PCR实验室设计讲课稿
PCR实验室设计
PCR实验室设计PCR实验室是进行聚合酶链反应（PCR）的地方，它是生物学研究中非常重要的一个实验室，用于复制和扩增DNA片段。
设计一个高效的PCR实验室，不仅需要考虑实验室的空间大小、设备等基本因素，还需要考虑实验室的安全性、环境条件和实验流程等细节。
下面将详细介绍如何设计一个高效的PCR实验室。
一、实验室布局：1.实验室面积：根据实验人员数量和需要进行PCR实验的频率确定实验室的面积，通常每个实验员需要4-6平方米的工作空间。
2.工作流程：实验室的布局应该考虑实验流程的合理性和高效性，例如将实验室分为样品准备区、PCR反应区和实验结果分析区等不同功能区域，便于实验员分工合作。
3.设备安放：PCR实验室需要安放PCR仪器、振荡器、离心机等设备，要确保设备之间有足够的空间，且易于实验员操作和维护。
4.实验室设施：实验室应该有充足的通风系统和洁净工作台，确保实验环境的清洁和无菌。
二、实验室设备：1.PCR仪器：PCR实验室必备的设备是PCR仪，用于DNA片段的扩增和复制，选择品牌好、性能稳定的PCR仪器。
2.离心机：用于离心PCR反应液，分离DNA片段和其他细胞成分，选择转速稳定、操作简单的离心机。
3.振荡器：用于振荡PCR反应管中的混合液，促使反应液均匀混合，选择振幅可调、操作便捷的振荡器。
4.电泳仪：用于检测PCR反应结果，分析DNA片段的长度和浓度，选择具有高分辨率、高灵敏度的电泳仪。
5.冰箱和冰盒：用于暂存PCR反应物和样品，确保PCR反应的成功进行。
6.光谱仪：用于检测PCR反应结果的准确性和一致性，选择灵敏度高、准确性好的光谱仪。
三、实验室安全：1.实验员培训：所有进入PCR实验室的人员都需要接受PCR实验操作的培训，了解实验室的安全规范和操作流程。
2.实验室标志：实验室内应该有清晰的标志和警示标识，提醒实验员注意实验室的安全规定。
3.废物处理：PCR实验产生的废物需要正确处理，避免对环境和人员造成危害。
PCR实验室设计
PCR实验室设计PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，用于在体外扩增特定DNA序列。
PCR实验室的设计需要充分考虑实验操作的安全性、便捷性和效率。
以下是一个PCR实验室的设计，以确保实验的高质量和可靠性。
一、实验室的布局与功能分区：1.实验准备区：包括实验布局和设备准备、试剂制备等工作台2.样本处理区：用于样本预处理和DNA/RNA提取，配备组织破碎器、离心机等设备3.反应体制备区：用于PCR反应混合液的制备，包括试剂台和标本分发器4.PCR扩增区：用于PCR反应，包括PCR仪和相应的电源、稳定器等设备5.分析区：用于PCR产物分析，包括凝胶电泳仪和镜下分析设备6.洗涤区：用于实验工具和试剂的清洗，包括洗涤槽和滤水装置7.废物处理区：用于废弃物和污染物的处理，包括污染物容器和化学废液处理设备二、实验室设备和仪器选择：1.PCR仪：根据实验室需要选择合适的PCR仪，可以同时进行多个PCR反应。
2.离心机：用于样本离心和试剂混合液离心。
3.能量稳定器：保证PCR反应的稳定温度。
4.凝胶电泳仪：用于PCR产物的凝胶电泳和分析。
5.UV照射装置：用于观察凝胶电泳结果。
6.温度控制设备：用于样本处理、制备反应液等过程中的温度控制。
7.洗涤设备：包括洗涤槽和滤水装置，用于实验工具和试剂的清洗。
8.试剂和试剂盒：根据实验需要选择合适的PCR试剂和试剂盒。
三、实验室安全防护：1.实验室操作人员必须熟悉PCR实验的操作流程和安全规范，并穿戴符合实验要求的防护服和个人防护装备。
2.实验室内的工作台面和器材应保持清洁，定期进行消毒处理。
3.实验室应设有紫外线灯，用于灭菌PCR仪和操作面的工作区域。
4.实验室内要有火灾报警器、灭火设备和紧急出口标识，以应对紧急情况。
5.明确废弃物的处理方法，遵循实验室废弃物处理规范。
四、实验室标识和操作指导：1.实验室应有明确的标识，包括实验室名称、实验室规章制度和安全提醒等标识。
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含反应混合液的离心管或试管在冰冻前都应 快速离心数秒。大多数用于扩增的试剂都应 冰冻贮存。为避免因单次反应取液而频繁的 冻融主贮存试剂，应分装冰冻贮存试剂溶液。 贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一 次测定所需的扩增反应数来决定。
主反应混合液的组成成份尤其是聚合酶的适 用性和稳定性通过预试验来检查，评价结果 必须有书面报告。对于"热启动"技术(在第一 个高温变性步骤后加入酶)，聚合酶也可不包 含在主反应混合液中。
清洁方法不当也是污染发生的一个主要原因， 因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩 增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应 有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
6
试剂准备区设置要求
· 超净工作台或试剂配置箱 · 试剂冰箱 · 可调移液器一套（四支）， · 配有带滤芯（防止气溶胶）及无 RNase酶的吸嘴 · 无粉的乳胶手套 · 涡旋器 · 专用工作服 · 无菌离心管
进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺 序，即只能从试剂贮存和准备区、标本制备 区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增 区)至产物分析区，避免发生交叉污染。
5
在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区 别标志的工作服，以便于鉴别。此外，当工作 者离开工作区时，不得将各区特定的工作服带 出。
10
标本制备区设置要求
· 生物安全柜 · 样本冰箱 · 可调移液器一套（四支）， · 带滤芯（防止气溶胶）及无RNase酶的吸 嘴 · 台式微型离心机（最大RCF 16000g，
最小RCF12500g）； · 试管架（Sarstedt 93.1428） · 无粉的乳胶手套 · 涡旋器 · 专用工作服 · 无菌离心管 · 加热块
膜上或微孔板上探针杂交方法(同位素标记 或非同位素标记)、琼脂糖凝胶电泳、聚丙 烯酰胺凝胶电泳、Southern转移、核酸测 序方法等。 目前国内的商品试剂盒绝大部分均采用非 同位素标记的微孔板上探针杂交方法，即 PCR-ELISA方法，也有膜上探针杂交方法。
PCR实验室设计PPT课件
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1
临床基因扩增检验实验室设计
❖ 依据：卫生部颁发的《临床基因 扩增检验实 验室管理暂行办法》 （卫医发[2002]10号）
❖ 《医疗机构临床基因扩增管理法》 (卫办医政发〔2010〕194号)
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2
实验室设计
❖ 空间充分合理的空间 ❖ 良好的照明 ❖ 空调设备
产物分析区
扩增区
标本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
专用走廊
工作流向
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6
A
扩增区
门 产物分析区
标本制备区 门
门
试剂准备区
门
外走廊
门
B
扩增及产物分 析区标本制备区来自门试剂准备区 门门
精选PP外T走课廊件
门
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8
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9
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3
临床PCR实验室设计的一般原则
❖ 各区独立
❖ 注意风向 “十六字口诀”
❖ 因地制宜
❖ 方便工作
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理想的PCR实验室设计A
产物分析区
扩增区
标本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
专用走廊
工作流向
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理想的PCR实验室设计B
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PCR实验室课件
目的
保护操作人员 保护环境 保护样品
临床PCR实验室工作流程
试剂储存准备
扩增试剂的配制 、分装和保存
标本制备区 装；核 酸提取、保存和加样
扩增反应区
扩增产物的测定、结 果分析、登记及报告
如使用全自动分析 仪，区域可适当合 并,三四区可合并为 扩增产物分析
PCR实验室平面设计
○在入口处设缓冲间○缓冲间比专用走廊更有意义。
有问题！
建筑结构
阴角 均采用
圆弧线条密封
洗手池
三、实验室设施、仪器设备
• 临床基因扩增检验实验室应有充分合理的 分区、空间、良好的照明和空调设备
• 实验室仪器设备应保养良好，实验用品要 达到相应的要求。加样器的校准？带滤塞 吸头的使用及质检？离心机？热循环仪？ 水浴箱和/或恒温干浴仪？
人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。
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O
9 超净工作台
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10 专用工作服和工作鞋
11 消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）
12 专用办公用品
仪器设备及管理
• 加样器：维护、校准 • 扩增仪：维护、校准 • 恒温干浴仪或水浴箱：维护、校准 • 离心机：维护 • 生物安全柜：维护 • 冰箱：维护
PCR实验室各区的设备配置表
序号
名称
实验二、PCR(不跑电泳)讲课教案
2
35 52 ℃（退火）
30s
72 ℃（延伸）
30s
3
1
72 ℃（补充延 伸）
10min
4
1
12℃
置于12 ℃ 可短时间 保存PCR 产物；若 需长时间 保存取出 后置-20 ℃ 保存
引物设计
PCR引物设计的原则
引物长度：16-30nt (20±2nt) G+C%：40-60% 四种碱基应随机分布，在3’末端不存在连续3个G或C 在引物内，尤其是在3’端不应存在二级结构（引物内互补配
Khorana (1971)等最早提出核酸体外扩增的设想：“经DNA变性，与合适 的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可合成tRNA基 因。” 1985年，Kary Mullis在Cetus公司工作期间，发明了PCR。Mullis要合成 DNA引物来进行测序工作，却常为没有足够多的模板DNA而烦恼。 1983年4月的一个星期五晚上，他开车去乡下别墅的路上,猛然闪现出“多 聚酶链式反应”的想法。 1983年12月，Mullis用同位素标记法看到了10个循环后的49 bp长度的第一 个PCR片段； 1985年10月25日申请了PCR的专利，1987年7月28日批准（专利号 4,683,202 ），Mullis是第一发明人； 1985年12月20日在Science杂志上发表了第一篇PCR的学术论文，Mullis是 共同作者； 1986年5月，Mullis在冷泉港实验室做专题报告，全世界从此开始学习PCR 的方法。
实验二、PCR(不跑电泳)
全触摸屏PCR仪（Bio-Rad）
什么是聚合酶链式反应（PCR）？
聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction， PCR）是模拟DNA的复制过程，在体外特异性扩 增DNA片段的方法，从而获得大量的同一序列 DNA。每经过一轮扩增，模板分子数增加一倍， 经过n次循环后，模板分子数变为原来的2n倍。
PCR实验室设计说明教案资料
PCR实验室设计说明PCR实验室分为四个区域，进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。
工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出，四区域分别为：1.试剂配制区n2.样品处理区n3.核酸扩增区n4.产物分析区n如使用全自动分析仪，区域可适当合并,三四区可合并为扩增产物分析。
各区的功能是：1.1.1 试剂准备区：扩增试剂的配制、分装和保存。
1.1.2 样品处理区：样品登记、分装；核酸提取、保存和加样。
1.1.3 扩增产物分析区：扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
1.2 扩增前区与扩增后区应严格分开，须使用不同的房间，两区之间最好有一定的间隔。
1.3 使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。
1.4 在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内：1.4.1 在生物安全柜内操作。
1.4.2 每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。
1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。
1.4.4 用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。
设计要求：PCR实验室可以是分散形式，也可以是组合形式,现要主要是以组合形式为主流。
完成一组PCR 实验，通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程，若实验工艺需要，还应增加样品粉碎过程。
一、分散形式PCR实验室所谓分散形式PCR实验室，是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远，呈分散布置形式。
对于这种布置形式的PCR实验室，由于各个实验之间不易相互干扰，因此无需特殊条件要求。
二、组合形式PCR实验室所谓组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置，组成独立实验区域的形式。
对于组合形式PCR实验室，由于各个实验间集中布置，容易造成相互干扰，因此，对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。
各室在入口处设缓冲间，以减少室内外空气交换。
pcr试验室设计的基本原则及建设要求讲课教案
精品文档是分子生物学研究和实验的常规方大幅增加，DNA能将微量的实验室广泛应用于生物学各个领域，例如：艾滋病检测，PCR法，指纹，个体识别，DNA乙型肝炎，禽疫病，癌基因的检测和诊断，今天为大家进行详解。
亲子鉴定及法医物证等等,实验室布局一.PCR实验室原则上为试剂准备区，样品制备区，扩增区和扩增PCR各工作区域应设并设有专用走廊，产物分析区四个单独的工作区域，不同功能的工作区应是分缓冲间，工作区与缓冲间宜安装连锁装置。
隔独立的，各工作区有明显的标志，不能直通，如果紧密连接，需安装物品传递窗。
前两区为扩增前区，后两区为扩增后区，即从：试剂扩增室——产物分析室，不得逆向准备区——样品制备区——PCR流动。
实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区，不得逆向流动。
一支20㎡每紫外灯波长为各工作区顶部应该安装紫外灯，254mm, 的紫外灯。
40W精品文档．精品文档二实验室各区功能及主要设备.试剂准备区：主要进行试剂的制备，分装和主反应混合液的1.试剂原材料制备。
试剂盒用于样品制作的材料应直接运送至该区域。
本区主要设备有必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的试剂。
天平，冰箱，离心机，加样器，振荡器等。
对于气流压力的控制，本。
+10Pa区并没有严格的要求，一般为样品制备区：主要进行样品的保存，核酸提取，贮存及其加2.的合成。
本区主要设备有冰箱，生物安DNA入至扩增反应管和测定全柜，离心机，加样器，振荡器等。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染，一般为。
+10Pa（来此外，DNA扩增区：3. 主要进行扩增。
已制备的DNA 模板自样品制备区）的加入和主反应混合液（来自试剂准备区）制备成反应混合液等也可在本区内进行。
本区主要设备有：扩增仪，冰箱，离精品文档．精品文档心机，加样器等。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶从本区漏出一般为-25Pa。
扩增产物分析区：扩增产物的测定。
PCR实验室设计-喜格实验室
近年来，随着生物技术的飞速发展，PCR(聚合酶链反应)已成为许多科研、临床诊断和基因工程领域的重要工具。
PCR实验室作为PCR技术的发源地和创新场所，在保证实验安全、提高反应效率的同时，更应注重实验环境的人性化设计和科学美感呈现。
1、PCR实验室的空间布局应合理规划，科学合理地分为样品处理区、试剂配制区和反应仪器区等功能区域。
在样品处理区，工作台应根据实验需求设置充足的操作空间和必要的工具。
并且，合适的防护措施如生物安全柜、消毒设备等也应该得到充分应用，确保实验人员的安全。
2、PCR实验室的插座布置和仪器设备的选择应具备高质量和高科技性，以提高实验的准确性和效率。
合理的插座布置不仅可以有效避免电缆交叉、乱绳及触碰事故，还可更好地保证设备的正常运行和统一管理。
而科技先进的PCR仪器，则可以提供超快速的温度控制和精准的反应过程监测，为科研人员提供更稳定、高效的实验平台。
3、PCR实验室的墙壁颜色、照明设计等也是不容忽视的要素。
一种稳定而温和的墙壁颜色能够刺激科学家的思绪，并提供良好的工作氛围;适宜的光线照明则能提高实验手段的美观度和舒适度，减轻实验操作者的疲劳感，保障实验的稳定性和一致性。
4、PCR实验室必备的噪音控制措施也应当值得关注。
根据实验程序和设备噪音来源，合理设计和选用有效的隔音技术，既可以保证实验质量的稳定，又能提供安静的工作环境，提高科研人员的注意力和效率。
更为关键的是，一个完善的PCR实验室设计应综合考虑实验流程的顺畅和实验数据的管理。
必要的生物信息学软件和数据库安装、管理科学模型和图像分析软件等将有助于优化实验工作的进程和提升实验成果的质量。
综上可见，PCR实验室设计不仅仅是为了提高实验效率，更重要的是为科学工作者营造一个更舒适、更安全的工作环境，以激发其创造力和热情。
未来，我相信随着科技的不断进步和人们对科学精神的追求，PCR实验室设计将不断创新，为科学探索铺设康庄大道，让生命的奥秘在其中舞动华彩乐章!。
PCR实验室的设计
PCR实验室就是Clean Room，而洁净等级是根据PCR的工作需要而确定的。
1、主体结构：主体为彩钢板、铝合金型材。
室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝，从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。
结构牢固，线条简明，美观大方，密封性好。
2、标准的三区分隔和气压调节将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。
整个区域有一个整体缓冲走廊。
每个独立实验区设置有缓冲区，同时各区通过气压调节，使整个PCR 实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。
可打开缓冲区Ⅰ，缓冲区Ⅱ和PCR 扩增区的排风扇往外排气，在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口，空气通过回风口向室内换气。
3、消毒在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯，供消毒用。
在试剂准备区和标本制备区还设置移动紫外线灯，对实验桌进行局部消毒。
4、机械连锁不锈钢传递窗试剂和标本通过机械连锁不锈钢（不建议使用电子连锁方式）传递窗传递，保证试剂和标本在传递过程中不受污染（人物分流）。
5、地面地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面，整体性好。
便于进行清扫，耐腐蚀。
没有条件的也可采用水磨石地面，或大块的瓷砖（至少800mm×800mm）接缝需要小于2mm。
6、照明灯具要选用净化灯具，能达到便于清洗、不积尘的特点。
在建设的过程中应注意：●规范的安装流程和全面的服务流程。
●严格按照规范科学设计的安装流程。
●安装前需要确定以下安装条件，如：电源电压，电源进线位置，电话网络线进线位置，进水水压，最小安装空间，地面平整度，通风孔、进水管和下水管的位置等，理想状态的空间尺寸和通风口尺寸样本处理区PCR 即聚合酶链式反应，是分子生物学研究和实验的常规方法，也是生物学、医学临床等领域广泛应用的实验技术。
其特点是能将微量的DNA大幅增加。
实验室分为四个区域，进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。
PCR技术讲稿
PCR技术讲稿1 PCR的概念2 PCR技术的创建PCR的最早设想Khorana(1968年诺贝尔医学奖得主)的设想：“经过DNA变性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆基因”。
是的，当时Khorana实验室已具备了进行PCR的条件，遗憾的是没有付诸实践。
核酸体外扩增最早设想被遗忘的原因：由于当时很难进行测序和合成寡核苷酸引物，且当时(1970年)Smith等发现了DNA限制性内切酶，使体外克隆基因成为可能，所以，使Khorana等的早期设想被人们遗忘。
而正是Mullis等人把PCR技术引向了实际应用。
PCR的实现Mullis 在“偶然想出的聚合酶链反应”一文中写到：“这种简单得令人惊奇，可以无限量地拷贝DNA片段的方法是在不可想象的情况下，即驾车行驶在月色下的加利福尼亚山间公路上时想出来的”。
开始是使用大肠杆菌DNA聚合酶Klenow片段来扩增人基因组中的特异片段。
由于该酶不耐热，因此，每次加热变性DNA后都要重新补加Klenow酶。
在操作多份标本时，这一过程耗时，费力，且易出错。
因此最初的PCR技术相当不成熟，在当时是一种操作复杂、成本高昂、“中看不中用”的实验室技术。
PCR的改进与完善1988年初，Keohanog通过对所使用的酶的改进，提高了扩增的真实性。
耐热DNA聚合酶的应用使得PCR反应更易于自动化，继而PE-Cetus 公司推出了第一台PCR热循环仪，使该技术的自动化成为现实。
Mullis 等因此项技术于1993年获得诺贝尔化学奖。
对PCR技术的评论3 PCR的原理4 PCR的反应体系25-50μl体系为例10×PCR Buffer（Mg2+ Low: low activity；High: non-specific amplification）Primers（冻干引物于-20℃可保存1-2年，各1μm，即1pmol/μl ）dNTP (储存液5-10 mmol/L，反应终浓度20-200 μmol/L，4种dNTP浓度应相同以利忠实性)Template( DNA or RNA，RNA的扩增需首先逆转录成cDNA后才能进行正常PCR循环。
pcr实验教案
pcr实验教案PCR（聚合酶链反应）是一种重要的分子生物学技术，可以在短时间内扩增特定DNA片段。
本文将介绍一份PCR实验教案，旨在帮助学生更好地理解PCR原理和操作步骤。
一、实验目的1. 了解PCR的原理和应用；2. 掌握PCR实验的基本操作步骤；3. 培养实验操作的仔细和规范。
二、实验材料与设备1. PCR试剂盒（含有DNA模板、引物、聚合酶等）；2. 离心机；3. PCR仪；4. 手套、口罩、实验台盖、无菌架等个人防护用品。
三、实验步骤1. 预热PCR仪至95℃；2. 将PCR试剂盒中的试剂均匀混合，并离心；3. 取出PCR试剂盒，加入待扩增的DNA样品；4. 将PCR试剂盒放入PCR仪，进行扩增反应；5. 根据所需扩增周期数和温度要求，设置PCR仪的程序；6. 扩增结束后，将PCR产物置于冰上保存。
四、实验注意事项1. 实验室内应保持干净整洁，避免污染PCR试剂；2. 操作过程中，尽量避免接触皮肤和眼睛，如有接触应立即用大量水冲洗；3. 实验前，务必戴上手套、口罩等个人防护用品，避免DNA 污染；4. 实验结束后，彻底清洗实验台面、仪器和试剂盒等。
五、实验结果与分析1. 扩增结果可通过电泳分析，观察PCR产物的大小和数量；2. 如出现预期大小的DNA条带，即表示PCR成功；3. 如未出现目标DNA条带，可能是反应条件不合适、试剂失效或污染等原因。
六、实验总结通过本次实验，我们深入学习了PCR的原理和操作步骤，并成功进行了PCR扩增反应。
PCR技术在医学、农业、环境等领域具有广泛的应用前景，掌握PCR技术对于我们今后的科研和实验工作具有重要意义。
七、延伸实验1. 设计不同引物和PCR条件，扩增不同目标序列；2. 尝试用PCR扩增其他类型的核酸分子，如RNA。
通过本实验教案的学习，我们不仅了解了PCR的原理和操作步骤，还培养了实验操作的仔细和规范。
希望同学们能够通过实验的实际操作，更好地掌握PCR技术，为今后的科研工作打下坚实的基础。
临床PCR检测技术-实习生讲课
10、低头要有勇气，抬头要有低气。***5/15/2021 4:27:13 PM
11、人总是珍惜为得到。21.5.15**May-2115- May-21
12、人乱于心，不宽余请。***Saturday, May 15, 2021
13、生气是拿别人做错的事来惩罚自 己。21.5.1521.5.15**May 15, 2021
dNTP(dUTP 替代 dTTP)， 引物，模板，酶，Mg2+,
探针，UNG 酶
结果检测 琼脂糖凝胶电泳
实时荧光检测
结果报告 阴性或阳性
定量数值
琼脂糖凝胶电泳
定量PCR扩增曲线图
2.定量PCR的临床意义
对致病微生物核酸含量进行定量检测 弥补免疫检测的缺陷 缩短诊断的窗口期（如HBV,HIV） 对治疗过程进行药物疗效监测 用于基因表达方面的研究
16、业余生活要有意义，不要越轨。2021/5/ 152021/5/15M ay 15, 2021
17、一个人即使已登上顶峰，也仍要 自强不 息。2021/5/152021/5/ 152021/5/152021/5/15
反应程序 预变性 94C 循环
3min
94C
58C
45 s 30循环 45 s
pcr概述2000至2013年发表论文1280748篇323830pcr遗传分析pcr临床诊断pcr肿瘤研究一pcr概述二原理双链dna变性退火链延伸双链分成单链膜板与引物杂交dna合成不断重复二实验步骤一核酸提取1dna提取100ul浓缩液100ul血清吹打混匀12000g离心5min弃上清20ul提取液100煮10min模板二实验步骤2rna提取10ula液200ulb液震荡混匀8000g离心1min200uldepc乙醇65干燥10minrna模板8000g离心1min逆转录为cdna弃上清重复洗2次50ul血清3细胞或组织剧烈震荡400ul试剂1加入400ul试剂2震荡混匀12000g离心5min完全弃上清加入试剂3模板加样扩增杂交显色10二ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ增hbv引物168bp
PCR实验室建立及预防污染ppt课件
污染原因
(二) PCR试剂的污染:主要是由于在PCR 试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双 蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.
污染原因
(三) PCR扩增产物污染: 这是PCR反应中 最主要最常见的污染问题，因为PCR产物 拷贝量 大，远远高于PCR检测数个拷贝的 极限，所以极微量的PCR产物污染，就可 造成假阳就可形成假阳性。
扩增反应混合物配制和扩增区
• • • • 核酸扩增仪 微量加样器（覆盖1-1000ul） 可移动紫外灯（近工作台面） 消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处 理的离心管和加样器吸头（带滤心） • 专用工作服和工作鞋 • 专用办公用品
扩增产物分析区
视检验方法不同而定。基本仪器设备如下： 1、 微量加样器（覆盖1-1000ul） 2、 可移动紫外灯（近工作台面） 3、 消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、 加样器吸头（带滤心） 4、 专用工作服和工作鞋 5、 专用办公用品
污染原因
还有一种容易忽视，最可能造成PCR 产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液 体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比 较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及 污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而 污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷 贝，因而由 其造成的污染是一个值得特别 重视的问题.
防止污染的方法
(四) 防止操作人员污染，使用一次性手套、吸头、小离心管应 一次性使用。
(五) 设立适当的阳性对照和阴性对照，阳性对照以能出现扩增 条带的最低量的标准病原体核酸为宜，并注意交叉污染的可能 性，每次反应都应有一管不加模板的试剂对照及相应不含有被 扩增核酸的样品作阴性对照。
(六) 选择质量好的Eppendorf管，以避免样本外溢及外来核酸 的进入，打开离心管前应先离心，将管壁及管盖上的液体甩至 管底部。开管动作要轻，以防管内液体溅出。
PCR实验室7500SOP讲课稿
分子生物操作手册版本号：B修订号：0发布日期：文件标题：ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使用、维护、校准程序文件编号：LAB-SOP-FZSW-011 生效日期：编写人：审核人：发布部门：中心主任：批准人：其他：页码：第1 页，共4页【】ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使用、维护、校准程序-LAB-SOP-FZSW-0111.目的：确保ABI7500仪器的正确使用及正常运行2.适用范围：美国应用生物系统公司生产的ABI7500实时荧光定量PCR仪3.运行环境：电源：推荐配备合适的UPS或稳压器。
通风：仪器的通风应该没有阻挡。
温度：推荐实验室配备空调，温度应该控制在10～30℃之间。
湿度：20-80%；对于潮湿的省份，推荐实验室配备除湿机。
空间：易于操作，安全。
4.操作程序：4.1开关机程序：开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机面板上的绿灯亮后即可打开ABI7500系统软件，进行实验。
关机顺序：确认实验已经结束后，首先关闭ABI7500系统软件，然后关掉定量PCR仪主机的电源，最后关闭电脑。
4.2 创建绝对定量反应板文件：4.2.1依次选择 Start > Programs > Applied Biosystems 7500 >Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )，以启动 SDS 软件;或在桌面双击Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )图标。
4.2.2选择 File （文件） > New （新建）。
4.2.3在 New Document Wizard （新建文件向导）窗口中，从 Assay （实验）下拉列表中选择Absolute Quantification (Standard Curve)（绝对定量，标准曲线）。
接受 Container （反应板类型）和 Template （模板）字段中的默认设置（即分别为 96-Well Clear（空白96 孔板）和 Blank Document（空白反应板））。
PCR实验室设计-喜格实验室
大家好!如果你是一位科研爱好者，肯定对PCR实验室不陌生。
今天就要带领大家一起探索，如何打造梦幻PCR实验室，点燃科研热情!快来跟着喜格的脚步，一起进入科学的世界吧!1、我们来说说PCR实验室的“造型”。
相信大家都知道PCR是一种分子生物学实验技术，但是在实验室的设计中，我们可以大胆发挥想象力!让实验室不再呆板，而是充满科幻感。
可以选择银白色的墙壁和铝合金实验台，搭配各种现代化的设备，整个实验室就像是未来科技的秘密基地一样，让科研工作者感到充满了干劲!2、而实验室的工作环境也是关键。
我们可以考虑做一个开放式的实验室，大面积的玻璃窗让自然光充满整个空间，让科研工作者在灵感的启迪下更加专注于实验。
另外，我们还可以在实验室中设置一个舒适的休息区，提供咖啡、茶和零食，让大家在疲劳时能够得到片刻的放松，持续地激发创造力。
3、实验室的设备也是至关重要的。
我们可以选择最先进的PCR仪器和试剂盒，以确保实验的准确性和效率。
另外，我们还可以引入智能化系统，通过人工智能算法进行数据分析和挖掘，为科研工作者提供更多的参考和建议。
4、除了现代化的设备，实验室的氛围也是需要营造的。
我们可以举办定期的科研沙龙，邀请专家学者分享最新的科研成果和经验交流。
乐于分享和合作的氛围将激发科研工作者的创新潜能，使实验室成为一个科学思想碰撞的乐园。
5、我们还可以为实验室定制一套独特的实验制服，可以是酷炫的科幻风格，或者是有趣的卡通形象，让大家在工作中也能感受到快乐和幸福。
打造梦幻PCR实验室，不仅仅是为了工作，更是为了点燃科研热情。
让我们从实验室的设计开始，通过舒适的环境、现代化的设备和合作共享的氛围，激发科研人员的创新灵感，共同推动科学的进步!以上就是为大家带来的关于PCR实验室设计的文章，希望能给大家带来一些灵感和启示。
让我们一起努力，为科学事业贡献自己的一份力量!。
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P C R实验室设计
1 PCR实验室平面布局
PCR扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。
为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
PCR实验室平面布置示意图如图1所示
图1
2实验室空调通风系统设计及压力控制
PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。
同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
2.1试剂贮存和准备区
该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。
试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。
对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。
2.2标本制备区
该区域主要进行的操作为样本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。
2.3扩增反应混合物配制和扩增区
该区域主要进行的操作为DNA扩增。
此外，已制备的DNA模板 (来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。
为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。
个别操作如加样等应在超净台内进行。
2.4扩增产物分析区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。
本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
3污染的预防与控制
PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。
在实际工作中，常见的有以下几种污染类型：扩增产物的污染；天然基因组DNA的污染；试剂的污染以及标本间的污染。
由于一旦发生污染，实验就必须停止，直到找到污染源为止，而且实验结果必须作废，需重新进行实验。
所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费人力物力。
因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。
3.1工作区域的严格划分
（1）各个实验区域设置合理；
（2）各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或不同的地面颜色等），以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。
3.2合理的系统设置
（1）合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统；
（2）严格的气流压力控制，保证不同的实验区内不同的压力要求。
3.3 规范的操作
（1）扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训，经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作；
（2）在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。
此外，操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施；
（3）清洁工作及时、正确。
实验工作结束后，必须立即对本区进行清洁。
除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外，对一些实验设备还应进行高压消毒处理。
3.4严格的管理
（1）严格控制进出实验室的人员。
与实验无关的人员不得随意进出实验室，有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门；
（2）尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。
（3）扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧等；
（4）扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质，应特别注意实验人员的安全防护。
3.5完备的实验室配套设施
完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件，应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器，如超净工作台、离心机、加样器等。