高中生物选修一1.2分离特定的微生物并测定其数量实验课件 共29张

2、实验室中微生物的筛选原理：
要分离一种微生物，必须根据该微生物的特 点，包括营养、生理、生长条件等；
方法：⑴抑制大多数微生物不能生长；⑵造 成有利于该菌生长的环境。
结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再 通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。
3、培养基选择分解尿素的微生物的原理
培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的 微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏 脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而 不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培 养基就能够选择出分解尿素的微生物。
取0.1ml菌悬液
接种 高浓度→低浓度，换枪头
低浓度→高浓度，可不用换枪头
涂布分离
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
⑵常用方法：稀释涂布平板法。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表 涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。
计数法
直接计数法 平板计数法 比浊法 膜过滤法
1、哪些土壤中含有这种以尿素为氮源微生物多？ 没硬化，腐殖质丰富的土壤
2、此实验用到的选择培养基需含有哪些物质？ 碳源、尿素、无机盐、水、酚红
退 出
第二节 分离特定的微生物 并测定其数量
➢ 1．掌握涂抹平板法或混合平板法。 ➢ 2．掌握利用选择培养基分离特定微生
物的方法。 ➢ 3．观察各种微生物形成的菌落。
微生物种类多样，也有多种代谢类型。
根瘤菌，为固氮菌， 可固定空气中的氮气
假单孢杆菌，可以分 解石油的超级细菌。
➢ 尿素是一种重要的农业氮肥，人类和其他哺 乳动物的尿中都含有尿素，大量尿素的存在 会对环境造成污染。
.在液体培养基上进行
B.至少接种一种细菌
C.接种一个细菌
D.及时补充消耗的营养物质
2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是
( D)
A.CO2和N2 C.CO2和尿素
B.葡萄糖和NH3 D.葡萄糖和尿素
3.下列说法不正确的是（ B ）
A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA 聚合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、 M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试 因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大， 种类最多。
制备选择培养基（尿素为唯一氮源） 制备牛肉膏蛋白胨培养基
思考？为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基？ （对照作用）
◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中 每一步都要在火焰旁进行 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于 计数的平板
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？ 测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的 细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？
原因：土壤中各类微生物的数量（单位：株 /kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中： 好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为 477万，霉菌数约为23.1万。
结论：为获得不同类型的微生物，就 需要按不同的稀释度进行分离，同时还 应当有针对性地提供选择培养的条件。
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm 左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。
取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前 都要灭菌。
“微生物的天然培养基” 数量最大、种类最多 大约70%—90%是细菌
得10-2
10-3, 10-4的菌悬液
0.5g土壤
1个50ml无菌水
2个4.5ml无菌水
➢ 既然微生物有多种代谢类型，那么有没有能 降解尿素的微生物呢？今天我们就试试能不 能从土壤中分离出以尿素为氮源的微生物。
1、实例：DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量 DNA 大 量 复制 的 技 术 ， 此 项 技术 要 求 使用 耐 高 温 （93 ℃）的DNA聚合酶。
原因：因为热泉温度70～ 80 ℃，淘汰了绝大多数 微生物只有Taq细菌被筛 选出来。
恒温37℃培养
按浓度捆成一摞
菌落
微生物计数方法
活菌计数——样品稀释度足够高时，培养基表 面只生长1个菌落（来源于样品稀释液中的1个 活菌）。根据平板上菌落数，推测样品中大约 含有多少活菌。结果一般用菌落数而不是活菌 数表示。
显微观察计数——红细胞计数板，观察数量， 再根据浓度比例计算出菌体数量。
3、可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生 物对尿素分解能力的高低？ 培养基红色的深浅
4、统计微生物的数量可用哪些方法？ 稀释涂布平板法，显微镜直接记数法
5、用稀释涂布平板法计数时，菌落数在30300（20以内）计数。 做一系列浓度梯度实验，探究合适的稀释度
6、实验设计要遵循的原则： 重复性原则 对照原则
1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一
定容积里样品中微生物的数量。 缺点 ➢ 不能区分死菌与活菌； ➢ 不适于对运动细菌的计数； ➢ 需要相对高的细菌浓度； ➢ 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
2、间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体
培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖 而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。