NITROGEN CYCLE - Western Connecticut State University
Western实验操作原理及方法 jst
蛋白免疫印迹（Western blotting）实验操作原理及方法一、实验目的：通过本实验，可以特异性的检测蛋白的表达水平。
二、实验原理：1、蛋白浓度测定：考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）存在两种不同的颜色形式：红色和蓝色。
它和蛋白质通过范德华力结合，结合后燃料演的有红变蓝，最大光吸收由465 nm变成595 nm。
通过测定595 nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
此反应大约2 min即可完成，并可稳定1小时。
2、SDS凝胶：丙烯酰胺（Acr）和甲叉丙烯酰胺（Bis）在催化剂过硫酸铵（ammonium persulfate, (NH4)2S2O8, APS）或核黄素（ribofavin, VB2）和加速剂N, N, N’,N’-四甲基乙二胺（N, N, N’,N’-ytetramethyl ethylenediamine, TEMED）的作用下，聚合成三维网状结构。
* Acr和Bis之比可以决定胶的孔径等因素。
浓缩胶为大孔胶，分离胶为小孔胶。
3、SDS-PAGE电泳：SDS是阴离子去垢剂，由于其带有大量负电荷，当与蛋白结合时，所带电荷大大超过了天然蛋白原有的负电荷，因而消除了蛋白之间原有的电荷差异，则电泳迁移率主要依赖于分子量，而与所带净电荷和形状无关。
三、实验方法及步骤：样品预处理：1、将细胞从平皿上刮下，离心后，用1 X PBS冲洗，12000rpm 1min离心，弃上清，细胞沉淀保存于-80℃。
2、把细胞沉淀取出，加M-PER或T-PER（Thermo，约为细胞体积的2~3倍），悬浮细胞。
10 mL M-PER或T-PER+50μL 200 mM Na3VO4+50μL 200 mM PMSF+1片IN（Roche，酶抑制剂复合物）3、将装有细胞悬液的Doff管固定在4℃层析柜中的脱色摇床上，max speed，剧烈摇1小时。
4、冰上，超声破碎（注意先用纯水清洗探头），AmL=35%超声10s，停顿5s，反复10次（探头不能碰到管壁，且始终保持在液面以下，尽量不要产生气泡）5、重新固定在脱色摇床上，4℃，1 h，max speed。
2018年安徽省蚌埠市高考英语二模试卷
B.＄60．
C.＄80．
D.＄100．
【答案】
CБайду номын сангаас
C
A
【考点】
完形综合
阅读理解综合
【解析】
本文属于广告类阅读，主要向我们介绍了新泽西植物园的会员，讲述了如何加入会员以及会员所享受的优惠，使读者更了解NJBG的会员．
【解答】
（1）C．推理判断题．根据第一段第三句Your membership dollars help to improve the Garden，and provide educational and recreational（娱乐的）activities for the general public．可知会员费将被用来改善公园的设施，给大众提供教育和娱乐的活动．这些活动都属于服务类的行为，所以会员费将被用来提供更好的服务．故C项正确．
For you, the NJBG is an exciting and beautiful place to visit where you may enjoy each season’ s best．Members enjoy special events, festivals, lectures, and rewarding educational opportunities for both city and country gardeners．
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（1）The NJBG membership dollars can be used to________
A.offer further education．
B.update online payment．
碧云天western blot步骤
Western实验步骤Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。
Western可以参考如下步骤进行操作。
1. 收集蛋白样品(Protein sample preparation)可以使用适当的裂解液，例如碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液等，裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。
对于某些特定的亚细胞组份蛋白，例如细胞核蛋白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白，也可以使用试剂盒进行抽提，例如碧云天生产的细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(P0028)。
收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。
根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。
因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。
如果使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液或RIPA裂解液，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)。
2. 电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝胶配制SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(P0012A)。
该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。
(2) 样品处理在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。
例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。
使用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。
5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)(P0015)。
固相萃取-高效液相色谱检测牛肉中四环素类抗生素残留
固相萃取-高效液相色谱检测牛肉中四环素类抗生素残留陈士恩;程燕平;阿依木古丽;霍生东;申晓蓉;刘丽霞【期刊名称】《西北民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(032)001【摘要】利用Waters2695高效液相色谱仪对牛肉中四环素类抗生素残留进行测定.样品经5%高氯酸溶液提取、C18固相萃取柱净化、旋转浓缩、0.22μm微孔滤膜过滤,反相色谱分离,紫外检测.色谱柱为Waters Nova-parkC18柱(4μm,3.9mmi.d.×150mm),以磷酸二氢钠溶液-乙腈-甲醇(体积比为70:20:10)为流动相,流速为0.8 mL/min.紫外检测器检测波长为365nm,每次进样10μL.结果是土霉素、四环素、金霉素的检出限分别为0.036 5μg/mL0.043 0μg/mL、0.0558μg/mL,线性范围为0.1μg/mL～-1.0μg/mL.测定54份牛肉样品,只有一份牛肉的金霉素残留为132μg/kg,高于我国农业部规定的量高允许残留量标准(100μg/kg).【总页数】6页(P62-67)【作者】陈士恩;程燕平;阿依木古丽;霍生东;申晓蓉;刘丽霞【作者单位】西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州,730030;西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州,730030;西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州,730030;西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州,730030;西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州,730030;西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州,730030【正文语种】中文【中图分类】S851.4【相关文献】1.分子印迹固相萃取-高效液相色谱法测定牛奶中四环素类抗生素残留 [J], 付珍珍;曾月;李增威;何利;周康;刘书亮;邹立扣;敖晓琳;陈姝娟2.限进材料固相萃取-高效液相色谱在线联用检测牛奶中四环素类抗生素残留 [J], 杨旭;刘美娇;林深;徐丹;董襄朝3.固相萃取-高效液相色谱法测定有机肥中四环素类抗生素药物残留 [J], 唐春玲;张文清;夏玮;左萍萍;朱恩4.猪肉中四环素类抗生素残留的固相萃取-高效液相色谱荧光测定法 [J], 林荆;林奕帆;林立峰;赵建晖;吴文凡5.固相萃取-高效液相色谱法同时测定牛奶中3种四环素类抗生素残留量 [J], 蔡志斌;张英;刘丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
技术磷酸化蛋白Western跑不出来好捉急，解螺旋给你支招
技术磷酸化蛋白Western跑不出来好捉急，解螺旋给你支招作者：解螺旋.大肚腩转载请注明来源：解螺旋，医生科研助手话说我做硕士课题的时候需要跑磷酸化的AMPK（p-AMPK），当时同组四五个孩子一起跑，效果都很不理想，要么是条带过淡，要么是根本出不来。
那几个月的时间我们疯狂的到处请教师兄师姐，在各种实验论坛上寻找改进方法，最终出来效果不错，文章也发了，在此总结几个Western跑磷酸化蛋白的要点，希望各位科研民工们少走弯路。
抗体工欲善其事必先利其器，抗体很关键。
这里我们要说的并不是最贵的就是最好的，如果条件允许，建议同时购买不同厂家的抗体，一起来试一试，因为有时候即使是最好的品牌，不同批次稳定性也不一样。
抗体从订购到到货有一定的时间，所以到货后请尽快分装好，准备做实验，我们当时因为实验进度问题，抗体到了3个多月才开始正式实验，这样拖了时间找厂家售后申诉也是很被动的。
我们那时候用CST的一抗，感觉效果不稳定，也可能跟抗体放久了有关。
最后买了另一家代理的抗体算是有了比较稳定的结果。
当然，还是选择购买口碑较好的公司的产品为佳，这样即使出了问题售后也会跟进。
如果经费有限，可以买买小包装的产品先试试，不少抗体公司还有5ul的抗体试用装免费申请。
再者，孵育一抗的时候，建议用新鲜抗体，什么意思呢？很多同学因为想图省事儿，很多时候配好孵育液，每次孵育好之后再次放进冰箱等待下次重复利用，一些比较好跑的蛋白到时没啥问题，但是磷酸化的蛋白建议每次都用新鲜的抗体原液，将条带剪下来后用杂交袋塑封好，按1：1000的比例加入抗体原液孵育，再这种情况下，100ul的抗体也是能用很久的，所以尽量每次都用新的抗体。
蛋白上样普遍反映磷酸化的条带很淡，有时候达不到制图标准，这点可以加大上样量来解决，另外，磷酸化蛋白一般与非磷酸化的蛋白一起跑一起制图，它本来就是要比非磷酸化的要淡一些，不要过分担心。
电泳不同kb的蛋白电泳时间有所差别，参数啥的要用脑子更改，不能一成不变，避免发生那种蛋白跑不见了的惨剧。
nox4分子量
nox4分子量
NOX4是一种酶，属于NADPH氧化酶家族的成员之一。
它在细胞中起着重要的作用，参与调节细胞内的氧化还原平衡和细胞信号传导等生物学过程。
NOX4的分子量是约65-70千道尔顿（kDa），其中kDa是千道尔顿的单位，用于表示蛋白质或分子的相对分子质量。
NOX4是一个由多个氨基酸组成的蛋白质，在人体细胞中通常由577个氨基酸残基构成。
在细胞中，NOX4主要定位在内质网（endoplasmic reticulum, ER）膜上，并通过将NADPH（还原型辅酶）转化为活性的超氧阴离子（O2•-）来催化化学反应。
这个过程被称为酶促电子传递，它是细胞内产生ROS（reactive oxygen species，活性氧物质）的重要途径之一。
NOX4可以与其他蛋白质相互作用，形成复合物，以便在细胞内特定位置执行其功能。
通过生成ROS，NOX4参与调节细胞内的氧化还原状态，维持正常的细胞生理功能。
此外，NOX4还参与调节细胞信号传导途径，如细胞增殖、凋亡和分化等。
在某些病理条件下，NOX4的过度活化可能会导致氧化应激和细胞损伤，与多种疾病的发展有关，如心血管疾病、炎症性疾病和肿瘤等。
因此，NOX4成为了药物开发和治疗相关疾病的潜在靶点。
总结起来，NOX4是一种分子量约为65-70kDa的酶，通过产生ROS参与调节细胞内的氧化还原平衡和信号传导。
它在多种生物学过程中发挥重要作用，并且与多种疾病的发展相关。
1。
Western一抗二抗去除液使用说明书
htpp://
Western 一抗二抗去除液
Western 一抗二抗去除液 Western 一抗二抗去除液(Stripping buffer)，用于 Western 中转移了蛋白的膜的重复利用。 在 Western 中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后，有时还需要检测 tubulin、 actin 等表达量相对稳定的蛋白作为参照，或检测其它蛋白进行比较。通过使用一抗二抗去 除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一 个 SDS-PAGE 胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。 使用 Western 一抗二抗去除液多次重复使用同一张膜，会导致蛋白信号的减弱。Western 一 抗二抗去除液，通常可以重复利用膜 3-5 次。
温馨提示 为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。
储存温度 2~8℃保存。
包装清单 货号
HCY055
品名 Western 一抗二抗去除液说书包装 100mL 1份
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注意事项 使用辣根过氧化物酶(HRP)，任何一次封闭都应当使用 5%脱脂牛奶，如果使用碱性磷酸酯酶， 任何一次封闭都应当使用酪蛋白(casein)。 使用 ECL 等类似的化学发光试剂进行的 Western 检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行 的 Western 检测，例如 DAB，NBT/BCIP，不适用于本试剂。
使用说明 1. 在完成 Western 化学发光检测后，蒸馏水中漂洗 5min。 2. 弃蒸馏水，加入适量的 Western 一抗二抗去除液，至少需把膜完全覆盖。在摇床上漂洗 10min。 3. 弃 Western 一抗二抗去除液，并吸尽残余液体。加入 TBS、TBST 或 PBS 漂洗 3-4 次，每 次在摇床上漂洗 3-5min。 4．进行封闭等 Western 的后续操作。
211132938_GC-MS_法测定酊剂中4_种邻苯二甲酸酯类塑化剂
分析检测GC-MS法测定酊剂中4种邻苯二甲酸酯类塑化剂王 毅，任红燕，乔 彬（喀什地区食品药品检验所，新疆喀什 844000）摘 要：目的：探索一种新的、可靠的、用于检测酊剂中4种邻苯二甲酸酯类塑化剂含量的方法。
方法：样品采用正己烷超声提取，色谱柱为TM-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 µm），载气为氦气，流速为1.2 mL·min-1，进样口温度为260 ℃，柱温为程序升温，电子轰击电离方式（EI），离子源温度为230 ℃，离子监测（SIM）模式。
结果：4种PAEs分离良好，在0～1.00 µg·mL-1内呈良好的线性关系，相关系数r＞0.99，检出限为0.038～0.081 mg·kg-1，加样回收率在85.0%～104.7%，相对标准偏差在0.5%～6.0%。
结论：该法分离效果好、准确、灵敏度高，可同时检测塑料包装酊剂中4种邻苯二甲酸酯类塑化剂。
关键词：邻苯二甲酸酯类；塑化剂；酊剂Determination of 4 Phthalate Plasticizers in Tincture byGC-MSWANG Yi, REN Hongyan, QIAO Bin(Kashgar Regional Food and Drug Inspection Institute, Kashgar 844000, China) Abstract: Objective: To explore a new and reliable method for determining the content of four phthalate plasticizers in tinctures. Method: The samples were extracted by n-hexane ultrasound, TM-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 µm), carrier gas was helium, flow rate 1.2 mL·m in-1, inlet temperature was 260 ℃, column temperature was programmed heating, electron impact ionization mode (EI), ion source temperature was set at 230 ℃, ion monitoring (SIM) mode. Result: The four PAEs were well separated and showed a good linear relationship in the range of 0～1.00 µg·mL-1. The correlation coefficient (r) was more than 0.99, the detection limit was 0.038～0.081 mg·kg-1, the recovery rate of sample addition was 85.0%～104.7%, and the relative standard deviation is between 0.5% and 6.0%. Conclusion: The method is effective,accurate and sensitive for the determination of 4 phthalate plasticizers in plastic packed tinctures.Keywords: phthalates; plasticizers; tincture邻苯二甲酸酯类（PAEs）增塑剂是一种塑料工业加工助剂，能够改善塑料制品的可塑性和柔韧性，广泛用于食品、玩具、医药行业等[1]。
Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)使用说明
Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)使用说明货号：LS00160规格：100mL保存：-20℃保存，12个月。
产品说明：多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，如Triton、SDS、NP-40等，Western及IP细胞裂解液是采用一种非变性裂解方法来裂解细胞，并获得总蛋白的裂解液。
所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳，Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等，主要由Tris-HCl、NaCl、低浓度Triton X-100，低浓度sodium pyrophosphate等组成，不含蛋白酶、磷酸酶抑制剂，并维持原有的蛋白间相互作用。
用Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)(Cell lysis buffer for Western and IP without inhibitors)得到的蛋白，可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。
由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不宜用Bradford法测定由Western及IP细胞裂解液获得样本的蛋白浓度。
操作步骤(仅供参考)：(一)贴壁培养细胞1、取Western及IP细胞裂解液室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加蛋白酶抑制剂。
2、去除贴壁细胞的培养液，用PBS、NS或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。
3、按照6孔板每孔加入100～200µL裂解液的比例，加入Western及IP细胞裂解液。
移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。
通常裂解液作用于细胞1～5s内，细胞就会被裂解。
4、10000～12000g，离心3～5min(如果用冷冻离心机4℃离心效果更佳)，取上清。
5、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞1、取Western及IP细胞裂解液室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加蛋白酶抑制剂。
细胞内叠氮化物反应探针的英文
细胞内叠氮化物反应探针的英文Intracellular Nitrogenase Reaction Probes: Applications and Advancements.Intracellular nitrogenase reaction probes have emerged as crucial tools in modern biochemistry, enabling researchers to monitor and understand the intricate nitrogen metabolism within cells. These probes, often fluorescently labeled, allow for real-time visualization of nitrogen fixation and associated processes, thereby providing insights into the dynamic nature of nitrogen metabolism.Background and Importance.Nitrogen is an essential element for all known forms of life, playing a pivotal role in amino acid synthesis, nucleic acid structure, and various other biological processes. However, nitrogen in its free form (N2) is unavailable for direct biological utilization due to itsinertness. Therefore, organisms rely on nitrogenases, a class of enzymes that catalyze the conversion of N2 into ammonia (NH3), a biologically usable form of nitrogen.Within cells, nitrogenase enzymes are often embedded within complex systems, involving multiple cofactors and electron transport chains. Monitoring these reactionswithin the cellular milieu is challenging due to the dynamic nature of the cellular environment and the often-subtle changes in substrate concentration. Intracellular nitrogenase reaction probes have been developed to overcome these challenges, providing a window into the intracellular world of nitrogen metabolism.Types of Intracellular Nitrogenase Reaction Probes.1. Fluorescent Probes: These probes are labeled with fluorescent molecules that change their emission properties upon interacting with nitrogenase or its intermediates. For example, fluorophores such as fluorescein or rhodamine can be conjugated to specific substrates or inhibitors of nitrogenase, allowing for the detection of enzymaticactivity through fluorescence microscopy or flow cytometry.2. Bioluminescent Probes: These probes emit light through a chemical reaction triggered by nitrogenase activity. Bioluminescent probes offer the advantage of being self-luminous, eliminating the need for external excitation sources.3. Radiolabeled Probes: Radiolabeled probes incorporate radioactive atoms (e.g., carbon-14 or tritium) into substrates or inhibitors of nitrogenase. The subsequent detection of radiolabeled products provides quantitative information about enzyme activity. However, the use of radiolabeled probes is limited due to safety concerns and the need for specialized equipment.Applications of Intracellular Nitrogenase Reaction Probes.1. Studying Nitrogen Fixation Pathways: By monitoring the activity of nitrogenase within cells, probes can reveal the preferred nitrogen fixation pathway utilized bydifferent organisms. This information is crucial for understanding the adaptability of microorganisms to varying nitrogen sources and environmental conditions.2. Analyzing Nitrogen Metabolism in Response to External Stimuli: Intracellular probes can be used to study how nitrogen metabolism is affected by external factors such as changes in nutrient availability, pH, or temperature. Such studies can provide insights into the mechanisms underlying cellular responses to environmental perturbations.3. Drug Discovery and Therapeutics: Nitrogenase inhibitors have been explored as potential therapeutics for treating diseases associated with abnormal nitrogen metabolism, such as cancer or certain infectious diseases. Intracellular probes can aid in the identification of effective inhibitors by allowing for high-throughput screening of candidate compounds.Future Directions.With the continuous advancement of biotechnology and imaging techniques, intracellular nitrogenase reaction probes are poised to make significant contributions to our understanding of nitrogen metabolism. Future research may focus on developing probes with improved sensitivity and specificity, enabling the detection of nitrogenase activity in single cells or even subcellular compartments. Additionally, the integration of probes with other omics technologies (e.g., genomics, proteomics, or metabolomics) could provide a comprehensive picture of nitrogen metabolism within cells, leading to new insights and potential therapeutic targets.In conclusion, intracellular nitrogenase reaction probes have emerged as invaluable tools for studying nitrogen metabolism within cells. Their ability to monitor enzymatic activity in real-time, combined with their versatility and sensitivity, makes them critical for advancing our understanding of nitrogen metabolism and its role in health and disease. As technology continues to evolve, these probes will play increasingly important roles in fundamental and applied research.。
硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)活性检测试剂盒说明书 微量法
硫氧还蛋白氧化还原酶（TrxR）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC1155规格：100T/96S产品内容：试剂一：液体120mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入2mL蒸馏水溶解。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入2mL蒸馏水溶解。
试剂四：液体×1支，-20℃避光保存。
产品说明：TrxR是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统。
TrxR与GR活性类似，催化GSSG还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。
TrxR催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+，TNB在412nm有特征吸收峰，通过测定412nm波长处TNB 的增加速率，即可计算TrxR活性。
自备仪器和用品：低温离心机、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：1、称约0.1g样品，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清液待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min），然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定前将上清液与试剂四以50：1的体积比混匀（即取100μL上清液加入2μL试剂四混合）37℃水浴30min后至冰上。
二、TrxR测定操作：1.分光光度计或酶标仪预热30min后，调节波长到412nm，用蒸馏水调零。
2.试剂一在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）预热30min。
3.空白管：取微量玻璃比色皿或96孔板，加入20μL试剂二，20μL试剂三，160μL试剂一，迅速混匀后于412nm测定10s时的吸光度，37℃水浴5min迅速拿出测量412nm下的吸光度记为A1和A2。
免疫细胞培养用澳洲胎牛血清fbs解冻方法
免疫细胞培养用澳洲胎牛血清fbs解冻方法
解冻澳洲胎牛血清（FBS）是进行免疫细胞培养的重要步骤。
以下是解冻FBS的方法：
1. 先将FBS的冻存管或瓶放入4°C的冰箱中，让其缓慢解冻。
一般来说，FBS应该以5-10°C的速度解冻。
2. 解冻前，需将FBS摇匀。
这样能确保其中的成分均匀混合。
3. 将冻存管或瓶放入37°C的水浴中，直到FBS完全解冻。
水
浴的使用可以加快解冻的速度，但需要注意不要将水浴温度过高，否则会导致FBS的变性。
4. 解冻后，将FBS用吸管转移到无菌离心管中。
注意，吸管、离心管以及其他使用的工具都应是无菌的，以确保细胞培养的纯度和无菌性。
5. 将无菌离心管中的FBS进行离心，以去除其中的异物和冰渣。
6. 将无菌离心管中的FBS分装到合适的小容器中，如10 ml的离心管，以方便后续使用。
注意，每个小容器中应当只放置足够解冻FBS的量，避免重复多次冻融。
7. 使用培养基时，将解冻后的FBS加入培养基中，使其浓度
为所需的最终浓度。
常见的细胞培养浓度为5-20%的FBS。
解冻澳洲胎牛血清的方法可以根据具体情况的需求进行调整，但在整个过程中，保持无菌性和避免过高温度是至关重要的。
同时，根据实验需要，可以进行更加精确的测量和计算，以确保所使用的FBS浓度符合实验要求。
Western抗体洗脱液(强碱性)
Western 抗体洗脱液(强碱性)简介：Western 抗体洗脱液(Stripping buffer)又称膜再生液或Western 一抗二抗去除液，用于Western 中转移了蛋白的膜的重复利用。
在Western 中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后，有时还需要检测GAPDH、β-actin 等表达量相对稳定的管家蛋白或其它蛋白作为参照。
Leagene Western Stripping buffer(强碱性)主要依靠碱性来解除一抗二抗的结合，同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失，适用于Western 化学发光检测后的蛋白膜的重复利用，尤其适用于PVDF 膜，其次为硝酸纤维素膜。
非化学发光试剂进行的Western 检测(如DAB，NBT/BCIP)不适用于本试剂。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、在膜完成Western 化学发光检测后，蒸馏水中漂洗。
2、弃蒸馏水，加入Western Stripping buffer(强碱性)，完全覆盖住膜。
3、摇床上漂洗。
4、弃液，尽量把Western Stripping buffer(强碱性)去除干净，必要情况下，可以用滤纸吸干。
5、加入蒸馏水振荡漂洗2～3次，每次漂洗。
6、入封闭液进行封闭后(推荐酪氨酸或脱脂奶粉作为封闭液)，进行Western 后续操作。
注意事项：1、使用辣根过氧化物酶标记的抗体时，封闭液必须使用5%脱脂奶粉配制。
使用碱性磷酸酯酶标记的抗体时，封闭液必须使用酪蛋白(casein)配制。
2、Western Stripping buffer(强碱性)特别适用于PVDF 膜的再生，硝酸纤维素膜的再生效果不如PVDF 膜。
3、Western Stripping buffer(强碱性)适用于ECL 等类似的化学发光液的检测后的一抗二抗洗脱。
非化学发光试剂进行的Western 检测(如DAB，NBT/BCIP)不适用于本试剂。
编号名称PW0052PW0052Storage Western Stripping buffer(强碱性)100ml 500ml RT 使用说明书1份4、Western Stripping buffer(强碱性)有轻微腐蚀性，使用时请注意防护。
新型肿瘤学疗法！氧化铪纳米颗粒Nbtxr3治疗头颈癌（HNSCC）：肿瘤部位激活，总生存期。。。
新型肿瘤学疗法！氧化铪纳⽶颗粒Nbtxr3治疗头颈癌（HNSCC）：肿瘤部位激活，总⽣存期。
来源：本站原创 2021-10-28 02:20Nbtxr3具有⼀种物理作⽤机制(MoA)，通过放疗激活，在所注射的肿瘤中诱导显著的肿瘤细胞死亡，随后触发适应性免疫反应和长期抗癌记忆。
头颈癌（图⽚来源：）2021年10⽉27⽇讯/⽣物⾕BIOON/ --Nanobiotix是⼀家处于后期临床阶段的⽣物技术公司，致⼒于开创颠覆性的、基于物理的治疗⽅法，为数百万患者带来⾰命性的治疗结果。
近⽇，该公司在2021年美国放射肿瘤学会（ASTRO）年会上公布了先导候选产品Nbtxr3治疗局部晚期头颈部鳞状细胞癌（LA-HNSCC）项⽬的新数据。
Nbtxr3是⼀种新型、潜在的⾸创（first-in-class）肿瘤学产品，由功能化氧化铪纳⽶颗粒组成，通过⼀次性瘤内注射给药，并通过放射激活。
该候选产品的物理作⽤机制（MoA）旨在通过放射激活时，在注射的肿瘤中诱导显著的肿瘤细胞死亡，随后触发适应性免疫反应和长期抗癌记忆。
考虑到物理MoA，Nanobiotix相信Nbtxr3可以扩展到任何可通过放疗治疗的实体肿瘤和任何治疗组合，特别是与免疫检查点抑制剂。
2020年2⽉，美国FDA已授予Nbtxr3快速通道资格（FTD）：联⽤或不联⽤西妥昔单抗（cetuximab），⽤于治疗不适合铂类化疗的LA-HNSCC患者。
此次公布的数据来⾃⼀项多中⼼、开放标签、⾮随机、剂量递增和剂量扩展1期研究（Study102 Expansion），该研究正在评估Nbtxr3作为由放疗激活的单⼀药物，治疗不符合顺铂化疗资格且对西妥昔单抗不耐受的难治性⽼年和体弱LA-HNSCC患者的疗效和安全性。
数据显⽰，在可评估⼈群（n=41）中，中位总⽣存期（mOS）为18.1个⽉，中位⽆进展⽣存期（mPFS）为10.6个⽉。
⽽在整个⼈群（所有接受治疗的可评估和不可评估患者；n=54）中，mOS为14.1个⽉，mPFS为9.4个⽉。
钌络合物的抗癌机理(三)：转铁运输
钌络合物的抗癌机理(三)：转铁运输
2016-08-23 13:44来源：内江洛伯尔材料科技有限公司作者：研发部
钌
化合物结构
肿瘤细胞对营养需要的增加与其细胞膜的高通透性有关,而血流的增加也会导致血管的形成,肿瘤细胞对金属药物的特异及非特异性吸收与这两个因素有关。
转铁蛋白(Tf)是一种分子量为80 kDa的单肽链糖蛋白,由两个叶组成,可调控对几种金属离子的特异性吸收。
其每一个叶通过两个酪氨酸、一个组氨酸、一个天冬酰氨和一个二齿的碳酸根与一个Fe3+结合,Fe3+的释放则可在低pH条件下发生,并可能引起组氨酸配体的质子化和P或N2叶中赖氨酸间氢键的变化。
除了每个Fe3+结合位点的组氨酸之外,人的Tf还包含其他17个可供结合的组氨酸,但是亲合度较低。
Fe结合位点的组氨酸对Ru(Ⅲ) 有高亲合性,和Tf-Fe (ⅢPⅡ) 不同, Tf-Ru (ⅢPⅡ)的还原可在生理条件下达到。
此还原可促进Ru从Tf的组氨酸位点释放,尤其是在肿瘤组织或者Tf 内体的低pH条件下,这样就可以使钌配合物被高度吸收并发挥其作用。
牛诱导型一氧化氮合成酶(iNOS )说明书
牛诱导型一氧化氮合成酶(iNOS )酶联免疫酶联免疫分析分析分析试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围检测范围：： 96T0.5U/L -16U/L使用目的使用目的：：本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS )含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛诱导型一氧化氮合成酶(iNOS )水平。
用纯化的牛诱导型一氧化氮合成酶(iNOS )抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入诱导型一氧化氮合成酶(iNOS )，再与HRP 标记的诱导型一氧化氮合成酶(iNOS )抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的诱导型一氧化氮合成酶(iNOS )呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中牛诱导型一氧化氮合成酶(iNOS )浓度。
试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品（32U/L ） 0.5ml ×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶 4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6显色剂B 液6ml ×1/瓶12密封袋1个标本标本要求要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
Western免疫印迹常见问题解答赛信通生物试
Western免疫印迹常见问题解答赛信通生物试做Western免疫印迹时，将膜孵育在稀释的抗体中轻轻摇动并4°C过夜。
抗体稀释在含5% 的w/v BSA或1X TBS, 0.1% Tween-20的脱脂奶粉当中。
注意：参考一抗的产品说明书选用合适的抗体稀释液和稀释比例。
A．所需溶液和试剂注意：所有溶液用Milli-Q或相当级别的水配制。
1. 20X 磷酸盐缓冲生理盐水(PBS):(#9808) 配制1L 1X PBS时，取50ml 20X PBS用950ml RODI水稀释到1L，混匀。
2. 1X SDS 上样缓冲液：(#7722, #7723) 62.5 mM Tris-HCl (pH 6.8，25°C), 2% w/v SDS, 10% 甘油, 50 mM DTT, 0.01% w/v 溴酚蓝或酚红。
3. 转膜缓冲液：25 mM Tris 碱, 0.2 M 甘氨酸, 20% 甲醇(pH 8.5)。
4. 10X Tris缓冲盐水(TBS):配制1L时，称取24.2g Tris碱，80g NaCl加入1L水中；调整pH为7.6（稀释至1X使用）。
5. 脱脂牛奶:(#9999) (重量体积比[w/v])6. 封闭液：含5% w/v脱脂奶粉，0.1% Tween-20的1X TBS。
配150ml时，在135ml水中兑入15ml 10X TBS，混匀；加入7.5g脱脂奶粉，使之溶解；边搅拌边加入0.15 ml Tween-20 (100%)，混匀。
7. 洗液:1X TBS, 0.1% Tween-20 (TBS/T)。
8. 牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin，BSA): (#9998).9. 一抗稀释液：含5% w/v脱脂奶粉或BSA，0.1% Tween-20的1X TBS。
配20ml时，在18ml水中兑入2ml 10X TBS，混匀；加入1gBSA或脱脂奶粉，使之溶解；边搅拌边加入20 μl Tween-20 (100%)，混匀。
牦牛血液铜锌超氧化物歧化酶cDNA克隆测序
条ｅＮ Ｄ Ａ链 进 行 Ｐ Ｒ扩 增 ， 克 隆测 序 ， Ｃ 并 测序 结 果 为 ４ ３ｐ 结果 证 实可从 牦 牛 血 液 中提 取 到 少量 合 成 ８ｂ 。
的铜 锌超 氧 化 物歧 化 酶 的 ｍＲ ＮＡ。
关键 词 ： 牦牛 ； 铜锌 超 氧 化物 歧 化 酶 ； 隆 克
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