RNAi介导Caspase-3基因及其抑制LPS诱导肾脏上皮细胞凋亡的研究

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Ｃｐｓ一ｓａａｅ３基因编码区的短发夹状ＲＡ（ｈＮ真核表达载体质粒ｐＮＴＵ．一ａｐｓ一ｓＲＡ，电穿孔法转染Ｒ３ＮｓＲＡ）ＲＡ — ６１Ｃａｅ３ｈＮ用ｓＫＥ细胞，Ｇ１经４８筛选后，形成稳定的表达Ｃｓａｅ３ｓＲＡ的细胞系。实验分为３组：ａｐ－ｈＮｓ ①正常对照组：未转染的Ｒ３ＫＥ细胞； ②阴性对照组：转染空载体ｐＮＴＵ．ＲＡ．６１的Ｒ３ＫＥ细胞系； ③实验组：染Ｃｓａｅ３ｓＲＡ的Ｒ３转ａｐ－ｈＮｓＫＥ细胞系。经脂多糖（Ｐ）ＬＳ孵育
中国图书分类号［摘Ｒ９．３２１文献标识码Ａ文章编号１０４８ｘ（０８）１０１一００４２００－０６ｏ４
要］目的：探讨ＲＡ干扰ＣｓａｅＮａｐｓ一因及抑制ＬＳ诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法：３基Ｐ构建针对大鼠
Ｃｐａｅ３ｇｎｅ，ａｄｔａｓｅｔｄＲＫ３Ｅｅｌｂｙｅｅｔｏｏａｉｎ．ｔｒＧ４１ｅｅｔｏｔｔｂｅｃｌｉｘｒｓｉｇＣａｐｓ－ｈＲＮＡｓ￣ｓ一ｅｎｒｎｆｅｃｃｌｌｃｒｐｒｔｏＡｆｅ８ｓｌｃｉｎ，ｈｅｓａｌｅｌｌｎｅｅｐｅｓｎｓａｅ３ｓｗａ
ｏｔｎｄｔｅｅｐｒｅｔａｄｉｅｎｏ３ｇｕｓｏ：ｎｒａｃｎｏｇｕ，Ｒ３ｅｓｗｔｏｔｒｓｃｏ；② ｎｇｔｅｃｎｒｂａｅ。ｈｘｅｉｎｓｉｄｄｉｒｐｆ ① ｏｍｏｔｌｒｐＫＥｃｌｈｕｔｆｔｎｉｍＷｖｔｏｌｒｏｌｉａｅｉｎｅａｖｏｔｌｉｏ
１２小时后，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，ＴＰＲ检测ｍＮＲ．ＣＲＡ的表达，以及各组Ｃｓａｅａｐｓ一白的活性。结果：８蛋与正常对照
组和阴性对照组相比，实验组的细胞凋亡率显著降低（００）Ｃｐｓ一Ｐ＜．１，ａａｅ３的ｍＮｓＲＡ水平和蛋白活性显著降低（００）Ｐ＜．１。结论：针对Ｃｓａｅａｐ．ｓ３的特异性短发夹ＲＡ可以明显引起靶基因的沉默，Ｎ进而抑制ＬＳ诱导的肾脏上皮细胞凋亡的发生。Ｐ［关键词］ＲＡ干扰；ａｐｓ－；ＮＣａｅ基因沉默；ｓ３细胞凋亡
［ｂｔａｔＯｊｃｖ：ｏｉｖｓｇｔＲＡｉｔｆｅｃｎｐｐｏｉｉｄｃｄｂＰｉｎｙｅｉｅａｃｌｔｒｕｈｓｅｃｇＡｓｒｃ］ｂｅｔｅＴｅｉｅＮｅｅｎｅａｄａｏｔｓｎｕｅｙＬＳｉｋｄｅｐｈｌｌｅｏｇｉｎｉｉｎｔａｎｒｒｓｎｔｉｌｈｌｎ
Ｃｐｓ一ｅｅｗｉｍａｌｈｉｐｎＲＮＡ．ｅｈｄ：ｅｃｎｔｕｔｄｔｅｅｋｒｏｉｘｒｓｉｎｖｃｏｆｓｌｌｈｒｉＮＡｔｒｅｉｇｒｔｓａａｅ３ｇｎｔｓｌａｒｉｈＭｔｏｓＷｏｓｃｅｈｕａｙｔｅｐｅｓｅｔｒｏｍａａｐｎＲａｇｔａｒｃｏｉｎ
Ｓｌｎｅｏｓｓ－ｅｙｃｎｔｕｔｏｕｒｏｉｘｒｓｉｎｖｃｏｆｓａｌｉｅｃｆＣａｐａｅ３ｇｎｅｂｏｓｒｃｉｎｅｋａｙｔｃｅｐｅｓｏｅｔｒｏｍｌ
ｈｉｐｎＲＮＡａｎｉｉｃｌａｏｔｓｓｉｄｃｄｂＳｉｉｎｙｅｉｅｉｌｃｌａｒｉｃｎｉｈｂｔｅｌｐｐｏｉｎｕｅｙＬＰｎｋｄｅｐｔｌｅｌｈａｓ
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中国免疫学杂志２００８年第２４卷
Ｒｉ导Ｃｓａｅ３基因及其抑制ＬＳ诱导肾脏上皮细胞凋亡的研究ＮＡ介ａｐｓ－Ｐ
张艳陈栋① 贡福盛刘健刘晓晴
（中科技大学同济医学院附属同济医院综合医疗科，汉４０３）华武３００
ｒｕ，Ｒ３ｅｓｒｆｔｔｂａｅｔ ⑧ ｘｅｍｎａｇｕ，ＫＥｃｌａｆｔｄｔＣｓａ一ｓＡＡｔｃｂｔｎｇｏｐＫＥｃｌａｓｃｄｉｌｋｖｃｏ；ｅｐｒｅｔｏｐＲ３ｅｓｒｓｃｅｉａｐｅ３ｉＮ．ｆｒｎｕａwk.baidu.comｏｌｔｅｅｗｈｎｎｒｉｌｒｌｔｅｎｗｈｓＲｅｉｉ
ＺＡＧＹｈ．ＨＮＤｎＨＮａＣＥｏｇ，ＧＮｕＳｅｇ．ＩｉｎＬＵＸａ — ｉ．ｅａｔｅｔｆＧｎｒｌｄｃ，ＴｎｊｏＧＦ —ｈｎＬＵＪａ．ＩｉｏＱｎＤｐｒｎｏｅｅｉｎｇｍａＭｅｉｅｏｇｉＨｓｉｌＴｎｆＭｅｉｌｏｅｅＨａｈｎｎｅｉＳｉｃｎｅｈｏｏｙｕａ３００Ｃｉａｏｔ，ｏｇｄｃｌｇ，ｕｚｏｇＵｉｒｔｏｃｎｅｄＴｃｎｌ，Ｗｈｎ４０３，ｈｎｐａｉａＣｌｖｓｙｆｅａｇ