工艺的优化试验，笔者在此基础上现采用响应面法优化超声波循环提取灵芝孢子粗多糖的工艺，为其应用奠定基础。
1材料与方法1.1主要材料和仪器破壁灵芝（G. lucidum）孢子粉为福建省农业科学院灵芝生产基地产品，采用超临界CO2萃取灵芝孢子油脂后备用。
U-1900紫外可见分光光度计为日本Hitachi公司产品；R206真空旋转蒸发仪为上海申科生物科技有限公司产品；LGJ-10D冷冻干燥机为北京四环科学仪器厂产品；CTXW-2B超声波循环提取机为北京弘详隆生物技术开发有限公司产品。
1.2样品提取多糖含量的确定10 g破壁灵芝孢子粉加入30倍蒸馏水，分别按试验设计的条件采用超声波循环提取机提取，提取液经3040 g离心10 min，弃去沉淀物，取上清液。
取0.1 mL经过离心沉淀得到的上清液，蒸馏水补足到1 mL，按照苯酚-硫酸法[5]测定多糖含量。
1.3提取工艺优化首先，采用单因素试验，以灵芝孢子多糖含量为指标，研究灵芝孢子多糖超声波提取的时间、温度和超声波功率对提取效果的影响，然后采用响应面法的中心组合设计优化提取工艺参数。
固定旋转速度为800 r/min，超声间歇比为1∶3 s以及料液比（灵芝孢子粉与蒸馏水的比值，w/v）1∶30，进行单因素试验。
灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法灵芝（Ganoderma lucidum）是一种珍贵的中药材，被认为具有多种生物活性成分，如多糖、蛋白质、三萜类及其衍生物等。
其中，多糖是灵芝中最为活性的成分之一，被广泛研究并应用于治疗多种疾病。
因此，有效提取灵芝多糖成分成为目前研究的热点之一。
灵芝多糖是一种大分子水溶性多糖，其化学结构较为复杂。
因此，灵芝多糖的提取方法需要考虑多种因素，如提取剂种类、浸提时间、浸提温度、提取pH值等。
以下将介绍几种常见的灵芝多糖提取方法。
1. 热水浸提法热水浸提法是目前最为常见的灵芝多糖提取方法之一。
该方法需要将干燥的灵芝粉末放入锅中，加入水（一般为灵芝粉末重量的10倍），加热至沸腾，然后继续煮沸2~3小时。
提取过程中可以根据需要调整pH值。
接下来，将提取液过滤并浓缩，随后加入适量的乙醇，混合后反复沉淀，干燥即可得到灵芝多糖。
酸性水提法是利用酸性水溶解灵芝中多糖，并进一步提取的方法。
先将灵芝粉末放入锅中，加入酸性水（如2%的HCl），在40~60摄氏度下回流约2~3小时，再过滤获得提取液，使用乙醇或丙酮沉淀得到灵芝多糖。
4. 超声波提取法超声波提取法是一种无机溶剂、无紧密块质量平衡的物质传递技术，可以提高灵芝多糖的提取率和产量。
该方法需要将灵芝粉末与提取剂（一般为水或酒精）混合，放入超声波提取器中，以适当频率、功率和时间进行超声波处理，进而将多糖分子破坏释放。
提取后用纸滤掉残渣，浸提液中加上酒精反复沉淀、洗涤，最后干燥即可得到灵芝多糖。
总之，不同的提取方法对灵芝多糖的提取效率和产量具有影响，需要根据研究目的和设备条件合理选择。
灵芝主要有效成分超声提取工艺的优化
灵芝主要有效成分超声提取工艺的优化张亮;程一伦;孙春玉;张美萍;王义【摘要】目的研究灵芝三萜和灵芝多糖的超声提取工艺.方法采用超声波辅助法,探讨了提取剂的Ph(碱醇)、提取剂用量、提取温度、超声时间4个因素对灵芝三萜提取效果的影响,并用无水乙醇做对照实验.探讨超声时间、提取温度、提取剂用量3个因素对灵芝多糖提取效果的影响.结果醇的Ph和超声时间对灵芝三萜的提取效果有明显影响,其他两因素影响效果不大;提取时间和提取温度两个因素对灵芝多糖提取效果达到极显著水平.结论灵芝三萜最佳提取条件为:乙醇用量30倍+提取温度60℃+提取时间60 min+碱醇Ph8.5,对无水乙醇调Ph可以明显提高乙醇提取灵芝三萜的能力;灵芝多糖提取最佳条件为:超声提取时间55min+提取温度55℃+提取剂用量50倍.【期刊名称】《北华大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(011)002【总页数】5页(P140-144)【关键词】灵芝三萜;灵芝多糖;超声波;提取工艺【作者】张亮;程一伦;孙春玉;张美萍;王义【作者单位】吉林农业大学生命科学学院,吉林,长春,130118;吉林农业大学生命科学学院,吉林,长春,130118;吉林农业大学生命科学学院,吉林,长春,130118;吉林农业大学生命科学学院,吉林,长春,130118;吉林农业大学生命科学学院,吉林,长春,130118【正文语种】中文【中图分类】R15L灵芝 (英文名 Lucid Ganoderma,拉丁名 Ganoder m alucidum(Leyss.ExFr.)Karst.)自古以来就因其广泛而明显的药效而被古今医药研究工作者所推崇.近 20年来国内外大量的研究结果也证明灵芝具有广泛的药理作用[1-3],且毒性极低,这与中医药学和现代医学对灵芝的疗效和毒副作用的认识是一致的.灵芝三萜是一类大部分具有酸性性质的四环三萜或者五环三萜类物质,易溶于醇等有机溶剂.根据灵芝三萜呈酸性的特征,利用有机溶剂浸提、碱提酸化、氯仿萃取,可分离到相对较纯的三萜化合物[4],但采用有机溶剂浸提,不仅所需时间长,而且还会有溶剂残留,效果不理想.利用超声波辅助提取,可大大降低提取成本,提高设备利用率[5].然而,超声辅助提取的条件对提取效果的影响很大,适当的改善提取剂会增大超声提取效果.灵芝多糖也是一种极性很大的物质,易溶于水,而不溶于醇等有机溶剂.目前,常见的灵芝多糖主要可分为水溶及碱溶两种.灵芝多糖以水提取为主,以稀碱提取灵芝多糖,可以比较明显地提高灵芝多糖的提取率,但其杂质也多,给多糖纯化带来很大障碍,而且在碱性条件下很多糖肽结构都会遭到破坏,肽链断裂.灵芝多糖的提取应避免在强酸、碱溶液中进行,否则极易造成灵芝多糖中糖普键断裂及构象变化.本实验通过对灵芝三萜与灵芝多糖超声提取工艺的研究,获得最优的提取工艺条件,为今后深入研究灵芝有效成分提供理论依据.1 材料与方法1.1 材料、试剂与仪器1.1.1 材料赤芝 (吉林省健龙实业有限公司提供).1.1.2 试剂有机试剂 (均为分析纯,北京北化精细化学品有限责任公司).1.1.3 仪器PHS-25C数显酸度计 (上海宁隆仪器有限公司),分析天平 SH IMADZU4、JJ型精密电子天平(美国双杰兄弟集团有限公司常熟双杰测试仪器厂),78-1磁力加热搅拌器 (金坛市富华仪器有限公司),UV751GD型紫外/可见分光光度计 (上海亚荣生化仪器厂),KQ-250B型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司),RE-52A型真空旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂),SHZ-Ⅲ型循环水真空泵 (上海亚荣生化仪器厂),电子恒温水浴锅 (天津市泰斯特仪器有限公司),电热恒温鼓风干燥箱(上海跃进医疗器械厂).1.2 方法1.2.1 灵芝三萜的提取1.2.1.1 碱醇母液制备用 NaOH调无水乙醇 (以下简称碱醇),PHS-25C数显酸度计检测碱醇 pH约为 9,作为母液保存备用.1.2.1.2 灵芝三萜的提取吸取配制好的碱醇溶液,置于含有 1 g灵芝粉的三角瓶中,浸泡过夜.通过超声波辅助提取灵芝三萜,与无水乙醇为提取剂进行并列比较.1.2.1.3 灵芝三萜含量检测吸取 2.5 mL提取液于试管中,并依次加入新配制的 5%香草醛-冰醋酸溶液 1 mL、高氯酸6mL,充分混匀,置沸水浴加热 15min,之后立即冰浴 15min,无水乙醇为空白对照.紫外分光光度法 550 nm波长处测量.1.2.1.4 正交试验设计选取乙醇用量、提取温度、提取时间以及 pH为观察因素,根据单因素考查结果.选取乙醇用量3个水平为 30,40,50倍,提取温度为40,50,60℃,超声波时间为40,50,60 min及 pH为 6.5,7.5,8.5.以此为基础设计 L9(34)正交试验,根据正交表进行提取实验,重复 3次.见表1.表1 灵芝三萜提取正交试验表Tab.1 The orthogonal test ofGanoderm a lucidumtriterpenes extraction处理号提取剂用量(Ⅰ)提取温度(Ⅱ)提取时间(Ⅲ)pH(Ⅳ)1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1在此实验中,各因素水平取值如下：乙醇用量Ⅰ：1为 30倍,2为 40倍,3为 50倍;提取温度Ⅱ：1为40℃,2为50℃,3为60℃;提取时间Ⅲ：1为40min,2为50min,3为60 min;pH Ⅳ：1为 6.5,2为7.5,3为8.5.确定最佳提取条件之后,以无水乙醇为溶剂相同条件下提取灵芝酸并进行比较. 1.2.2 灵芝多糖提取条件的优化1.2.2.1 灵芝多糖的提取与纯化精确称取灵芝粉 2 g,用 100 mL蒸馏水浸泡12 h,35℃下超声波提取 45 min,抽滤,再加入无水乙醇使乙醇终浓度达到 80%,3 000 r/min离心10min,去掉上清液,而后用水溶解,Sevag法 [氯仿 /正丁醇 (体积比)和 (氯仿 +正丁醇)/样品 (体积比)分别为 1 0.2和 1 0.24]除蛋白,进行 6次,3 000 r/min离心 10min,旋转蒸发浓缩至干,最后定容至50mL.1.2.2.2 灵芝多糖的检测取 2mL样品溶液加入蒽酮-浓硫酸试剂 (精密称取蒽酮 0.1 g,加入 80%的硫酸溶液100 mL,使溶解均匀)6.0 mL,摇匀并置沸水浴中加热15mL,取出放入冰浴 15 min,蒸馏水为空白对照,紫外分光光度法 625 nm波长处测量.1.2.2.3 正交试验设计根据单因素考查结果,以灵芝多糖被测样品吸光度为考查指标,选取超声时间、提取温度、提取剂量对灵芝多糖提取效果的影响,设计 L9(33)正交表进行实验.正交表L9(33)见表2.表2 灵芝多糖提取正交试验表Tab.2 The orthogonal test ofGanoderm a lucidumpolysaccharides extraction处理号提取时间(A) 提取温度(B)提取剂用量(C)?1111 2 1 2 2 3 1 3 3 4 2 1 2 5 2 2 3 6 2 3 1 7 3 1 3 8 3 2 1 9 3 3 2在此实验中,各因素水平取值如下：提取时间A：1为 35 min,2为 45 min,3为 55 min;提取温度B:1为35℃,2为45℃,3为55℃;提取剂用量 C：1为 40倍 ,2为50倍,3为 60倍;灵芝粉末取 2 g.3个因素同上,水平分别选取单因素考查时最佳值及其左右各一个值.2 结果与讨论2.1 灵芝三萜提取正交试验结果灵芝三萜提取正交试验结果见表3,4,5,6.表3 灵芝三萜提取正交试验结果Tab.3 The orthogonal results ofGanoderm a lucidumtriterpenes extraction处理号提取剂用量(Ⅰ)提取温度(Ⅱ)提取时间(Ⅲ)pH(Ⅳ) 吸光度1 1 1 1 1 0.747 2 1 2 2 2 0.781 3 1 3 3 3 0.821 4 2 1 2 30.817 5 2 2 3 1 0.773 6 2 3 1 2 0.769 7 3 1 3 2 0.782 8 3 2 1 3 0.797 9 3 3 21 0.773表4 各因素各水平之和Tab.4 The summation of the level of every factor因素水平1 水平2 水平3Ⅰ2.349 0 2.359 0 2.352 0Ⅱ2.346 0 2.351 0 2.3630Ⅲ2.313 0 2.371 0 2.376 0Ⅳ2.293 0 2.332 0 2.435 0表5 各因素各水平均值Tab.5 The mean value of level of every factor因素水平1 水平2 水平3?Ⅰ0.783 0 0.786 3 0.784 0Ⅱ0.782 0 0.783 7 0.7877Ⅲ0.771 0 0.790 3 0.792 0Ⅳ0.764 3 0.777 3 0.811 7表6 极差分析Tab.6 Range analysis因素极小值极大值极差调整极差?Ⅰ0.783 0 0.786 3 0.003 3 0.003 0Ⅱ 0.782 0 0.787 7 0.005 7 0.005 1Ⅲ 0.771 0 0.792 0 0.021 0 0.018 9Ⅳ 0.764 3 0.811 7 0.047 3 0.042 6由表3,4,5,6可以看出,超声时间的极差最高,其次是 pH的极差,对于灵芝三萜提取影响最大的因素就是这两个关键性因子,随后依次是提取温度和乙醇用量,影响较小.各因素影响效果依次为Ⅳ(pH)＞Ⅲ(提取时间)＞Ⅱ(提取温度)＞Ⅰ(乙醇用量).水平选优与组合选优：根据各试验因素的总计数或平均数可以看出：Ⅰ取Ⅰ1,Ⅱ取Ⅱ3,Ⅲ取Ⅲ3,Ⅳ取Ⅳ3为最佳条件,即灵芝三萜提取工艺最优条件组合为：乙醇用量30倍 +提取温度60℃+提取时间 60min+碱醇 pH 8.5.表7 灵芝三萜提取正交设计方差分析Tab.7 Variance analysis of orthogonal design ofGanoderm a lucidumtriterpenes＊此因素 F值非常小,为了减少误差,将其作为参比因子.变异来源平方和自由度均方F P?Ⅰ＊0.000 0 2 0.000 0Ⅱ 0.000 1 2 0.000 0 2.898 7 0.256 5Ⅲ 0.000 8 2 0.000 4 46.569 6 0.021 0Ⅳ 0.003 6 2 0.001 8 204.392 4 0.004 9误差 0.000 0 2 0.000 0总和 0.004 5从表7方差分析结果可以看出,碱醇 pH：P=0.004 9＜0.01,即碱醇的 pH在提取过程中对灵芝酸提取效果产生影响的概率超过 99.99%,达到极显著水平;超声时间因素：P =0.021 0＜0.05,即超声时间在提取过程中对灵芝酸提取效果产生影响的概率超过 99.95%,也达到显著水平;提取温度因素：P=0.256 5＞0.05,表示在提取过程中温度对灵芝三萜提取效果产生影响的概率没达到99.95%,未达到显著水平,对灵芝三萜提取的影响并不是很大.而由于第 1次正交试验没有得到 F值,说明实验误差自由度太小,所以选择了对提取效果影响最小的乙醇用量作为空白对照,用以消除过大误差,从而提高检验的灵敏度.根据正交试验所获得的最佳灵芝三萜提取条件：用无水乙醇提取灵芝三萜,在其他条件相同的情况下,所测得的吸光度仅为 0.551.此结果证明：对乙醇调 pH确实可以明显提高乙醇提取灵芝酸的能力,这与顾剑[6]用 5%NaHCO3水溶液结合超声提取灵芝三萜效果明显相吻合,证实了灵芝酸更易溶于碱性溶液中.2.2 灵芝多糖提取正交试验结果灵芝多糖提取正交试验结果见表8,9,10,11.表8 灵芝多糖提取正交试验结果Tab.8 The orthogonal results ofGanoderm a lucidumpolysaccharides extraction处理号提取时间(A)提取温度(B)提取剂用量(C) 吸光度1 1 1 1 1.612 2 1 2 2 1.635 3 1 3 3 1.681 4 2 1 2 1.665 5 2 2 31.679 6 2 3 1 1.727 7 3 1 3 1.676 8 3 2 1 1.683 9 3 3 2 1.736表9 各因素各水平之和Tab.9 The summation of the level of every factor因素水平1 水平2 水平3?A 4.928 0 5.071 0 5.095 0 B 4.953 0 4.997 0 5.144 0 C 5.022 0 5.036 0 5.036 0表10 各因素各水平均值Tab.10 The mean value of level of every factor因素水平1 水平2 水平3 A 1.642 7 1.690 3 1.698 3 B 1.651 0 1.665 7 1.714 7 C 1.674 0 1.678 7 1.678 7表11 极差分析Tab.11 Range analysis因素极小值极大值极差调整极差A 1.642 7 1.698 3 0.055 7 0.050 1 B 1.651 0 1.714 7 0.063 7 0.057 3 C 1.674 0 1.678 7 0.004 7 0.004 2由以上各表可以看出,超声时间以及提取温度的极差分居第 1,2位,是影响灵芝多糖提取效果的关键性因子,其次是蒸馏水用量,影响较小,即各因素影响效果依次为A(提取时间)＞B(提取温度)＞C(提取剂量).水平选优与组合选优：根据各试验因子的总计数或平均数可以看出：A取 A3,B取B3,C取 C2为好.表12 正交试验方差分析Tab.12 Variance analysis of orthogonal exper iment 变异来源平方和自由度均方 F P?A 0.005 4 2 0.002 7 237.446 6 0.004 2 B 0.006 7 2 0.003 3 291.388 3 0.003 4 C 0.000 0 2 0.000 0 1.902 9 0.344 5误差0.000 0 2 0.000 0总和 0.012 2从表12方差分析结果可以看出,超声时间因素：P=0.004 2＜0.01,即超声时间在提取过程中对灵芝多糖提取效果产生影响的概率超过99.99%,达到极显著水平;提取温度因素：P=0.003 4＜0.01,即在提取过程中温度对灵芝多糖提取效果产生影响的概率超过99.99%,达到极显著水平;蒸馏水用量因素：P=0.344 5＞0.05,表示蒸馏水用量在灵芝多糖提取过程中因蒸馏水用量而使多糖提取效果产生改变的概率低于 99.95%,没有达到显著水平.因此,超声时间以及提取温度对灵芝多糖的提取影响最大,达到极显著水平,而蒸馏水用量在此提取过程中影响并不大,这与单因素考查结果近似.超声波的原理与多糖分子空间构象之间的作用关系决定了灵芝多糖提取效果,所以,对于超声波条件的探索是最为主要的.通过实验结果可以看出,超声时间与超声温度对灵芝多糖提取效果的影响甚大.3 讨论灵芝三萜最佳提取条件为：乙醇用量 30倍 +提取温度60℃+提取时间 60 min+碱醇 pH 8.5,对无水乙醇调 pH可以明显提高乙醇提取灵芝三萜的能力;灵芝多糖提取最佳条件为：超声提取时间 55min+提取温度55℃+提取剂用量 50倍.在无水乙醇中,NaOH固体溶解性并不高,在一定范围内,有些 NaOH仍然是以微小颗粒存在于乙醇中,但乙醇溶液的 pH仍会有改变;灵芝三萜、碱醇的既有碱性又具有脂溶性的物理性质也必将对灵芝三萜的提取效果产生重要影响;将用无水乙醇和碱醇提取的灵芝三萜合二为一,使其可以更迅速、更稳定地溶解于醇里,可获得更多的三萜成分.在考虑灵芝多糖活性的前提下,本实验采取了比较传统的水提法.对于具有溶解于水的多糖,随着温度的升高其溶解度就会增大,单位体积内可以溶解的多糖就会增加,从而减少蒸馏水的使用量;而对于仍未从灵芝里提取出来的多糖,温度较高的情况下,其分子活性会比较强,这样有利于多糖分子脱离原来在灵芝粉末中的束缚而更快地溶解于提取剂中.本实验所采用的灵芝生药材料,在不同工艺下没有通过标准曲线得到准确的提取率,原因在于：目前很多报道的灵芝多糖和灵芝三萜的提取率出入非常大,灵芝多糖提取率 0.8%～3%、灵芝三萜提取率 0.6%～1.3%[7-10],尤其多糖,差距超过 2%.【相关文献】[1]Morigiwa A,Kitabatake K,Fujimoto Y,et al.Angiotension Converting Enzyme-inhibitory Triterpenes from Ganoder ma lucidum[J].Chem Pham Chem,1986,34(7)：3025-3028. [2]李荣芷,何云庆.灵芝抗衰老机理与活性成分灵芝多糖的化学与构效研究[J].北京医科大学报,1991,23(6)：473-475.[3]黄伟光,戴文英.灵芝菌的药效 [J].中国食用菌,1993,1(4)：12-13.[4]黄书铭,杨新林,王帮武,等.灵芝醇溶酸性组分的制备工艺与检测方法研究 [J].中国中药杂志,2003,28(4)：332-334.[5]黄书铭,杨新林,张自强.超声循环提取灵芝中三萜类化合物的研究[J].中草药,2004,35(5)：508-510.[6]顾剑.利用超声辅助从培养的灵芝中提取灵芝酸[J].南通工学院学报：自然科学版,2002,1(3)：13-16.[7]赵明文,王晨光,鲍鹏,等.不同灵芝菌丝体中三萜与多糖含量的比较[J].中国食用菌,2002,22(2)：43-46.[8]何江川,韩永萍.超滤膜分离法在多糖分离提取中的应用 [J].食用菌,2005,27(1)：5-7.[9]陈灵,罗九甫.利用中空纤维超滤分离和浓缩灵芝多糖[J].上海交通大学学报,1996,30(11)：114-116.[10]李平作,章克昌.灵芝发酵菌丝体中灵芝酸的分离纯化及生物活性检测[J].天然产物与研究,1999,11(4)：67-70.。
超声波酶法提取灵芝多糖的研究
超声波酶法提取灵芝多糖的研究吕京宁浙江大学材料与化学工程学院 高分子化工研究所摘要：灵芝古称瑞草,在我国作为药物有2000多年的历史。
临床和药理研究表明,灵芝具有多种生理活性与药理作用。
而灵芝多糖则是其最主要的有效成分,尤其它还具有抗肿瘤的活性功能。
灵芝多糖的常规提取方法已有报道,这些方法不仅费时,而且收率很低。
目前,超声技术已广泛应用于中药有效成分的提取,本文介绍了采用超声波酶法方法提取灵芝多糖的原理、工艺条件以及应用，与普 通方法相比，该法具有水解效率高，产品质量好等特点，同时还能缩短提取周期，并使反应条件更加温和。
关键词：灵芝多糖 提取 超声波酶法 纯化0 引言多糖因其具有多种生物活性已越来越硬起人们的重视，近年来，对真菌多糖的研究进展很快，灵芝多 糖作为一类非特异性免疫增强剂，具有抗血栓、抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、免疫调节、保肝、降压等作用， 因此在医药领域中具有很高的开发应用前景。
目前分离到的灵芝多糖达200种之多，大部分为β型葡聚糖， 分子量从数千到数万不等，不溶于高浓度乙醇，可在热水中溶解。
但提取灵芝多糖的传统工艺，生产周期 长，工艺复杂，从而增大了生产成本，并受资源来源的影响，使生产和临床应用受到限制。
因此如何有效 提取和分离纯化灵芝多糖是目前工作的重点 [1] 。
现代生物技术已广泛应用于许多领域，迄今为之，一批发酵工程产物已由实验室走向工业化生产，此 过程中，分离提纯技术起到了关键作用。
随着科学技术的发展，超临界萃取、超声波、微波、超滤、凝胶 电泳分离、新型吸附剂层析分离、真空冷冻干燥提取分离等技术，已经应用到中药及其天然植物研究及生 产领域中。
天然植物药用成分大多为细胞内产物，提取时多需进行细胞破碎，而现有的机械和化学方法有 时难于取得理想的破碎效果。
本研究表明，利用超声波产生的强烈振动、超高的速度、强烈的空化效应、 搅拌作用等，可加速药物有效成分进入溶剂 [2,3] ，具有提高得率，缩短提取时间，节约溶剂，有利于保护 有效成分等优点，此技术在中药有效成分提取、分离与制备工艺中已广泛应用 [4,5] 。
正交实验法超声提取灵芝多糖最佳工艺研究
正交实验法超声提取灵芝多糖最佳工艺研究
胡斌杰 ,韩艳霞 ,姬 红 (开封大学化学工程学院 ,河南开封 475004)
摘要 本研究利用超声波法及正交实验法对灵芝多糖的提取工艺进行了研究 。实验结果表明 ,超声波能显著 提高灵芝多糖的提取含量 ,最佳提取条件为 :药材粒度为 20目 ,提取温度为 55℃,超声处理时间为 20 m in,料液比 为 1∶20。多糖的最高提取含量比热水法 、稀酸法 、稀碱法分别提高了 36117%、45145%、39113%。
关键词 灵芝多糖 ;正交实验 ;超声提取 ;含量测定 中图分类号 : R28412 文献标识码 : A 文章编号 : 100124454 (2008) 0120142202
灵 芝 Ganoderm a lucid ium ( Leyssl1 ex Fr1 ) Ka rst,为担子菌纲 多 孔 菌 科 灵 芝 属 真 菌 〔1〕。《本 草 纲目 》中称灵芝“甘温无毒 , 主治耳聋 , 利关节 , 保 神 ,益精气 ,坚筋骨 ,好颜色 ,疗虚劳 ,治痔 ”。灵芝 多糖 ( Ganoderm a lucid ium Polysaccharide)是灵芝的 主要有效成分之一 ,具有多种药理学活性〔2〕。传统 的灵芝多糖提取方法耗时长 ,而且提取率较低 。目 前 ,超声技术在植物多糖的提取中已越来越引起人 们的重视 ,超声提取方法具有高回收率 、加热快速 、 控温容易等优点 。利用该方法提取灵芝多糖 ,操作 方法简单 、节能 ,为提取灵芝多糖的一个可行方法 。 本研究采用正交实验探讨了不同粒度 、提取温度 、超
多糖含量 = C·D ·F ×100% W
C:供试液中葡萄糖浓度 (mg /m l) ; D:供试液中的稀释因 数 ; F:换算因素 ; W :供试样品重量 ( g)
灵芝有效成分的提取方法
灵芝有效成分的提取方法灵芝（Ganoderma lucidum）是一种珍贵的药用真菌，被广泛应用于中医药和保健品领域。
灵芝含有多种生物活性成分，如多糖、三萜类化合物、脂肪酸、黄酮类化合物等。
提取灵芝有效成分的方法主要包括水提、乙醇提取、超声波辅助提取、微波与酶解提取等。
下面将详细阐述这几种提取方法。
1.水提取法：水提取法是使用水作为溶剂将灵芝中的有效成分提取出来的方法。
一般可以分为温水提取和高压水提取两种方法。
温水提取是将灵芝研磨成粉末，加入一定量的水，在适宜温度下进行浸泡或加热搅拌一段时间，然后通过滤液、离心等操作获得提取物。
高压水提取是将灵芝粉末置于高压水解油罐中，在一定温度和压力下进行水解、分离。
2.乙醇提取法：乙醇提取法是利用乙醇作为溶剂将灵芝中的有效成分提取出来的方法。
一般可分为冷提法和热提法两种方法。
冷提法是将灵芝研磨成粉末，加入适量的乙醇，在低温条件下进行浸泡或搅拌一段时间，然后通过滤液、离心等操作获得提取物。
热提法是将灵芝粉末加入乙醇，在高温条件下进行浸泡或加热搅拌一段时间，然后通过滤液、离心等操作获得提取物。
任何提取方法都应注意乙醇的浓度和提取时间的选择，以提高提取物的纯度和收率。
3.超声波辅助提取法：超声波辅助提取法是利用超声波的作用将灵芝中的有效成分提取出来的方法。
超声波可以产生剧烈的物理和化学效应，如空化、微压和涡流等，从而促进药物的传质和转化。
通过将灵芝粉末与溶剂一起置于超声波浴中进行超声波辅助提取，可以显著缩短提取时间和提高提取效果。
4.微波与酶解提取法：微波与酶解提取法是利用微波辐射和酶解作用将灵芝中的有效成分提取出来的方法。
微波辐射可以使溶剂分子振动，从而加快颗粒表面和内部的物质传递速率；酶解则是利用灵芝内部酶的活性将有效成分释放出来。
将灵芝粉末与溶剂和酶一起置于微波炉中，进行微波与酶解提取，可以使提取更加高效且提取物质的活性更好。
以上就是几种常见的灵芝有效成分提取方法，每种方法都有其适用的范围和条件。
灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法
灵芝是一种具有很高药用价值的中药材，含有多种有效成分，如六萜类化合物、多糖、蛋白质、氨基酸、有机酸等。
这些成分具有很好的药理作用，包括免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗氧化等。
下面将介绍一些常用的灵芝有效成分提取方法。
（1）超声波提取法：
将灵芝粉末与适量的溶剂（如水、醇类溶剂等）混合后，经超声波振荡器进行提取。
超声波的作用可以促进灵芝有效成分的释放和溶解，提高提取效果。
此方法操作简单，提
取效率较高，适用于小批量灵芝有效成分的提取。
（2）浸提法：
将灵芝粉末与适量的溶剂混合，置于恒温搅拌器中进行浸泡，提取一定时间后，进行
过滤、浓缩和干燥，得到提取物。
浸提法适用于大批量灵芝有效成分的提取，但提取时间
较长，效率较低。
需要注意的是，不同的有效成分对提取条件的要求不同，因此在实际操作中需要根据
目标成分的特性进行选择和优化提取条件。
还需注意选择合适的溶剂，并进行提取液的处
理和检测，确保提取物的质量和安全性。
对于灵芝中有效成分的提取，需要根据具体目标和条件选择合适的提取方法，并进行
相应的优化和控制。
有效成分的提取对于灵芝的药用价值和应用前景具有重要意义，未来
还有待进一步深入研究和开发。
灵芝有效成分提取工艺研究进展
灵芝多糖和三萜有效成分提取及纯化方法综述摘要: 灵芝的化学成分多种多样，多糖和三萜是灵芝中具有生物活性的主要有效组分。
20 世纪70 年代，灵芝多糖和三萜的研究开发进入了一个崭新的发展时期。
本文总结了近十年来灵芝多糖和三提取纯化的各种方法及研究进展。
关键词：灵芝；多糖；三萜；提取；纯化The Review of the Extraction and Purification Methods of Polysaccharides andtriterpenes in Ganoderma LucidumhAbstract: There are many chemical component in ganoderma luc idum, polysaccharides and triterpenes are important effective compounds which havebiological activities. The research of polysaccharides and triterpenes were developed since 1970s. The methods of extraction and purification for polysaccharides and triterpenes in ganoderma lucidum and the research advance were summarized in this paper.Key words: Ganoderma lucidum; Polysaccharides; triterpenes; Extraction; Purification灵芝，又称“灵芝草”、“仙草”、“瑞草”，为非褶菌目（Aphyllophorales）灵芝菌科（Ganode rmataceae）灵芝属( Ganoderma)真菌灵芝(G andoer ma lucidum)。
灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法
灵芝（scientific name: Ganoderma lucidum）是一种珍贵的中药材，被广泛应用于
中医药和保健品领域。
灵芝含有多种有效成分，包括多糖、三萜类物质、蛋白质、多酚类
物质等。
提取这些有效成分可以增强灵芝的药用价值和效果。
以下将介绍灵芝中有效成分
的提取方法。
1. 水提法：水提法是灵芝有效成分提取的主要方法之一。
首先将灵芝切碎成粉末状，然后用水进行浸泡，提取出水溶性的有效成分。
浸泡时间一般为12-24小时，温度一般在60-80摄氏度之间。
提取液可以通过滤网过滤得到，再经过浓缩、脱色等步骤得到纯净的
灵芝提取物。
3. 超声波提取法：超声波提取法是一种高效、快速的提取方法。
将灵芝粉末与溶剂（如水、乙醇等）混合后，通过超声波震荡和振荡的作用，促使有效成分从灵芝中迅速溶
解到溶剂中。
超声波提取的优点是提取效率高，操作简单，对有效成分的损失较小。
4. 超临界流体提取法：超临界流体提取法是一种高效的提取方法，在一定的温度和
压力条件下，使用超临界流体（如二氧化碳）提取灵芝中的有效成分。
超临界流体具有较
好的溶解能力和扩散性，可以比较彻底地提取灵芝中的有效成分，提取效果较好。
以上就是灵芝中有效成分提取的几种常用方法。
根据实际需要和设备条件，可以选择
合适的提取方法。
提取出的灵芝有效成分可以应用于药物研发、食品保健品的生产等领域，发挥灵芝的药用价值和功效。
灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法作者：任奕来源：《农业科技与装备》2019年第06期摘要：根据灵芝多糖提取研究进展，综述热水提取法、超声波提取法、微波提取法、超声辅助酶解提取法、高压热水提取法、连续动态逆流提取法等提取方法的原理、特点和工艺条件，为开展灵芝有效成分提取提供借鉴。
关键词：灵芝多糖;提取工艺;热水;超声波中图分类号：R284.2文献标识码：A文章编号：1674-1161（2019）06-0047-02灵芝（GanodermaLucidumKarst）是孔菌科真菌灵芝的子实体，为我国传统的药食兼用的大型真菌，其孢子、菌丝和子实体均可利用，具有祛病延年、滋补强壮的作用。
现代研究表明：灵芝多糖是灵芝属真菌菌丝体的次生代谢产物，存于灵芝属真菌的菌丝体和子实体中，具有清除体内自由基、提高机体免疫力、降血糖等功效，是灵芝扶正固体的主要活性成分。
根据灵芝多糖提取研究进展，对灵芝多糖的提取工艺进行总结归纳，为灵芝多糖的开发利用提供借鉴和参考。
1 灵芝多糖的提取1.1 热水提取法热水提取法是提取灵芝多糖传统方法，提取时间长、能耗大、得率低、活性差。
杜鹏瑶探讨热水提取法提取树舌灵芝多糖的最佳提取工艺。
在单因素试验的基础上，运用响应面法优化提取的树舌灵芝多糖（GASP）各项参数。
提取时间、提取温度、液料比均对树舌灵芝多糖提取率有显著影响，顺序为提取时间>液料比>提取温度。
最佳工艺条件为：提取温度77℃、提取時间138min、液料比27∶1（mL∶g），多糖提取率为2.57%±0.05%。
王会宾等以超临界CO2萃取过灵芝孢子油后的灵芝孢子粉为原料，利用响应面设计试验优化灵芝孢子多糖的热水浸提工艺条件。
在单因素试验的基础上，以多糖提取率为响应值，利用Box-Behnken试验确定最佳提取工艺：提取温度91℃，提取时间3.3h，液料比15.8∶1（mL∶g），多糖提取率达3.69%，与理论值相对误差0.33%。
灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法任奕(本溪化学工业学校,辽宁本溪117004)摘要:根据灵芝多糖提取研究进展,综述热水提取法、超声波提取法、微波提取法、超声辅助酶解提取法、高压热水提取法、连续动态逆流提取法等提取方法的原理、特点和工艺条件,为开展灵芝有效成分提取提供借鉴。
关键词:灵芝多糖;提取工艺;热水;超声波中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1674-1161(2019)06-0047-02灵芝(Ganoderma Lucidum Karst )是孔菌科真菌灵芝的子实体,为我国传统的药食兼用的大型真菌,其孢子、菌丝和子实体均可利用,具有祛病延年、滋补强壮的作用。
现代研究表明:灵芝多糖是灵芝属真菌菌丝体的次生代谢产物,存于灵芝属真菌的菌丝体和子实体中,具有清除体内自由基、提高机体免疫力、降血糖等功效,是灵芝扶正固体的主要活性成分。
根据灵芝多糖提取研究进展,对灵芝多糖的提取工艺进行总结归纳,为灵芝多糖的开发利用提供借鉴和参考。
1灵芝多糖的提取1.1热水提取法热水提取法是提取灵芝多糖传统方法,提取时间长、能耗大、得率低、活性差。
杜鹏瑶探讨热水提取法提取树舌灵芝多糖的最佳提取工艺。
在单因素试验的基础上,运用响应面法优化提取的树舌灵芝多糖(GASP)各项参数。
提取时间、提取温度、液料比均对树舌灵芝多糖提取率有显著影响,顺序为提取时间>液料比>提取温度。
最佳工艺条件为:提取温度77℃、提取时间138min、液料比27∶1(m L ∶g),多糖提取率为2.57%±0.05%。
王会宾等以超临界CO 2萃取过灵芝孢子油后的灵芝孢子粉为原料,利用响应面设计试验优化灵芝孢子多糖的热水浸提工艺条件。
在单因素试验的基础上,以多糖提取率为响应值,利用Box-Behnken 试验确定最佳提取工艺:提取温度91℃,提取时间3.3h,液料比15.8∶1(mL ∶g),多糖提取率达3.69%,与理论值相对误差0.33%。
灵芝常温超声提取浓缩工艺流程
灵芝常温超声提取浓缩工艺流程1.液氮粉碎：将干燥的灵芝样品放入液氮中粉碎。
Liquid nitrogen pulverization: Crush the dried Ganoderma sample in liquid nitrogen.2.超声提取：将粉碎的灵芝样品加入提取溶剂中，进行超声波提取。
Ultrasound extraction: Add the crushed Ganoderma sample into the extraction solvent and perform ultrasonic extraction.3.过滤：将提取液进行过滤，去除残渣和杂质。
Filtration: Filter the extraction to remove residue and impurities.4.浓缩：将滤液进行浓缩，减少溶剂体积。
Concentration: Concentrate the filtrate to reduce the volume of the solvent.5.干燥：对浓缩后的提取液进行干燥，得到灵芝浓缩提取物。
Drying: Dry the concentrated extract to obtain Ganoderma concentrated extract.6.检测：对得到的浓缩提取物进行质量检测，确保其品质符合要求。
Detection: Perform quality testing on the obtained concentrated extract to ensure its quality meets the requirements.7.包装：将合格的浓缩提取物进行包装，准备投放市场。
Packaging: Package the qualified concentrated extract for the market.8.存储：储存包装好的浓缩提取物，确保其保存期限。
鹿角灵芝有效成分提取工艺研究
鹿角灵芝有效成分提取工艺研究一、鹿角灵芝的有效成分鹿角灵芝中含有多种有效成分，包括多糖、三萜类化合物、蛋白质、氨基酸、维生素等。
以多糖和三萜类化合物的含量较高，具有重要的药用价值。
多糖是鹿角灵芝中的主要活性成分之一，具有调节免疫功能、抗炎抗肿瘤等多种作用。
而三萜类化合物则具有抗氧化、抗菌、抗病毒等作用。
提取鹿角灵芝中的多糖和三萜类化合物，对于发挥其保健功效具有重要意义。
1. 提取方法目前，常用的鹿角灵芝有效成分提取方法主要包括水提取、醇提取和超声波提取等。
水提取是一种较为传统的方法，主要是利用水作为溶剂将鹿角灵芝中的有效成分提取出来。
醇提取则是通过醇类溶剂提取鹿角灵芝中的有效成分，其提取效果较好。
超声波提取是近年来发展起来的一种新型提取方法，通过超声波的作用可以快速高效地提取鹿角灵芝中的有效成分。
不同的提取方法对于鹿角灵芝中有效成分的提取效果有所不同，因此需要进行比较研究，找出最适合的提取方法。
2. 工艺优化在提取工艺中，除了提取方法外，还需要对提取温度、提取时间、提取物料比等工艺参数进行优化。
提取温度和时间是影响提取率和提取效果的重要因素，需要通过实验确定最佳的工艺条件。
提取物料比（鹿角灵芝与溶剂的比例）的选择也会影响提取效果，需要进行合理的确定。
工艺优化是鹿角灵芝有效成分提取工艺研究中的重要内容。
3. 提取设备在鹿角灵芝有效成分提取工艺中，提取设备的选择也是至关重要的。
不同的提取方法需要不同的提取设备，比如水提取可采用普通的水提取设备，而超声波提取则需要超声波提取设备。
提取设备的选择需要根据具体的提取方法来确定。
灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法【摘要】灵芝被广泛应用于药用和保健品领域，其中有效成分提取方法对于提高其药用价值至关重要。
本文从传统提取方法的局限性出发，介绍了常用的现代提取方法，包括超声波辅助提取、微波辅助提取和搅拌式提取方法。
这些现代方法不仅提高了提取效率，还能保留灵芝中的有效成分。
结合发展趋势分析，未来灵芝提取方法可能朝着更高效、绿色和可持续的方向发展。
灵芝中有效成分提取方法的不断创新与进步，将进一步推动灵芝在药用和保健品领域的应用，为人类健康带来更大的福祉。
【关键词】关键词：灵芝、有效成分、提取方法、传统、现代、超声波、微波、搅拌、发展趋势1. 引言1.1 灵芝中有效成分提取方法的重要性在药用植物灵芝中，含有丰富的有效成分，如三萜类、多糖类、多酚类等，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节等多种药理活性。
这些有效成分的提取并不是一件简单的事情，需要采用合适的提取方法才能最大限度地保留和提取出这些成分。
研究灵芝中有效成分提取方法的重要性不言而喻。
通过科学有效的提取方法，可以提高有效成分的提取率和纯度，使药用价值得以充分发挥。
而且，研究不同的提取方法还可以为灵芝产品的开发和生产提供技术支持，推动相关领域的发展。
2. 正文2.1 传统提取方法及其局限性传统提取方法通常包括水提取、醇提取、溶剂提取、蒸馏提取等。
水提取是最常见的方法之一，因为灵芝中很多有效成分是水溶性的。
传统水提取方法提取效率低，时间长，且容易受到环境因素的影响。
醇提取虽然提取效率高，但可能会导致某些有效成分的损失。
溶剂提取一般需要使用有机溶剂，存在溶剂残留的问题，不利于产品的安全性。
蒸馏提取虽然提取速度快，但并不适用于所有灵芝有效成分的提取。
传统提取方法的局限性主要体现在提取效率低，时间长，容易受环境因素干扰，对有效成分的选择性不足等方面。
这些问题限制了灵芝中有效成分的充分提取和利用，因此需要寻找更加高效、安全、环保的现代提取方法来解决这些局限性。
灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法
灵芝（Ganoderma lucidum），又称灵草、仙芝、天芝等，是我国传统的珍贵中草药之一。
灵芝具有抗肿瘤、抗炎、免疫调节、抗衰老等多种药理活性，被广泛应用于中医药领域。
其有效成分主要包括三萜类化合物、多糖类、蛋白质、多酚类、有机酸等。
灵芝中的有效成分提取方法主要有水提取法、醇提取法、超声波提取法、微波辅助提
取法等。
不同的提取方法可以得到不同类型和含量的有效成分。
水提取法是最常用的提取方法之一。
它的原理是利用水作为溶剂，通过加热或冷浸将
灵芝中的有效成分溶解出来。
水提取法的优点是操作简单、成本低廉，适用于大规模生产。
但水溶液中只能提取到灵芝中的水溶性成分，不适用于提取灵芝中的脂溶性成分。
超声波提取法是利用超声波的机械作用和热效应来提取有效成分。
超声波能够破坏灵
芝细胞壁，使有效成分迅速释放。
超声波提取法的优点是速度快、效率高，但操作过程中
需要注意超声波的功率和时间控制，避免生成热量过大而破坏有效成分。
灵芝中有效成分的提取方法有多种选择，选择适合自己的方法可以提高提取效率和产量，为灵芝的制备和应用提供更多的有效成分。
还需要注意提取过程中的温度、浓度、pH
值等因素的调控，以保证提取的有效成分的质量和稳定性。
灵芝三萜提取工艺的优化
第62卷 第2期吉林大学学报(理学版)V o l .62 N o .22024年3月J o u r n a l o f J i l i nU n i v e r s i t y (S c i e n c eE d i t i o n )M a r 2024d o i :10.13413/j .c n k i .jd x b l x b .2023314灵芝三萜提取工艺的优化温舒然,马占山,詹冬玲(吉林农业大学食品科学与工程学院,长春130118)摘要:以灵芝孢子粉为原料,使用体积分数为70%的乙醇为提取剂,采用酶解与超声辅助提取相结合的方法,将不同液固比㊁超声时间㊁酶解时间和酶用量设定为4个因素,进行单因素试验并设计响应面试验,以确定最优提取方式及其影响因素.利用大孔树脂层析法对灵芝三萜进行分离纯化,通过优化分离纯化工艺,确定最佳洗脱树脂㊁洗脱液体积分数㊁上样液流速以及上样液质量比.采用高效液相色谱法分析灵芝总三萜的组分差异.通过预实验分析,与单一提取法相比,酶+超声辅助提取更高效.采用乙醇为提取剂提取灵芝中三萜类化合物可提高三萜的纯度.最优条件下可实现对三萜含量的快速㊁精确测定,为灵芝三萜的分离纯化提供理论依据.关键词:灵芝三萜;提取工艺;工艺优化;分离纯化中图分类号:Q 586 文献标志码:A 文章编号:1671-5489(2024)02-0452-12E x t r a c t i o nP r o c e s sO p t i m i z a t i o no fG a n o d e r m aT r i t e r pe n e s W E NS h u r a n ,MAZ h a n s h a n ,Z HA N D o n g l i n g(C o l l e g e o f F o o dS c i e n c e a n dE n g i n e e r i n g ,J i l i nA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ,C h a n gc h u n 130118,C h i n a )收稿日期:2023-07-26.第一作者简介:温舒然(2000 ),女,汉族,硕士研究生,从事生物大分子空间结构改造的研究,E -m a i l :w e n s h u r a n 2023@163.c o m.通信作者简介:詹冬玲(1977 ),女,汉族,博士,副教授,从事食品生物化学的研究,E -m a i l :zd l ga l e @126.c o m.基金项目:吉林省科技发展计划重点研发项目(批准号:20210202109N C ).A b s t r a c t :G a n o d e r m a l u c i d u m s po r e p o w d e rw a s u s e d a s r a w m a t e r i a l ,e t h a n o l w i t h a v o l u m e f r a c t i o n o f 70%a se x t r a c t a n t .W ea d o p t e dac o m b i n a t i o no fe n z y m a t i ch y d r o l ys i sa n du l t r a s o u n da s s i s t e d e x t r a c t i o nm e t h o d ,s e t d i f f e r e n t l i q u i d -s o l i dr a t i o s ,u l t r a s o u n d t i m e ,e n z y m a t i ch y d r o l y s i s t i m e ,a n d e n z y m ed o s a g ea sf o u rf a c t o r sf o rao n e -w a y t e s ta n dd e s i g n e dar e s p o n s es u r f a c ee x p e r i m e n tt o d e t e r m i n e t h e o p t i m a l e x t r a c t i o nm e t h o d a n d i t s i n f l u e n c i n g f a c t o r s .T h eG a n o d e r m a t r i t e r pe n ew e r e s e p a r a t e d a n d p u r if i e db y u s i ng m a c r o p o r o u s r e s i n ch r o m a t o g r a p h y .B y o p ti m i z i n g t h e s e p a r a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n p r o c e s s ,t h e o p t i m a l e l u t i o n r e s i n ,e l u e n t v o l u m e f r a c t i o n ,f l o wr a t e o f t h eu p p e r s a m p l e s o l u t i o na n dt h e m a s sr a t i o o ft h e u p p e rs a m p l es o l u t i o n w e r e d e t e r m i n e d .T h ec o m p o s i t i o n a l d i f f e r e n c e s o f t h e t o t a l G a n o d e r m a t r i t e r p e n e s w e r e a n a l y s e d b y h i g h p e r f o r m a n c e l i qu i d c h r o m a t o g r a p h y (H P L C ).T h o u g ht h e p r e -e x p e r i m e n t a l a n a l y s i s ,t h e r e s u l t s s h o wt h a t t h ee n z y m e +u l t r a s o u n d a s s i s t e d e x t r a c t i o n i sm o r e ef f i c i e n t c o m p a r e d t o t h e s i n gl e e x t r a c t i o nm e t h o d .E t h a n o l i s u s e d a s a ne x t r a c t a n t t oe x t r a c t t r i t e r p e n o i d s f r o m G a n o d e r m a l u c i d u m c a ne n h a n c e t h e p u r i t y of t r i t e r p e n o i d s .U n d e r o p t i m a lc o n d i t i o n s ,t h er a p i d a n d a c c u r a t e d e t e r m i n a t i o n o ft h et r i t e r p e n e c o n t e n t c a nb e a c h i e v e d ,p r o v i d i ng a th e o r e ti c a l b a s i s f o r t h e s e pa r a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n o fG a n o d e r m a t r i t e r pe n e s .K e yw o r d s :G a n o d e r m a t r i t e r p e n e ;e x t r a c t i o n p r o c e s s ;p r o c e s s o p t i m i z a t i o n ;s e p a r a t i o na n d p u r i f i c a t i o n0 引 言灵芝三萜类化合物(G T )是从灵芝中提取出的一种重要生物活性成分,其中主要成分灵芝酸A 和灵芝酸G 的结构如图1所示.G T 在制药和医疗保健中有巨大的应用潜力[1-3].药理研究表明,G T 除调节血糖和血脂外,还具有多种药理活性,如抗肿瘤㊁抗菌㊁抗病毒㊁抗氧化㊁免疫调节和保肝作用[4-8],已被用于治疗和预防各种疾病,如肝炎和糖尿病等.图1 灵芝酸A (A )和灵芝酸G (B )的结构F i g .1 S t r u c t u r e s o f ga n o d e r i c a c i dA (A )a n d g a n o d e r i c a c i dG (B ) 常见的灵芝三萜提取方法包括溶剂回流提取法[9]㊁超声波提取法[10-11]㊁超临界C O 2萃取法[12]㊁微波辅助提取法㊁有机溶剂提取法和酶辅助提取法等[13-15].由于灵芝三萜是一种脂溶性物质,因此可采用传统有机溶剂浸提法进行提取.根据实验室环境条件,采用多种提取方法相结合的方式,对目标物料进行提取,可有效提升提取效率.灵芝粗提取液中含有多糖和色素等多种杂质,需要分离其中杂质部分,提升三萜的纯度.目前,分离纯化技术主要有薄层层析法㊁柱层析法和制备高效液相色谱(H P L C )法等[16-17].C h e n g 等[18]用石油醚洗涤除去脂肪酸,用二氯甲烷提取灵芝三萜,再用(400~600目)硅胶柱层析洗脱,获得5个灵芝三萜组分.本文以灵芝孢子粉为原料,采用酶+超声辅助提取法提取灵芝三萜,以体积分数为70%的乙醇为提取剂[19],用不同液固比㊁超声时间㊁酶解时间㊁酶用量为4个因素,进行单因素试验,并设计响应面试验,以确定最优提取方式及影响因素.利用大孔树脂层析法,通过优化分离纯化工艺[20],确定最佳洗脱树脂㊁最佳洗脱液体积分数㊁上样液流速以及上样液质量比.通过H P L C 分析灵芝总三萜的组分差异,实现快速㊁精确地对三萜含量进行测定[21],为灵芝三萜的分离纯化以及H P L C 分析提供理论依据.1 材料与方法1.1 材料㊁试剂与仪器灵芝子实体和灵芝孢子粉均为赤灵芝,灵芝酸A 和G 的标准品购于长春特产所;纤维素酶(质量分数ȡ99.9%)购于山东隆科特酶抑制剂有限公司;无水亚硫酸钠购于天津市科密欧化学试剂公司;齐墩果酸(质量分数ȡ98%)购于大连美仑生物技术有限公司;无水乙醇㊁N a O H ㊁H C l㊁香草醛㊁冰醋酸和高氯酸均为国产分析纯试剂,甲醇和乙腈等为国产色谱纯试剂,均购于北京化工厂;A B -8和D 101型大孔树脂购于天津天泰化学品有限公司.电子分析天平(C P A -125型,德国S a r t o r i u s 公司);电热恒温水浴锅(HH -4A 型,北京市光明医疗仪器厂);制冰机(M C B -105型,常熟市雪科电器有限公司);离心机(K L 04-A 型,美国A gi l e n t 公司);真空冷冻干燥机(F D -I B -50型,北京博医康实验仪器有限公司);电热鼓风干燥箱(101A -2E T 型,上海实验仪器厂有限公司);旋转蒸发仪(R E -52A A 型,上海亚荣生化仪器厂);紫外可见分光光度计354 第2期 温舒然,等:灵芝三萜提取工艺的优化(7230G 型,陕西凯利化玻仪器有限公司);超声波清洗机(S G 3300H 型,上海冠特超声仪器有限公司);循环水式多用真空泵(S H B -I I I G 型,郑州长城科工贸有限公司);智能恒流泵(B T 1-100V -L C D型,上海琪特分析仪器有限公司);B i n a r y H P L C 水泵(W a t e r s 1525型,美国W a t e r s 公司);U V -V i s 光谱仪(W a t e r s 2489型,美国W a t e r s 公司).1.2 方 法1.2.1 灵芝三萜制备及标准曲线绘制将灵芝孢子粉于50ħ烘干,过100目筛,精确称取一定量样品加入锥形瓶中,先加入纤维素酶,再加入酶解缓冲液,待酶解完成,在无水乙醇中于59k H z 下进行超声处理,并在3500r /m i n 下高速离心20m i n ,取上清液,过滤㊁定容后按香草醛-冰醋酸-高氯酸法测定三萜得率.参考文献[22]方法,将齐墩果酸配成100μg/m L 的对照溶液,在546n m 处测吸光度值,并绘制标准曲线,用公式灵芝三萜得率=提取液中灵芝三萜的质量(m g )灵芝粉的干质量(g)(1)计算得率.1.2.2 单因素试验以灵芝孢子粉为原料,通过酶+超声辅助提取法提取灵芝三萜,在乙醇体积分数为70%㊁温度为50ħ且p H=4的条件下,在59k H z 下进行超声处理,通过改变液固比(V (液)ʒm (固)=30ʒ1,40ʒ1,50ʒ1,60ʒ1,70ʒ1m L /g )㊁超声时间(15,25,35,45,55m i n )㊁酶解时间(15,25,35,45,55m i n )和酶量(1%,2%,3%,4%,5%)进行单因素试验.1.2.3 响应面试验利用D e s i g n -E x p e r tV 8.0.6软件,参考单因素试验结果,对三因素三水平进行设计,分别以超声时间㊁酶解时间和酶用量为主要指标,采用单因素试验结果中对灵芝孢子粉中三萜化合物提取得率影响较大的3个因素进行响应面试验,优化工艺.1.2.4 大孔树脂吸附及洗脱工艺研究使用内径和长度分别为1.08,50c m 的玻璃柱,装入经处理的D 101和A B -8型大孔树脂,湿法装柱.通过智能恒流泵以1m L /m i n 的流速吸取灵芝三萜提取液,泵送通过玻璃柱,静态吸附3h ,用水冲洗玻璃柱1管(1管约为4.5m L ),通过自动收集装置分段(5m L /份)收集流出液,并测定灵芝三萜的质量浓度,绘制动态吸附曲线.由于灵芝三萜酸易溶于有机溶剂,因此用乙醇-水体系作为洗脱液.吸取灵芝三萜提取液的上样液1管,控制流速为1m L /m i n 通过树脂柱.为确定最佳的洗脱液浓度,分别用体积分数为40%,60%,80%和95%浓度的乙醇对其进行洗脱,用自动收集装置收集洗脱剂用量后测定灵芝三萜的质量浓度.1.2.5 大孔树脂吸附率和解吸率计算在500m L 三角形烧瓶中,分别将5g 两种树脂与200m L 灵芝三萜提取物(1.0m g /m L )混合.振荡3h 后,测定两种树脂的吸附容量.使用循环水多用途真空泵在真空下进行抽吸过滤,得到含有吸附物的树脂.在烧瓶中称取0.5g 含吸附物大孔树脂的等分试样,加入10m L 体积分数为95%的乙醇作为解吸溶剂.振荡后,测定溶剂中的灵芝三萜含量,计算吸附率和解吸率:吸附率=上样液质量浓度ˑ上样液体积-洗脱液质量浓度树脂质量ˑ100%,(2)解吸率=洗脱液质量浓度ˑ洗脱液体积(上样液质量浓度-吸附平衡质量浓度)ˑ上样液体积ˑ100%.(3)1.2.6 大孔树脂吸附泄露曲线采用湿法装柱,待树脂柱平衡稳定后,采用恒流泵将三萜粗提取液引入树脂柱,对其进行动态吸附,并检测分离后的三萜浓度.通常情况下,在流出液中灵芝三萜的浓度达到上样液1/10时达到泄露点[23],可停止上样,此时为最大上样量.以收集管数为横坐标,流出液灵芝三萜浓度为纵坐标,绘制泄露曲线.454 吉林大学学报(理学版) 第62卷1.2.7 灵芝三萜的纯化及纯度计算在上样过程中,将灵芝三萜样品溶液的上柱流速分别控制为1.0,2.0,3.0m L /m i n ,测定每份流出液(5m L /份)的质量浓度,利用式(2)计算其吸附率.同时,分别配制质量浓度为10,15,20,25,30m g /g 的灵芝三萜样品溶液,以泵速为1.0m L /m i n 的流速加载到树脂柱上,测定每份流出液(5m L /份)的质量浓度,利用式(2)计算其吸附率.使用A B -8型大孔树脂实现对灵芝粗三萜溶液的动态吸附解吸,并旋蒸浓缩洗脱液.将浓缩液进行冷冻干燥并称其质量.测定样品溶液浓度,并按纯度=灵芝三萜类化合物质量(g)干燥后样品质量(g)ˑ100%(4)计算产物的灵芝三萜纯度.1.2.8 高效液相色谱分析高效液相色谱待测样品预处理:取1m g 经纯化㊁浓缩冻干的灵芝三萜,溶于10m L 甲醇中,经0.22μm 微孔滤膜过滤后,装入色谱瓶中.标准品溶液配制:分别称取灵芝酸A 和G 标准品,用甲醇溶解,过滤膜,即得到标准品溶液.参考文献[24]方法,以乙腈(A )-醋酸(φ=0.01%)水溶液(B )为流动相,使用色谱柱(4.6mmˑ250mm ,5μm )对样品进行梯度洗脱.将柱温控制在30ħ,分析波长设为254n m ,以1.0m L /m i n 流速进样,将进样量控制在20μL .高效液相色谱洗脱条件列于表1,分别分析三萜类成分的单一标准品溶液与混合标准品溶液,通过三萜类成分的保留时间定性分析.表1 高效液相色谱洗脱条件T a b l e 1 H i g h p e r f o r m a n c e l i qu i d p h a s e e l u t i o n c o n d i t i o n s t /m i n2045557595100w (A )/%283960100100282 结果与讨论2.1 标准曲线的绘制测量546n m 处吸光度得到的标准曲线如图2(A )所示.以吸光度为纵坐标,齐墩果酸质量浓度为横坐标,得到标准曲线线性回归方程为y =9.1529x +0.0421,R 2=0.9992,表明线性关系良好,可用该公式计算灵芝三萜含量.2.2 单因素试验2.2.1 液固比对灵芝三萜得率的影响以30ʒ1,40ʒ1,50ʒ1,60ʒ1,70ʒ1的液固比为对照,研究不同液固比对灵芝三萜最终得率的影响,结果如图2(B )所示.该方法的其他工艺参数为:酶解时间40m i n ㊁超声波作用时间40m i n ㊁酶用量3%㊁酶解温度50ħ.由图2(B )可见:随着液固比的增加,灵芝三萜得率不断提高,可能是因为提取液与物料接触面积接触更充分,导致灵芝三萜溶出效果更好;当液固比为50ʒ1时,灵芝三萜酶得率的最大值为0.86m g /g ;当液固比继续增加时,灵芝三萜得率下降,这是由于提取液过多,可能析出其他杂质影响了灵芝三萜析出,导致灵芝三萜提取量下降.本文选定最佳液固比为50ʒ1,与文献[25-26]结果相同.2.2.2 酶量对灵芝三萜得率的影响以1%,2%,3%,4%,5%酶用量为对照,研究不同酶用量对灵芝三萜最终得率的影响,结果如图2(C )所示.该方法的其他工艺参数为:酶解时间40m i n ㊁超声波作用时间40m i n㊁酶解温度50ħ㊁液固比50ʒ1.由图2(C )可见:随着酶用量的增加,灵芝三萜得率增大;当酶用量为4%时,灵芝三萜得率的最大值为0.92m g /g ;之后灵芝三萜的得率降低,这是由于酶解灵芝中三萜类化合物时,溶出了其他物质,析出了其他杂质,从而影响了灵芝中三萜类化合物析出,导致灵芝三萜含量降低[27].因此,本文选定最佳酶用量为4%.554 第2期 温舒然,等:灵芝三萜提取工艺的优化654吉林大学学报(理学版)第62卷2.2.3酶解时间对灵芝三萜得率的影响以15,25,35,45,55m i n酶解时间为对照,研究酶解时间对灵芝三萜得率的影响,结果如图2(D)所示.该方法的其他工艺参数为:超声时间40m i n㊁酶用量为3%㊁控制酶解温度为50ħ㊁液固比50ʒ1.由图2(D)可见:随着酶解反应时间的增加,灵芝三萜的提取得率增大;当反应时间为35m i n 时,灵芝三萜得率的最大值为0.96m g/g;之后灵芝三萜的得率降低.导致这种趋势的原因可能是纤维素酶在一定时间内酶解效率达到最大,若时间过长,由于纤维素酶对温度耐受范围有限,酶内分子结构被破坏,酶发生降解,导致灵芝三萜得率降低[28].因此,本文选定最佳酶解时间为35m i n. 2.2.4超声时间对灵芝三萜得率的影响以超声时间15,25,35,45,55m i n为对照,研究超声时间对灵芝三萜得率的影响,结果如图2(E)所示.该方法的其他工艺参数为:酶解时间40m i n㊁酶用量3%㊁纤维素酶酶解温度50ħ㊁液固比50ʒ1.由图2(E)可见:随着超声时间的增加,灵芝三萜得率增大;当超声时间为45m i n时,灵芝三萜得率的最大值为0.84m g/g;之后灵芝三萜得率降低.由于提取灵芝三萜时利用了超声波的机械效应和热效应达到传质平衡,但需要一定时间[29],导致得率逐渐增大,之后溶出无效成分和杂质增多,影响三萜类化合物质溶出,得率下降.因此,本文选定最佳超声时间为45m i n .图2标准曲线及各因素对灵芝三萜得率的影响F i g.2S t a n d a r d c u r v e a n d e f f e c t o f v a r i o u s f a c t o r s o n y i e l do fG a n o d e r m a t r i t e r p e n e s2.3响应面试验分析2.3.1响应面工艺试验设计以单因素试验结果为基础[30-32],以灵芝三萜得率为响应面指标,从中选取对其影响最大的3个因素,分别是超声时间(A)㊁酶解时间(B)和酶用量(C),对其进行响应面分析试验,选出最佳提取工艺.利用D e s i g n-E x p e r tV8.0.6软件,建立三因素三水平二次回归方程,设计因素水平列于表2.表2设计因素水平T a b l e2D e s i g n f a c t o r l e v e l编码水平超声时间/m i n酶解时间/m i n酶用量/%-135253045354155455根据D e s i g n-E x p e r t试验设计和结果,分析超声时间(A)㊁酶解时间(B)和酶用量(C)对灵芝三萜提取率的影响,结果列于表3.表3 中心组合试验设计和结果T a b l e 3 C e n t r a l c o m b i n a t i o n t e s t d e s i gna n d r e s u l t s 试验号ABC三萜得率/(m g∙g -1)10000.893720000.896130000.885941-100.723250-110.740560000.90017-1010.83618-1-100.81079010.785710-1100.695311-10-10.6894120-1-10.75761310-10.7217141100.7241150000.8617160110.80051701-10.6412通过检验分析和二次多项式模型回归分析,得到对灵芝三萜提取率进行预测的回归模型为y =0.8886-0.0096ˑA -0.0214ˑB +0.0441ˑC +0.0291ˑA B -0.0207ˑA C +0.0441ˑB C -0.0635ˑA 2-0.0868ˑB 2-0.0669ˑC2,式中:y 为响应值灵芝三萜的提取率;A ,B ,C 分别为超声时间㊁酶解时间和酶用量的编码值.方差分析(A N O V A )结果列于表4.表4 方差分析T a b l e 4 V a r i a n c e a n a l ys i s 变异来源及参数自由度平方和均方和F 检验P r >F模型90.10800.012044.2600<0.0001**A 10.00700.00702.72000.1432B 10.00370.003713.46000.0080**C 10.00020.000257.40000.0001**A B 10.00340.003412.47000.0096**A C 10.00170.00176.30000.0404*B C 10.00780.007828.68000.0011**A 210.00020.000262.5800<0.0001**B 210.00030.0003116.8700<0.0001**C 210.00020.000269.4100<0.0001**残差70.00190.0030失拟项30.00120.00402.37000.2118纯误差40.00700.0020总误差160.1099注:*P <0.05差异性显著;**P <0.01差异性极显著.由表4可见:该模型的P (P r >F )<0.0001,达到极显著水平,存在明显差异;因变量与考察自变量间的线性关系显著,R 2=0.9827;失拟项P =0.2118>0.05不显著,说明响应值在本文所得数据下可精准全面预测;模型调整确定系数(A d j .R 2)=96.05%,预测相关系数(P r e d .R 2)=81.35%,表明该模型具有较高的可信性和较好拟合度;模型的变异系数(C V )为2.09%.由方差分析结果可知,754 第2期 温舒然,等:灵芝三萜提取工艺的优化超声时间(A )㊁酶解时间(B )和酶用量(C )之间存在明显的交互作用,不同因素对灵芝三萜得率影响不同,由大到小依次为C >B >A .2.3.2 响应面模型拟合及分析根据二次模拟回归方程绘出响应面及等高线如图3所示.酶用量㊁酶解时间和超声时间两两之间分别存在交互作用,且两因素交互作用显著,同时影响灵芝三萜最终得率.由图3(A )可见,超声时间(A )和酶解时间(B )二者相互作用对灵芝三萜得率的影响显著性较强,同时灵芝三萜得率随酶用量的增加呈先增加后减少的趋势,在A 方向曲面变化不明显,方差分析中酶解时间对结果影响显著(P <0.01),且A 与B 交互作用等高线椭圆程度明显,所以二者交互作用显著(P <0.05).由图3(B )可见:超声时间(A )和酶用量(C )相互作用对灵芝三萜得率的影响显著性较强,随着超声时间的增加,灵芝三萜得率先增加后减少,由方差分析可知,在A 方向曲面变化不大,但C 方向曲面变化极显著图3 酶用量㊁酶解时间和超声时间对灵芝三萜得率的影响F i g .3 E f f e c t s o f e n z y m e d o s a g e ,e n z y m a t i c h y d r o l y s i s t i m e a n du l t r a s o u n d t i m e o n e x t r a c t i o n r a t e o fG a n o d e r m a t r i t e r pe n e s (P <0.01);A 与C 交互作用等高线的椭圆程度明显,因此二者交互作用显著(P <0.05).由图3(C )可见:酶解时间(B )和酶用量(C )相互作用对灵芝三萜得率的影响显著性较强,随着超声持续时间的增加,灵芝三萜得率先增加后减少;由方差分析可知,在B 与C 方向曲面变化极显著(P <0.01),且B 与C 交互作用等高线椭圆程度明显,所以二者交互作用极显著(P <0.01).854 吉林大学学报(理学版) 第62卷2.3.3 最佳提取条件确定将所得数据利用D e s i g n -E x p e r t 软件分析,最终可确定灵芝三萜提取工艺的最佳条件为:以φ(乙醇)=70%为提取剂,控制液固比为50ʒ1,并进行超声洗涤,超声时间(A )为46m i n ,再进行酶解,将其温度控制在50ħ,并控制酶用量(C )为4.8%,持续酶解时间(B )为35m i n .在该条件下,灵芝孢子粉总三萜的得率为0.98m g /g .2.4 大孔树脂吸附灵芝三萜2.4.1 上样液量的选择图4为大孔树脂最佳吸附曲线.由图4可见,对每份流出液灵芝三萜质量浓度进行测定,确定在第7~13管时,大孔树脂吸附灵芝三萜得率最高,吸附效果最好.所以每次收集7~13管中灵芝三萜的流出液,并绘制动态吸附最佳曲线.图5为D 101和A B -8两种大孔树脂动态吸附曲线对灵芝三萜纯化程度的影响.由图5可见,通过对比两种大孔树脂D 101和A B -8吸附灵芝三萜粗体液,可测定流出液灵芝三萜的质量浓度.通过对解吸率的计算得到A B -8型大孔树脂和D 101型大孔树脂的解吸率分别为94.39%和83.51%,可见A B -8型大孔树脂具有更好的吸附性,在动态洗脱试验中纯化效果更好.A B -8型大孔树脂在纯化分析中的方法简单,适用于灵芝三萜类化合物的富集纯化.图4 大孔树脂最佳吸附曲线F i g .4 O p t i m a l a d s o r pt i o n c u r v e o fm a c r o po r o u s r e s in 图5 D 101和A B -8两种大孔树脂动态吸附曲线对灵芝三萜纯化程度的影响F i g .5 E f f e c t o f d y n a m i c a d s o r pt i o n c u r v e s o fD 101a n dA B -8m a c r o p o r o u s r e s i n s o n p u r i f i c a t i o n d e g r e e o fG a n o d e r m a t r i t e r pe n e s 2.4.2 大孔树脂吸附泄露曲线图6为大孔树脂动态吸附泄露曲线.由图6可见,灵芝三萜得率随上样量增大而增大.当上样量16管(约70m L )时,灵芝三萜得率为12.33m g /g.因此选择70m L 为最佳上样量.2.4.3 洗脱剂体积分数的确定图6 大孔树脂动态吸附泄露曲线F i g .6 D y n a m i c a d s o r p t i o n l e a k a ge c u r v e o fm a c r o po r o u s r e s i n 图7 不同洗脱剂体积分数对灵芝三萜得率的影响F i g.7 E f f e c t o f d i f f e r e n t e l u e n t v o l u m e f r a c t i o n o n y i e l do fG a n o d e r m a t r i t e r pe n e s 图7为不同洗脱剂体积分数对灵芝三萜得率的影响.由图7可见,随着洗脱液体积分数的增加,954 第2期 温舒然,等:灵芝三萜提取工艺的优化灵芝三萜得率呈先升高后降低的趋势.当φ(乙醇)=40%时,灵芝三萜得率最小,为8.49m g /g;当φ(乙醇)=95%时,灵芝三萜的得率最大,为9.97m g /g .原因为灵芝三萜类物质为脂溶性物质,易溶于乙醇等有机溶剂,当乙醇体积分数增大时,三萜类物质溶解度也不断增大,且在φ(乙醇)=95%时具有较高的溶解性,更容易被洗脱[33].因此,选择灵芝三萜的洗脱溶剂为φ=95%的乙醇.2.4.4 上样液流速的确定图8为上样液流速对灵芝三萜吸附程度的影响.由图8可见,随着上样液流速的增大,大孔树脂对灵芝三萜的吸附能力逐渐降低.刘洋璇[34]研究表明,随着流速的增加,树脂对样液的吸附能力不断降低,使大孔树脂不能充分吸附,吸附过程未完成便随样液流出树脂柱.所以上样液流速选择1.0m L /m i n ,此时吸附率最高.2.4.5 上样液质量比的确定图9为上样液质量比对大孔树脂吸附性能的影响.由图9可见,随着样品质量比的增大,大孔树脂对灵芝三萜的吸附率呈先减小后增大的趋势,在上样液质量比20~30m g /g 内,A B -8型大孔树脂对样品的吸附率波动较小.灵芝三萜得率随上样液质量比的增加也呈升高的趋势,当质量比为25m g /g 时,灵芝三萜得率达到最大值18.34m g /g.但当样品质量比过高时,所含杂质增多,树脂因吸附其他物质而使吸附率下降.因此,上样液质量比选择25m g /g ,以充分吸收灵芝三萜.图8 上样液流速对灵芝三萜吸附程度的影响F i g .8 E f f e c t o f f l o wr a t e o f u p p e r s a m pl e s o l u t i o no n a d s o r p t i o nd e g r e e o fG a n o d e r m a t r i t e r pe n e s 图9 上样液质量比对大孔树脂吸附性能的影响F i g .9 Ef f e c t o fm a s s r a t i o o f u p p e r s a m pl e s o l u t i o no n a d s o r p t i o n p e r f o r m a n c e o fG a n o d e r m a t r i t e r pe n e s 2.4.6 灵芝三萜纯度分析用式(4)计算灵芝三萜纯度,其纯度由原来的42.57%提高至87.09%,约为纯化前2.05倍,表明该方法简单高效,可用于灵芝三萜的纯化分析.2.5 高效液相色谱法鉴定分析图10为灵芝三萜类标准品混合组分与样品的H P L C .由图10可见,在1.2.8条件下进行高效液相图10 灵芝三萜类标准品混合组分(A )与样品(B )的H P L CF i g .10 H P L Co fm i x e d c o m p o n e n t s o fG a n o d e r m a t r i t e r p e n e s s t a n d a r d (A )a n d s a m pl e (B )色谱分析,得到的各色谱峰分离度良好,其中三萜类标准样品的保留时间分别为灵芝酸G :56.875m i n ,灵芝酸A :65.442m i n .由灵芝三萜标准品谱与样品谱可见,通过大孔树脂纯化后得到灵芝三萜提取064 吉林大学学报(理学版) 第62卷液,纯化后得到以灵芝酸A 和灵芝酸G 为主要成分的灵芝三萜类化合物,满足实验要求.通过H P L C 检测分析,绘制标准曲线,得到线性回归方程为灵芝酸A :y =2.0393ˑ106x -62245.5303, R 2=0.9992;灵芝酸G :y =3.8941ˑ106x -61808.1393, R 2=0.9994.结果表明,灵芝三萜在0.01~0.1m g/L 内具有良好的线性关系.对两种灵芝三萜类化合物进行相对标准偏差(R S D )计算,结果分别为0.51%,0.41%,表明仪器精密度良好.计算两种灵芝三萜酸峰面积,结果表明,二者无明显变化,R S D 结果分别为1.17%,1.25%,表明该方法具有良好的可重复性.对两种灵芝三萜酸的R S D 结果进行计算,结果分别为1.38%,1.28%,表明受试品溶液在48h 内较稳定.通过对三萜成分含量测定发现,灵芝中三萜的组成及含量存在明显差异,灵芝酸A 和灵芝酸G 分别占灵芝酸总量的26.17%,38.35%.综上所述,本文采用酶+超声波辅助提取法快速㊁高效地提取灵芝中三萜类物质.通过单因素试验和响应面试验确定灵芝三萜的最佳提取参数:提取剂为φ=70%的乙醇,液固比50ʒ1,酶解最适温度50ħ,超声时间46m i n ,酶解时间35m i n ,酶量为4.8%.在该条件下对灵芝孢子粉总灵芝三萜得率为0.98m g /g.选择A B -8型大孔树脂分离纯化灵芝三萜类物质,通过考察动态吸附解吸条件确定最佳纯化工艺为:上样液灵芝三萜类物质浓度为25m g /g,上样液流速为1.0m L /m i n ,先静态吸附3h 后用1管(4.5m L )蒸馏水洗去杂质,再用φ=95%的乙醇作为洗脱剂并以1.0m L /m i n 流速洗脱.在该条件下灵芝三萜类物质纯度由42.57%提高至87.09%.通过H P L C 分析洗脱液成分,结果表明,保留时间为56.875,65.442m i n 时出现峰值,分别为灵芝酸G 和灵芝酸A ,因此纯化后的灵芝三萜类化合物以灵芝酸A 和灵芝酸G 为主要成分析出.参考文献[1] C H E N H Y ,L E I JY ,L I SL ,e t a l .P r o g r e s s i nB i o l o g i c a l A c t i v i t i e s a n dB i o s y n t h e s i s o f E d i b l e F u n g i T e r p e n o i d s [J ].C r i t i c a lR e v i e w s i nF o o dS c i e n c e a n dN u t r i t i o n ,2022,63(25):7288-7310.[2] G U O W L ,C A O YJ ,Y O USZ ,e t a l .G a n o d e r i cA c i d s -R i c hE t h a n o l E x t r a c t f r o m G a n o d e r m a l u c i d u m P r o t e c t s a g a i n s tA l c o h o l i cL i v e r I n j u r y an d M o d u l a t e sI n t e s 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灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法灵芝是一种珍贵的中草药，被广泛用于中医药学，它被认为具有多种保健功效，如抗肿瘤、抗炎、抗衰老等。
灵芝中所含有的有效成分对人体具有积极的影响，因此提取灵芝中的有效成分是非常重要的研究方向之一。
下面将介绍一些常用的灵芝有效成分的提取方法。
一、热水提取法：热水提取法是一种传统的提取方法，通过将灵芝研磨成粉末后，用热水进行提取。
这种方法简单易行，且成本较低。
提取时需要控制好温度和提取时间，通常在80-100摄氏度下提取2-3小时。
这种方法提取得到的有效成分含量较低，且容易受到其他物质的干扰。
二、超声波辅助提取法：超声波辅助提取法是一种常用的提取方法，在研究中得到了广泛的应用。
该方法使用超声波来加速提取过程，能有效提高有效成分的提取率和提取速度。
将灵芝粉末与溶剂混合，然后使用超声波器进行提取。
超声波的高频振动能破坏细胞壁，使得细胞内的有效成分能够充分释放出来。
这种方法操作简单，提取效果较好。
三、酶解提取法：酶解提取法利用酶的作用来分解细胞壁，释放出有效成分。
将灵芝粉末与酶液混合，在适宜的温度和时间下进行酶解。
酶能够破坏细胞壁，使得细胞内的有效成分得以释放出来。
这种方法提取效果较好，但是酶液的选择和使用条件需要具体的研究。
四、超临界流体萃取法：超临界流体萃取法是一种先进的提取技术，利用超临界流体（如二氧化碳）的特殊性质来提取有效成分。
超临界流体具有较高的渗透性和较低的粘度，能够快速渗透进入细胞内，将有效成分溶解出来。
这种方法提取效率高，且不需要有机溶剂，对环境无污染。
灵芝中有效成分的提取方法有多种选择，不同的方法有不同的优缺点。
在实际应用中，可以根据实验目的和条件选择合适的提取方法。
随着科技的发展，相信将会有更多更高效的提取方法被开发出来，为灵芝中有效成分的研究和应用提供更多的可能性。
灵芝多糖超声波提取工艺条件的优化
灵芝多糖超声波提取工艺条件的优化
李凤林;吕艳荣;宫敬利;齐俊生
【期刊名称】《湖北农业科学》
【年(卷),期】2014(53)3
【摘要】为确定灵芝(Ganoderma lucidum)多糖超声波提取最佳工艺条件,通过单因素试验与正交回归组合设计对其进行优化.结果表明,灵芝多糖超声波提取最佳工艺条件为料液比(g/mL)1∶35,超声功率80W,超声温度50℃,超声时间35 min,此条件下灵芝多糖实际提取率为2.06％.
【总页数】4页(P640-643)
【作者】李凤林;吕艳荣;宫敬利;齐俊生
【作者单位】吉林省酿造技术科技创新中心,吉林吉林132101;吉林农业科技学院,吉林吉林132101;吉林省扶余县环境保护局,吉林扶余131200;吉林农业科技学院,吉林吉林132101;中国农业科学院特产研究所,吉林吉林132109
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
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