大鼠HSP27基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

大鼠HSP27基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定
黄捷;谢良地;许昌声;王华军
【期刊名称】《中国药理学通报》
【年(卷),期】2009(25)4
【摘要】目的构建大鼠的热休克蛋白27 (heat shock protein 27, HSP27)RNA 干扰慢病毒载体.方法设计并合成3对互补针对大鼠HSP27 mRNA的oligoDNA 片段.磷酸化和退火后,分别克隆入pSUPER-basic质粒载体,获重组的pSUPER-HSP27-oligoDNA.将其中表达shRNA的结构酶切插入慢病毒转移质粒pNL-IRES2-EGFP,产生pNL-HSP27-IRES2-EGFP,在293T细胞中与VSVG、pHelper 包装产生慢病毒.48 h后收集上清液,离心过滤后进行病毒滴度测定.用构建正确的慢病毒质粒载体感染血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),检测干扰效果.结果酶切和测序两种方法结果证明3种质粒载体的插入序列完全正确,慢病毒载体构建成功并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度为3.12×109 fu·L-1.重组慢病毒质粒pNL-HSP27-IRES2-EGFP-1的RNA干扰效率最高,为0.771.结果成功构建靶向大鼠HSP27基因RNAi慢病毒载体.为进一步研究HSP27功能和用慢病毒进行基因治疗奠定基础.
【总页数】5页(P488-492)
【作者】黄捷;谢良地;许昌声;王华军
【作者单位】福建医科大学附属第一医院,福建省高血压病研究所,福建,福
州,350005;福建医科大学附属第一医院,福建省高血压病研究所,福建,福州,350005;
福建医科大学附属第一医院,福建省高血压病研究所,福建,福州,350005;福建医科大学附属第一医院,福建省高血压病研究所,福建,福州,350005
【正文语种】中文
【中图分类】R-332;R341;R342.2;R373.9;R394.3;R394.114;R394.2
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