脂肪酶产酶菌的筛选及酶活性的测定
产脂肪酶的菌株筛选方法的研究
产脂肪酶的菌株筛选方法的研究近年来，随着植物油和动物油在食品、医药、农药以及其他行业的广泛使用，脂肪酶的需求量逐渐增加。
脂肪酶是一种具有多种功能的酶，它可以分解脂肪和油脂，用来制造食品添加剂、医药中间体以及其他有用的产品。
发酵技术是获得脂肪酶的重要方法之一，而发酵菌株的筛选是发酵技术的基础和关键步骤，其目的是从微生物资源中筛选出对脂肪酶产生量有明显提高的菌株（颜永涛，2018）。
一般而言，菌株的筛选标准主要有两个，一是筛选的菌株能有效的产出脂肪酶，二是筛选的菌株能兼顾发酵条件的优化。
因此，要求筛选出高产脂肪酶的菌株，必须考虑到发酵条件与产物形成之间的关系。
筛选高产脂肪酶的菌株一般包括多种筛选方法，其中比较常见的是两种：一种是培养基筛选方法，另一种是固定化筛选方法。
培养基筛选方法是在最佳培养基中，根据育种材料的不同（如不同的液体培养基或固体培养基），采用基础发酵条件对菌株进行培养，以获得高产脂肪酶的菌株。
优势在于，培养基筛选方法易于操作，能够及时获得结果，且价格低廉，但这种方法受发酵条件的限制，在某些情况下，成果不太满意。
固定化筛选方法是在发酵过程中，将发酵菌株通过固定化技术（如表面层析法、膜层流法、筛选电泳法）进行筛选，然后再根据筛选出来的菌株的表现和性状，以及细胞高分子量蛋白或细胞酶活性，来识别和分离出高产脂肪酶的菌株。
相比培养基筛选方法，固定化筛选方法更加精确，能够准确识别出高产脂肪酶的菌株，但操作复杂，费时费力，存在技术操作的难度。
另外，结合培养基筛选方法和固定化筛选方法也可以进行脂肪酶菌株的筛选。
例如，采用柔性发酵条件，针对不同的育种材料经过培养基的筛选，从中获得脂肪酶合成量提高明显的发酵菌株，再利用固定化筛选方法进一步筛选出脂肪酶合成量更高的菌株（张静，2019）。
综上所述，要筛选高产脂肪酶的菌株，可以采用培养基筛选方法、固定化筛选方法，也可以结合培养基筛选方法和固定化筛选方法进行操作，以达到所需的目标。
碱性脂肪酶高产菌株的筛选及产酶条件的优化
碱性脂肪酶高产菌株的筛选及产酶条件的优化摘要利用筛选和验证相结合的方法筛选出了产碱性脂肪酶活性较高的菌株bl1011。
经过形态观察、生理生化试验及分子生物学鉴定，结果表明该菌株为假单胞菌（pseudomonas sp.）。
运用单因素试验和均匀试验优化了bl1011菌株摇瓶产酶培养基和最佳发酵条件。
在培养基为麦芽糖2.5%，蛋白胨3.0%，大豆油0.5%，k2hpo4 0.2%，培养条件为起始ph值7.5，温度33 ℃，转速180 r/min，装液量20 ml，发酵周期为60 h的条件下，酶活力达到最高，为223 u/ml。
关键词脂肪酶；筛选；发酵优化；均匀试验中图分类号 q55 文献标识码 a 文章编号 1007-5739（2012）22-0274-03脂肪酶（lipase，e.c.3.1.1.3，又称三酰基甘油水解酶）是一种特殊的酯键水解酶，能在油水界面催化油脂水解，生成甘油和脂肪酸，具有化学选择性和底物选择性[1]。
脂肪酶被广泛应用于食品、轻纺、皮革、香料、化妆品、洗涤剂、有机合成、医药等领域[2]。
尽管自然界中产脂肪酶的微生物很多，但用于商业化生产的细菌很少，主要有伯克霍尔德氏菌（burkholderia）、无色杆菌属（achromobacter）、假单胞菌属（pseudomonas）、色杆菌属（chromobacterium）、产碱杆菌属（alkaligenes）、节杆菌属（arthrobacter）[3]。
假单胞菌产碱性脂肪酶国内外虽有研究，但酶活力均不高[4]。
该研究通过罗丹明b平板法快速筛选出一株产碱性脂肪酶能力较强的菌株，并对其产酶条件进行优化研究。
1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 菌株。
细菌：bl1001-1020；酵母：bl2001-2015；霉菌：bl3001-3025。
试验菌株均由郑州轻工业学校食品与生物工程学院酶分子工程研究室保藏。
1.1.2 培养基。
①种子培养基。
产脂肪酶真菌的筛选及产酶条件优化
产脂肪酶真菌的筛选及产酶条件优化李军红;姜绍通;童洋洋【摘要】[目的]从富含油脂的土壤中寻找高产脂肪酶的真菌,以期为扩大脂肪酶的菌源提供材料.[方法]从上海市、河北省唐山、江苏省兴化、安徽省合肥地区土样中,经富集培养、平板筛选得到22株脂肪酶产生菌株,通过复筛得到1株脂肪酶活力较高真菌.根据《常见与常用真菌》对菌株进行鉴定,并研究不同条件对菌株产酶的影响.[结果]从富含油脂土壤中分离得到1株产脂肪酶能力较高菌株,根据菌落群体及个体形态,查阅相关鉴定手册,初步确定该菌株为黑曲霉.菌株产酶条件研究表明:其最适产酶条件为温度30℃,初始pH 7,装液量20％,最适碳源与氮源分别为淀粉和蛋白胨.[结论]为脂肪酶产生菌以及脂肪酶的工业化生产与应用奠定了基础.%[Objective]The study aimed to seek for the fungi with high yield of lipase from the greasy soil, so as to provide the material for ex panding the fungi source of lipase. [ Method]22 strains of fungi producing lipase were isolated by enrichment culture and flat screening methods in soil samples collected from Shanghai City, Tangshan City of Hebei Province, Xinghua area of Jiangsu Province, Hefei area of Anhui Province. A stain with higher activity of producing lipase was isolated by re-screening methods. The strain was identified according to "The Common and Com mon-used Fungi" and the effects of different conditions on the strain producing lipase were studied. [Result] A stain with higher ability of produ cing lipase was isolated from the greasy soil. The strain was identified as Aspergillus niger according to groups characteristic and individuals forms of colonies and the relevant appraisal manual. The study on the conditions ofproducing enzyme for the strain showed that the optimal conditions of producing enzyme were as follows: the temperature for fermentation of 30 t, the initial pH of 7, the medium volume of 20% , and the optimum carbon and nitrogen sources were starches and peptones, resp. [Conclusion]The study laid a foundation for lipase producing bacteria and industri al production and application of lipase to some extent.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)026【总页数】3页(P15840-15842)【关键词】脂肪酶;筛选;产酶条件【作者】李军红;姜绍通;童洋洋【作者单位】合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009【正文语种】中文【中图分类】S132脂肪酶(Lipase，E.C.3.1.1.3，甘油三酯水解酶)，可在油水界面催化甘油三酯形成甘油二酯、甘油单酯或甘油及游离脂肪酸［1］。
脂肪酶抑制剂产生菌的筛选和鉴定
中 图分类 号 ： Ｔ Ｑ ９ ２ ０ ． １ 文 献标 志码 ： Ａ 文 章编 号 ： １ ６ ７ ３ —１ ６ ８ ９ ［ Ｉ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ —０ ２ ｌ ９ —０ ５
Ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎｉ ｎｇ ａ ｎｄ Ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｌｉ ｐａ ｓ ｅ Ｉ ｎ ｈｉ ｂｉ ｔ ０ｒ —Ｐｒ ０ ｄｕｃ ｉ ｎｇ Ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ
长表 现 的特 征 以 及 一 些 生理 生化 方 面 特 性 进 行 观 察 ，并 对 菌株 的 Ｄ Ｎ Ａ进行提取 并扩增 １ ６ Ｓ ｒ Ｄ Ｎ Ａ， 通过 对后 者序 列测 定 、 数 据 库 同源搜 索和 比对 ， 进 而构建 菌株 的 系统进 化树 。 通过 形 态学和
分子 生物 学手段 对产 脂肪酶 抑 制 剂菌株 Ｓ ｆ ｌ ６进行 初 步鉴 定 ， 结果 确定 其 为 Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ ｔ ｏ ｍ ｙ ｃ ｅ ｓ ｓ ｐ ． 。 关键 词 ： 脂 肪酶 抑制 剂 ； Ｐ Ｃ Ｒ； １ ６ Ｓ ｒ Ｄ Ｎ Ａ： 系统 发 育树
ＬＩ Ｕ Ｌａ ｎ ， ， Ｚ Ｈ Ｏ Ｕ Ｐｅ ｉ －ｈ ｕ ａ ２ ， ＺＥＮ Ｇ Ｗｅ ｉ ， ＣＨＥＮ Ｇｕ ｉ － ｇｕ ａ ｎ ｇ ２ ， ＬＩ Ａ ＮＧ Ｚｈ ｉ — ｑｕ ｎ ＇ 。 （ １ ．Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｘ ｉ Ｙｕ ｌ ｉ ｎ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｆ ｏ ｒ Ｆ ｏ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ Ｄｒ ｕ ｇ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ， Ｙｕ ｌ ｉ ｎ ５ ３ ７ ０ ０ ０， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ； ２ ．Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｌ ｉ ｆ ｅ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ
ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ ｏ ｆ ｃ ｏ ｌ ｏ ｎ ｙ， ａ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ｈ ｙ ｐｈ ａ ｅ， ｓ ｐ ｏ ｒ ｏ ｔ ｈ ｒ ｉ ｘ ａ ｎ ｄ ｓ ｐ ｏ ｒ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｇ ｒ ｏ ｗｔ ｈ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｎｃ ｅ
产脂肪酶真菌的分离鉴定、产酶条件优化及酶学性质研究的开题报告
产脂肪酶真菌的分离鉴定、产酶条件优化及酶学性质研究的开题报告一、研究背景随着人们生活水平的不断提高，高脂肪食品的消费量逐渐增加。
而高脂肪食品的长期摄入容易导致人体各种代谢疾病的发生，如肥胖、高血脂、心脑血管疾病等。
因此，研究开发高效、环保的脂肪降解酶已经成为了当前生物技术领域的热点。
真菌是脂肪酶的主要产生菌种之一。
目前已经分离出多种产脂肪酶的真菌，并在饲料、乳制品、面包等食品工业中得到广泛应用。
然而，目前已知的产脂肪酶真菌种类还很有限，而且其酶学性质和产酶条件也需要进一步的研究和优化。
因此，本课题将通过对自然环境中的微生物进行筛选和鉴定，分离出一株高效产脂肪酶的真菌，并对其产酶条件和酶学性质进行研究和分析，以期为生产上的应用提供科学依据和技术支持。
二、研究内容和方法1. 真菌的分离鉴定本研究将从自然环境中采集样本，通过板培法、毛细管扩散法等方法筛选出能够产生脂肪酶的菌种，并通过形态学、生理生化、分子生物学等方法进行鉴定和分类。
2. 产酶条件的优化通过单因素试验和正交试验等方法，对影响真菌产酶的因素进行优化，如温度、pH值、培养基成分、培养时间等。
3. 酶学性质的研究将分离出的真菌进行大量培养，提取纯化脂肪酶，并进行酶学性质的分析和研究，如酶的催化效率、热稳定性、pH稳定性、底物特异性等。
三、预期结果本研究预计可以成功分离出一株高效产脂肪酶的真菌，并通过优化培养条件、提高酶的活性和稳定性等手段，进一步提高其产酶能力和应用价值。
同时，对其酶学性质和催化机理的深入研究也将为其在工业生产中的应用提供科学依据和技术支持。
四、研究意义本研究将为开发高效、环保的脂肪降解酶提供新的思路和方法，并为其在食品、医药、生物燃料等领域的应用提供技术支持和料源基础。
同时，通过研究其催化机理和特异性等酶学性质，也将为更深入地理解生物催化反应的本质提供新的思路和方向。
生物柴油脂肪酶产生菌的筛选及培养条件研究
心， 取上清液 ， 硫酸铵沉淀法获得粗脂肪酶。脂肪酶活力测定参考橄榄油乳化法ｌ。一个单位脂肪酶的定 ６ 】
义是 ： 每分钟释放 ｌｒ ｌ ｔｎ 脂肪酸所需脂肪酶的数量。 ￣ｏ ４影响脂肪酶 活 力的 因素研 究。分别选取不 同的 ｐ ） Ｈ值 、 橄榄 油浓度、 氮源条件作 为研究 对象 ， 在 ３℃、８ｒ ｉ ０ １ ・ｎ ０ ｍ 的恒温摇床 中振荡培养 ３ 测脂肪酸量确定优化培养条件 。 ｄ ５ 固定化脂肪酶的催化转酯反应。以硅藻土为载体， ） 吸附法制备固定化酶。转酯反应体系 ：ｍ 正己 ６ｌ 烷 ，．２ ｍ ｌ ００ｍ ｏ三油酸甘油酯 ，． ｒ ｏ 甲醇 ， ． 固定化脂肪酶粗酶 。分三次添加 甲醇 ，７ １ ｒ ｉ密 ００ｅ ｌ ６ｔ ｏ ２０ ｇ ３ ℃、８ ／ ｎ ０ｍ
第 ２卷 ｏ
第１ 期
茂名 学院 学报
Ｊ ＵＲ ＡＬ Ｏ Ｏ Ｎ Ｆ ＭＡＯＭ Ｇ Ｕ ＮⅣ Ｅ Ｓ Ｒ ｎＹ
Ｖ １ ２ Ｎ ． ０ ．０ ｏ１
２ １ 年 ２月 ００
Ｆｂ２ｏ ｅ ．０ ９
生 物 柴 油脂 肪 酶 产 生茵 的筛 选及 培 养 条 件 研 究
韩寒冰， 李松佳 ， 沈伟煌， 彭翠苹， 吴小梅
生物柴油具有无毒、 能生物降解 、 不含芳香烃且含硫量很低 、 可以以任意比例与石油柴油混兑的特点。 开发生物柴油不仅有利于减小大量进 口对我国的能源安全造成 的威胁； 还对实现经济可持续发展 ， 推进能 源替代， 减轻环境压力等具有深远的经济与社会效益。酶法制备生物柴油具有化学催化法不可 比拟 的优 越性 ， 是工业化生产的发展方向…。生物柴油是由动植物油脂与醇经酯交换反应而得的脂肪酸单烷基酯， 最典型的生物柴油是脂肪酸甲酯。脂肪酶（ ｐｓ， ． ． ． ． ） “ ａ ＥＣ ３ １ １ ３ 是指分解或合成高级脂肪酸与丙三醇 ｅ 形成甘油三酸酯酯酶 ， 在催化合成生物柴油的研究 中已获得应用【３， ２ 】但生产中酶的成本过高 、 Ｉ 甲醇和甘 油对酶的毒害作用这两大问题还未能得到根本性的解决 ， 使得生物酶法一直不能在工业生产上得到推广 应用。因此 ， 通过筛选或是利用基因工程技术对现有的脂肪酶产生菌进行改造 ， 以获取催化活性更高、 对
四川腊肉中产脂肪酶霉菌筛选及产酶条件研究
利 用平 皿生化反应法对四川腊肉 中高产脂肪酶的霉菌进行筛选 ，对分离菌株进行分子生物学鉴定 ，研究其在不 同时间、温度及初始 ｐ Ｈ条件 下产酶情况。结果表 明 ：分 离获得一 株产脂肪酶能力较强 的霉菌 ，经鉴定为 团青
霉 （ Ｐ ｅ ｎ ｉ ｃ ｉ ｌ ｌ ｉ ｕ ｍ ｃ ｏ ｍｍ ｕ ｎ ｅ ） ，其最适产 酶条件为 ，当发 酵时间为 ４ ８ ｈ ，温度为 ３ ０ ￣ Ｃ，初始 ｐ Ｈ为 ８ ． ０时 ，其 脂肪
脂肪酶产生菌的筛选·产酶条件及酶特性研究
脂肪酶产生菌的筛选产酶条件及酶特性研究薛静;陶树兴;田泽英;苏蕊;丛寅【摘要】[ Objective ] To screen high lipase activity strains as strains producing lipase and donor of lipase gene. [ Method ]26 samples were collected,and the strains were isolated through adopting bromcresol purple preliminary screening plate and secon darily screening with shake flask loading fermentation medium. A higher lipase activity strain 09-7-1 was obtained and identified as Aspergillus niger. The factors of influencing lipase production and characterization of the lipase of strain 09-7-1 were researched. [ Result ] The soluble starch in 0. 5％ was the best carbon resource. The yeast extract in a ratio of 0.2％ was the best nitrogen resource. The optimum initial temperature was 32 ℃ ,and the optimum initial pH value was 5.2. The lipase activity of strain 09-7-1 achieved 24. 112 U/ml after optimization from 13. 164 U/ml and was 1. 83 times as high as the initial lipase activity. The best reaction temperature of lipase was30 ℃. The best reaction pH was 7.0,and the activity were no much change in 60 ℃ for90 min and stable from pH 5.5 to pH 10.0. [Conclusion] The study can lay the foundation for study on producing lipaso and lipase gene.%[目的]筛选脂肪酶高活性菌株作为脂肪酶生产菌株和脂肪酶基因的供体菌.[方法]从油脂厂等地采集26份含菌样品,采用溴甲酚紫平板对样品进行初筛,以产脂肪酶发酵培养基摇瓶复筛,获得1株产脂肪酶活性较高的菌株09-7-1,经鉴定该菌株为黑曲霉(Aspergillus niger).采用正交试验对影响该菌株产酶的因素进行了研究,并探讨了该菌株所产脂肪酶的性质.[结果]该菌株最佳产酶条件:碳源为0.5%的可溶性淀粉,氮源为0.2%的酵母膏,培养温度为32℃,发酵液pH为5.2,该菌株最初发酵液中酶活力为13.164 U/ml,优化后酶活力达24.112 U/ml,是最初酶活力的1.83倍.该菌株所产脂肪酶最适作用温度为30℃,最适作用pH为7.0;酶液在60℃保温90 min后,活性损失较少,pH为5.5～10.0内稳定.[结论]该研究可为脂肪酶生产和基因研究奠定基础.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)015【总页数】5页(P8826-8830)【关键词】脂肪酶;筛选;黑曲霉;产酶条件;酶特性【作者】薛静;陶树兴;田泽英;苏蕊;丛寅【作者单位】陕西师范大学生命科学学院,陕西西安,710062;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安,710062;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安,710062;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安,710062;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安,710062【正文语种】中文【中图分类】Q939.97脂肪酶(Lipase，EC3.1.1.3，甘油酯水解酶)为作用于酯键的酶，专门作用于异向系统，可催化天然油脂水解，生成脂肪酸、甘油和甘油单酯或二酯，且优先水解长链酯类产生长链脂肪酸［1］，可以完成水解、酯化、转酯、酯交换及合成等反应，被广泛应用于油脂水解［2］、食品加工、食品品质改良、疾病诊断、催化药物合成［3-4］、皮革生产［5］、可生物降解的无污染洗涤剂的研发［6］和生物柴油的生产［7］等方面。
脂肪酶高产菌株筛选材料方法
2 脂肪酶高产菌株筛选2.1 前言常见的筛选脂肪酶高产菌的方法是含甘油三酯琼脂平板法，我们以橄榄油为底物，溴甲酚紫为指示剂，通过平板法筛选脂肪酶高产菌株。
2.2 材料和方法2.2.1 土样从襄樊、武汉、十堰等地的油脂厂、油坊、奶牛场、食堂采集土样208份。
2.2.2 设备与试剂本试验所用到的药品试剂除橄榄油外均为分析纯；橄榄油为国药集团化学试剂有限公司生产，化学纯。
试验仪器和设备如下：OHAUS分析天平AR1530 奥豪斯国际贸易有限公司乳化机CZD3 上海氟鲁克流体机械制造有限公司磁力搅拌器79-2 金坛市新航仪器厂灭菌锅YX-400B 上海三申医疗器械有限公司超净工作台SW-CT-2FD 苏州净化设备有限公司生化培养箱SPX-150B-Z上海博迅实业有限公司医疗设备厂2.2.3 溶液配制2％（w/v）的聚乙烯醇水溶液：称取聚乙烯醇固体20g，倾入1000mL蒸馏水中，然后边加热边搅拌直到聚乙烯醇全部溶解。
静置冷却至室温备用。
若有少量杂质不溶解，可通过滤纸过滤去除杂质。
橄榄油乳化液：分别量取橄榄油25mL和2％聚乙烯醇水溶液75mL，混合，置4℃平衡1h，然后10000r/min乳化三次，每次一分钟。
4℃保存备用。
若高温灭菌后产生分层，可充分振荡至分层现象消失，而无需重新乳化。
2.2.4 筛选培养基平板粗筛培养基（％）：酵母膏0.1，蛋白胨0.2，硫酸铵0.2，橄榄油乳化液1.2，磷酸氢二钾0.1，氯化钾0.05，硫酸镁0.05，硫酸亚铁0.001，琼脂1.5。
平板复筛培养基组成（％）：蛋白胨1.0，蔗糖0.5，橄榄油乳化液1.2，硫酸铵0.1, 磷酸氢二钾0.1,氯化钾0.1,硫酸亚铁0.001，琼脂1.5。
摇瓶复筛液体培养基（％）:蛋白胨2.0，蔗糖1.0，橄榄油乳化液1.0，硫酸铵0.5，硫酸镁0.05，磷酸氢二钾0.2。
筛选培养基于121℃灭菌20min，平板粗筛培养基和平板复筛培养基从灭菌锅取出后，每升培养基冷却到60℃加入无菌的10mg/mL溴钾酚紫10mL，混匀，趁热倒平板。
产脂肪酶菌株的筛选及酶学特性研究
PH 酶活 L ipase activ ity / U ·mL - 1
4. 0 不生长
5. 0 10. 03
6. 0 11. 10
7. 0 9. 06
8. 0 7. 08
( Co lleg e of L ife Science and T echnolog y , G uangx i U niv ersity, N anning 530005, China)
Abstract: 58 strains producing lipase w er e isolat ed f rom rich o il soil . T he lipase fro m GXL 02 has t he highest aro lysis of oil. St rain GXL 02 w as ident if ied as A cinetobacter sp. according t o it s character and 16S rDN A sequence. L ipase pr oduct ion condit ions o f A cinet obact er sp. GXL 02 w ere studied in detail. T he result s show ed that lipase pr oduct ion of GXL 02 depended on fat and M g2+ . Glucose and so me ot her saccharide car bon sour ces rest rained lipase productio n. T he o pt imal pH and t em perat ure of t he lipase for hy drol ysis of o live were pH 9. 0 and 50°C respect iv ely . Act ivit y of lipase w as no much chang e in 60°C fo r 90 m in, and st able f rom pH 3. 0 t o pH 10. 0.
产脂肪酶菌株的筛选
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土壤采集：
在土门菜市场油污重地进行土壤采样。
材料：
烧杯、玻璃棒、锥形瓶、试管、平板、接种环、制备乳化 状态的针筒等。
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富集培养基配置：
硫酸铵0.1% 磷酸氢二钾0.1% 七水硫酸镁 0.05% 七水硫酸亚铁0.001% 酵母膏0.5% 橄榄 油乳化液12% 氯化钠l% PH自然，115℃灭菌 30min
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脂肪酶的活力的测定：
测定方法很多: 酸碱滴定法，电位滴定法，浊度测定法， 甘油测定法，色谱分析法等。 常用的检测手段为酸碱滴定，在酸碱滴定的方法中，有直 接进行滴定的，也有先用疏水有机溶剂抽提出脂肪酸，再 进行滴定的。
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活性测定选择时注意哦！！
由于反应体系中存在缓冲液的缓冲作用，因此直接滴定法 的合理性常令人怀疑，更容易给科研人员造成困惑，而且 直接滴定法的稳定性一般都不十分理想。 根据脂肪酸和铜离子形成铜皂的原理利用分光光度法 (715nm附近)进行脂肪酶活力的检测，但是由于实验中使 用大量苯进行铜皂的萃取，容易造成污染和对人体造成伤 害，因此使用该方法的人少。 三丁酸甘油醋和三油酸甘油酷作为底物的时候，脂肪酶活 力检测的结果比较稳定，但是由于三丁酸甘油醋和三油酸 甘油酷价格比较昂贵，因此使用的人很少。
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辛酸对硝基苯酚酷自水解的速度比较快，因此检测脂肪酶 活力的时候，误差比较大;而乙酸对硝基苯酚醋水解的速 度比较缓慢，因此实验误差相对较小，但是辛酸对硝基苯 酚醋和乙酸对硝基苯酚醋都不是脂肪酶的天然底物，一般 认为不适合作为脂肪酶活力检测的底物，尤其用乙酸对硝 基 苯酚酷作为底物，其检测的活力作为醋酶活力似乎更 合理一些。 本实验筛选得到的野生菌株产胞外脂肪酶活性较小，采用 将传统的直接酸碱滴定法加以改进的方法来检测脂肪酶活 性。
产脂肪酶菌株的筛选
产脂肪酶菌株的筛选实验目的:以橄榄油作为唯一碳源筛选出能产生出脂肪酶的菌株。
橄榄油乳化法是测定脂肪酶活性的常用方法，其测定的原理是天然油脂被水解产生的游离脂肪酸可以被氢氧化钠中和。
橄榄油乳化：聚丙烯醇3:1橄榄油乳化，水包油型，然后装在合适的瓶子里。
实验原理：脂肪酶是一类特殊酯键水解酶，产脂肪酶的微生物广泛的分布，主要以各类真菌为主；在富含油脂的地方进行采样，利用稀释平板分离法筛选产脂肪酶菌株，再以乳化橄榄油为底物。
脂肪酶作用于橄榄油乳化液，催化酯键水解，生成脂肪酸，用标准氢氧化钠滴定脂肪酸，利用酚酞滴定终点，记录消耗的氢氧化钠体积，根据氢氧化钠的用量来计算脂肪酶的活力。
材料：烧杯、玻璃棒、锥形瓶、试管、平板、接种环、制备乳化状态的针筒等。
土壤采集：在土门菜市场油污重地进行土壤采样。
富集培养基配置：硫酸铵0.1% 磷酸氢二钾0.1% 七水硫酸镁 0.05% 七水硫酸亚铁0.001% 酵母膏0.5% 橄榄油乳化液12% 氯化钠l% PH自然，115℃灭菌30min选择培养基平板：乳化橄榄油 12% 蛋白胨 1% 硫酸铵0.2% 磷酸氢二钾0.1% 磷酸二氢钾0.3% 七水硫酸亚铁0.1% 维多利亚蓝0.004% 琼脂1.5% PH=8.0灭菌115℃30min 复筛培养基平板：乳化橄榄油12% 蛋白胨1% 硫酸铵0.2% 磷酸氢二钾0.1% 磷酸二氢钾0.3% 七水硫酸亚铁0.1% 琼脂1.5% PH=8 115℃灭菌30min实验方法：1、取土样2g悬于20ml无菌水中，震荡，在100ml培养基中加入5ml的悬液，30℃ 180r/m 培养3d。
2、取富集液稀释分别涂布于选择培养基平板上，经培养观察菌落周围的蓝色圈，然后挑取该菌落于富集培养基斜面上。
30℃培养箱3d。
3、将初筛得到的菌株在复筛培养基平板划线，然后放于30℃培养箱中3d。
4、挑取单菌落，镜检并纯化，得到纯菌株保存。
5、活力测定：U=(V-V.)/t×50×n。
产脂肪酶菌株的筛选及其固定化的研究
产脂肪酶菌株的筛选及其固定化的研究随着人们生活方式的改变和食物极限的提高，肥胖和心脑血管疾病等疾病也日益增多。
白领和学生等群体中，人们的饮食习惯和健康状况引起了更多的关注。
研究表明，脂肪酶能够降低脂肪的含量，对于健康人群以及需要减肥的人来说，这种酶被应用广泛。
因此，本文主要讨论如何通过菌株的筛选和固定化研究，实现产脂肪酶的目标。
1.产脂肪酶菌株的筛选(1)菌株分类首先我们需要得到具有脂肪酶产生能力的微生物株。
目前，研究人员从不同来源的环境中筛选得到脂肪酶分解菌株。
一般来说，脂肪酶菌株按照细菌、真菌、酵母菌的类型划分。
以细菌领域为例，产脂肪酶的细菌具有广泛的分布。
研究表明，主要包括属于芽孢杆菌属（Bacillus）、乳酸菌属（Lactobacillus）、放线菌属（Streptomyces）、泥炭菌属（Pseudomonas）等。
其中，芽孢杆菌属的应用比较广泛。
其次，酵母菌的产酶能力比较强，因此也是研究的热点对象。
真菌也是研究的对象之一。
上述微生物大多数有代表性的株系都已经分离鉴定过程中分离纯化和筛选中，通过选择合适的产酶基质，调节适宜的菌株培养环境，确定了不同的产酶体系。
基于活性、脂肪酶酶特异性和影响、菌株生产含量等方面着手，最终确定了适宜的菌株，如Bacillus subtilis CICC 40224，Bacillus pumilus CICC 1316。
(2)筛选菌株的影响因素1.酸碱度：脂肪酶的酸碱度是影响酶活性的一种因素，特别是在温度较高的条件下，酸碱度会对酶的活性和稳定性产生较大的影响。
2.温度：温度也是影响脂肪酶活性的因素之一。
根据研究，脂肪酶在40-50℃时的活性最为理想。
3.基质：脂肪酶对基质的种类和特性有一定的要求。
研究表明，基质的溶解度、分子大小、分子构型等因素会影响脂肪酶的分解能力。
4.浓度：产酶菌株的营养状态也会影响到它的产酶性能。
不同浓度的培养基对产酶菌株的贡献不同，太浓或太稀的培养基均会对脂肪酶的产生产生不利影响。
脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件优化
作者简 介： 孟玲 （９ ９一） 女 ， １６ ， 吉林吉林人 ， 副教授 ， 博士 ， 主要 从事 生物技术方面 的研究
１ ６
沈
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２１ ０ ０正
１ １４ 培养基 ．．
线 分纯 ． 离 出单 菌 落后 斜 面保 存 ， 分 将分 纯 后 的
展 方 向． 用生 物酶 法合 成 生物 柴油 并商业 化 的 但
主要瓶 颈是 酶 的成 本高 ， 使用 寿命 短 ． 因此 ， 得 获 大量高 活力 、 受性 强 的脂肪 酶是 酶 法制备 生 物 耐
柴油 的关键 所在 ． 目前 国 内外 尚没有 很好 的技 术 解 决 这 一难 题 ， 因此 ， 肪 酶 具 有 重要 的研 究 和 脂
脂 肪 酶 已被制成 商 品化 酶制 剂
ｊ ．
随着 全球 经济 的快 速 发展 ， 全世 界范 围内 的
能源 消 耗 量 日益 增 加 ， 因此 ， 找 到 一种 可 替 代 需 能源来 解决 传统 能 源不 足 的问题 ． 生物 柴油 是 而
橄榄 油 ： 国药 集 团 化 学试 剂 有 限公 司 ， 学 化 纯； 聚乙烯 醇 ： 津 市 博 迪 化 工 有 限 公 司 ； ｈ — 天 Ｒ ｏ ｄ ｍｉｅ 天 津市 化学 试剂 一厂 ， 析纯 ． ａ ｎ Ｂ： 分
脂 肪 酶产 生 菌 的筛 选 及产 酶条 件优 化
孟 玲， 王 慧
（ 阳 化 工 大 学 环 境 与 生 物 工 程 学 院 ， 宁 沈 阳 １０ ４ ） 沈 辽 １ １２
摘
要 ： 从不 同土样 中分 离获得 ３ ６株脂肪酶产 生菌， 中 ｚ ５菌株产酶 活性 最高， 其 ｊ 一 通过对 ｚ ５进 ｊ ・
脂肪酶高产菌株的筛选及产酶条件优化
Ｖｌ ０ｌ ， ３ ３ Ｎ ｏ． ９ Ｓｅ ｐ． ２０１ ３
脂肪酶高产 菌株 的筛选及产酶条件优化
夏 宇 ， 周文化 ， 邓学 良 ， 伍金娥
（ １ ． 中南林业 ０ ０ ４ ；
２ ． 稻谷及副产品深加工国家工程 实验 室，湖南 长沙 ４ １ ０ ０ ０ ４） 摘 要 ：为获得高产脂肪酶菌株 ，对包括 白地霉在 内的数 十种 微生物进行 了筛选 。在采用油脂培养基进 行仞 步
Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｈ ｉ ｇ ｈ ｌ ｉ ｐａ ｓ ｅ — ｐｒ ｏ ｄｕ ｃ ｉ ｎ ｇ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎｓ ａ ｎｄ ｏ ｐｔ ｉ ｍｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ
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（ １ ． Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｌ ｏ ｆ Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｉ ｒ ｎ ｇ ， Ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｌ Ｓ ｏ ｕ ｔ ｈ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｆ ｏ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｙ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｓ ｈ ａ ４ １ ０ ０ ０ ４ ， Ｈ ｕ ｎ ａ ｎ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ
低温脂肪酶产生菌的筛选、鉴定及其部分酶学性质
0 引言
脂肪酶（Li pase ，EC3 .1 .1 .3 ）是一类在油- 水界 面上催化“长链”三酰甘油酯（脂肪酸长链在10 个碳 原 子 以 上 ）水 解 与 合 成 的 羧 酸 酯 酶（carboxylesterases ），广泛地存在于微生物、动物以及植 物体内。细菌是脂肪酶的重要来源，目前已发现多 种具有不 同 的 酶 学 性 质 和 底 物 特 异 性 的 细 菌 脂 肪 酶，其在水解、酯化、转酯及酯类手性合成等反应中 表现出良好的应用前景［1 ，2 ］。
2 结果
2.1菌种筛选 从76 株来自南极乔治王岛冻土的细菌中筛选
到 13 株 产 低 温 脂 肪 酶 的 菌 株，其 中 以 菌 株 BTs10022 的脂肪酶作用温度最低（25 C 左右）。 2.2 菌种鉴定 2. 2. 1 形态学、生理生化特征
菌株 BTs10022 在 LB 培养基上15 C 培养96h
1.5 脂肪酶活性测定方法 脂肪酶活性测定参照文献［10 ］方法进行。
1.6 产酶菌株鉴定 1 .6 .1 形态学、生理生化特征
产酶菌株的形态学观察、生理生化实验参照文
献［11 、12 ］方法进行。
1 .6 .2 16S r DNA 序列测定和分析 按 KL Wahara 等［13 ］方法进行菌株染色体 DNA
— 90 —
的菌落白色、圆形、隆起、不透明、表面光滑、湿润、边
缘整齐，直径约3 .5 mm。菌体革兰氏阴性、短杆状、 能运动、极生单鞭毛。常规生理生化测试表明，菌株
BTs10022 兼性厌氧，生长不需要 NaCl ，37 C 以上不 生长；氧化酶反应阳性、接触酶反应阳性、氧化葡糖
产酸、不能发酵乙醇产酸。根据这些特征，参照《常 见细菌系统鉴定手册》［12 ］，菌株BTs10022 初步定为 假单胞菌属（Pseudo monas ）的细菌。
脂肪酶生产菌的筛选及酶活性测定
脂肪酶生产菌的筛选及酶活性测定脂肪酶是类脂化合物分解合成和酯交换的催化剂在有机相中脂肪酶可以完成酯化交换及转酯等反应具有区域选择性立体选择性较高的稳定性尤其是它的立体选择催化特性可以完成用化学法难以进行的消旋化合物的拆分不对称合成等使这一古老的酶在有机合成精细化工药物中间体合成以及生物能源等诸多领域有着崭新而广阔的发展前景。
脂肪酶在微生物界的分布很广几乎所有的微生物都能产生脂肪酶芽孢杆菌脂肪酶是细菌中产生的脂肪酶的之一具有能耐受较高的温度较宽的pH 作用范围和对有机溶剂良好的耐受性等特点非常适用于非水相的催化鉴于目前对芽孢杆菌脂肪酶研究较少以及潜在的应用价值和巨大的需求潜力寻找新酶种和脂肪酶的扩大应用研究具有十分现实的意义从油污土壤中分离到一株产脂肪酶菌株经初步鉴定属于芽孢杆菌为后续产脂肪酶菌株的菌种改良以及脂肪酶基因工程菌的构建等工作奠定了基础1 材料与方法1.1材料1.1.1 土样采集土壤采集于承德石油高等专科学校石化楼附近的土样及学校汇龙餐厅；共9 份样品1.1.2 主要试剂橄榄油，聚乙烯醇，Rhodamine B （玫瑰红B,或碱性玫瑰精，俗称花粉红），酵母提取物YE，维多利亚兰，1mol/lNaoH 6mol/L Na2CO3 1mol/L HCl 等分析试剂1.1.3 培养基⑴富集培养基组成（%）NH4 2SO4 0.1，NH4NO3 0.1 ，NaCl 0.1 ，MgSO4 7H2O 0.05 ，K2HPO40.1，用6mol/L Na2CO3 调pH 为7.0 再加入1%橄榄油，蒸馏水100ml ，121摄氏度蒸汽灭菌20min ⑵平板初筛培养基组成（%）NH4 2SO4 0.1，NH4NO3 0.1，NaCl 0.1，MgSO4 7H2O 0.05 ，K2HPO4 0.1，琼脂 1.2~1.8 ，用6mol/L Na2CO3 调pH 为7.0 灭菌后再加入橄榄油聚乙烯醇乳化液10ml/100ml ⑶Rhodamine B 显色培养基在配制好的初筛培养基中加入10ml 0.1mg/ml Rhodamine B 作为指示剂⑷维多利亚兰显色培养基在配制好的初筛培养基中每100ml 中加入0.1g 维多利亚兰充分振荡使其溶解⑸复筛培养基组成（%）蛋白胨2.35，蔗糖1，K2HPO4 0.1 ，MgSO4 7H2O 0.05 ，用6mol/L Na2CO3 调pH 为6.5 115摄氏度蒸汽灭菌30min；⑹橄榄油聚乙烯醇乳化液，取1.8g聚乙烯醇溶于90ml蒸馏水中，用1mol/lNaoH调至Ph9.0再加入30ml橄榄油离心10000r/min 5分钟；⑺LB培养基胰蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，NaCl1g用5mol/lNaoH调Ph7.0高压蒸汽灭菌21min1.2方法1.2.1 筛选方法⑴富集培养采集的土样称5g 溶于10ml 无菌水中充分摇匀静置取1ml 上层液体加入到装有20ml 富集培养基的三角瓶中在摇床上30摄氏度180r/min，振荡培养2d，富集3 次；⑵初筛培养取1ml 富集菌液加入到9ml 无菌水中进行倍比稀释稀释到10 7取10 210 610 73 个梯度菌液各200 l 分别涂布在Rhodamine B 显色培养基和维多利亚兰显色培养基中30摄氏度培养2~3d；⑶复筛培养将初筛培养后的菌株在紫外灯波长为365nm 下观察将变色圈较大的菌落划线分离纯化随后接种到复筛培养基中在摇床上30 摄氏度175r/min 振荡培养2d1. 2. 2 温度对脂肪酶活性的影响摇瓶发酵液离心取上清，分成5 份，加橄榄油乳化液分别于20℃、30℃、40℃、50℃、60℃反应，并测定相应的酶活力。
脂肪酶产酶菌的筛选及酶活性的测定
脂肪酶产酶菌的筛选及酶活性的测定
谢妤
【期刊名称】《宜春学院学报》
【年(卷),期】2011(033)004
【摘要】目的:从土壤中分离出脂肪酶产酶菌并测定最佳产酶条件及所产脂肪酶的活性.方法:经富集、初筛及复筛将脂肪酶产酶菌筛选出来,然后用滴定法测定酶活性.结果:成功从土壤中分离出了一株脂肪酶产酶菌,并通过滴定法测出了所产酶在不同温度和pH条件下的活性.结论:该菌所产的脂肪酶在30℃、pH 6.8左右的环境中,酶的活性最强.
【总页数】2页(P128-129)
【作者】谢妤
【作者单位】宜春学院化学与生物工程学院,江西宜春,336000
【正文语种】中文
【中图分类】Q939.9
【相关文献】
1.产脂肪酶真菌的筛选及产酶条件优化 [J], 李军红;姜绍通;童洋洋
2.新疆哈萨克族奶酪产脂肪酶酵母菌的筛选及产酶条件优化 [J], 刘飞;郑晓吉;李宝坤;史学伟;董娟;李开雄;诸葛斌
3.产脂肪酶嗜酸性真菌的筛选、鉴定与产酶条件优化 [J], 赵军;赵淑琴;杨孝朴;刘晓丽
4.脂肪酶活力测定方法及其在筛选产脂肪酶微生物中的应用 [J], 王欢;何腊平;周换
景;张义明;李翠芹;陶菡
5.脂肪酶产生菌的筛选及一株黑曲霉产脂肪酶最适条件研究 [J], 任丽虹;周应揆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脂肪酶产生菌的筛选
脂肪酶产生菌的筛选作者：刘俊杰刘茜陈晓宁等来源：《中国果菜》 2015年第4期摘要：脂肪酶主要应用于食品工业，本研究从10份土壤样品中通过富集培养分离出6株产脂肪酶发酵，平板划线；然后对脂肪酶的性质进行研究，以葡萄糖1.5%、硫酸铵0.7%、磷酸氢二钾0.1%、牛肉膏1.25%、硫酸镁0.211%、橄榄油乳化液1.41%为发酵培养基，在250r/min、30℃下培养72h。
此时可获得高产的脂肪酶菌株。
酶活力的最适条件：温度50℃，pH 8.5，水浴30min。
此时测定的酶活力最大。
最后，对分离菌株进行常规方法的细菌鉴定。
关键词：微生物；脂肪酶；筛选中图分类号：X172 文献标志码：A 文章编号：1008-1038(201５)0４-0033-06Screening of Lipase Producing StrainLIU Jun-jie LIU Qian CHEN Xiao-ning JIANG Jun-hui(Shandong Lvye Pharmaceutical Co., Ltd., Yantai 264003, China)Abstract: The main research aspects and results are as following: First, 6 strains producing lipase were isolated from 10 soil samples by enrichment culture, plate streaking and fermentation. Second, the properties of lipase were studied, after fermentation under the medium including 1.5% glucose, 0.7% (NH4)2SO4, 0.1%K2HPO4, 1.25% beef cream, 0.211% MgSO4·7H2O, 1.41% olive oil and the conditions250r/min, 30℃ and 72h. The optimum reaction temperature, pH, reaction time were 50℃, 8.5 and 30min respectively. Finally, the isolated stra in was conserved and identified by using conventional methods for bacteria identification.Key words: Microorganism; lipase; screening脂肪酶是一类非常重要的水解酶，是目前应用最为广泛的工业用酶之一，脂肪酶目前主要应用于食品工业。
土壤中脂肪酶产生菌的筛选_鉴定及脂肪酶基因的克隆
140
生物技术通报 B io techno logy B u lle tin
2009年第 8期
榄油 ,蒸馏水 100 m l。121℃蒸汽灭菌 20 m in。 平板初筛培养基 : (NH4 ) 2 SO4 0. 2 g, NaC l 0. 05
g,M gSO4 ·7H2O 0. 05 g, K2 HPO4 0. 1 g,琼脂 1. 2 ～ 1. 8 g,用 6 mol/L Na2 CO3 调 pH 为 7. 0,灭菌后再加 入橄榄油聚乙烯醇乳化液 。
( College of L ife S cience of S h ihezi U niversity, Sh ihezi 832003)
Ab s trac t: U sing olive oil as sole carbon source in enrichment culture, and Rhodam ine B as indicator to screening, one lipase2 p roducing strain B2 w ith higher lipase activity were screened. B2 strain was identified as Klebsiella sp. according to morphological ob2 servation, determ ination of physiological and biochem ical. The part 16S rDNA was amp lified by PCR and sequenced. B y designing specific p rimers, two lipase genes K1 and K2 in B2 strain was amp lified by PCR and sequenced. The lipase can catalyze cotton oil and methanol into biodiesel, when tert2butyl alcohol as solvent and acetone and (NH) 2 SO4 sedimentation method involved in.
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脂肪酶产酶菌的筛选及酶活性的测定
作者：谢妤， XIE Yu
作者单位：宜春学院化学与生物工程学院,江西宜春,336000
刊名：
宜春学院学报
英文刊名：JOURNAL OF YICHUN UNIVERSITY
年，卷(期)：2011,33(4)
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2.卢福山.李惠玲.芦宝林.LU Fu-shan.LI Hui-ling.LU Bao-ling青海绵羊血清铜蓝蛋白酶活性测定[期刊论文]-畜禽业2005(9)
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10.张艳红.王小芬.王俊华.杨洁微生物脂肪酶的纯化方法[会议论文]-2005
本文链接：/Periodical_ycxyxb201104061.aspx。