多种半透膜材料肝细胞相容性的对比研究_杨光辉

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肝癌细胞自分泌外泌体通过TGF-β1调控自身细胞学行为

肝癌细胞自分泌外泌体通过TGF-β1调控自身细胞学行为

肝癌细胞自分泌外泌体通过TGF -β1调控自身细胞学行为①李文华 王芊文② 王小芳 赵彬 耿玉庆 曹明珍 吴向未③ 陈雪玲(国家卫生健康委中亚高发病防治重点实验室,石河子大学医学院,石河子 832061)中图分类号 R392.12 R735.7 文献标志码 A 文章编号 1000-484X (2023)07-1442-04[摘要] 目的:研究肝癌Huh7细胞外泌体促进自身转移的机制。

方法:培养肝癌Huh7细胞,分离提取外泌体并进行鉴定。

将分离的外泌体与Huh7细胞共培养,Transwell 比较细胞迁移和侵袭能力;检测外泌体中TGF -β1水平;实时荧光定量PCR 和Western blot 分别检测TGF -β1、SMAD2/3、EMT 相关分子表达。

结果:提取的外泌体经Western blot 检出CD63、TSG101条带;透射电镜检测出双侧膜结构小体;纳米粒径分析显示颗粒大小集中在100 nm 左右。

外泌体中检出TGF -β1。

外泌体与Huh7细胞共培养,免疫荧光显示外泌体成功进入Huh7细胞。

与对照组相比,共培养组细胞迁移和侵袭大幅增加,TGF -β/Smad 通路相关分子活化,上皮标志物E -钙黏蛋白、p -Smad7表达下降,间充质标志物-波形蛋白表达升高。

结论:肝癌Huh7细胞自分泌的外泌体通过运输TGF -β1上调TGF/Smad 通路进而影响肝癌转移,探明了肝癌发展机制,为肝细胞癌治疗提供了新思路。

[关键词] 肝癌Huh7细胞;外泌体;TGF -β/SMADAutocrine exosomes in liver cancer cells are regulated by TGF -β1 autologous cell behaviorLI Wenhua , WANG Qianwen , WANG Xiaofang , ZHAO Bin , GENG Yuqing , CAO Mingzhen , WU Xiangwei , CHEN Xueling. NHC Key Laboratory of Prevention and Treatment of Central Asia High Incidence Diseases , School of Medicine , Shihezi University , Shihezi 832061, China[Abstract ] Objective :To study mechanism of liver cancer Huh7 cell exosomes to promote self -metastasis. Methods :Liver can‐cer Huh7 cells were cultured , exosomes were isolated , extracted and identified. Isolated exosomes were co -cultured with Huh7 cells , and Transwell was used to compare cell migration and invasion capabilities ; TGF -β1 level in exosomes was detected ; real -time fluores‐cent quantitative PCR and Western blot were used to detect expressions of TGF -β1, SMAD2/3, EMT related molecules. Results : Extracted exosomes was detected CD63 and TSG101 bands by Western blot ; transmission electron microscopy detected double -sided membrane structure small bodies ; nanometer particle size analysis showed that particle size was concentrated around 100 nm. TGF -β1was detected in exosomes. Exosomes were co -cultured with Huh7 cells , and immunofluorescence showed that exosomes successfully entered Huh7 cells. Compared with control group , co -culture group has significantly increasing cell migration and invasion , activatal TGF -β/Smad pathway related molecules , decreasing expressions of epithelial marker E -cadherin and p -Smad7, while increasing expression of mesenchymal marker -vimentin. Conclusion :Autocrine exosomes of liver cancer Huh7 cells up -regulate TGF/Smad pathway by transporting TGF -β1 and then affect liver cancer metastasis , further explores mechanism of liver cancer development and provides new ideas for treatment of hepatocellular carcinoma.[Key words ] Liver cancer Huh7 cells ;Exosomes ;TGF -β/SMAD肝细胞癌(hepatocellular carcinoma ,HCC )是全球第五大常见恶性肿瘤,同时也是第二大常见死亡原因,其发生机制与病毒感染或慢性疾病有关[1]。

喹硫平联合丙戊酸钠在老年抑郁症伴非自杀性自伤患者中的应用效果

喹硫平联合丙戊酸钠在老年抑郁症伴非自杀性自伤患者中的应用效果

- 58 -[9]杨君,黄洋辉.血清MMP-2、AFP 与MELD 评分对HBV 相关慢加急性肝衰竭患者预后的评估价值[J].临床与病理杂志,2019,39(8):1648-1653.[10]应高翔,杨英,吴凤天,等.慢加急性肝衰竭患者并发感染的特点及对诊断的影响[J].中华临床感染病杂志,2020,13(2):140-148.[11]刘春涛,武瑞,俞海燕,等.双重血浆分子吸附术对乙肝相关慢加急性肝衰竭患者细胞因子水平及预后的影响[J].中国卫生检验杂志,2019,29(12):1459-1462.[12]杨晴,耿强,孙长峰,等.血浆置换联合双重血浆分子吸附系统治疗乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭患者疗效的分析[J].中华传染病杂志,2021,39(7):430-435.[13]王临旭,刘浩,党肖,等.局部枸橼酸抗凝在DPMAS 联合低置换量血浆置换治疗慢加急性肝衰竭患者中的应用[J].现代生物医学进展,2021,21(14):2748-2752,2800.[14]黎春宇,明全.双重血浆分子吸附系统联合血浆置换治疗HBV 感染相关慢加急性肝衰竭的疗效[J].贵阳医学院学报,2021,46(10):1211-1215,1220.[15]张静,尹芳,罗贯虹,等.血浆置换序贯双重血浆分子吸附治疗慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者疗效及短期生存分析[J].实用肝脏病杂志,2019,22(1):85-88.[16]秦浩,王洋,魏金刚,等.半量血浆置换联合双重血浆分子吸附系统对慢加急性肝衰竭患者炎性反应、免疫功能及肝功能的影响[J].疑难病杂志,2020,19(5):485-489,509.[17]熊晏,龙黎,张卿,等.双重血浆分子吸附术(DPMAS)联合低置换量血浆置换术(LPE)对慢加急性肝衰竭患者血清Th1/Th2型细胞因子影响分析[J].贵州医药,2022,46(9):1352-1354.[18]左同坤,郑以山,汤庆,等.双重血浆分子吸附系统联合血浆置换用于慢加急性肝衰竭的价值[J].湖南师范大学学报(医学版),2020,17(3):79-83.[19]贾瑾堂,施文娟,王兆勋,等.乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者血清γ干扰素水平变化的意义[J].肝脏,2020,25(1):61-63.[20]陈真真,李海英,江倩男,等.3种评分系统对急性肝衰竭患儿预后的评估价值[J].中华实用儿科临床杂志,2021,36(18):1398-1402.(收稿日期:2023-03-22) (本文编辑:白雅茹)①江西省赣州市第五人民医院 江西 赣州 341000通信作者:张丽华喹硫平联合丙戊酸钠在老年抑郁症伴非自杀性自伤患者中的应用效果张丽华① 肖南昌①【摘要】 目的:探讨喹硫平联合丙戊酸钠治疗老年抑郁症(DD)伴非自杀性自伤(NSSI)患者的效果及对血清甲状腺激素指标的影响。

槲皮素脂质体纳米粒对肝癌HepG2细胞生长的抑制作用

槲皮素脂质体纳米粒对肝癌HepG2细胞生长的抑制作用

槲皮素脂质体纳米粒对肝癌HepG2细胞生长的抑制作用龙白;张阳德;张洋;刘祥彦【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2007(017)008【摘要】目的比较槲皮素脂质体纳米粒化后对肝癌HepG2细胞的抑制作用是否优于纯槲皮素.方法将不同浓度的槲皮素悬液与采用薄膜蒸发-高压均质法制备的槲皮素脂质体纳米粒,空白脂质体纳米粒槲皮素,加入到肝癌HepG2细胞悬液中进行培养,24h,48h后,加入MTT,观察细胞生长状况,分析抑制情况.结果 48h光密度值:同浓度的槲皮素脂质体纳米粒明显较槲皮素,空白脂质体纳米粒小,与5-Fu比较,明显较大,差异有显著性(P<0.05).结论在所使用的浓度范围内,槲皮素脂质体纳米粒对体外肝癌HepG2细胞生长的抑制作用更优于纯槲皮素.【总页数】3页(P911-913)【作者】龙白;张阳德;张洋;刘祥彦【作者单位】中南大学,卫生部肝胆肠外科研究中心,湖南,长沙,410008;中南大学,卫生部肝胆肠外科研究中心,湖南,长沙,410008;中南大学,卫生部肝胆肠外科研究中心,湖南,长沙,410008;中南大学,卫生部肝胆肠外科研究中心,湖南,长沙,410008【正文语种】中文【中图分类】R318;R735.7【相关文献】1.热休克诱导人肝癌HepG2细胞HSP70和P-gp的表达及槲皮素对二者的抑制作用 [J], 唐武兵;马佩球;倪宏;曾文铤;朱科伦2.槲皮素对肝癌HepG2细胞生长影响的体外研究 [J], 汤利华;宋建宁;李铁军3.鸦胆子油脂质体对人肝癌细胞株HepG2抑制作用的体内外研究 [J], 石磊;岳媛;王作仁4.槲皮素下调hTERT表达对肝癌HepG2细胞生长影响研究 [J], 宋建宁;汤利华;康楷;胡赞斓;Tong-Chuan He;李铁军5.槲皮素对裸鼠人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤生长的抑制作用 [J], 贺凯;刘明华;任美萍;李蓉因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

高表达UBE2S通过增加癌细胞干性促进肝癌的进程机制

高表达UBE2S通过增加癌细胞干性促进肝癌的进程机制

高表达UBE UBE22S 通过增加癌细胞干性促进肝癌的进程机制陈浩1,2,3,李振汉4,王明婷5,卢林明3,唐乾利2,罗良平11暨南大学临床医学博士后流动站,广东广州510632;2右江民族医学院研究生学院,广西百色533000;皖南医学院3病理解剖学教研室,4临床医学院,安徽芜湖241002;5南京市第一医院产科,江苏南京210006High expression of UBE2S promotes progression of hepatocellular carcinoma by increasing cancer cell stemnessCHEN Hao 1,2,3,LI Zhenhan 4,WANG Mingting 5,LU Linming 3,TANG Qianli 2,LUO Liangping 11Postdoctoral Research Station of Clinical Medicine,Jinan University,Guangzhou 510632,China;2Graduate School,Youjiang Medical University for Nationalities,Baise 533000,China;3Department of Pathology,4School of Clinical Medicine,Wannan Medical College,Wuhu 241002,China;5Department of Obstetrics,Nanjing First Hospital,Nanjing 210006,China摘要:目的探究UBE2S 在肝癌微环境不同细胞类型的特异性表达及对肝癌细胞干性的影响。

方法使用TCGA 数据库分析肝癌中UBE2S 转录水平及其启动子甲基化水平差异,使用CPTAC 数据库分析UBE2S 蛋白水平差异。

基于海藻酸钠衍生物的肝靶向纳米前药的构建及抗肿瘤活性研究

基于海藻酸钠衍生物的肝靶向纳米前药的构建及抗肿瘤活性研究

基于海藻酸钠衍生物的肝靶向纳米前药的构建及抗肿瘤活性研究郭华;杨承玲;王蔚;赖全勇;袁直【期刊名称】《高等学校化学学报》【年(卷),期】2014(000)008【摘要】The high viscosity of sodium alginate( ALG) causes its insufficient targeted ligand loading, and further influences the targeted recognition effect of nano-prodrug. Here, oligomeric ethylene glycol modified-sodium alginate( ALG-mOEG) was used as a carrier to improve the targeted-ligands loading. Results showed that ALG-mOEG significantly improved glycyrrhetinic acid ( GA ) loading compared with unmodified ALG (11.8% vs.6.9%, 1.97-fold increase) . On this basis, the liver targeted nano-prodrug( DOX-ALG-mOEG/GA-ALG-mOEG NPs ) was self-assembled via dialysis method by mixing GA-ALG-mOEG and DOX-ALG-mOEG. Cell cytotoxicity experiment showed that DOX-ALG-mOEG/GA-ALG-mOEG NPs inhibited HepG2 proliferation with an half maximal inhibitory concentration( IC50 ) value of 58.1 ng/mL while the IC50 of control group was 141.7 ng/mL;the tumor growth inhibition rate( IR) reached to 88.4%, improved by 11.5% com-pared to that of the control group. This study show that the liver targeted nano-prodrug based on ALG-mOEG can effectively improve the drug utilization, and provide a reference for the preparation of other polysaccharide targeted nano-prodrug.%利用寡聚乙二醇( mOEG)修饰海藻酸钠( ALG),有效降低了ALG的黏度,提高了其对疏水性肝靶向配体甘草次酸( GA)的负载量.结果表明,靶向材料( GA-ALG-mOEG)的 GA负载量为11.8%,是对照组( GA-ALG)的1.97倍.在此基础上,以物理交联的方式引入pH 响应的阿霉素前药( DOX-ALG-mOEG),制备了肝靶向纳米前药( DOX-ALG-mOEG/GA-ALG-mOEG NPs).细胞实验及抑瘤实验结果表明,该前药较对照组( DOX-ALG/GA-ALG NPs)具有更高的肝靶向性和药物利用率,其对肝癌细胞的半致死率浓度( IC50)为58.1 ng/mL,是对照组( IC50=141.7 ng/mL)的41%;动物实验结果显示,该前药的抑瘤率达到了88.4%,比对照组提高了11.5%.【总页数】8页(P1835-1842)【作者】郭华;杨承玲;王蔚;赖全勇;袁直【作者单位】南开大学高分子化学研究所,功能高分子材料教育部重点实验室,天津化学化工协同创新中心,天津300071;南开大学高分子化学研究所,功能高分子材料教育部重点实验室,天津化学化工协同创新中心,天津300071;南开大学高分子化学研究所,功能高分子材料教育部重点实验室,天津化学化工协同创新中心,天津300071;南开大学高分子化学研究所,功能高分子材料教育部重点实验室,天津化学化工协同创新中心,天津300071;南开大学高分子化学研究所,功能高分子材料教育部重点实验室,天津化学化工协同创新中心,天津300071【正文语种】中文【中图分类】O631;O636.9【相关文献】1.阿霉素前药纳米粒/姜黄素联合递送系统的构建及其抗肿瘤研究 [J], 褚丽萍;刘金剑;杨翠红;黄帆;刘鉴峰;张玉民2.1,8-萘酰亚胺类衍生物靶向DNA及抗肿瘤活性研究 [J], 胡晓琳3.乳糖化修饰海藻酸钠-多聚赖氨酸纳米粒的制备及其肝靶向性研究 [J], 宋策;张阳德;于丽;陈璐;于洪梅4.碳量子点-四价铂前药纳米粒子的合成及抗肿瘤活性研究 [J], 王忠瑞;刁永兴;赵聪;陈杨;朱晏;孙源;孙铁东5.海藻酸钠及其衍生物的抗肿瘤活性研究进展 [J], 聂小琴;邹祖豪;张碧君;卢军联;廖铭能因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

用双向电泳及蛋白质印迹技术筛选乳腺癌相关抗原

用双向电泳及蛋白质印迹技术筛选乳腺癌相关抗原

用双向电泳及蛋白质印迹技术筛选乳腺癌相关抗原朱丽英;杨柳;李兴;蒋朝晖;赵芳;杨国珍;潘卫【摘要】目的: 应用双向电泳及免疫印迹技术分析乳腺癌MCF-7细胞总蛋白,寻找乳腺癌相关抗原.方法: 提取乳腺癌MCF-7细胞总蛋白,双向电泳技术(2-DE)对总蛋白进行分离后转膜,将健康人血清(对照组)和乳腺癌患者血清(实验组)作为一抗进行蛋白质印迹(Western blotting)分析,寻找杂交蛋白点的差异.结果: MCF-7总蛋白双向电泳考马斯亮蓝染色图谱共检测到248个蛋白质斑点,Western blotting显示实验组抗原抗体反应点23个,对照组为13个,找到10个差异蛋白点.结论: 乳腺癌患者血清中的抗体表达水平有改变,这10个差异蛋白点有可能是乳腺癌相关抗原.【期刊名称】《贵阳医学院学报》【年(卷),期】2010(035)004【总页数】4页(P341-343,348)【关键词】乳腺肿瘤;免疫电泳,双向;印迹法,蛋白质;抗原【作者】朱丽英;杨柳;李兴;蒋朝晖;赵芳;杨国珍;潘卫【作者单位】贵阳医学院医学检验系,贵州,贵阳,550004;贵阳医学院医学检验系,贵州,贵阳,550004;贵阳医学院医学检验系,贵州,贵阳,550004;贵阳医学院医学检验系,贵州,贵阳,550004;贵阳医学院医学检验系,贵州,贵阳,550004;贵阳医学院医学检验系,贵州,贵阳,550004;贵阳医学院医学检验系,贵州,贵阳,550004【正文语种】中文【中图分类】R737.9乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤,每年大约有新发病例115万,死亡病例41万[1,2]。

尽管世界各国对乳腺癌的早期发现十分重视,仍有50%的乳腺癌患者未能得到早期发现[3]。

其中最主要的原因是缺乏有早期预测价值的乳腺癌标志物。

目前乳腺癌较好的生物学标志物被认为是CA153,但其对乳腺癌早期诊断的灵敏度很低,仅<30%,不适合乳腺癌的早期筛查[4]。

可用于3D肝细胞培养的甘草次酸修饰海藻酸钠凝胶球的制备

可用于3D肝细胞培养的甘草次酸修饰海藻酸钠凝胶球的制备

可用于3D肝细胞培养的甘草次酸修饰海藻酸钠凝胶球的制备杨美跃;王蔚;田志清;李营营;袁直【摘要】制备了叔胺改性甘草次酸[GA-N(CH3)2]修饰的海藻酸钠[ALG-GA-N(CH3)2],并在温敏性琼脂糖的辅助作用下,利用微流体技术获得了高通量、单分散且粒径可控的ALG-GA-N(CH3)2微凝胶.考察了Span 80含量、疏水配体取代度、样品浓度和水/油相流速对微液滴制备的影响.研究结果表明,叔胺基改性可显著改善甘草次酸的亲水性;在Span 80质量分数为2.0%,疏水配体取代度小于12%,样品浓度小于15 mg/mL,水相流速为1.5 mL/h,油相流速为6 mL/h条件下,可获得高通量、单分散及粒径为200μm的适用于细胞包封培养的微凝胶球.同时提供了一种三维培养肝细胞的新方法,为其在组织工程中的应用奠定了基础.%In order to obtain microgel sphere containing hydrophobic ligands which can be used for 3D liver cell culture. Firstly, the sodium alginate ( ALG ) was modified with tertiary ammonia-glycyrrhetinic acid [ GA-N( CH3 ) 2 ] . Then, the high flux, monodisperse, size controllable microgel of GA-N ( CH3 ) 2 modified ALG[ ALG-GA-N( CH3 ) 2 ] was prepared by the technology of microfluidics with the assistant of agarose. The influence of different preparation condition, such as concentration of Span 80, substitution degree of hydropho-bic ligand, concentration of ALG-GA-N( CH3 ) 2 , velocity of water/oil phase, on microdroplet preparation were also studied. The results showed that the introduction of tertiary ammonia can significantly improve the hydrophility of GA. And the monodisperse microgel with 200μm diameter, which could be used for cell enve-lope culture, could be obtained under the condition below:the mass fraction of Span 80 is 2.0%,hydrophobic ligand substitution degree is less than 12%, concentration of sample is less than 15 mg/mL, the velocity of water is 1. 5 mL/h and the velocity of oil is 6.0 mL/h. The microgel provides a new method for liver cell 3D culture and laid the foundation for its application in tissue engineering.【期刊名称】《高等学校化学学报》【年(卷),期】2017(038)002【总页数】9页(P326-334)【关键词】微流体;海藻酸钠;甘草次酸;微凝胶球;三维肝细胞培养【作者】杨美跃;王蔚;田志清;李营营;袁直【作者单位】南开大学功能高分子教育部重点实验室,高分子化学研究所,天津300071;南开大学功能高分子教育部重点实验室,高分子化学研究所,天津300071;南开大学功能高分子教育部重点实验室,高分子化学研究所,天津300071;南开大学功能高分子教育部重点实验室,高分子化学研究所,天津300071;南开大学功能高分子教育部重点实验室,高分子化学研究所,天津300071;南开大学天津市化学化工协同创新中心,天津300071【正文语种】中文【中图分类】O636;O648.17水凝胶是一种常见的生物医用材料[1],具有良好的可修饰性、亲水性及生物相容性,广泛应用于三维(3D)细胞培养[2]、组织工程支架构建[3,4]及药物筛选[5]等领域.近年来,将尺寸在几十至几百微米的微凝胶球应用于3D细胞球的包封培养备受关注.与普通水凝胶材料相比,微凝胶球具有以下优势:(1)可以快速高通量地制备负载细胞的凝胶球;(2)其尺寸可以满足氧气、营养物质的传入与细胞代谢物的排出;(3)可通过改变凝胶基质来调节凝胶球性质,避免细胞免疫反应,改善移植效果.目前,微凝胶的制备方法主要有乳液聚合法[6,7]及排阻滴定法[8]等.虽然微凝胶在3D细胞球培养方面具有一定优势,但微凝胶存在的一些问题也限制了其进一步的应用.首先,传统方法制备的微凝胶球尺寸较大;虽然大尺寸的细胞球可以更好地模拟体内细胞外生理环境,但不利于营养物质及细胞代谢物的进入与排出,容易造成凝胶球中心位置细胞的坏死,通常用于细胞培养的微凝胶球尺寸最好控制在200 μm以下[9~11];其次,微凝胶球的尺寸分布较宽,在实验中无法获得单分散的微凝胶球,进而影响后续研究的重复性;最后,传统方法制备的凝胶球形状会发生畸形,易诱发组织中的炎症反应.微流体技术是一种借助微液滴芯片的微流体精确操作技术[12],该技术不仅有利于扩大微凝胶的生产规模,而且可以精确控制微通道中的反应过程[13].利用微流体技术,通过调节两相溶液流速可以高通量地制备出粒径单一、大小可控的单分散微液滴,微液滴进一步凝胶固化则可以制备高通量、单分散及粒径可控的微凝胶球.Weibel等[14]利用流动汇聚型微流体系统成功制备出粒径为30 μm的单分散琼脂糖凝胶球;Gidrol等[15]利用流动汇聚型微流体系统制备了粒径分别为100,200和300 μm的包封有细胞的单分散基质(Matrigel)凝胶球.通过微流体系统可以将海藻酸钠/琼脂糖[16]或海藻酸钠/matrigel[17]成功制备成单分散的微凝胶球.为了维持体外细胞的高活性以接近体内的真实生理功能,模拟生物体内细胞外基质与细胞膜受体间的相互作用,利用功能性配体[如半乳糖[6,18~21],精氨酸⁃甘氨酸⁃天冬氨酸三肽(RGD)[22]等]对水凝胶骨架进行修饰,可以有效延长细胞在体外的培养时间,维持细胞的生理活性和功能.但目前微凝胶中使用的功能配体多为亲水性分子,而疏水性功能配体使用较少.这是因为修饰疏水配体后,聚合物的水溶性会受到极大影响,进而影响微凝胶球的制备.Guo等[23]发现,当海藻酸钠上甘草次酸(GA,肝靶向疏水配体)的修饰量超过6%时,海藻酸钠在水中形成沉淀.因此,研究疏水配体修饰聚合物微凝胶的制备,对于拓展微凝胶在3D细胞中的应用范围有着非常重要的意义.甘草次酸是甘草的主要活性成分,Negishi等[24]和Ishida等[25]证明鼠源肝实质细胞表面含有大量甘草次酸受体.Wang等[26~29]利用甘草次酸构建了多种肝靶向纳米给药系统,并证实甘草次酸与人肝细胞间同样具有特异性相互作用,因此甘草次酸修饰材料有望用于3D肝细胞球基质材料.但甘草次酸的强疏水性质限制了其在药物领域的应用[30].因此,本文以甘草次酸作为疏水配体模型,通过修饰叔胺基对其进行亲水改性;并将此亲水改性产物[GA⁃N(CH3)2]修饰到海藻酸钠上,通过微流体法将ALG⁃GA⁃N(CH3)2制成微凝胶球;考察了通道中水油两相流速、样品浓度、样品取代度、Span 80含量对微液滴制备的影响,为肝细胞的体外三维培养提供了一种可能的方法.1.1 试剂与仪器甘草次酸(GA,纯度≥98%),西安瑞鸿生物技术有限公司;海藻酸钠(ALG,黏度160 mPa·s),青岛生物科技开发有限公司;N,N⁃二甲基乙二胺(DMEDA)、N⁃羟基琥珀酰亚胺(NHS)、N,N′⁃二环己基碳二亚胺(DCC)、琥珀酸酐、4⁃二甲氨基吡啶(DMAP)、2⁃氯⁃1⁃甲基吡啶(CMPI)、四丁基氢氧化铵(TBAOH)、1⁃羟基苯并三唑(HOBt)和罗丹明B,上海阿拉丁生化科技股份有限公司;二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、氨水、乙二胺、盐酸、丙酮、三乙胺、氯化钠、乙醇、吡啶、Span 80和氯化钙,天津市试剂供销公司;异硫氰酸荧光素(FITC,纯度95.0%),梯希爱(上海)化成工业发展有限公司;芘荧光素,Alfa Aesar公司;4⁃羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液、液体石蜡,天津鼎国生物技术有限责任公司;中国胎牛血清,天津优抗生物技术有限公司;低溶点琼脂糖,北京普博欣生物科技有限责任公司.LSP01⁃2A型流体泵,保定兰格恒流泵有限公司;PMMA微流体芯片,苏州汶颢芯片科技有限公司;AVANCE型核磁共振波谱仪(1H NMR,400 MHz),瑞士Bruker公司;FTS 6000型红外光谱(IR)仪,美国Bio⁃rad公司;Zetasizer Nano⁃ZS90型动态光散射(DLS)仪,英国马尔文仪器有限公司;Ariall型流式细胞仪,美国BD公司;LCQ⁃Advantage型液质联用仪,美国Thermo⁃Finnigan公司;vario EL CUBE型元素分析仪,德国 Elementar公司;XPS⁃18S型生物显微镜,中国上海比目仪器有限公司;F⁃7000型荧光发射光谱,日本Hitachi公司;IX53型荧光显微镜,日本Olympus有限公司.1.2 GA衍生物的合成参照文献[29,31]方法合成30⁃羧丙酸酯甘草次酸酰胺(化合物2),合成路线见Scheme 1.将5.3 g (25.6 mmol)DCC和3.4 g(25.6 mmol)HOBt溶于30 mL二氯甲烷中,室温下搅拌30 min;向溶液中加入10.0 g(21.3 mmol)GA,搅拌20 min;加入2.3 mL(21.3 mmol)N,N⁃二甲基乙二胺,室温搅拌12 h;反应液旋转蒸发除去溶剂后使用色谱柱[流动相V(CH2Cl2)∶V(M2OH)∶V(NH3H2O)=15∶1∶1]提纯,将产物溶于乙酸乙酯中,于0℃下静置2 h,过滤,蒸干滤液,真空干燥,得到白色粉末状30⁃二甲胺乙基甘草次酸酰胺[GA⁃N(CH3)2,化合物2].将3.2 g(5.8 mmol)化合物2溶于30 mL无水吡啶中,依次加入4.7 g(47.0 mmol)琥珀酸酐和7.7 g(58.0 mmol)DMAP,加热至90℃反应12 h,得到黑色黏稠液体;加入一定量的二氯甲烷稀释,用稀盐酸洗涤,将洗涤后的二氯甲烷溶液浓缩,上色谱柱洗脱提纯.首先使用色谱的流动相除去DMAP与未反应的化合物2,之后再使用色谱的流动相得到棕色产物,即3⁃羧丙酸酯⁃30⁃二甲胺乙基甘草次酸酰胺[suc⁃GA⁃N(CH3)2,化合物3].将2.7 g(4.2 mmol)化合物3溶于20 mL二氯甲烷中,控制温度为-10℃,向溶液中加入1.05 g (5.04 mmol)DCC反应30 min,加入0.57 g(5.04 mmol)NHS后,室温搅拌12 h;过滤,将滤液缓慢滴加到30 mL含有70%(质量分数)乙二胺的二氯甲烷溶液中,室温搅拌12 h,反应体系用稀盐酸溶液洗涤1次,浓缩后使用色谱柱纯化,得到白色粉末状30⁃二甲胺乙胺酰基⁃3⁃胺乙胺酰基丙酸酯[en⁃GA⁃N(CH3)2,化合物4].1.3 ALG⁃GA⁃N(CH3)2的制备式中:MALG,Men⁃GA⁃N(CH3)2和MH2O分别为对应分子的相对分子质量;MN为氮的原子质量;N为样品中氮的质量分数.1.4 GA⁃N(CH3)2亲水性测试分别配制0.45 mol/L GA和GA⁃N(CH3)2的甲醇溶液,分别将20 μL GA和GA⁃N(CH3)2的甲醇溶液均匀涂抹在玻璃片上,充分晾干后,得到表面涂有GA及GA⁃N(CH3)2分子的平面,测试水接触角.将20 mL 3×10-7mol/L芘的丙酮溶液加入试剂瓶中,自然挥发除去丙酮,再加入10 mL不同浓度的聚合物ALG⁃GA⁃N(CH3)2(DS=5.68%)样品溶液,使芘的最终浓度为6×10-7mol/L;将聚合物⁃芘溶液在65℃摇床放置3 h,然后避光室温放置24 h;通过荧光分光光度计测定聚合物溶液中芘的发射光谱,设定激发波长为336 nm,固定激发狭缝宽2.5 nm,扫描速率100 nm/min,记录360~460 nm范围的发射光谱;以发射光谱中373和383 nm峰强比值(I373/I383)变化对聚合物浓度作图,计算临界聚集浓度(CAC值).1.5 凝胶球的制备配制10 mmol/L HEPES缓冲溶液,其中含有20%(质量分数)的中国胎牛血清及0.9%(质量分数)NaCl;以HEPES缓冲溶液作为溶剂,配制20 mg/mL的ALG⁃GA⁃N(CH3)2(DS=4.6%)溶液,使用0.45 μm滤膜过滤除去块状不溶物及杂质;再以不加血清的HEPES缓冲溶液为溶剂,配制20 mg/mL的低溶点琼脂糖溶液;以体积比1∶1混合使样品与琼脂糖的最终浓度均为10 mg/mL;将得到的混合溶液作为水相,含有质量分数为2.0%的Span 80的液体石蜡作为油相,在37℃恒温条件下,利用微流体芯片制备油包水的乳液,滴入上层铺有葵花籽油(5℃)的2 mg/mL CaCl2水溶液中进一步凝胶,离心,得到海藻酸钠钙凝胶球.2.1 en⁃GA⁃N(CH3)2及ALG⁃GA⁃N(CH3)2的制备由于GA具有较强的疏水性,修饰GA的海藻酸钠高分子链在水溶液中会出现相分离,而相分离会部分屏蔽甘草次酸作为功能性配体的效果.因此,为了减少GA修饰海藻酸钠在水溶液中的相分离行为,首先对甘草次酸进行了亲水改性.图1为GA及GA改性衍生物(化合物2~4)的1H NMR谱图.图1谱线b中δ 2.28(s,6H)处为6个H的单峰,证明在GA上成功引入了二甲胺基(化合物2).引入丁二酸酐后,化合物3分子间可成盐,使二甲胺基质子化,从而使二甲胺基上H原子化学位移向低场移动[δ 2.56(s,6H)].图1谱线d中,由于化合物4中引入的乙二胺导致分子内羧基消失,二甲胺基去质子化,使二甲胺基上的H的屏蔽作用恢复,故二甲胺基的6个H的化学位移又从δ 2.56(s,6H)移动到δ 2.28(s,6H).根据以上结果,证明合成了en⁃GA⁃N(CH3)2.图2给出ALG⁃GA⁃N(CH3)2的IR光谱.1781 cm-1处为GA⁃N(CH3)2中酯羰基的伸缩振动吸收峰,1658 cm-1处为酰胺Ⅰ带的羰基伸缩振动峰;1533 cm-1处为酰胺Ⅱ带N—H的弯曲振动峰[32,33],表明GA⁃N(CH3)2成功修饰到海藻酸钠上.利用元素分析仪检测N元素含量,通过式(1)分别计算出不同样品的取代度.2.2 CAC值测试为了验证甘草次酸的亲水改性效果,分别将20 μL GA和GA⁃N(CH3)2的甲醇溶液均匀涂抹于玻璃片上,测试水接触角.由图3可见,涂有GA⁃N(CH3)2的玻璃片表面接触角为57.0°,显著低于GA涂覆玻璃片(75.4°),说明GA⁃N (CH3)2的亲水性明显优于GA.为了进一步确认甘草次酸亲水改性效果,测定了取代度为5.68%的ALG⁃GA⁃N (CH3)2的CAC值. 图4给出芘荧光强度随不同ALG⁃GA⁃N(CH3)2浓度的变化曲线.通过其在373及383 nm处荧光比值变化,可以推算出ALG⁃GA⁃N (CH3)2的CAC值为0.11 mg/mL;而取代度为5.6%的ALG⁃GA的CAC值为66 μg/mL[34].对比结果表明,叔胺基团的引入显著改善了GA的亲水性,改性后的ALG⁃GA⁃N(CH3)2疏水性降低,导致CAC浓度升高,与水接触角测试结论一致.2.3 Span 80含量对微液滴形成的影响由于油/水界面存在较大的表面张力,会影响微液滴的形成.因此,为了能够成功地利用微流体液滴芯片制备微液滴,首先考察了油相中表面活性剂Span 80对微液滴的影响.图5给出Span 80质量分数分别为0,2%,5%,8%时液体石蜡作为油相的液滴形成情况.当Span 80的质量分数为0时,由于油水界面存在较大的表面张力,水相无法在油相剪切情况下形成离散的微液滴,而是成股流出. Span 80质量分数为5%和8%时,可以看到大小液滴交替产生,而且Span 80含量高时这种现象更加明显,使形成的液滴的粒径不均匀,无法满足对凝胶球尺寸均一性的要求.这种现象可能是由微流体机械泵产生的脉冲和Span 80的高含量所致,但具体的原因还需进一步的研究.综合以上结果,后续实验中均使用Span 80含量为2%的液体石蜡作为油相.2.4 流速对液滴粒径的影响为了实现微流体液滴技术对液滴的精确控制,考察了不同流速对制备的微液滴粒径的影响.分别控制油水两相中的任一相流速保持恒定,改变另外一相流速,观察微液滴粒径的变化.由图6(A)可见,水相流速(500 μL/h)保持恒定,而油相的流速依次为0.1,0.5,0.9,1.3,1.7和2.1 mL/h时,形成小液滴的尺寸依次减小;由图6(B)可见,油相流速(1.3 mL/h)保持恒定,而水相的流速依次为50,100,200,300,400和500 μL/h时,形成液滴的尺寸依次增大.这是因为,在油相流速固定时,水相流速越快,短时间内液滴积累量越多,形成的液滴尺寸越大;而在水相流速固定时,油相流速越大,则剪切力越大,形成的液滴尺寸越小.同时还可以观察到,相对水相流速而言,油相流速对液滴的粒径的影响更大,这主要是由于水相的流速比油相流速小一个量级所致.2.5 样品取代度及样品浓度对微液滴形成的影响海藻酸钠中改性GA的取代度会直接影响材料的性质,故本文对改性GA的取代度对微液滴形成的影响进行了考察.配制不同改性GA⁃N(CH3)2取代度的海藻酸钠溶液,观察样品溶液在微液滴芯片中的液滴形成情况.当取代度分别为4.3%,8.6%和12%时,均可以很好地形成球形液滴(图7);当GA⁃N(CH3)2取代度进一步增大时,液滴形成过程中出现拖尾使液滴拉长导致无法形成微液滴.出现这种情况主要是因为:改性后的甘草次酸仍具有一定的疏水性,其与疏水处理的PMMA芯片通道内壁具有一定疏水相互作用.随着改性GA取代度的增大,甘草次酸与通道内壁的疏水相互作用也会逐渐增强,导致利用微流体芯片制备微液滴过程中出现拖尾现象[35].Takeuchi等[36]发现,由于通道内壁表面受到蛋白和细胞残片沉积的影响使其由疏水变成亲水,因而流体在通过流道时出现拖尾现象.随着取代度的增加,样品溶液的黏度也会随之增大,导致分子链的运动出现弛豫现象,因此通过芯片中油相的剪切力制备液滴时,出现生成液滴的拖尾[35],从而影响制备液滴的精确度.溶液黏度也会影响微液滴形成.而浓度的差异同样会导致黏度的不同,因此考察了ALG⁃GA⁃N(CH3)2浓度对微液滴形成的影响.选取取代度为8.6%的样品,分别配制9,12,15和18 mg/mL的样品溶液,观察微液滴的形成情况(图8).当浓度相对较低时,浓度对液滴形成的影响没有显著的差别.随着样品浓度增加,样品溶液的黏度随之增大,当浓度为18 mg/mL时,液滴形成过程中出现轻微的拖尾,与取代度影响的结论一致.拖尾会导致产生的微液滴的体积出现偏差,从而影响微液滴的粒径,同时会伴随有小粒径产生[图8(D)].当样品溶液的浓度继续增加时,样品溶液黏度进一步增大,拖尾现象更加严重,导致液滴整体拉长,变成细流,无法形成微液滴.结合样品取代度与样品浓度对微液滴形成的影响,可以得出,随着液滴浓度的增加,样品黏度增大,单分散微液滴的形成难度逐渐增大;随着样品取代度增加,样品的疏水性增强,黏度随之增大,单分散微液滴的形成难度同样会逐渐增大.2.6 微凝胶球的制备为了制备粒径为200 μm的凝胶球,在微液滴的基础上对微液滴进行了固化形成凝胶球.制备海藻酸钠凝胶的常用方法是利用Ca2+作为固化剂,但如果将制备好的微液滴直接滴加到氯化钙溶液中,由于油水界面的界面张力作用将使微液滴无法维持完好的球状.低溶点琼脂糖(Low metling agarose)是在多糖链上引入羟乙基和甲氧基等基团后的琼脂糖衍生物,可在65℃熔化,30℃固化;由于其在37℃能保持流动状态,因而广泛应用于生物领域.利用低溶点琼脂糖的温敏性质在37℃条件下制备ALG⁃GA⁃N(CH3)2微液滴,通过降温使溶液先部分凝胶以维持微液滴的形状,这也有利于其通过油/水界面进入CaCl2溶液中,之后海藻酸钠进一步凝胶,最终形成凝胶球.由图9可见,凝胶球尺寸均一且形态良好. Nastruzzi等[16]也报道了相似的结果;Wang等[17]利用低温为液态,升温至37℃为固态的温敏性物质Matrigel,辅助海藻酸钠微液滴的固化,同样得到了单分散海藻酸钠微凝胶球.制备了一种甘草次酸衍生物修饰的海藻酸钠[ALG⁃GA⁃N(CH3)2],并探讨了芯片微流体方法构建3D微凝胶的可行性.结果表明,改性后甘草次酸的亲水性得到了明显改善,ALG⁃GA⁃N(CH3)2的CAC值较改性前有显著上升.微流体芯片结果显示,样品浓度、样品取代度、Span 80含量对微凝胶的成型具有显著影响,在水相流速为1.5 mL/h,油相流速为6.0 mL/h条件下,可获得200 μm的微液滴.此外,琼脂糖的加入可显著提高微凝胶球的固化效果.[1] Zhang Y.J.,Wang S.P.,Eghtedari M.,Motamedi M.,Kotov N.A.,Adv.Funct.Mater.,2005,15(5),725—731[2]Tibbitt M.W,Anseth K.S.,Biotechnol.Bioeng.,2009,103(4),655—663[3] Drury J.L.,Mooney D.J.,Biomaterials,2003,24(24),4337—4351[4] Place E.S.,George J.H.,Williams C.K.,Stevens M.M.,Chem.Soc.Rev.,2009,38(4),1139—1151[5] Elliott N.T.,Yuan F.A.N.,J.Pharm.Sci.,2011,100(1),59—74 [6] Sakai S.,Ito S.,Ogushi Y.,Hashimoto I.,Hosoda N.,Biomaterials.,2009,30(30),5937—5942[7] Curcio E.,Salerno S.,Barbieri G.,De B.L,Drioli E.,Bader A.,Biomaterials,2007,28(36),5487—5497[8] Lin R.Z.,Chang H.Y.,Biotechnol.J.,2008,3(9/10),1172—1184[9] Wu Y.,Zhao Z.,Guan Y.,Zhang Y.,Acta Biomater.,2014,10(5),1965—1974[10] Wang D.,Cheng D.,Guan Y.,Zhang Y.,Biomacromolecules,2011,12(3),578—584[11]Morimoto Y.,Tan W.,Tsuda Y.,Takeuchi S.,Lab.Chip.,2009,9(15),2217—2223[12] Kintses B.,Vliet L.D.,Devenish S.R.,Hollfelder F.,Curr.Opin.Chem.Biol.,2010,14,548—555[13] Wang R.,Yang W.,Song Y.,Shen X.,Wang J.,Zhong X.,Sci.Rep.,2015,5,9189[14] Eun Y.J.,Utada A.S.,Copeland M.F.,Takeuchi S.,Weibel D.B.,ACS Chem.Biol.,2011,6(3),260—266[15] Dolega M.E.,Abeille F.,Picollet D.N.,Gidrol X.,Biomaterials,2015,52,347—357[16]Capretto L.,Mazzitelli S.,Luca G.,Nastruzzi C.,Acta.Biomater.,2010,6(2),429—435[17] Wang Y.L.,Wang J.Y.,Analyst,2014,139(10),2449—2458 [18] Cho C.S.,Seo S.J.,Park I.K.,Kim S.H.,Kim T.H.,Hoshiba T.,Biomaterials,2006,27(4),576—585[19] Chua K.N.,Lim W.S.,Zhang P.,Lu H.,Wen J.,Ramakrishna S.,Biomaterials,2005,26(15),2537—2547[20] Yang J.,Goto M.,Ise H.,Cho C.S,Akaike T.,Biomaterials,2002,23,471—479[21] Park I.K.,Yang J.,Jeong H.J.,Bom H.S.,Harada I.,Akaike T.,Biomaterials,2003,24(13),2331—2337[22] Dai W.G.,Saltzman W.M.,Biotechnol.Bioeng.,1996,50,349—356[23] Guo H.,Yang C.L.,Hu Z.P.,Wang W.,Wu Y.K.,Lai Q.Y.,Yuan Z.,J.Mater.Chem.B.,2013,1(43),5933—5941[24] Negishi M.,Irie A.,Nagata N.,Ichikawa A.,Biochim.Biophys.Acta.Biomembr.,1991,1066(1),77—82[25] Ishida S.,Sakiya Y.,Ichikawa T.,Taira Z.,Biol.Pharm.Bull.,1993,16(3),293—297[26] Huang W.,Wang W.,Wang P.,Tian Q.,Zhang C.,Wang C.,Acta.Biomater.,2010,6(10),3927—3935[27] Huang W.,Wang W.,Wang P.,Zhang C.N.,Tian Q.,Zhang Y.,J.Mater.Sci.Mater.Med.,2011,22(4),853—863[28] Tian Q.,Wang X.H,Wang W.,Zhang C.N.,Wang P.,Yuan Z.,Nanomedicine.Nanotechnolog.,Biol Med.,2012,8(6),870—879 [29] Zhang C.,Wang W.,Liu T.,Wu Y.,Guo H.,Wang P.,Biomaterials,2012,33(7),2187—2196[30] Tian Z.,Yang C.,Wang W.,Yuan Z.,ACS.Appl.Mater.Interfaces.,2014,6(20),17865—17876[31] Beseda I.,Czollner L.,Shah P.S.,Khunt R.,Gaware R.,Kosma P.,Bioorg.Med.Chem.,2010,18(1),433—454[32] Song Y.J.,Liu F.,Sun B.,J.Appl.Polym.Sci.,2005,95(5),1251—1261[33] Song Y.J.,Liu C.G.,J.Appl.Polym.Sci.,2006,101(6),3781—3790[34] Pawar S.N.,Edgar K.J.,Biomacromolecules,2011,12(11),4095—4103[35] Song Y.,Sun Q.,Zhang T.,Jin P.,Han L.,J.Nanoparticle.Res.,2010,12(7),2689—2697[36] Tan W.H.,Takeuchi S.,Adv.Mater.,2007,19(18),2696—2701。

国内外干细胞牛人简介

国内外干细胞牛人简介

榜样的力量是无穷的。

每个领域都有取得杰出成就的成功人士,他们也是后生崇拜学习的偶像。

科研领域也不例外。

作为目前最热门的研究领域--干细胞,该领域的大牛都有谁?他们都在做什么?笔者总结了一下这个领域的牛人,分为国际篇、华人篇和国内篇三部分介绍。

本文仅代表笔者的个人观点,欢迎补充。

7 s2 z3 p- Z5 f. {) w/ n: l5 ]) ]3 ], I' c! f一、国际篇( Z2 S! S; q5 t, K& F) [+ S2 b! m2 L& u6 t. w8 s) j2 p山中伸弥(Shinya Yamanaka)# n5 D& A- m% v- Z5年前,提起Shinya Yamanaka,可能只有做胚胎干细胞的人略有耳闻,而现在他的名字在科研领域可谓是家喻户晓。

虽然在iPS之前,他也做出了一些重要的工作,如发现Nanog 和Eras在小鼠胚胎干细胞中的作用(2003,Cell;2003,Nature),但这些跟iPS相比,再好的工作光芒都会被掩盖,即使是CNS(Cell,Nature,Science)级别的工作。

传统的观点认为核移植是获得个体特异的多能干细胞的主要途径,但该方法技术难度高,成功率低,至今没有获得人的核移植胚胎干细胞。

笔者至今仍记得2007年初(刚进实验室)看到Shinya Yamanaka于2006年发表在Cell上关于iPS的论文时的兴奋心情。

我立刻意识到这项工作的重要性,虽然他们最初的结果并不完美,当时获得的iPS细胞按现在的标准只能算是半成品,因此部分人对这项工作的看法是半信半疑。

直到一年后,Shinya Yamanaka和Rudolf Jaenisch 同时在Nature上报道获得可以生殖系传递的iPS细胞,基本上打消了人们对这个发现的质疑,而随后越来越多的工作进一步证实这个发现。

虽然这两年内他的产出不多(2010年有分量的工作只有一篇PNAS),但仅凭2006年那篇论文已经使他成为诺贝尔奖最热门的候选人。

几种具二细胞型花粉植物精细胞的分离和融合

几种具二细胞型花粉植物精细胞的分离和融合

几种具二细胞型花粉植物精细胞的分离和融合
莫永胜;杨弘远
【期刊名称】《植物学报:英文版》
【年(卷),期】1992(034)009
【摘要】在5科8种具二细胞型花粉的植物中,通过'活体-离体技术'得到花粉管,从中分离出大量生活精细胞。

应用低渗-低酶法可有效地释放精细胞并有利于其纯化。

用聚乙二醇(PEG)的'小规模融合法'诱导了5种植物同种精细胞之间、唐菖蒲(Gladiolus gandavensis Van Houtte)与朱顶红(Hippeastrum vittatum Herb.)
异种精细胞之间、黄花菜(Hemerocallis minorMill.)精细胞与同种小孢子原生质体之间、朱顶红精细胞与萱草(Hemerocallis fulva L.)小孢子原生质体之间以及唐菖
蒲精细胞与同种花瓣原生质体之间的融合,均获得了具生活力的同核体或异核体。

二甲基亚砜(DMSO)能促进唐菖蒲花瓣原生质体对精细胞的摄取。

研究了影响分离和融合效果的若干因素。

【总页数】10页(P688-697)
【作者】莫永胜;杨弘远
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】Q942.5
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卡维地洛调节ApoE-/-小鼠肝脏ACAD10、mTOR抗动脉粥样硬化

卡维地洛调节ApoE-/-小鼠肝脏ACAD10、mTOR抗动脉粥样硬化

网络出版时间:2023-11-3016:13:56 网络出版地址:https://link.cnki.net/urlid/34.1086.R.20231130.1319.018卡维地洛调节ApoE-/-小鼠肝脏ACAD10、mTOR抗动脉粥样硬化王 鹏,袁 瑶,张海港,刘 雅(陆军军医大学药学与检验医学系药理学教研室,重庆 400038)收稿日期:2023-07-20,修回日期:2023-09-27基金项目:重庆市自然科学基金资助项目(Nocstc2019jcyj-msxmX0609)作者简介:王 鹏(1989-),男,硕士生,研究方向:动脉粥样硬化代谢调控,E mail:18098331947@163.com;刘 雅(1979-),女,博士,教授,硕士生导师,研究方向:心血管代谢疾病及其药物防治,通信作者,E mail:li uya1979@hotmail.comdoi:10.12360/CPB202308063文献标志码:A文章编号:1001-1978(2023)12-2251-07中国图书分类号:R 332;R322 47;R543 5;R575 5;R972摘要:目的 初步探明卡维地洛抗动脉粥样硬化的作用。

方法 8周龄ApoE-/-小鼠用高脂高胆固醇饲料喂养,随机分为对照组(Control)和卡维地洛组(Carvedilol),分别给予5g·L-1羧甲基纤维素溶液和卡维地洛(12 5mg·kg-1)灌胃,每天一次,共计10周。

组织切片观察头臂干、肝脏、胰腺和脂肪病理形态学变化;检测血糖、血脂、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)水平、肝脂肪酸β 氧化酶水平;进行葡萄糖耐量和胰岛素耐量实验;Real TimePCR和West ernblot分别检测肝脏ACAD10和mTOR蛋白及mRNA表达。

结果 与Control组相比,Carvedilol组小鼠动脉粥样硬化斑块面积(P<0 01)和内-中膜比值(P<0 05)和均明显减少,动脉损伤明显减轻,葡萄糖和胰岛素耐量增强,外周血高密度脂蛋白胆固醇含量明显增加(P<0 05)。

脂质运载蛋白2在肝脏疾病发生发展中的作用

脂质运载蛋白2在肝脏疾病发生发展中的作用

2脂质运载蛋白2在肝脏疾病发生发展中的作用廖争光,卫诗蕙,杜丹玉,孙 立,袁胜涛中国药科大学药物科学研究院,江苏省新药筛选重点实验室,南京210009摘要:脂质运载蛋白2(LCN2)最初是从感染猴空泡病毒40的小鼠肾细胞培养物中纯化得到的一种分泌糖蛋白,在炎症期间对细胞稳态控制以及应对细胞应激或损伤的反应中发挥着关键作用,被认为是风湿病、癌症、肝脏疾病和炎症性疾病的一种潜在的生物标志物。

已有研究表明,LCN2在肝实质细胞和非实质细胞中表达并分泌入血,与急性肝损伤、肝硬化、病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病以及肝细胞癌等的发生发展密切相关。

本文总结了LCN2与肝脏疾病发病机制相关的动物实验和临床研究,以期为肝脏疾病的防治提供新思路和治疗靶点。

关键词:肝疾病;脂质运载蛋白2;病理过程基金项目:国家自然科学基金(81773766)Roleoflipocalin-2inthedevelopmentandprogressionofliverdiseasesLIAOZhengguang,WEIShihui,DUDanyu,SUNLi,YUANShengtao.(JiangsuKeyLaboratoryforNewDrugScreening,InstituteofPharmaceuticalResearch,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210009,China)Correspondingauthor:YUANShengtao,yuanst1967@163.com(ORCID:0000-0002-5626-6532)Abstract:Lipocalin-2(LCN2)isasecretedglycoproteinoriginallypurifiedfrommousekidneycellsinfectedwithsimianvirus40andplaysakeyroleinthecontrolofcellularhomeostasisduringinflammationandtheresponsetocellularstressorinjury,anditisconsideredapotentialbiomarkerforrheumaticdiseases,cancer,liverdiseases,andinflammatorydiseases.StudieshaveshownthatLCN2isexpressedinhepaticparenchymalandnonparenchymalcellsandissecretedintothebloodstream,anditiscloselyassociatedwiththedevelopmentandprogressionofacuteliverinjury,livercirrhosis,viralhepatitis,alcoholicliverdisease,nonalcoholicfattyliverdisease,andhepatocellularcarcinoma.ThisarticlesummarizestheanimalexperimentsandclinicalstudiesontheassociationofLCN2withthepathogenesisofliverdis eases,inordertoprovidenewideasandtherapeutictargetsforthepreventionandtreatmentofliverdiseases.Keywords:LiverDiseases;Lipocalin-2;PathologicProcessesResearchfunding:NationalNaturalScienceFoundationofChina(81773766)DOI:10.3969/j.issn.1001-5256.2022.09.044收稿日期:2022-02-18;录用日期:2022-03-20通信作者:袁胜涛,yuanst1967@163.com 糖蛋白作为细胞膜的结构成分以及免疫细胞的抗原决定簇,在抵御多种疾病中起着关键作用。

部分切肝对大鼠肝细胞门静脉途径转基因效率的影响

部分切肝对大鼠肝细胞门静脉途径转基因效率的影响

部分切肝对大鼠肝细胞门静脉途径转基因效率的影响蔡素娜;张阳德;廖允军【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2001(011)007【摘要】目的:探讨70%切肝对大鼠肝细胞门静脉途径转基因效率的影响。

方法:Wistar大鼠70%切肝[假手术组(sham operation,S)仅行开腹术]建立肝再生模型,术后24h肝隔离门静脉注射脂质体-质粒DNA复合物(lipofectamine -pEGFP-N1 DNA complexes,lipoplexes)转绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因至肝细胞,对照组注射生理盐水(NS)。

转染后4d(分4组,每组5只:切肝并于门静脉注射lipoplexes组,He4;切肝并于门静脉注射NS组,Hc4;假手术并于门静脉注射lipoplexes组,Se4;假手术并于门静脉注射NS组,Sc4)、转染后15d(与转染后4d的对应分组为:He15;Hc15;Se15;Sc15)均以胶原酶消化、Percoll液梯离心法获取纯化肝细胞悬液;以NS组为对照并以GFP为荧光标记物,用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析各实验组肝细胞的转染率。

结果:FCM分析He4组、Se4组、He15组、Se15组的平均转染率(%)分别为:27.50±18.15、1.06±0.87、3.40±2.09、0.32±0.19;He4明显高于Se4(P<0.01),He15明显高于Se15(P<0.05)。

结论:部分切肝可显著提高大鼠门静脉途径转基因的瞬时和稳定转染效率。

【总页数】3页(P17-19)【作者】蔡素娜;张阳德;廖允军【作者单位】广州医学院第一附属医院普外科;国家卫生部肝胆肠外科研究中心;国家卫生部肝胆肠外科研究中心【正文语种】中文【中图分类】R657.3【相关文献】1.肝部分切除术对大鼠门静脉途径肝细胞转基因效率的影响 [J], 唐远志;夏荣;伍建春;王成友;廖允军2.雷公藤红素对APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病模型小鼠肝叶部分切除术后认知功能及海马内Cdk5、p25和p35表达的影响 [J], 许方方;万燕杰;徐静3.入肝门静脉动脉化对肝部分切除大鼠肝细胞能量代谢的影响 [J], 李坚;贾英斌;关晓东;蔡潮农;周文英;张百萌4.经门静脉输注血小板对肝硬化大鼠部分肝切除术后残肝再生的影响研究 [J], 庄鹏晖;吴凯;徐蕾;庞允;杨桂芳;路伟5.去肝交感神经对部分肝切除大鼠肝细胞增殖的影响 [J], 张新胜;赵丹丹;王改平;徐存拴因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

Ck19、Ki67、CK7在肝细胞癌组织中的表达

Ck19、Ki67、CK7在肝细胞癌组织中的表达
O&*';O$表达于肿瘤细胞质&O*'$表达 于肿 瘤 细 胞 核&阳 性 细 胞 呈 浅 黄 色 至 棕 黄 色 颗 粒( )""倍光 镜 下 随 机 抽 取 % 个 视 野&每 视 野 至 少 对 &"" 个细胞 计 数&计 算 阳 性 占 比&细 胞 阳 性 率 &"D 诊 断 为阴性$细胞阳性率&"D诊断为阳性(出院患者随 访(年&每半年&次(
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

免疫共沉淀联合质谱分析筛选克罗恩病中Intelectin-1相互作用蛋白的初步研究

免疫共沉淀联合质谱分析筛选克罗恩病中Intelectin-1相互作用蛋白的初步研究

免疫共沉淀联合质谱分析筛选克罗恩病中Intelectin-1相互作用蛋白的初步研究顾问;周郑;吴文涌;刘晓昌;余昌俊【摘要】Objective To screen the proteins interacted with Intelectin-1 in Crohn disease via comparing Crohn disease and normal tissues and investigate the function of Intelectin-1 in the development of Crohn disease.Methods The proteins interacting with Intelectin-1 were screened by co-immunoprecipitation and identified by MALDL-TOF/TOF-MS and finally confirmed by immunoprecipitation and Western blotanalysis.Results Data of Western blot showed that Intelectin-1 was overexpressed in Crohn disease tissues compared with normal tissues. In addition, four novel proteins(ATPase,HSP90,TRAF3 and ZNF) interacted with Intelectin-1 were successfully verified by MALDL-TOF/TOF-MS. Conclusion Intelectin-1 involves in the development of Crohn disease via interacting with TRAF3, ATPase, HSP90 and ZNF.%目的对比克罗恩病患者的病变与正常肠黏膜,筛选与肠凝集素-1(Intelectin-1)相互作用的差异蛋白,探讨Intelectin-1及其相互作用蛋白在克罗恩病发展中的作用.方法利用免疫共沉淀技术筛选克罗恩病患者病变及正常组织中与Intelectin-1相互作用的蛋白;利用MALDI-TOF/TOF-MS质谱分析技术鉴定与Intelectin-1相互作用蛋白;并使用免疫共沉淀和Western blot分析技术验证所鉴定的Intelectin-1相互作用蛋白.结果利用免疫共沉淀联合质谱分析技术成功筛选出4个与Intelectin-1相互作用差异蛋白,包括:肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)、腺苷酸三磷酸酶(ATPase)、热休克蛋白90(HSP90)、锌指蛋白(ZNF).结论 Intelectin-1可能通过与TRAF3、ATPase、HSP90、ZNF蛋白相互作用,而影响克罗恩病的发展.【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2017(052)004【总页数】5页(P519-523)【关键词】克罗恩病;Intelectin-1;免疫共沉淀;质谱;蛋白质相互作用【作者】顾问;周郑;吴文涌;刘晓昌;余昌俊【作者单位】安徽医科大学第一附属医院普外科,合肥 230022;安徽医科大学第一附属医院普外科,合肥 230022;安徽医科大学第一附属医院普外科,合肥 230022;安徽医科大学第一附属医院消化内科,合肥 230022;安徽医科大学第一附属医院普外科,合肥 230022【正文语种】中文【中图分类】R574.6肠凝集素-1 ( Intelectin-1 )是一种主要表达于人小肠、结肠等组织的分泌性糖蛋白,含313个氨基酸,由1个分泌序列和1个纤维蛋白原相关结构域组成的分子量为120 ku的同源三聚体[1]。

聚氯乙烯表面肝素化的研究

聚氯乙烯表面肝素化的研究
-2 *+,-. 处理的聚氯乙烯; .2 肝素化聚氯乙烯; *2 纯肝素
示 E 由于第一次检测的复钙时间偏长, 第二次后比较接近, 故 取第二次至第七次的复钙时间平均 E 复钙时间检测发现 (表 /012 ! , 经过肝素化处理的样品, 复钙时间明显长于空白样品, 而以 ()
[), H] 前文献报道 的复钙时间均未超过 "$$ 9E 说明以本实验方法
固定肝素稳定性好, 且抗凝血活性高 E
图"
肝素化前后的聚氯乙烯表面的扫描电子显微镜照片 ( I "$$$) ( I "$$$) FJ, 60%>K849 5; >34 9K8;7%4 5; 65?@A0:@? %3?580B4
( 7) 未经肝素处理; (C) 肝素化处理后
/012 "
( !) 全血凝固时间分析: 小白鼠断颈取新鲜血液 于 #! Q 水浴中 (小白鼠 $ 2 # &P 注入未肝素化管道中, 体温) , 而另取新鲜血液 $ 2 # &P 注入肝 "$ 9 内便凝血; 素化管道中, 也于 #! Q 水浴中搁置 " 3 后, 血液仍然 未凝固 E 一般体外循环心血管手术的时间为 " 3 左右 E 由 上面的全血凝固时间检测可以看出, 此种肝素化修饰 的管道已能满足实际医疗的需要 E !"& 聚氯乙烯表面肝素化后的生物相容性分析
肝素化聚氯乙 (() 复钙时间测定: 复钙时间通常以 ) 次测定的平均值表 图 ! *+,-. 处理的聚氯乙烯、 烯及纯肝素的红外光谱 +34 %5&678095: 5; <= 96%>87 5; 65?@A0:@? 65?@A0:@? %3?5D %3?580B4 >847>4B C@ *+,-., 80B4 >847>4B C@ 346780: 7:B 346780:

激光共聚焦显微镜检测紫花地丁水浸出物对HBV的影响

激光共聚焦显微镜检测紫花地丁水浸出物对HBV的影响

激光共聚焦显微镜检测紫花地丁水浸出物对HBV的影响王玉;吴中明;罗果;王美丽【摘要】目的通过免疫荧光技术和激光共聚焦技术观察紫花地丁水浸出物对HepG2.2.15细胞内HBsAg、HBeAg和HBcAg的影响.方法以HepG2.2.15细胞作为研究模型,选用拉米夫定作为阳性对照药物,采用KSCM观察紫花地丁水浸出物作用3d后,免疫荧光技术标记的细胞内HBsAg、HBeAg和HBeAg的变化.结果紫花地丁对HepG2.2.15细胞内三种抗原均有抑制作用,且优于拉米夫定.拉米夫定对细胞内HBcAg无明显抑制作用.结论紫花地丁对HepG2.2.15细胞内HBsAg、HBeAg和HBcAg有抑制作用.【期刊名称】《遵义医学院学报》【年(卷),期】2010(033)003【总页数】4页(P208-211)【关键词】紫花地丁水浸出物;乙型肝炎病毒;HBsAg;HBeAg;HBcAg;HepG2.2.15细胞【作者】王玉;吴中明;罗果;王美丽【作者单位】遵义医学院,贵州,遵义,563003;遵义医学院,贵州,遵义,563003;遵义医学院,贵州,遵义,563003;遵义医学院,贵州,遵义,563003【正文语种】中文【中图分类】R282.7+05紫花地丁(Viola Yedoensis Makino)属堇菜属,传统医学认为紫花地丁味苦、性寒,具有清热解毒,抗菌消炎的功效。

临床上,紫花地丁及含有紫花地丁的方剂主要用于治疗各种病原体感染,特别是慢性感染和自身免疫性疾病[1]。

激光共聚焦显微镜(laser confocal scanning microscopy,LSCM)是一种新型高精度的激光源加共聚焦显微镜,可对活的或固定的细胞及组织标本的荧光定量分析,离子含量的实时动态分析检测等。

本实验利用LSCM与间接免疫荧光结合,观察紫花地丁对乙型肝炎病毒 (Hepatitis B virus,HBV)DNA全基因转染的HepG2.2.15细胞 [2,3]内的HBsAg、HBeAg和HBcAg的影响。

SIRT3过表达抑制肝癌细胞的迁移与侵袭

SIRT3过表达抑制肝癌细胞的迁移与侵袭
ClinicalLaboratory MedicineCenter,Shenzhen Hosห้องสมุดไป่ตู้ital,Southern MedicalUniversity, Shenzhen,Guangdong 518100,China
Abstract:Objective Toexploretheinfluenceofsilentinformationregulator (SIRT)3onthemigration andinvasionofhepatomacarcinomacells.Methods TransfectedHuh-7cellswithcontrolpc-DNA3.1plasmid (controlgroup),andtransfected Huh-7cellswithSIRT3plasmid (experimentalgroup).Real-timefluorescencequantitativePCR wasusedtodetecttheexpressionlevelofSIRT3 mRNAinthetwogroups,andtheex-
国际检验医学杂志2021年6月第42卷第12期 IntJLabMed,June2021,Vol.42,No.12
·论 著·
SIRT3过表达抑制肝癌细胞的迁移与侵袭*
· 1423 ·
宋春丽,张 琰,周义文△ 南方医科大学深圳医院临床检验医学中心,广东深圳 518100
摘 要:目 的 探 讨 沉 默 信 息 调 节 因 子(SIRT)3 对 肝 癌 细 胞 迁 移 与 侵 袭 能 力 的 影 响。方 法 用 对 照 pc-
tancebetweenthecellsonbothsidesoftheexperimentalgroupwassignificantlywiderthanthatofthecontrol group,andthemigrationdistancewasshorter.Theresultsofcellinvasiontestshowedthatthecellsinthetwo groupswerecollected10hafterinoculationintheupperchamber,andcountedunderthemicroscope,thenumberofcellsineachfieldwas(45±5)inthecontrolgroup,andthenumberofcellsineachfieldwas(25±2)in theexperimentalgroup,thedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05).Conclusion SIRT3overexpressioninhibitsthemigrationandinvasionofhepatomacarcinomacells,anditisexpectedtoserveasanew mo-

大气中乙二醛光谱分析方法的研究进展

大气中乙二醛光谱分析方法的研究进展

当代化工研究1Modern Chemical Research丄2021•01本刊特稿大气中乙二醛光谱分析万法的研究进展*王志宇李剑*杨航刘庆辉张玮川李艳(南昌航空大学重金属污染物控制与资源化国家地方联合工程研究中心江西330063)摘耍:乙二醛是最小的a二讖基化合物,是大气中多种挥发性有机物氧化餉典型中间产物,在对二次有机气溶胶(S0A)餉形成中有着非常重要的作用.该文章介绍了大气中乙二醛光谱分析餉检测方法,包括差分吸收光谱技术(D0AS)、腔增强吸收光谱技术(CBAS)、激光诱导确光技术(LIP)等技术的光谱分析方法.并对该类方法的原理、特点、应用和研究进展等方面进行了系统的总结和评述,指出当 前乙二醛分析方法所存在的局限性,并对以后分析方法的改进方向提出展望.关键词:乙二醛;光谱法;检测限;分析方法中阖分类号:X511文献标识码:AResearch Progress of Spectral Analysis Methods of Atmospheric GlyoxalWang Zhiyu,Li Jian*,Yang Hang,Liu Qinghui,Zhang Weichuan,Li Yan(National-Local Joint Engineering Research Center of Heavy Metals Pollutants Controlar and Resource,Nanchang HangkongUniversity,Jiangxi,330063)Abstracts Glyoxal is the simplest a-dicarbonyl compound,is a typical intermediate f or the oxidation of v arious volatile organic compounds in the atmosphere,and plays an important role in the formation of s econdary organic aerosol(SOA).Various approaches for the determination of atmospheric glyoxal appearing in literature were described,including difference optical absorption spectroscopy(DOAS),cavity enhanced absorption spectroscopy(CEAS),laser induced phosphor technology(LIP),and other technology of s pectral analysis method.The principle,characteristics, application and research progress of t he methods were systematically summarized and reviewed.The limitations of t he current analytical methods f or glyoxal were pointed out,and the improvement direction of t he analytical methods in the f uture was prospected.Key words:glyoxah spectral analysisdetection limits analytical method近年来,人们对乙二醛的研究发现,乙二醛通过非均相消耗对S0A有巨大的贡献,所以在研究大气污染时,乙二醛是一个十分重要的示踪剂。

211237920_陶瓷膜的膜污染机制与控制技术研究进展

211237920_陶瓷膜的膜污染机制与控制技术研究进展

第43卷第 5 期2023年5月Vol.43 No.5May,2023 工业水处理Industrial Water TreatmentDOI:10.19965/ki.iwt.2022-0207陶瓷膜的膜污染机制与控制技术研究进展杨洁1,李旋坤1,李光辉1,饶品华1,郭健2(1.上海工程技术大学化学化工学院,上海松江 201620;2.山东赛利科膜科技有限公司,山东潍坊 262500)[ 摘要]无机陶瓷膜具有通量高、耐化学腐蚀性强、使用寿命长等特点,目前在工业废水处理领域正得到越来越多的应用。

然而,膜污染问题是影响陶瓷膜运行效率的重要因素之一,是限制其在实际工程中应用的关键。

因此,研究陶瓷膜的膜污染机制,并开发针对陶瓷膜膜污染的控制技术可有效解决其工程应用中出现的问题。

总结归纳了陶瓷膜膜污染的形成机制,重点梳理了近年来与膜污染控制技术相关的研究进展,可为解决陶瓷膜工程应用中出现的问题提供新思路。

[关键词]陶瓷膜;膜污染;功能化[中图分类号]X703 [文献标识码]A [文章编号]1005-829X(2023)05-0009-07Research progress of ceramic membrane foulingmechanism and control technologyYANG Jie1,LI Xuankun1,LI Guanghui1,RAO Pinhua1,GUO Jian2(1.School of Chemistry and Chemical Engineering,Shanghai University of Engineering Science,Songjiang201620,China;2.Shandong Silicon Membrane Technology Co.,L td.,W eifang 262500,China)Abstract:In recent years,application of inorganic ceramic membrane in the field of industrial wastewater treatment is growing rapidly due to its high flux,strong chemical corrosion resistance and long service life. However,the foul⁃ing of ceramic membrane is the main factors affecting the operation efficiency,which is the key restriction of mem⁃brane technology in actual project. Therefore,the exploration of membrane fouling mechanism and development of the corresponding fouling control strategies is necessary to for the engineering application of ceramic membrane. The general membrane fouling formation mechanism was summarized. Besides,recent research progresses of fouling control for ceramic membrane were also concluded. It is hoped to provide a new idea for solving the problems in the application of ceramic membrane engineeringKey words:ceramic membrane;membrane fouling;functionalization膜分离技术可高效实现物质分子水平的分离,是目前水处理技术的重要发展方向〔1〕。

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PVDF、PP、C N A 购自北京升河诚信膜科技发展中 1.6 统计学处理
心。
计量资料使用 Exel 2000和SPSS10.0统计学软
1.2 膜材料的处理和细胞接种
件处理,以均数±标准差表示,组间先进行方差分
将各种膜材料裁剪成 12 孔细胞培养板孔大小, 析,方差齐性用 t 检验,方差不齐用 t '检验,P
培养液配制成 1 × 104/ml 的细胞悬液;每孔膜材料 细胞 LDH漏出量的检测是评价细胞膜损伤的敏感指
内接种细胞悬液 1.0ml,置入 37℃,5% CO 细胞培 2
养箱培养,同时以聚苯乙烯培养板内培养 L02 细胞
标。L02 细胞的 LDH 漏出量在 PSF(59.7± 6.0)IU/ L 和 PP(58.3± 4.7)IU/L膜材料上相对较高,但各
【关键词】 半透膜;肝细胞;相容性;中空纤维 中图分类号:R318.14 文献标识码:A
A comparison study of hepatic-compatibility among several semi-permeable membranes YANG Guang-hui1, ZHANG Shi-chang1, WANG Ying-jie1,3, LIU Tao1, SUN Shu-dong2 1Institute of Infectious Diseases, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing, 400038; 2College of Polymer Science and Engineering, Sichuan University, 610065 Chendu, China Corresponding author:WANG Ying-jie, Email: yingjiewng@
于正常人肝组织的人肝细胞株,购自中国科学院上 液 100μ l,37℃孵育 4h,吸净培养液上清,每孔加
海细胞生物学研究所。半透膜材料 PES 和 PSF 由四 1.0ml DMSO振荡,37℃孵育 10min,取样在 Fortune
川大学高分子材料与工程学院协助制备,C A 、 Labsystems酶标仪以 490nm 波长测定 OD 值。
中国血液净化 2009 年 1 月第 8 卷第 1 期 Chinese Journal of Blood Purification, January 1, 2009, Vol.8, No.12
统生物反应器的首要和基础环节之一。虽然在血液 计算各种膜材料上的细胞贴壁率。
·3 9 ·
透析器或滤过器中使用的半透膜材料均具有良好的 1.4.2 荧光显微镜观察 L02细胞形态 各种膜材料
作为对照。
种膜材料上的细胞 LDH 漏出量与培养板对照无显著
1.3 膜材料的细胞毒性检测
差异(P > 0.05),见图 1。
1.3.1 L02细胞的LDH漏出量检测 在各种膜材料
Hale Waihona Puke 上的 L02 细胞培养 24h 后,收集培养液上清;按试
剂盒说明检测培养液上清 LDH 含量。
1.3.2 L02细胞凋亡DNA Ladder检测 消化各种膜
系统生物反应器的构建提供实验依据。
测各种膜材料上的细胞 DNA 含量。
1 材料和方法
1.5.2 各种膜材料上培养 L02细胞的活性测定 将
1.1 材料
各种膜材料上的细胞培养 1、3、5、7 天后,用 MTT 法
实验采用的L02细胞(即HL-7702人肝细胞)来源 测定细胞活性:每孔膜材料内加入 5mg/ml的 MTT 溶
聚丙烯膜等大多数是借用血液透析器或滤过器的半 透膜材料[3-6]。由于半透膜材料承载着人工肝支持 系统生物反应器的物质传输、免疫阻隔、肝细胞培 养基质等重要功能,直接关系到生物反应器的性能 和功能。因此,膜材料的选择是构建人工肝支持系
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30470458) 作者单位:400038 重庆,1 第三军医大学西南医院全军感染病研究所 610065 成都,2 四川大学高分子科学与工程学院 通信作者:王英杰 400038 重庆,第三军医大学西南医院全军感染病研究所 Email: yingjiewng@yahoo.com
【Key words】Semi-permeable membrane; Hepatocytes; Compatibility; Hollow fiber
中空纤维型生物反应器在物质传输和免疫阻隔 方面具有明显的优势,使其成为体外生物人工肝支 持系统中使用最多的生物反应器[1,2]。以往中空纤 维型反应器使用的中空纤维膜材料如混合纤维素酯 膜、醋酸纤维素膜、铜仿膜、聚偏二氟乙烯膜、
【Abstract】 Objective To screen out a semi-permeable membrane with the best hepatic-compatibility suitable for making hollow fiber bioreactor in bioartificial liver supporting system. Methods Human liver cell lines (L02) were cultured on 6 different semi-permeable membranes made of polyethersulfone (PES), polysulfone (PSF), cellulose acetate (CA), polyvinylidene fluoride (PVDF), polypropylene (PP) and cellulose nitrate acetate (CNA). The cells cultured on polystyrene plate were used as a control group. Cytotoxicity of the membrane was evaluated by the data of lactate dehydrogenase (LDH) leakage and DNA ladder. Adherence ratio, cell viability, protein synthesis and DNA amount of the L02 cells were determined. Results No cytotoxicity was found to the L02 cells growing on the 6 membranes. The adherence ratio of L02 cells cultured on PES membrane was significantly higher than that of the cells cultured on CA, PVDF, PP and CAN membranes, and was similar to that of the control group and the cells cultured on PSF membrane. The amount of total DNA from L02 cells growing on PES and PSF membranes was higher than that from the cells growing on CA, PP and CNA membranes. On the 7th day of culture, the cell viability was higher in cells growing on PES membrane than those on CA, PVDF, PP and CAN membranes. Conclusion PES membrane showed the best hepatic-compatibility among the 6 membranes tested. Therefore, PES is suitable for making hollow fiber bioreactor in bioartificial liver supporting system.
铺在经2.5%聚羟乙基异丁烯酸包被的12孔培养板孔 < 0.05 具有统计学意义。
内;用 PBS 漂洗 3 次,烤干后用钴 60 照射消毒,使 2 结果
用前用培养液漂洗 3 次;将对数生长期的 L02 细胞 2.1 膜材料的细胞毒性检测
用胰酶消化,用含 10% 新生小牛血清的 RPMI-1640 2.1.1 膜材料对培养 L02 细胞 LDH 漏出量的影响
不同半透膜材料,观察L02细胞在半透膜材料上的生 1.5.1 各种膜材料上培养 L02细胞的DNA总量检测
长特征、贴壁率、细胞活性和功能等,筛选出与肝细 消化收集各种膜材料上培养 48h 的 L02 细胞,按前
胞有较好生物相容性的半透膜材料,为人工肝支持 述方法提取细胞基因组 DNA,在 DNA 定量分析仪检
血液相容性[7-11],但与肝细胞的生物相容性尚缺少 上的细胞培养 24h 后,每孔加入 2 μ l FDA 储存液,
系统的评价。本文选择聚醚砜(polyethersulfone, 置 37℃细胞培养箱孵育 10~15min,吸弃上清液,
PES)、聚砜(polysulfone,PSF)、醋酸纤维素(cellu- 用PBS漂洗细胞3次,取出膜材料将细胞接种面朝下,
【摘要】目的 筛选出与肝细胞有较好生物相容性的半透膜材料,以用于生物人工肝支持系统中空纤 维型反应器的制备。方法 选择聚醚砜(PES)、聚砜(PSF)、醋酸纤维素(CA)、聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚 丙烯(PP)、混合纤维素酯(CNA)等有代表性的 6 种半透膜材料进行肝细胞(L02 细胞)培养,同时以聚苯乙烯 培养板作为对照组,检测细胞 LDH 漏出量和 DNA Ladder细胞凋亡评价膜材料的细胞毒性,观察各种膜材料 上 L 0 2 细胞的贴壁率、细胞活性、D N A 总量等。结果 各种膜材料未见明显细胞毒性;L 0 2 细胞在 P E S 膜 上的贴壁率显著高于 CA、PVDF、PP、CNA 膜(P < 0.05),与对照组和 PSF 膜无显著差异;PES 膜上贴壁细 胞数明显较 CA 和 CNA 膜多;PES 和 PSF 膜上细胞 DNA 总量显著高于 CA、PP、CNA 膜(P < 0.05);在 7 天的 培养时间内,PES 膜上和对照组的细胞活性最高,显著高于 CA、PVDF、PP、CNA 膜(P < 0.05)。结论 在 6 种半透膜材料中,P E S 是肝细胞相容性最佳的半透膜材料,适宜用于生物反应器中空纤维的制备。
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