storm显微镜原理
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storm显微镜原理
Storm显微镜是一种高分辨率成像技术,它基于荧光单分子图像
技术和TIRFM(全内反射荧光显微镜)技术。
Storm显微镜原理主要包
括以下几个步骤:
1.样品制备:将待观察的样品标记上荧光染料,通常使用的是有
机荧光染料或荧光蛋白。
荧光染料或荧光蛋白应该和包含它们的蛋白
或细胞贴附在基质表面的液体溶液浓度低于饱和浓度(占据至少50%的荧光单分子需要被激活和荧光)。
2.激活:将样品放在显微镜下,使用激光器让少数荧光染料或荧
光蛋白处于激发态,激发态的荧光分子发出荧光,达到表亮状态。
会
分析适当的荧光染料或荧光蛋白激发光波长。
例如,for Alexa Fluor 647, the absorbance maximum is 650 nm, so exciting at 647 nm
is optimal. 对于Alexa Fluor 647,吸收最大值是650nm,因此在
647nm处激发是最佳选择。
3.收集荧光图像:收集这些表亮状态的荧光分子发出的单个光子
的位置,之后对大量的单个荧光分子位置进行组合,就得到了样品的
高分辨率荧光图像。
为了获得高分辨率的图像,重复这个过程很多次,然后将所有单个荧光分子位置的信息聚合起来。
通过这些步骤,可以在细胞和分子水平上研究和观察细胞和分子
的生物活动和组织结构。