中国红豆杉植株再生体系优化

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100 年的红豆杉树皮 用 于 提 取 紫 杉 醇 子 4 . 红 豆 杉 在
自然条件下生长缓慢,再生能力差,种子处于深休眠状
态,需经两冬一夏才能萌发,发芽率低 [5].人工繁殖主
要靠扦插和 种 子 育 苗 移 栽 等 方 法 [6-8],但 繁 殖 速 度 较
转化 [16],紫杉醇的 合 成、化 学 提 取 等 方 面 [16-17]. 通 过
16h/d、
1600~
2000l
x光照条件下培养.
第 39 卷 第 5 期 草 原 与 草 坪 2019 年
1.
2.
2 愈伤组织 诱 导 和 芽 分 化 培 养 将 试 管 苗 的 叶
片剪为长 0.
5cm 的小片,茎剪切成 1cm 小段,分别接
种到愈伤组织诱导的 10 种培养基(接种时茎段平放于
养条件,建立高效的植株再生系统及组培体系,以期为
中国红豆杉基因 工 程 的 遗 传 转 化,组 培 生 产 大 量 的 愈
伤组织或悬浮细胞,从中提取紫杉醇提供技术参考.
1 材料和方法
1.
1 材料
试验用的 中 国 红 豆 杉 枝 条 采 自 甘 肃 省 陇 南 市 徽
慢,繁殖材料利用率低,无法满足紫杉醇提取所需用的
茎段、叶片愈伤组织和分化芽 的 培 养 基.结 果 表 明:WPM+6
GBA2.
25 mg/L+2

i
5 mg/L+NAA
p1.
0.
2mg/L和 WPM+6
GBA3.
4mg/L+2

i
0 mg/L+NAA0.
2 mg/L 为茎段、叶片最适合诱导愈伤
p3.
组织的培养基;WPM+6
GBA3.
4mg/L+2
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2019.
05.
014
j.
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中 国 红 豆 杉 (
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为红豆杉科红 豆 杉 属 常 绿 乔 木.红 豆 杉 属 植 物,全 世
界有 11 种,中国原产有 4 个 种 1 个 变 种,即 中 国 红 豆
再进 行 人 工 栽 培,是 解 决 紫 杉 醇 原 料 短 缺 的 途 径
培养基上,叶片的上表皮面与培养基接触).每瓶培养
基上接种 10 块,每 个 处 理 接 种 3 瓶,每 个 处 理 设 3 个
重复.将接种好材料的三角瓶和培养皿置于人工气候
箱,在(
25±1)℃ 、
12h/d、
1600l
x光照条件下进行培
采用«农业田间试验统计分析软件»[18].
1.
3 选择试验因素确定上、下线水平
sho
rmon
e
s
g
养.培养 10d 后观察出愈时间,
30d 后统计愈伤组织
因子/(
mgL-1 )
X1 (
NAA)
X2 (

GBA)
X3 (
i
l:
116548883@qq.
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黄惠英为通讯作者.
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Gma
i
l:
hu
i
i
ng_h@126.
c
om
y
15% 的 84 消 毒 液 浸 泡 12~15 mi
n,再 用 0.
1% 的
到 WPM 附 加 植 物 生 长 调 节 剂 2

i

GBA 和 NAA 的
p,
初代培养基上.培养条件在 25±2℃ ,
县,
2016 年 6 月剪取 8 年 龄 当 年 生 的 嫩 枝. 中 国 红 豆
原料 [9].利用组织 培 养 技 术 工 厂 化 生 产 红 豆 杉 种 苗,
1.
2 方法
收稿日期:
2019

09

19;修回日期:
2019

09

28
基金项目:盛 彤 笙 科 技 创 新 基 金 项 目 (
GSAUGSTS

1515);
甘肃省支撑 计 划 项 目 (
1204NKCA096);兰 州 市
杉的试管苗由甘肃农业大学农学院组培实验室提供.
1.
2.
1 外植体的 灭 菌 处 理 及 培 养 将 采 回 来 的 枝 条
剪去叶片后剪切成 2~4cm 长的段,每段带 2~3 个侧
芽,先用洗衣粉溶液浸泡10~15mi
根据 红 豆 杉 组 织 和 细 胞 培 养 等 相 关 文 献 报

,以 3 种外 源 激 素 最 高 使 用 浓 度 为 上 限,以 不
[
16-17]
使用为下限进行设计(表 1).
表 1 3 种外源激素使用浓度上、下界值
Tab
l
e1 Upp
e
randl
owe
rl
imi
t
so
ft
h
r
e
ee
xo
enou
豆杉、南方红豆杉(变种).红豆杉是植物界的活化石,
紫杉醇及其衍生 物 是 目 前 世 界 上 公 认 的 广 普、高 活 性
.
[
1-2]
抗癌药物,被称为“晚期癌症的最后一道防线”
从一 棵 红 豆 杉 树 皮 中 提 取 的 紫 杉 醇 含 量 仅 为
0.
01%~0.
05% . 治 疗 一 个 癌 症 病 人 需 要 3~6 棵

i
5mg/L 为最适合茎段愈伤组织分化芽的培养基;WPM
p4.
+NAA0.
4mg/L 为适合生根的培养基.
关键词:中国红豆杉;植株再生;培养基;外源激素
中图分类号:
S791 文献标志码:
A 文章编号:
1009

5500(
2019)
05

0102

05
DOI:10.
13817/
n,再用自来水冲洗
人才创新创业项目(
2018GRCG来自70)资助40mi
n,在超净工作台上,用 75% 的乙醇浸泡30s后用
方向为作物遗传育种 .
HgCl2 消毒 6~10mi
n,无菌水冲洗 4~5 次,然后接种
作者简介:王威(
1984
G),男,甘 肃 平 凉 人,硕 士,讲 师,研 究
E
Gma
之一 [10].
近年来有关红 豆 杉 的 研 究 主 要 集 中 在 人 工 种 植,
杉(中国特有物 种)、东 北 红 豆 杉、云 南 红 豆 杉、西 藏 红
组织和细胞培养 [10-13],微 生 物 和 基 因 工 程 [14-16],遗 传
国家一级重点保护珍稀濒危植物.从红豆杉中提取的
寻找最优化的愈伤组织诱导培养基和愈伤组织分化培
102
GRASSLAND AND TURF(
2019) Vo
l.
39No.

中国红豆杉植株再生体系优化
王 威1,白江平1,王 清2,黄惠英1
(
1.甘肃农业大学农学院,甘肃 兰州 730070;2.甘肃农业大学生命科学院,甘肃 兰州 730070)
摘要:以中国红豆杉的嫩枝和试管苗为外植体,采用三因子 DG饱和最优设计方案,筛选最适合诱导
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