微生物检验真菌PPT课件

(2)、分离培养与鉴定：将标本接种于沙氏培养基上25℃培养，2-3d开始 生长，初为白色湿润的酵母型菌落，以后变为淡咖啡色至深褐色。37℃ 培养2-3d，可形成乳白色或淡褐色酵母型菌落。
（3）、对碘化钾、伊曲康唑、特比萘芬 等药物敏感。
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脚气
• 脚气是一种常见的真菌感染性皮肤病。 • 多见于趾间,足底及足缘,有深在性水疱,糜烂及鳞屑,伴有瘙痒等症状.多见于成人,
• 毛癣菌属（Trichophyton）属半知菌亚门－丝孢 菌目－丛梗孢菌科，有20余种，其中14种能引起 人和动物的感染。
• 临床上常见的有
红色毛癣菌(trichophyton rubrum)
须癣毛癣菌(,又称石膏样毛癣菌)
许兰毛癣菌(,又称黄癣菌)
紫色毛癣菌（）
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毛癣菌：菌落灰白、红、橙或棕色, 表面呈绒毛状、粉粒状或蜡样。 大分生孢子细长棒状薄壁。菌丝有 螺旋状、球拍状、鹿角状和结节状
作用 真菌繁殖结构
细菌休眠结构，
抵御不良环境
低抗力 不强，加热60~70℃ 强 ， 有 的 可 耐
短时间即可死亡 100℃数小时
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Categories of spore
sexual spore: 分生孢子
asexual spore 叶状孢子
孢子囊孢子
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大分生孢子
小分生孢子 芽生孢子
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（二）、真菌抗原检测
• 白假丝酵母菌甘露聚糖抗原、隐球菌多糖荚膜抗原、组织胞浆菌循环多糖抗原 • 常用的方法有胶乳凝集试验、ELISA、半定量放射免疫法
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（三）、真菌的分离培养
真菌培养是目前准确鉴定真菌的可靠方法
真菌的培养特点：三低两高
平皿培养 大试管培养
玻片培养
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实验室检验
n 镜检真菌形态 n 真菌抗原检测 n 真菌分离培养与鉴定 n 真菌核酸检测 n 真菌毒素检测
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• 癣病标本多用KOH湿片检查法 第12页/共118页
意义
直接镜检阳性表示：
①有诊断意义。 ②看到的就是真菌的形态，可确定某些致病性真菌 的属或种。 ③判断某些真菌种的致病性等,如皮肤癣菌、曲霉等。
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思考题：
1.简述真菌的致病性特点。 2.真菌标本采集是有哪些注意事项？ 3.形态学检查和培养在真菌检查中的意义。
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目的要求
（一）掌握毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子丝 菌生物学特性、微生物学检验方法及鉴定。 （二）熟悉浅部真菌感染的种类
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表面感染真菌
原核细胞型微生物与真核细胞型微生物比较
原核细胞型微生物
细胞核结构 核膜 核仁 分裂方式 细胞质结构 质膜 内膜 核糖体 呼吸系统
无 无 主要以二分裂
常缺乏固醇 较简单，有中介体
70S 质膜或中介体
真核细胞型微生物
有 有 有丝分裂，减数分裂
常有固醇 复杂，有内质网和高尔基体
80S 线粒体
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• 假丝酵母菌（Candida），俗称念珠菌，生物学分类为半知菌亚门、半知菌纲、 隐球菌目、假丝酵母菌属。
• 本属菌有81个种，其中有11种对人有致病性，其中白假丝酵母菌最为常见。
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(一)白假丝酵母菌
条件致病： 皮肤粘膜感染鹅口疮，阴道炎 内脏感染：肺炎、关节炎、膀胱炎，肾盂肾炎 中枢神经感染：脑膜（脑）炎、脑脓肿
厚膜孢子 关节孢子
芽生孢子
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厚膜孢子
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关节孢子
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孢子囊孢子
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标本
（1）皮肤的角质性物质 （2）各种分泌物和排泄物
注意 （3）血液和（体液1）采集的标本要适宜
（4）脓汁及（渗出2物）在用药前采集标本 （3）采集的标本量要足 （4）严格无菌操作 （5）采集的标本立即送检
2.同化碳源试验
3.同化氮源试验
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核酸检测 毒素的检测 动物试验
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抗真菌药物分类--化学结构分类
1.多烯类抗生素，如两性霉素B、制霉菌素、曲古霉素等。 2.吡咯类，包括酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、伏立康唑、克霉唑、益康唑等。 3.其他类如氟胞嘧啶。
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药物敏感试验
对灰黄霉素、伊曲康唑等药物敏感。 第34页/共118页
表皮癣菌属
• 表皮癣菌属（Epidermophyton）目 前只有一个种，即絮状表皮癣菌（）, 能引起人类感染。 • 絮状表皮癣菌是一种常见的皮肤癣菌， 可引起皮肤感染如股癣、足癣、体癣、 手癣和甲癣。
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絮状表皮癣菌生物学性状
• 皮屑和甲屑经+10%KOH液消化 裂的有隔菌丝，少见孢子
镜检可见分枝断
• 培养后，菌落初为白色鹅毛状，以后转变为黄色 粉末状。镜下可见球拍状菌丝、卵圆形或巨大棒 状薄壁大分生孢子，无小分生孢子，在陈旧培养 物中可见厚膜孢子。
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表皮癣菌：菌落初为 白色鹅毛状,以后变为 黄绿色粉末状。粗棒 状薄壁大分生孢子。 菌丝球拍状
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微生物检验
1．标本采集采集新发生的皮肤损害边缘皮屑；指 甲近尖端下面甲屑；拔取无光泽病发。
2．直接显微镜检查 皮屑10%KOH液；指甲25%KOH/25%NaOH处理 镜检可见透明、有隔，常有分支的菌丝及成链的关节孢子。
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皮肤癣菌感染的毛发
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夏秋重,冬春轻,足多汗及常穿胶鞋者易患本病 • 主要致病菌为红色毛癣菌、石膏样毛癣菌和絮状表皮癣菌。
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• 医学上通常将脚气分三型：糜烂型、水疱型、 角化型
• 本病是由皮肤癣菌所引起的。足部多汗潮湿或 鞋袜不通气等都可诱发本病。皮肤癣菌常通过 污染的澡堂、游泳池边的地板、浴巾、公用拖 鞋、洗脚盆而传染。
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菌落的性状是鉴别真菌的重要特征
①菌落性质：酵母菌还是霉菌 ②菌落大小：病原性真菌菌落小，而条件致 病性真菌菌落大
③菌落颜色 病原性真菌颜色淡， 污染真菌 颜色深； ④致病性真菌菌落下沉，有时使培养基开 裂；污染性真菌菌落不下沉,很少引起开裂。
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真菌鉴定
菌种鉴定是一个复杂过程，仅观察菌落形态是远远 不够的，还需作生化反应，分子生物学鉴定，必要 时将菌种送有关单位鉴定。 1.糖(醇)类发酵试验
色、粉末或绒毛状菌落。镜下可见梳状、球
拍状或结节状菌丝，卵圆形小分生孢子、厚
壁梭形（纺锤形）大分生孢子。
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小孢子癣菌：菌落为 灰色、橘红色或棕黄 色，厚壁大分生孢子， 菌丝有结节状、梳状 和球拍状
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毛癣菌属
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微生物检验
1．直接显微镜检查可采用透明胶带粘贴取材法，将透明胶带直接贴于皮肤 表面，数分钟后揭下，直接贴于载玻片上镜检或经棉蓝染色或革兰染色 后镜检。可见孢子和菌丝。孢子为圆形或卵形，厚壁，芽颈较宽，常成 簇分布；菌丝粗短，呈腊肠样。
2．分离培养与鉴定
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毛癣菌属
生化反应：不能水解淀粉，不凝固牛奶，能同化 硝酸盐，需维生素B1。
对5-FC、伊曲康唑、氟康唑敏感，易产生耐药性
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孢子丝菌
传染源：人和动物 传播途径：经破损
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微生物检验：
(1)直接显微镜检查：卵圆形的孢子。
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着色真菌
分生孢子：①树枝型、②剑顶型、③花瓶型：
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多发生四肢暴露部位，开始为小丘疹，表面干燥 或湿润，有鳞屑或鳞痂，逐渐形成斑块结节，呈 疣状增殖。
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直接显微镜检查：单个或成群厚壁孢子，有横隔 或中间十字分隔。 培养：沙氏培养基，生长缓慢，菌落从灰黑色至 黑色，有气生菌丝。菌落涂片镜检可见三种类型 的分生孢子，有鉴定价值。
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小孢子菌属
• 我国常见的有铁锈色小孢子菌、石膏 样小孢子菌和狗小孢子菌等。
• 小孢子菌属感染皮肤和毛发，很少感 染甲。
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小孢子菌生物学特性
• 皮屑和毛发+10%KOH处理 子镶嵌
镜检，皮屑中有分枝断裂菌丝，在毛发中呈现小孢
的鞘包裹着发干。
• 在沙氏培养基中可见白色、棕黄色或黄褐
局限性：
①阴性结果不能排除真菌感染； ②有假阳性结果。
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常用的染色方法
• 常用的染色方法有革兰染色、瑞氏染色、荧光染 色，乳酸酚棉蓝染色、还有墨汁负染色等。
• 对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，需作 瑞氏染色或姬氏染色后镜检。
• 检测病人脑脊液标本中新生隐球菌，需作墨汁负 染色后检查，背景为黑色，新生隐球菌和荚膜不 着色
三.分离培养
标本
70%乙醇或在青、链霉素混合液
内处理5min
生理盐水洗3次
接种沙
氏琼脂斜面25℃培养观察菌落特征。
四.其他鉴定试验
毛发穿孔试验
脲酶试验
特殊营养需要试验
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毛发穿孔试验
• 将头发发剪成lcm长，置于已加入25ml蒸馏水和2—3滴10％酵母浸膏液的平皿 内，高压灭菌。将待检皮肤真菌接种于平皿内，置25℃孵育四周，每周检查一 次，每次取数根毛发置载玻片上，经乳酚棉蓝染色后，置低倍镜下观察。若毛发 有裂口或陷凹者为阳性，否则为阴性。
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预防
• 1．要保持脚的清洁干燥，勤换鞋袜，鞋子要通气良好。 • 2．不要用别人的拖鞋、浴巾、擦布等，不要在澡堂、游泳池旁的污水中行走。 • 3．公用澡堂、游泳池要做到污水经常处理，以防相互传染。
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治疗
• 灰黄霉素、伊曲康唑 • 派瑞松:曲安奈德益康唑乳膏
达克宁:硝酸咪康唑软膏
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目的要求
（一）掌握深部感染真菌概念、分类、检验程序； 掌握假丝酵母、隐球菌、卡氏肺孢菌微生物学特 性、检验方法及鉴定要点。
（二）熟悉荚膜组织胞浆菌孢子鉴别要点。 （三）了解抗真菌药物分类及临床应用。
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教学内容
（一）假丝酵母菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。 （二）隐球菌属；分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。 （三）曲霉菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。 （四）组织胞浆菌属：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。 （五）卡氏肺孢菌：分类、临床意义、生物学特性、微生物学检验。
• Dimorphism （二相性真菌）
Unicellular
机体内寄生37℃ yeast
含动物蛋白培养基
普通培养基25℃
Multicellular
mold
沙保氏培养基25℃
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Morphology of Spore
真菌繁殖结构，一条菌丝可生成 多个孢子
孢子
芽胞
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DEFINITION
• 是指能侵袭深部组织和内脏及全身的真菌，主要有假丝酵母菌、隐球菌、曲霉、毛 霉、组织胞浆菌和卡氏肺孢菌等。
• 组织胞浆菌为二相性真菌，假丝酵母菌、曲霉菌、毛霉菌和卡氏肺孢菌等为条件致 病性真菌，只有在一定条件下才引起机体致病。
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第一节 假丝酵母菌属
表皮癣菌属
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小孢子癣菌属
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皮下组织真菌感染
• 主要有着色真菌和孢子丝菌 • 着色真菌感染发生在暴露部位，称着色真菌病。卡氏枝孢霉和裴氏着色芽生菌。 • 申克孢子丝菌，属腐生性真菌，常因外伤接触带菌的花草等引起感染。此菌可引起孢子
丝菌下疳。此菌也可引起深部感染。是一种二相性真菌。
糠秕马拉色菌
皮肤癣真菌
毛癣菌属 表皮癣菌属
小孢子菌属
皮下组织感染真菌
着色真菌 孢子丝菌
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• 位置：寄居于人体皮肤和毛干的最表层。因不接触组织细胞，很少引起宿主细胞反应。 • 嗜脂性酵母样菌 • 代表：秕糠马拉色菌(Malasseziafurfur) • 症状：皮肤表面出现花斑癣（汗斑）
直接检查 检测抗原 直接镜检
固定标 墨汁负 KOH 本染色 染色法 法
脑
毛发
脊 液
指甲
皮屑
临床标本
分离培养
分 子
动病 物理
检 测
生
实检
抗
物
验查
体
沙氏培养基 学
检
测
25℃
37℃
观察菌落 镜检、生化反应
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小结
真菌的致病性 真菌的基本特性：菌丝、孢子、培养特性 标本采集注意事项 常用的检查方法：显微镜检查、分离培养、 生化实验