小鼠实验胚胎技术 ppt课件
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《小鼠胚胎的收集》PPT课件
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小鼠附植前胚胎的收集与观察
——兽医产科学研究性学习
胚胎收集的目的及其意义
小鼠是生命科学研究中最常用的实验动物 ,小鼠 胚胎的收集、培养和移植已成为实验室进行胚胎 工程研究要掌握的基本技术。
胚胎的收集、培养技术可进一步挖掘动物的繁殖 潜力，为优良牲畜的大量繁殖，稀有动物的种族 延续提供有效的解决办法。在畜牧业和制药业等 领域发挥重要的作用，具有光明的应用前景。
实验流 程
前期准 备（超
排）
配种及 检栓
胚胎收 集与观
察
腹腔注射10IU PMSG（孕马血清促性腺 激素）
48小时后注射10IU HCG（人绒毛膜促性 腺激素）
检栓
实验采用年龄体重相似的小鼠１２只，随机分为３组， 每组３只，分别为０.５天组 １.在0.5天从 输卵管膨大部受精胚胎，1.5天和2.5天从输卵 管和部分子宫冲洗胚胎。
０.５天组 １.５天组 ２.５天组
２０ｘ
桑葚胚
结论
0.5天输卵管膨大部明显，可清晰得看到多个受精 卵，所以撕开膨大部就能够较集中得收集受精卵
1.5天输卵管膨大部消失，胚胎散在输卵管中，所 以选择从输卵管伞部用HTF培养液进行冲洗，将 胚胎冲出收集并观察
2.5天时，部分胚胎可能进入子宫，所以截取输卵 管及部分子宫，并用HTF培养液按1.5天冲洗步骤 进行冲洗收集，并观察
背景知识介绍：
哺乳动物的受精过程发生在输卵管内，大多数动 物的合子于排卵后的3~5天由输卵管进入子宫， 而小鼠胚胎进入子宫着床时间约为4天左右。
从供体收集胚胎就是在配种后或受精后的适当时 间，从超排供体回收其胚胎，以备给受体移植， 亦称胚胎回收或胚胎采集，简称采胚。采胚的数 量与采集时间、方法和检胚技术均有关系。
小鼠早期胚胎发育ppt课件
？ ？
7 Development 139, 3-14, 2012
Two possible mechanisms for the generation of multiple cell types and polarity
8 Development 139, 3-14, 2012
Mouse trophectoderm distinguish from inner cell mass regulated by Hippo signaling pathway
9 Dev Cell 16, 398-410, 2009
Cell position-dependent differentiation mediated by Hippo signaling
10 Development 139, 3-14, 2012
Mouse embryo development from fertilization to gastrulation
？
15 Development 139, 3-14, 2012
Emerging asymmetry and establishment of anteriorposterior polarity in the E5.75 mouse embryo
Axis of Proximal & Distal
Axis of Anterior-Posterior
23 Development 139, 3-14, 2012
Mouse embryo development from fertilization to gastrulation
24 Development 139, 3-14, 2012
Early mouse embryo development and lineage segregation
7 Development 139, 3-14, 2012
Two possible mechanisms for the generation of multiple cell types and polarity
8 Development 139, 3-14, 2012
Mouse trophectoderm distinguish from inner cell mass regulated by Hippo signaling pathway
9 Dev Cell 16, 398-410, 2009
Cell position-dependent differentiation mediated by Hippo signaling
10 Development 139, 3-14, 2012
Mouse embryo development from fertilization to gastrulation
？
15 Development 139, 3-14, 2012
Emerging asymmetry and establishment of anteriorposterior polarity in the E5.75 mouse embryo
Axis of Proximal & Distal
Axis of Anterior-Posterior
23 Development 139, 3-14, 2012
Mouse embryo development from fertilization to gastrulation
24 Development 139, 3-14, 2012
Early mouse embryo development and lineage segregation
小鼠胚胎操作分析60页PPT
小鼠胚胎操作分析
16、人民应该为法律而战斗，就像为 了城墙 而战斗 一样。 ——赫 拉克利 特 17、人类对于不公正的行为加以指责 ，并非 因为他 们愿意 做出这 种行为 ，而是 惟恐自 己会成 为这种 行为的 牺牲者 。—— 柏拉图 18、制定法律法令，就是为了不让强 者做什 么事都 横行霸 道。— —奥维 德 19、法律是社会的习惯和思想的结晶 。—— 托·伍·威尔逊 20、人们嘴上挂着的法律，其真实含 义是财 富。— —爱献 生
ห้องสมุดไป่ตู้
谢谢！
51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
16、人民应该为法律而战斗，就像为 了城墙 而战斗 一样。 ——赫 拉克利 特 17、人类对于不公正的行为加以指责 ，并非 因为他 们愿意 做出这 种行为 ，而是 惟恐自 己会成 为这种 行为的 牺牲者 。—— 柏拉图 18、制定法律法令，就是为了不让强 者做什 么事都 横行霸 道。— —奥维 德 19、法律是社会的习惯和思想的结晶 。—— 托·伍·威尔逊 20、人们嘴上挂着的法律，其真实含 义是财 富。— —爱献 生
ห้องสมุดไป่ตู้
谢谢！
51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
小鼠胚胎发育实验设计 ppt课件
定大小、时期以及胚胎个数。 四．实验结果与讨论
结果：对鼠胚形态进行详细描述。 讨论：通过不同时期鼠胚的形态观察，讨论鼠胚正处于什么发育
时期。
ppt课件
4
小鼠的性别鉴定
识别要点是：
①雄性的生殖器与肛门之 间的距离较远，雌鼠较近；
②雄性的生殖器与肛门之间有毛；
③雄性的生殖器突起较雌鼠大；
④雌鼠乳头较雄鼠明显。
一．实验目的 二．实验原理 三．实验步骤 1. 每组同学将一只公鼠，三只母鼠合笼，并将自己组的鼠笼做好标
记（合笼时间 年/月/日/时 合笼地点）。 2. 每隔三到四天，以组为单位到实验室来观察公鼠和母鼠，内容包
括：保证小鼠有水有食；称重母鼠重量并记录。 3. 每次上课选取孕鼠解剖并确定鼠胚龄。 注意事项：解剖后的胚胎如前图那样放在培养皿中，并通过标尺来确
小鼠胚胎发育实验设计
裸鼠
昆ppt课明件白
C57 1
1982
1987
1998
2002
ppt课件
2
•实验目的及原理
通过小鼠胚胎发育实验设计，解剖不同 时期的孕鼠，观察不同时期的鼠胚并绘图和 描述，了解并掌握哺乳动物胚胎发育的基本 过程，并为将来深入研究其中的分子网络提 供坚实基础。
ppt课件
3
实验报告内容
离乳仔鼠性别鉴定主要以生殖器与肛门之间的距离长短及肛门与生殖器有无被毛为标志。
成熟后，雄性可见阴囊,雌性乳头明显而p易pt于课件区分。
5
小鼠解剖图
ppt课件
6
小鼠胚胎发育过程——从成熟卵子(E0)到植入期(E4.5)
ppt课件
7
受精卵
ppt课件
8
卵裂(2细胞期）
ppt课件
结果：对鼠胚形态进行详细描述。 讨论：通过不同时期鼠胚的形态观察，讨论鼠胚正处于什么发育
时期。
ppt课件
4
小鼠的性别鉴定
识别要点是：
①雄性的生殖器与肛门之 间的距离较远，雌鼠较近；
②雄性的生殖器与肛门之间有毛；
③雄性的生殖器突起较雌鼠大；
④雌鼠乳头较雄鼠明显。
一．实验目的 二．实验原理 三．实验步骤 1. 每组同学将一只公鼠，三只母鼠合笼，并将自己组的鼠笼做好标
记（合笼时间 年/月/日/时 合笼地点）。 2. 每隔三到四天，以组为单位到实验室来观察公鼠和母鼠，内容包
括：保证小鼠有水有食；称重母鼠重量并记录。 3. 每次上课选取孕鼠解剖并确定鼠胚龄。 注意事项：解剖后的胚胎如前图那样放在培养皿中，并通过标尺来确
小鼠胚胎发育实验设计
裸鼠
昆ppt课明件白
C57 1
1982
1987
1998
2002
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2
•实验目的及原理
通过小鼠胚胎发育实验设计，解剖不同 时期的孕鼠，观察不同时期的鼠胚并绘图和 描述，了解并掌握哺乳动物胚胎发育的基本 过程，并为将来深入研究其中的分子网络提 供坚实基础。
ppt课件
3
实验报告内容
离乳仔鼠性别鉴定主要以生殖器与肛门之间的距离长短及肛门与生殖器有无被毛为标志。
成熟后，雄性可见阴囊,雌性乳头明显而p易pt于课件区分。
5
小鼠解剖图
ppt课件
6
小鼠胚胎发育过程——从成熟卵子(E0)到植入期(E4.5)
ppt课件
7
受精卵
ppt课件
8
卵裂(2细胞期）
ppt课件
小鼠胚胎发育实验设计 ppt课件
一．实验目的 二．实验原理 三．实验步骤 1. 每组同学将一只公鼠，三只母鼠合笼，并将自己组的鼠笼做好标
记（合笼时间 年/月/日/时 合笼地点）。 2. 每隔三到四天，以组为单位到实验室来观察公鼠和母鼠，内容包
括：保证小鼠有水有食；称重母鼠重量并记录。 3. 每次上课选取孕鼠解剖并确定鼠胚龄。 注意事项：解剖后的胚胎如前图那样放在培养皿中，并通过标尺来确
离乳仔鼠性别鉴定主要以生殖器与肛门之间的距离长短及肛门与生殖器有无被毛为标志。
成熟后，雄性可见阴囊,雌性乳头明显而p易pt于课件区分。
5
小鼠解剖图
ppt课件
6
小鼠胚胎发育过程——从成熟卵子(E0)到植入期(E4.5)
ppt课件
7
受精卵
ppt课件
8
卵裂(2细胞期）
ppt课件
9
4细胞期
8细胞期
定大小、时期以及胚胎个数。 四．实验结果与讨论
结果：对鼠胚形态进行详细描述。 讨论：通过不同时期鼠胚的形态观察，讨论鼠胚正处于什么发育
时期。
ppt课件
4
小鼠的性别鉴定
识别要点是：
①雄性的生殖器与肛门之 间的距离较远，雌鼠较近；
②雄性的生殖器与肛门之间有毛；
③雄性的生殖器突起较雌鼠大；
④雌鼠乳头较雄鼠明显。
ppt课件
10
小鼠的致密桑椹胚
ppt课件
11
小鼠各阶段囊胚
ppt课件
12
小鼠原肠胚的 发育过程
ppt课件
13
小鼠各胚胎发育时期的形态变化
ppt课件
14
新生鼠
ppt课件
15
E11.5
ppt课件
16
E12.5
记（合笼时间 年/月/日/时 合笼地点）。 2. 每隔三到四天，以组为单位到实验室来观察公鼠和母鼠，内容包
括：保证小鼠有水有食；称重母鼠重量并记录。 3. 每次上课选取孕鼠解剖并确定鼠胚龄。 注意事项：解剖后的胚胎如前图那样放在培养皿中，并通过标尺来确
离乳仔鼠性别鉴定主要以生殖器与肛门之间的距离长短及肛门与生殖器有无被毛为标志。
成熟后，雄性可见阴囊,雌性乳头明显而p易pt于课件区分。
5
小鼠解剖图
ppt课件
6
小鼠胚胎发育过程——从成熟卵子(E0)到植入期(E4.5)
ppt课件
7
受精卵
ppt课件
8
卵裂(2细胞期）
ppt课件
9
4细胞期
8细胞期
定大小、时期以及胚胎个数。 四．实验结果与讨论
结果：对鼠胚形态进行详细描述。 讨论：通过不同时期鼠胚的形态观察，讨论鼠胚正处于什么发育
时期。
ppt课件
4
小鼠的性别鉴定
识别要点是：
①雄性的生殖器与肛门之 间的距离较远，雌鼠较近；
②雄性的生殖器与肛门之间有毛；
③雄性的生殖器突起较雌鼠大；
④雌鼠乳头较雄鼠明显。
ppt课件
10
小鼠的致密桑椹胚
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11
小鼠各阶段囊胚
ppt课件
12
小鼠原肠胚的 发育过程
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13
小鼠各胚胎发育时期的形态变化
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14
新生鼠
ppt课件
15
E11.5
ppt课件
16
E12.5
第五讲胚胎工程ppt课件
• 核移植技术最早由德国胚胎学家Spemann于1938 年首次提出，是为了研究细胞核的全能性和发育过 程中细胞核与细胞质的相互关系而建立的。早期的 研究工作主要集中在两栖类和鱼类；哺乳动物的核 移植研究始于1969年，但由于其卵母细胞较小而 且是体内发育，给研究工作带来一定难度，直到 1983年Mc Grath等建立了一套较为适用的方法并 成功地获得了克隆小鼠。
实验动物的胚胎工程
• 胚胎工程(embryo biotechnology)是利用人工方法影 响、改变动物胚胎品质发育和进程的一种生物技术。
基本内容
• 超数排卵、胚胎培养、胚胎保存、胚胎移 植、胚胎分割、性别鉴定、胚胎嵌合、细 胞核移植、体外受精、基因导入以及胚胎 干细胞
超数排卵
• 超数排卵是一种不正常的排卵，经外源激 素处理的雌性动物，改变其性周期，使之 按照预定时间超常量的排卵。
• 核移植技术在研究两个原核的作用，核质关系和加速繁殖优良实验动 物方面，将起着巨大的作用。
体外受精(in vitro fertilization, IVF)
• 体外受精技术是指通过人工操作使精子和 卵子在体外环境中完成受精过程的技术， 主要用于培育试管动物。体外受精技术为 遗传播种提供了新的选择，因为与体内受 精相比对正常精子的需求很少，从而提高 了具有性特征的精子利用率的可能性。
• 核移植是实现哺乳动物无性繁殖的重要手段，能产生遗传特性一致的 动物群，是培育超纯系实验动物的新途径和有效方法。
• 胚胎细胞核移植技术要比胚胎分割技术进了一步，它是用显微手术的 方法分离未着床的早期胚胎细胞，将其单个细胞导入去除染色体的未 受精的成熟的卵母细胞，经过电融合，让该卵母细胞质和导入的胚胎 细胞核融合、分裂、发育成胚胎。把该胚胎移植给受体，让其妊娠产 仔。目前知道的胚胎细胞核移植克隆的动物有小鼠、兔、山羊、绵羊、 猪、牛和猴子等。
实验动物的胚胎工程
• 胚胎工程(embryo biotechnology)是利用人工方法影 响、改变动物胚胎品质发育和进程的一种生物技术。
基本内容
• 超数排卵、胚胎培养、胚胎保存、胚胎移 植、胚胎分割、性别鉴定、胚胎嵌合、细 胞核移植、体外受精、基因导入以及胚胎 干细胞
超数排卵
• 超数排卵是一种不正常的排卵，经外源激 素处理的雌性动物，改变其性周期，使之 按照预定时间超常量的排卵。
• 核移植技术在研究两个原核的作用，核质关系和加速繁殖优良实验动 物方面，将起着巨大的作用。
体外受精(in vitro fertilization, IVF)
• 体外受精技术是指通过人工操作使精子和 卵子在体外环境中完成受精过程的技术， 主要用于培育试管动物。体外受精技术为 遗传播种提供了新的选择，因为与体内受 精相比对正常精子的需求很少，从而提高 了具有性特征的精子利用率的可能性。
• 核移植是实现哺乳动物无性繁殖的重要手段，能产生遗传特性一致的 动物群，是培育超纯系实验动物的新途径和有效方法。
• 胚胎细胞核移植技术要比胚胎分割技术进了一步，它是用显微手术的 方法分离未着床的早期胚胎细胞，将其单个细胞导入去除染色体的未 受精的成熟的卵母细胞，经过电融合，让该卵母细胞质和导入的胚胎 细胞核融合、分裂、发育成胚胎。把该胚胎移植给受体，让其妊娠产 仔。目前知道的胚胎细胞核移植克隆的动物有小鼠、兔、山羊、绵羊、 猪、牛和猴子等。
小鼠实验胚胎技术
100%
实验环境
确保实验室温度、湿度、光照等 环境条件适宜，保持实验室的清 洁和消毒。
80%
实验人员
进行相关培训，熟悉实验操作流 程和注意事项，确保实验操作的 准确性和安全性。
实验操作流程
胚胎获取
通过手术或体外受精等 方法获取小鼠胚胎。
胚胎培养
将胚胎放置在适宜的培 养环境中，进行培养和
观察。
胚胎操作
小鼠与人类在生殖系统方面有许多相似之处，因此 小鼠实验胚胎技术的结果可以为人类生殖健康提供 参考和借鉴。
辅助生殖技术
小鼠实验胚胎技术也可以用于辅助生殖技术，如体 外受精、胚胎移植等，以提高生殖成功率。
小鼠实验胚胎技术的意义
促进生物学研究
小鼠实验胚胎技术为生物学研 究提供了一种重要的工具，有 助于深入了解生命科学的奥秘 。
01
受精卵形成
02
卵裂期
03 桑椹胚
04
囊胚期
植入期
05
精子和卵子在输卵管中结合形成受精卵。 受精卵开始分裂，形成多个细胞。 细胞数目增加，胚胎呈桑椹状。 胚胎细胞形成囊胚腔，准备植入子宫。 胚胎植入子宫内膜，开始妊娠。
小鼠胚胎技术的分类
01
02
03
04
体外受精技术
将精子和卵子在试管中结合， 培养成早期胚胎后再移植到母 体子宫中。
详细描述
通过基因敲除或敲入技术，可以研究特定基因对小鼠生长发 育、代谢等方面的作用。这些研究有助于揭示基因与疾病之 间的关系，为疾病治疗和预防提供新的思路。
05
小鼠实验胚胎技术的挑战与展望
技术挑战
胚胎操作难度
小鼠胚胎在实验过程中容易受到 损伤，对实验技术和操作精细度 要求极高。
组织学与胚胎学小鼠受精过程课件
组织学与胚胎学小鼠受精过程课件《组织学与胚胎学》是生命科学的重要组成部分，而生命科学是事关人类生存、繁衍、社会进步和社会发展的重要科学。
组织学是研究机体微细结构及其相关功能的科学，包括细胞、组织、器官和系统。
胚胎学是研究从受精卵发育为新生个体的过程及其机制的科学，研究内容包括生殖细胞形成、受精、胚胎发育、胚胎与母体的关系、先天畸形等。
组织学与胚胎学同属形态学科，在长期发展中相互渗透、相互推进、密切关联。
作为一名生命科学爱好者，你会从中发现人体组织器官微观结构的精致美好，体会胚胎发育过程的神奇美妙。
作为一名医学生，只有系统掌握组织学与胚胎学知识，才能更好的学习和理解人体的生理过程和病理现象，为深入学习其它医学基础课程和临床课程奠定坚实的基础。
《组织学与胚胎学》是本科五年制临床医学专业，四年制护理学、医学检验、影像技术、药学、康复治疗学等专业，以及专科三年制护理学、药学、助产等专业医学生必修的专业基础课，属医学形态学课程，它包括组织学和胚胎学两门形态学科，既密切相关又相互独立。
组织学与基础和临床各学科都有一定的联系，尤其与解剖学、病理学、生理学、生物化学、免疫学的联系更为密切。
胚胎学为妇产科学、男科学、生殖工程、儿科学、肿瘤科学等临床学科提供了必要的基础知识，也是计划生育与优生学赖以发展的学科之一。
组织学主要是利用光镜、电镜等技术研究正常人体的微细结构及其相关功能的科学，其内容可分为基本组织、器官系统两大部分，组织学在器官、组织、细胞、亚细胞和分子水平上对机体进行研究。
胚胎学是研究从受精卵发育为新生个体的过程及其机制的科学，其内容可分为胚胎学总论和胚胎学各论两部分，总论即胚胎总体的发生过程以及胚胎与母体的关系，各论即胚体各个系统的发生过程，胚胎学主要研究人体的个体发生、发育与先天性畸形。
通过学习组织学与胚胎学，你会从中发现人体器官组织和细胞微观结构的精致美好，体会胚胎发育过程的神奇美妙，也只有系统掌握组织学与胚胎学知识，才能更好的学习和理解人体的生理过程和病理现象，为深入学习其它医学基础课程和临床课程奠定坚实的基础。
小鼠早期胚胎发育(课堂PPT)
(early) Epiblast
VE: visceral endoderm AVE: anterior VE DVE: distal VE
(late) Epiblast
Anterior neuroectoderm
Cell lineages in early mouse embryo
Morula
Primitive endoderm
Segregation and relocation of epiblast and PrE cells
Development 139, 3-14, 2012
Mouse embryo development from fertilization to gastrulation
？
Development 139, 3-14, 2012
Dev Cell 16, 398-410, 2009
Cell position-dependent differentiation mediated by Hippo signaling
Development 139, 3-14, 2012
Mouse embryo development from fertilization to gastrulation
Emerging asymmetry and establishment of anteriorposterior polarity in the E5.75 mouse embryo
Axis of Proximal & Distal
Axis of Anterior-Posterior
Cell movements in early mouse embryos
Inner Cell Mass
小鼠实验胚胎技术知识分享
核移植法流程图
目的基因克隆、纯化 胚胎干细胞或体细胞转染
阳性细胞筛选 阳性细胞提供核，进行去核卵母细胞核移植
胚胎体外培养至双细胞期 胚胎体内移植
产生克隆阳性个体 阳性个体的培育和建群
核移植法特点：
• 优点：可以进行基因定点的敲除和导入
后段工作相对简单
• 缺点：技术难度大
需要昂贵仪器
感谢：
感谢陈系古教授和马芸老师提 供部分的图片!!
Thanks！ 谢谢!
此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
• 超数排卵：给予发情间期的母鼠一定量的
促进卵泡成熟和卵子排放的激素，母鼠可 以同时段排放比正常排卵数多一倍以上的 成熟卵子。
PMSG（孕马血清促性腺激素）：促进卵泡 成熟。
HCG（人绒毛膜促性腺激素）：促进卵泡成 熟和卵子排放。
• 假母：性成熟的母鼠在与结扎公鼠交配后，
克隆目的基因 构建载体
精子 载体法
雄原核 注射法
胚胎 感染法曲细精管 注射法胚胎 干细胞法核移植 法
目的基因随机整合入动物个体基因组
目的基因转录、翻译 产生蛋白和表现功能
转基因动物
构建的载体通过同源重组方式 整合入动物个体基因组的特定位点
靶基因被删除或灭活
靶基因不能转录、翻译，不能产 生蛋白和表现功能
2. 胚胎-胚胎干细胞：一个8细胞期~桑椹 期的胚胎和多个胚胎干细胞在植物血凝 素的作用下，形成一个融合胚胎，移植 后发育成一个个体。 聚合法的特点：不需要昂贵仪器，但成 功率低。
二、显微注射法
1. 成体细胞：将成体细胞显微注射入囊胚期胚胎 囊腔，移植后发育成一个个体。
动物早期胚胎操作PPT课件
第3页，共76页。
一）胚胎移植的生理学基础
• 成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在外源激素 作用下，每个发情期的卵泡发育和排卵数可达十数个
• 每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育 • 早期胚胎处于游离状态 • 胚胎发育不存在免疫问题 • 胚胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组联系 • 胚胎的遗传性不受受体的影响
第39页，共76页。
第二节、胚胎分割技术
• 胚胎分割(embryo splitting)是运用显微操作系统将哺 乳动物附植前胚胎分成若干个具有继续发育潜力部 分的生物技术，运用胚胎分割可获得同卵孪生后代。
• 在畜牧生产上，胚胎分割可用来扩大优良家畜的
数量;在实验生物学或医学中，运用同卵孪生后代
作实验材料，可消除遗传差异，提高实验结果的 准确性。
第19页，共76页。
四）供体早期胚胎的收集
• 胚胎的收集是指在配种或输精后的适当时间， 从超排供体回收胚胎，以准备给受体移植， 简称采胚。
• 一般将配种当日记为0天，从配种后第二天 开始计算采胚天数。
• 不同动物早期胚胎发育速度和到达子宫的时 间各有差异（p314，表12-3），应根据采胚 目的来选择合适的采胚时间。
• 3. 药物因素：PMSG、FSH等 • 4. 激素的注射部位及超排程序
第16页，共76页。
三）同期发情
（一）同期发情（同步发情）：用人工的方法对母畜发情周期进 行同期化处理的方法叫同期发情。在胚胎移植技术中，受体子 宫和供体胚胎处于高度同步化状态才有利于移植胚的发育。
1.同期发情在畜牧生产中的意义：A.便于集中或定时对一群母畜 进行输精；B.可做到同期配种，从而使母畜的妊娠、分娩、幼 畜的培育相对集中，提高生产效率和经济效益。C.利于家畜的 胚胎移植技术的应用。
一）胚胎移植的生理学基础
• 成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在外源激素 作用下，每个发情期的卵泡发育和排卵数可达十数个
• 每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育 • 早期胚胎处于游离状态 • 胚胎发育不存在免疫问题 • 胚胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组联系 • 胚胎的遗传性不受受体的影响
第39页，共76页。
第二节、胚胎分割技术
• 胚胎分割(embryo splitting)是运用显微操作系统将哺 乳动物附植前胚胎分成若干个具有继续发育潜力部 分的生物技术，运用胚胎分割可获得同卵孪生后代。
• 在畜牧生产上，胚胎分割可用来扩大优良家畜的
数量;在实验生物学或医学中，运用同卵孪生后代
作实验材料，可消除遗传差异，提高实验结果的 准确性。
第19页，共76页。
四）供体早期胚胎的收集
• 胚胎的收集是指在配种或输精后的适当时间， 从超排供体回收胚胎，以准备给受体移植， 简称采胚。
• 一般将配种当日记为0天，从配种后第二天 开始计算采胚天数。
• 不同动物早期胚胎发育速度和到达子宫的时 间各有差异（p314，表12-3），应根据采胚 目的来选择合适的采胚时间。
• 3. 药物因素：PMSG、FSH等 • 4. 激素的注射部位及超排程序
第16页，共76页。
三）同期发情
（一）同期发情（同步发情）：用人工的方法对母畜发情周期进 行同期化处理的方法叫同期发情。在胚胎移植技术中，受体子 宫和供体胚胎处于高度同步化状态才有利于移植胚的发育。
1.同期发情在畜牧生产中的意义：A.便于集中或定时对一群母畜 进行输精；B.可做到同期配种，从而使母畜的妊娠、分娩、幼 畜的培育相对集中，提高生产效率和经济效益。C.利于家畜的 胚胎移植技术的应用。
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• 优点：感染率高 • 缺点：相对复杂
存在生物安全性问题 形成嵌合体 后期工作量大
小鼠实验胚胎技术
曲细精管注射法：
将外源基因注射入雄性动物的曲细精 管内，在精原细胞分裂过程中外源基因随 机整合入受体基因组，再通过精卵受精产 生带有外源基因的个体。
小鼠实验胚胎技术
曲细精管注射法流程图
目的基因克隆、纯化 逆转录病毒载体的构建 雄性个体曲细精管注射 外源基因随机整合入雄性生殖细胞 雌、雄动物自然交配
• 缺点：成功率低
小鼠实验胚胎技术
雄原核注射法：
通过显微注射的方法将外源基因 注射入受精卵的雄原核区；在受精卵 DNA复制过程中外源基因随机整合入 受体基因组。
小鼠实验胚胎技术
雄原核注射法流程图
目的基因克隆、纯化 显微注射至受精卵雄原核 受精卵DNA复制，外源基因整合 双细胞期胚胎假母体内移植
产生个体 外源基因阳性个体筛选 阳性个体的培育和建群
促进卵泡成熟和卵子排放的激素，母鼠可 以同时段排放比正常排卵数多一倍以上的 成熟卵子。
PMSG（孕马血清促性腺激素）：促进卵泡 成熟。
HCG（人绒毛膜促性腺激素）：促进卵泡成 熟和卵子排放。
小鼠实验胚胎技术
• 假母：性成熟的母鼠在与结扎公鼠交配后，
子宫内膜会处于增殖和接受胚胎着床的生 理状态。一旦有胚胎进入子宫腔内，胚胎 便可以在其子宫内着床发育成个体。
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术与应用
眼科学实验动物中心
小鼠实验胚胎技术
提纲
一、小鼠实验胚胎技术
1、母鼠超数排卵 2、胚胎收集 3、胚胎体外培养 4、假母制备 5、胚胎体内移植
二、应用:转基因动物模型的制作
1、定义 2、制作方法和原理
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
• 超数排卵：给予发情间期的母鼠一定量的
胚胎干细胞法流程图
目的基因克隆、纯化
转染胚胎干细胞及阳性细胞筛选
受体囊胚腔注射
核移植至受体卵母细胞
胚胎移植
胚胎移植
产生嵌合体
产生阳性克隆个体
嵌合体之间交配
外源基因纯合阳性个体筛选
阳性个体的培育和建群
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
嵌合体动物：
组成一个动物个体的细胞来源于两 个或两个以上的动物品系或品种。
小鼠实验胚胎技术
嵌合体动物制作方法：
一、聚合法 1. 胚胎-胚胎：两个8细胞期~桑椹期的胚
胎去透明带后，在植物血凝素的作用下， 互相粘附融合在一起重新形成一个胚胎， 移植后发育成一个个体。
小鼠实验胚胎技术
2. 胚胎-胚胎干细胞：一个8细胞期~桑椹 期的胚胎和多个胚胎干细胞在植物血凝 素的作用下，形成一个融合胚胎，移植 后发育成一个个体。
产生个体 外源基因阳性个体筛选 阳性个体小的鼠培实验育胚和胎建技术群
小鼠实验胚胎技术
曲细精管注射法特点：
• 优点：相对简单
不需要昂贵仪器
• 缺点：成功率较低
小鼠实验胚胎技术
胚胎干细胞法：
将外源基因转染胚胎干细胞，再通 过嵌合体技术或核移植技术产生带有外 源基因的胚胎干细胞来源的转基因个体。
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实点：相对简单、成功率高
不需要构建特殊的载体 单纯的外源基因DNA片段 成功率可达5%～25%
• 缺点：需要昂贵的仪器设备
显微注射仪、拉针仪、煅针仪
小鼠实验胚胎技术
胚胎感染法：
将外源基因连接上逆转录病毒载体， 再让逆转录病毒载体感染着床前后的胚 胎，外源基因随机整合入受体基因组。
小鼠实验胚胎技术
精体载体法流程图
目的基因克隆、纯化
与精子共孵育
卵子
体外受精或单精子注射
受精卵DNA复制，外源基因整合
双细胞期胚胎假母体内移植
产生个体
外源基因阳性个体筛选
阳性个小鼠体实的验胚培胎育技术和建群
精子载体法
小鼠实验胚胎技术
精体载体法特点：
• 优点：简单
不需要构建特殊的载体 单纯的外源基因DNA片段
转基因动物模型:
转基因动物模型(transgenic animal model)是指利用转基因动物 制作手段导入的人类疾病基因在其基 因组稳定整合、遗传并表达产生类似 于人类疾病的一类动物。
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
目的基因转录、翻译 产生蛋白和表现功能
转基因动物
小鼠实验胚胎技术
构建的载体通过同源重组方式 整合入动物个体基因组的特定位点
靶基因被删除或灭活
靶基因不能转录、翻译，不能产 生蛋白和表现功能
基因敲除动物
精体载体法：
将外源基因附着在精子上，通过体 外受精或单精子注射法将外源基因导入 受精卵；在受精卵DNA复制过程中外源 基因随机整合入受体基因组。
小鼠实验胚胎技术
胚胎感染法流程图
目的基因克隆、纯化、逆转录病毒载体的构建
体外感染着床前胚胎 （共孵育或显微注射）
体内感染着床前、后胚胎 （输卵管或子宫内注射）
胚胎移植
产生个体
筛选阳性嵌合体
嵌合体之间交配
外源基因阳性纯合个体产生、筛选
外源基因阳性个体的培育和建群
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
胚胎感染法特点：
鼠类动物、兔子有此特性，其他动物 需借助激素。
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术的应用 ----转基因动物模型的制作
小鼠实验胚胎技术
转基因动物:
转基因动物(transgenic animal) 是指以实验手段导入的外源基因在其 基因组内稳定整合并能遗传给后代的 一类动物。
小鼠实验胚胎技术
聚合法的特点：不需要昂贵仪器，但成
功率低。
小鼠实验胚胎技术
二、显微注射法
1. 成体细胞：将成体细胞显微注射入囊胚期胚胎 囊腔，移植后发育成一个个体。
2. 胚胎干细胞：将胚胎干细胞显微注射入囊胚期 胚胎囊腔，移植后发育成一个个体。
显微注射法的特点：需昂贵仪器，但成功率高。
小鼠实验胚胎技术
* 成体细胞不具有体外无限增殖能力，不 适于进行遗传修饰；而胚胎干细胞刚好 相反，所以普遍用于转基因动物特别是 基因敲除动物的制作。
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
LIM1基因敲除无脑小鼠
小鼠实验胚胎技术
震颤小鼠与多发性硬化
小鼠实验胚胎技术
震颤小鼠与多发性硬化
小鼠实验胚胎技术
转基因动物、基因敲除动物制作方法和原理
克隆目的基因 构建载体
精子 载体法
雄原核 注射法
胚胎 感染法
曲细精管 注射法
胚胎 干细胞法
核移植 法
目的基因随机整合入动物个体基因组
存在生物安全性问题 形成嵌合体 后期工作量大
小鼠实验胚胎技术
曲细精管注射法：
将外源基因注射入雄性动物的曲细精 管内，在精原细胞分裂过程中外源基因随 机整合入受体基因组，再通过精卵受精产 生带有外源基因的个体。
小鼠实验胚胎技术
曲细精管注射法流程图
目的基因克隆、纯化 逆转录病毒载体的构建 雄性个体曲细精管注射 外源基因随机整合入雄性生殖细胞 雌、雄动物自然交配
• 缺点：成功率低
小鼠实验胚胎技术
雄原核注射法：
通过显微注射的方法将外源基因 注射入受精卵的雄原核区；在受精卵 DNA复制过程中外源基因随机整合入 受体基因组。
小鼠实验胚胎技术
雄原核注射法流程图
目的基因克隆、纯化 显微注射至受精卵雄原核 受精卵DNA复制，外源基因整合 双细胞期胚胎假母体内移植
产生个体 外源基因阳性个体筛选 阳性个体的培育和建群
促进卵泡成熟和卵子排放的激素，母鼠可 以同时段排放比正常排卵数多一倍以上的 成熟卵子。
PMSG（孕马血清促性腺激素）：促进卵泡 成熟。
HCG（人绒毛膜促性腺激素）：促进卵泡成 熟和卵子排放。
小鼠实验胚胎技术
• 假母：性成熟的母鼠在与结扎公鼠交配后，
子宫内膜会处于增殖和接受胚胎着床的生 理状态。一旦有胚胎进入子宫腔内，胚胎 便可以在其子宫内着床发育成个体。
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术与应用
眼科学实验动物中心
小鼠实验胚胎技术
提纲
一、小鼠实验胚胎技术
1、母鼠超数排卵 2、胚胎收集 3、胚胎体外培养 4、假母制备 5、胚胎体内移植
二、应用:转基因动物模型的制作
1、定义 2、制作方法和原理
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
• 超数排卵：给予发情间期的母鼠一定量的
胚胎干细胞法流程图
目的基因克隆、纯化
转染胚胎干细胞及阳性细胞筛选
受体囊胚腔注射
核移植至受体卵母细胞
胚胎移植
胚胎移植
产生嵌合体
产生阳性克隆个体
嵌合体之间交配
外源基因纯合阳性个体筛选
阳性个体的培育和建群
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
嵌合体动物：
组成一个动物个体的细胞来源于两 个或两个以上的动物品系或品种。
小鼠实验胚胎技术
嵌合体动物制作方法：
一、聚合法 1. 胚胎-胚胎：两个8细胞期~桑椹期的胚
胎去透明带后，在植物血凝素的作用下， 互相粘附融合在一起重新形成一个胚胎， 移植后发育成一个个体。
小鼠实验胚胎技术
2. 胚胎-胚胎干细胞：一个8细胞期~桑椹 期的胚胎和多个胚胎干细胞在植物血凝 素的作用下，形成一个融合胚胎，移植 后发育成一个个体。
产生个体 外源基因阳性个体筛选 阳性个体小的鼠培实验育胚和胎建技术群
小鼠实验胚胎技术
曲细精管注射法特点：
• 优点：相对简单
不需要昂贵仪器
• 缺点：成功率较低
小鼠实验胚胎技术
胚胎干细胞法：
将外源基因转染胚胎干细胞，再通 过嵌合体技术或核移植技术产生带有外 源基因的胚胎干细胞来源的转基因个体。
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实点：相对简单、成功率高
不需要构建特殊的载体 单纯的外源基因DNA片段 成功率可达5%～25%
• 缺点：需要昂贵的仪器设备
显微注射仪、拉针仪、煅针仪
小鼠实验胚胎技术
胚胎感染法：
将外源基因连接上逆转录病毒载体， 再让逆转录病毒载体感染着床前后的胚 胎，外源基因随机整合入受体基因组。
小鼠实验胚胎技术
精体载体法流程图
目的基因克隆、纯化
与精子共孵育
卵子
体外受精或单精子注射
受精卵DNA复制，外源基因整合
双细胞期胚胎假母体内移植
产生个体
外源基因阳性个体筛选
阳性个小鼠体实的验胚培胎育技术和建群
精子载体法
小鼠实验胚胎技术
精体载体法特点：
• 优点：简单
不需要构建特殊的载体 单纯的外源基因DNA片段
转基因动物模型:
转基因动物模型(transgenic animal model)是指利用转基因动物 制作手段导入的人类疾病基因在其基 因组稳定整合、遗传并表达产生类似 于人类疾病的一类动物。
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
目的基因转录、翻译 产生蛋白和表现功能
转基因动物
小鼠实验胚胎技术
构建的载体通过同源重组方式 整合入动物个体基因组的特定位点
靶基因被删除或灭活
靶基因不能转录、翻译，不能产 生蛋白和表现功能
基因敲除动物
精体载体法：
将外源基因附着在精子上，通过体 外受精或单精子注射法将外源基因导入 受精卵；在受精卵DNA复制过程中外源 基因随机整合入受体基因组。
小鼠实验胚胎技术
胚胎感染法流程图
目的基因克隆、纯化、逆转录病毒载体的构建
体外感染着床前胚胎 （共孵育或显微注射）
体内感染着床前、后胚胎 （输卵管或子宫内注射）
胚胎移植
产生个体
筛选阳性嵌合体
嵌合体之间交配
外源基因阳性纯合个体产生、筛选
外源基因阳性个体的培育和建群
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
胚胎感染法特点：
鼠类动物、兔子有此特性，其他动物 需借助激素。
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术的应用 ----转基因动物模型的制作
小鼠实验胚胎技术
转基因动物:
转基因动物(transgenic animal) 是指以实验手段导入的外源基因在其 基因组内稳定整合并能遗传给后代的 一类动物。
小鼠实验胚胎技术
聚合法的特点：不需要昂贵仪器，但成
功率低。
小鼠实验胚胎技术
二、显微注射法
1. 成体细胞：将成体细胞显微注射入囊胚期胚胎 囊腔，移植后发育成一个个体。
2. 胚胎干细胞：将胚胎干细胞显微注射入囊胚期 胚胎囊腔，移植后发育成一个个体。
显微注射法的特点：需昂贵仪器，但成功率高。
小鼠实验胚胎技术
* 成体细胞不具有体外无限增殖能力，不 适于进行遗传修饰；而胚胎干细胞刚好 相反，所以普遍用于转基因动物特别是 基因敲除动物的制作。
小鼠实验胚胎技术
小鼠实验胚胎技术
LIM1基因敲除无脑小鼠
小鼠实验胚胎技术
震颤小鼠与多发性硬化
小鼠实验胚胎技术
震颤小鼠与多发性硬化
小鼠实验胚胎技术
转基因动物、基因敲除动物制作方法和原理
克隆目的基因 构建载体
精子 载体法
雄原核 注射法
胚胎 感染法
曲细精管 注射法
胚胎 干细胞法
核移植 法
目的基因随机整合入动物个体基因组