高效液相色谱仪
高效液相色谱仪的原理及应用
高效液相色谱仪的原理及应用
高效液相色谱仪（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析仪器，根据物质在固定相和流动相
间的相互作用差异来实现物质分离和测定的方法。
高效液相色谱的主要原理如下：
1. 样品进样：样品通过进样器注入到流动相中。
2. 流动相泵：流动相泵将流动相以一定的压力送入进样阀。
3. 进样阀：进样阀控制样品的进入量，并通过连接固定相柱。
4. 固定相柱：固定相在柱中，对流动相和待分离的样品进行分离。
5. 检测器：根据样品的特性和分离程度选择合适的检测器进行检测。
6. 数据处理器：将检测的信号转化为柱温度、流量和检测器信号等数据。
高效液相色谱仪的主要应用包括：
1. 分析化学：用于定性和定量分析化学样品中的成分。
2. 生物化学：用于分析蛋白质、核酸、多肽等生物大分子。
3. 药学：用于分析药物中的活性成分、控制药品的质量。
4. 环境分析：用于监测环境中的有机污染物和无机物质。
5. 食品分析：用于检测食品中的添加剂、残留农药和毒性物质。
高效液相色谱仪的优点包括分离效率高、分析速度快、样品容量小、样品制备简单等。
然而，高效液相色谱仪的操作要求严格，仪器费用较高，且需要使用高纯度的溶剂和试剂。
高效液相色谱仪原理及操作步骤
高效液相色谱仪原理及操作步骤嘿，咱今儿个就来唠唠高效液相色谱仪这玩意儿！你可别小瞧它，它在好多领域那可都是大功臣呢！那高效液相色谱仪到底是咋工作的呢？简单来说啊，就好比是一场特别的赛跑。
不同的物质就像是不同的选手，它们在色谱柱这个“跑道”上奔跑。
由于各自的性质不同，跑的速度也就不一样啦，这样就能把它们一个一个地分开。
这就好比是一群人一起跑马拉松，跑得快的自然就先冲线啦，然后我们就能清楚地知道谁先谁后，这就是高效液相色谱仪的基本原理啦。
接下来咱说说操作步骤。
第一步呢，就像是准备比赛前要先做好热身一样，咱得把仪器调试好。
要检查各种部件是不是都正常，这可不能马虎，不然跑着跑着出问题了可咋办！然后呢，就是要把样品准备好。
这就像是给选手们准备好号码牌一样，得让它们有个“身份”呀。
样品的处理可得精心，不能有杂质啥的来捣乱。
接着就是进样啦，这就像是鸣枪起跑！把样品送进色谱柱这个“跑道”里，让它们开始“奔跑”。
在这个过程中，可别闲着呀，得时刻关注着仪器的运行状态。
就像看着比赛一样，看看选手们跑得顺不顺利。
等跑完了，数据出来了，那就像是比赛结束知道成绩了。
这时候可得好好分析分析这些数据，看看咱想要的结果在不在里面。
你说这高效液相色谱仪是不是很神奇呀？它能帮我们把那些复杂的混合物分得清清楚楚。
这要是没有它，好多实验可就没法做啦！咱再想想，生活中不也有很多类似的情况吗？就像整理东西，把乱七八糟的东西分类整理好，不就清楚多了嘛。
高效液相色谱仪不就是在微观世界里帮我们做这样的事情嘛。
所以啊，学会操作高效液相色谱仪那可太重要啦！这不仅是为了工作，也是为了能更好地探索那些我们看不见的世界呀。
你说呢？反正我觉得它真的是个了不起的家伙，能帮我们解决好多难题呢！。
高效液相色谱仪的五大组成部分
高效液相色谱仪的五大组成部分
高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）的五大组成部分包括：
1. 液相分离部分：液相分离部分由色谱柱和液相泵组成。
色谱柱是分离和分析样品的地方，其中填充有固定相，可以根据其化学特性选择不同的色谱柱。
液相泵则通过压力将试样和溶剂混合并推送进入色谱柱。
2. 采样和进样系统：采样和进样系统用于将待分析的样品引入到色谱柱中。
这包括样品的准备、进样量的控制和溶剂的混合等操作。
3. 检测器：检测器用于检测分离出的化合物，并将其转化为可观察的信号。
常见的HPLC检测器包括紫外-可见吸收光谱检
测器、荧光检测器、折射率检测器和质谱检测器等。
4. 数据处理系统：数据处理系统用于记录和分析检测到的信号，并进行数据的整理、处理和解释。
这些系统可以包括计算机软件和数据处理设备。
5. 溶剂系统：溶剂系统由溶剂储罐、混合器、进样泵和排泄器等组成，用于准备溶剂，并将其送入色谱柱中。
溶剂系统需要保持恒定的压力和流量，以确保色谱分离的准确性和重现性。
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。
溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。
超声脱气30分钟以上。
2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。
有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。
4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。
5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。
6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。
7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。
分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。
8. 设计走样方法。
9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。
高效液相色谱仪的特点
高效液相色谱仪的特点高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography，HPLC）是现代分析化学中常用的一种高灵敏度和高分辨率的液相色谱技术，被广泛应用于药物分析、环境检测、食品安全、化妆品等领域。
以下将介绍HPLC技术的特点。
高分辨率HPLC技术的分离度比传统的液相色谱(PLC)明显提高，能够分离同种物质中结构相似的同族物质、极性不同的物质等。
相对于气相色谱，HPLC技术更加适用于非挥发性、易发生化学反应、分子量较大的物质等方面。
同时，HPLC技术可以实现对于复杂混合物中单一组分的分离，提高了分析灵敏度。
高选择性HPLC技术可以利用吸附剂、离子交换剂、氢键剂等对待分离的物质进行选择性吸附或交换，实现物质的选择性分离，从而提高了HPLC技术的选择性和灵敏度；同时，HPLC技术还可以通过调节分离剂的使用方式、流速、温度等参数实现更高的选择性。
高灵敏度HPLC技术采用微量采样、高灵敏检测技术，最高检测灵敏度可达到ppb级别。
HPLC技术采用现代检测手段，如UV检测器、荧光检测器、质谱检测等，以及前处理技术，提高了样品的检测灵敏度。
高效率HPLC技术在分析和检测同等数量的样品时，其分离效率比传统的液相色谱高，同时还能够实现自动化操作，提高了分析效率。
与手动的液相色谱相比，HPLC技术的样品处理和分析速度更快，更加准确、可靠。
安全、环保HPLC技术使用无毒和环保类型的溶剂，且溶剂的使用量很少，从而减少了对环境的污染；同时，HPLC技术的操作也更加安全，无需使用大量的有毒溶剂和试剂，可以减少操作风险。
总之，HPLC技术是当前分析领域中应用最广泛、最有效、最成熟的液相色谱技术之一，其高分辨率、高选择性、高灵敏度、高效率和安全环保的特点使得其被广泛应用于药物分析、环境检测、食品安全、化妆品等领域。
高效液相色谱仪操作步骤
高效液相色谱仪操作步骤1.准备工作：a.检查设备是否正常运转，所有零件是否安装和连接正确。
b.检查每个必需的溶液和试剂是否充足并且符合规定的质量标准。
c.检查色谱柱是否装配完好，并根据要进行的分析校准适当的流量和压力范围。
d.打开色谱软件，并设置所需的分析方法和参数。
e.开始预热色谱柱直到达到所需的温度。
2.样品制备：a.准备待检测样品的溶液或提取物，并进行必要的预处理步骤，例如固相萃取、浓缩、稀释或离心等。
b.将样品溶液通过0.22微米滤膜过滤，以去除杂质、微粒和可能堵塞色谱柱的颗粒。
3.样品进样：a.打开进样器，并选择合适的样品进样模式（如定量进样或自动进样）。
b.使用微量注射器或自动进样器将样品注入进样器，并确定进样量符合分析方法的要求。
4.色谱柱选择：a.根据样品特性和分析目的选择合适的色谱柱类型（如反相、离子交换、大小排阻等），尺寸（长度和内径）和填充材料等。
b.根据样品的pH值调节移动相的酸碱度，以满足分析要求和保护色谱柱。
5.色谱条件设置：a.设置流量速率，根据色谱柱的额定最大流速和样品的分离要求来确定。
一般来说，较高的流速可提高分离速度，但也会降低分离效果。
b.设置柱温，并确保温度稳定在所需的分析条件下。
c.设置检测器的参数，如波长、增益、灵敏度等，以适应待测试样品的检测需求。
6.分析运行：a.开始进样和运行色谱，确保流量和压力稳定。
b.监测色谱峰形的变化和信号强度，以评估分离速度和效果。
c.记录每个样品的保留时间和峰高（面积），并进行相应的数据处理和分析。
7.数据处理：a.使用色谱软件导出和处理分析数据，如生成色谱图、峰面积测定、峰高度测定、定量计算等。
b.根据实验目的和要求，对分析数据进行统计学分析、校正和解释。
c.对数据进行结果汇总、报告撰写和存档。
8.后期维护：a.定期检查和维护仪器，如清洁色谱柱、更换零件、校准仪器、更换溶液等，以确保仪器的正常运行和结果的准确性。
b.对废液和废品进行妥善处理，符合环境保护要求。
高效液相色谱仪工作流程
高效液相色谱仪工作流程高效液相色谱仪（High-Performance Liquid Chromatography, HPLC）是现代色谱分析技术中的关键仪器之一，广泛应用于生命科学、医学、制药和环境监测等领域。
HPLC不仅可以分离复杂混合物，还能测定化合物的纯度、分子量和化学反应动力学参数等。
本文将详细介绍HPLC的工作流程及其各个环节的具体内容。
一、概述HPLC分离方法是在特定的操作条件下，利用样品中化合物在流动相与固定相交互作用不同而分离纯化目标化合物的一种仪器分离方法。
常用固定相材料包括硅胶、活性炭、十八烷基硅胶和氨基硅胶等，而流动相则是要经过调节才能使各化合物分离，例如改变溶剂配比，改变温度等。
HPLC一般由液相泵、样品进样器、柱子、检测器和数据处理系统组成。
下面，我们将详细介绍每个环节的作用和工作流程。
二、液相泵液相泵是指在HPLC中负责将流动相（移动相）通过固定相（柱子）的系统中流动的一种泵。
通俗来讲，其功能是向上抬升活塞推动流动相流经柱子，使样品能与固定在柱子上的固定相发生相互作用从而分离出纯度更高的化合物。
液相泵可以提供稳定的流速和压力，是HPLC系统中关键的组成部分。
液相泵在HPLC系统中的具体工作流程如下：1. 设置流速，输入溶剂参数：首先需要在仪器控制软件上设置流速；还需要输入流动相的一些参数，如溶剂的种类、浓度和缩写等。
2. 启动液相泵：通过点击控制软件“启动”按钮将提供压力的泵浦启动。
3. 压力监控：液相泵将持续加压，直到达到预设的压力值。
在加压过程中，成分浓度的变化会导致压力的变化，这时可以通过压力监控系统及时调整流速来保持压力的稳定。
4. 柱前压力平衡：为确保柱子中样品能够顺利分离，开始运行HPLC之前首先需要在柱子中填充流动相，进行柱前压力平衡。
三、样品进样器样品进样器是HPLC系统中负责将待分析的化合物样品进给进HPLC柱中的一个系统，它的主要作用是将待测试的样品转化成具有高性能液相色谱分析所需的样品状态。
高效液相色谱仪 工作原理
高效液相色谱仪工作原理
一、压力流动
高效液相色谱仪中的压力流动是靠高压泵来实现的。
高压泵是产生高压输送液体的装置，它将储液器中的溶剂经流经进样阀的液体送入色谱柱，并使柱内液体流动保持一定流速。
在高效液相色谱中，为了获得一致的柱压，流速必须是恒定的。
在排除压力波动等因素后，只要柱压恒定，流速就恒定。
二、吸附/洗脱过程
在高效液相色谱中，分离过程本质上是溶液中被分离物质在两相之间进行分配的过程。
在固定相和流动相之间，被分离物质依据其在两相之间的分配达平衡后进行分离。
这个过程分为两个步骤：在两相间达到平衡和从两相中分离。
三、分离
分离是高效液相色谱仪中的核心部分，主要通过色谱柱实现。
色谱柱由固体吸附剂或涂层填充剂填充于直径约为1-5mm的玻璃或金属球体中制成。
样品溶液经过高压泵注入，进入色谱柱。
在色谱柱中，不同组分依据其在固定相和流动相之间的分配系数差异进行分离。
四、检测
检测器是高效液相色谱仪中的重要部分，用于对被分离的组分进行检测和测量。
检测器根据物质的物理或化学属性将组分转化为可测量的电信号，如紫外-可见光吸收、荧光、电化学等。
这些信号被记录并用于确定被分离组分的浓度和数量。
五、数据处理
数据处理是高效液相色谱仪中的最后一步，通过计算机软件对采集到的数据进行处理和分析。
数据处理主要包括数据采集、数据预处理、色谱峰识别和定量分析等步骤。
数据处理结果以图谱形式呈现，通过图谱可以直观地了解样品中各组分的含量和分布情况。
高效液相色谱分析法(仪器+组成+分离类型+流动相选择)
2、主 要 部 件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：30MPa以上。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（ <10μm），液体的流动相高速通过时，将产生 很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱 的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、 流量稳定可调、耐腐蚀等特性
(2)梯度淋洗装置
3.离子交换色谱分离固定相
结构类别： （1）薄壳型离子交换树脂
薄壳玻璃珠为担体，表 面涂约1%的离子交换树脂； （2）离子交换键合固定相
薄壳键合型；微粒硅胶 键合型（键合离子交换基团）
树脂类别： （1） 阳离子交换树脂（强酸 性、弱酸性） （2） 阴离子交换树脂（强碱 性、弱碱性）
4. 空间排阻分离固定相
liquid-solid adsorption chromatography 固定相：固体吸附剂如硅胶、氧化铝等，较
常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；
流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：利用溶质分子占据固定相表面吸 附活性中心能力的差异；适用于分离相对分子 质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合 物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
GC：H = A + B / u + C • u （填充柱）
A = 2λ • dp
A ∝ λ • dp
B = 2γ • Dm = 2γ • Dg B ∝ t R ，B ∝ Dg
Dg
∝
T η
或Dg
∝
T M
B = 2γ • Dm
Dm
∝
T η
柱温T ↓低，流动相η ↑大 ⇒B相忽略
在高效液相色谱中, 液体的扩散系数
(4) 高效分离柱
高效液相色谱仪的基本操作和使用
高效液相色谱仪的基本操作和使用1.准备工作：-确保高效液相色谱仪的设备和耗材齐全。
-检查色谱柱，确保色谱柱选择正确并在有效使用期内。
-检查溶剂的质量和纯度，确保溶剂无杂质。
-设置所需的操作温度。
2.连接高效液相色谱仪：-将进样器连接到色谱柱，并将进样针座固定住。
- 将固相柱插入色谱柱座，然后将电导/ UV-Vis检测器连接到色谱柱座。
3.样品制备：-将待测样品溶解于合适的溶剂中，并进行必要的前处理步骤（如过滤、稀释等）。
-对于固体样品，可以采用适当的溶解方法，如超声波处理等。
4.设置色谱仪参数：-开启电源，等待色谱仪预热稳定。
- 打开色谱仪的软件，并设置所需的参数，包括流速、波长（对于UV-Vis检测器）、进样量、运行时间等。
5.校准仪器和程序：-制备标准品溶液，并用标准曲线法对色谱仪进行校准，以确保仪器输出的结果准确可靠。
-确认色谱仪的波长和检测器的线性范围，并根据需要进行修正。
6.进样：-打开进样器盖，用吸尘器吸出残液，然后用纯溶剂将针清洗干净。
-分别进行空白样品和待测样品的进样，保证进样量准确。
7.开始运行：-在软件界面上点击“开始运行”，观察色谱图输出的曲线形状和峰的出现。
-根据需要，可以进行多次重复运行。
8.结果分析：-对于定性分析，根据色谱图的特征峰形状、保留时间和波长，进行物质的鉴别。
-对于定量分析，根据标准曲线和色谱图的峰面积，计算出待测样品中目标物质的浓度。
9.清洗仪器：-运行结束后，关闭仪器，并将进样器和色谱柱进行清洗。
10.维护：-定期检查仪器的性能和功能是否正常。
-及时更换色谱柱、固相柱和检测器，确保仪器的正常运行。
-做好仪器维护和维修记录。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程
《高效液相色谱仪操作规程》
一、实验目的
本实验旨在通过高效液相色谱仪分析样品，准确测定目标化合物的含量，并学习高效液相色谱仪的操作方法和技巧。
二、实验设备
1. 高效液相色谱仪
2. 注射器
3. 色谱柱
4. 移液管
5. 色谱仪软件
三、操作步骤
1. 打开高效液相色谱仪的电源并进行系统初始化，启动色谱仪软件。
2. 调整流速，进样量等参数，使得实验条件符合要求。
3. 将样品通过移液管注入色谱柱中，注意避免样品泡沫和气泡的产生。
4. 设置色谱条件，如梯度洗脱，流速等，启动色谱分析。
5. 记录实验数据和结果，并进行数据处理和分析。
6. 清洗色谱仪，保持设备清洁。
四、实验注意事项
1. 在操作色谱仪时，要严格按照操作步骤进行，严禁随意更改参数。
2. 在进行样品进样时，要小心操作，避免产生气泡和样品泡沫。
3. 在进行色谱分析时，注意梯度洗脱条件的设置，保证分析结果准确。
4. 在实验结束后，及时清洗色谱仪，保持设备干净。
五、实验结果
根据实验数据和结果，可以得出目标化合物的含量和纯度，并进行结果的解释和分析。
通过《高效液相色谱仪操作规程》的学习，使我们更加熟悉高效液相色谱仪的操作方法和技巧，能够准确进行样品分析，为科研工作的开展提供了重要的技术支持。
高效液相色谱仪可以测的指标
高效液相色谱仪可以测的指标高效液相色谱仪（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离和分析化学物质的仪器，广泛应用于检测和分析各种化合物，包括有机物、无机物和生物分子等。
以下是高效液相色谱仪可以测定的主要指标：1. 化合物含量：通过对比标准品和样品的色谱图，可以定量地测定出样品中各种化合物的含量。
2. 化合物纯度：高效液相色谱仪能够分离样品中的不同组分，因此可以用于评估化合物的纯度。
3. 杂质分析：除了主成分外，高效液相色谱仪还可以检测样品中的杂质，这对于药物分析和质量控制尤其重要。
4. 分子量和分子结构：通过与已知分子量或结构的化合物进行对比，可以推测未知化合物的分子量或结构。
5. 手性化合物分析：使用手性柱的高效液相色谱仪可以对具有手性的化合物进行分离和分析，如手性药物。
6. 物质的稳定性和降解产物：高效液相色谱仪可用于研究物质在特定条件下的稳定性和降解产物，如药物在储存过程中的稳定性。
7. 环境样品中的污染物：高效液相色谱仪可以用于环境样品中污染物的分离和测定，如多环芳烃、农药残留等。
请注意，高效液相色谱仪只能测定易溶于甲醇、水、乙腈等溶剂的物质。
对于不溶于这些溶剂的物质，需要使用其他分析方法。
同时，高效液相色谱仪的检测结果受到多种因素的影响，如色谱柱的选择、流动相的组成、检测器的灵敏度等，因此在进行实验时需要严格控制实验条件以保证结果的准确性。
此外，高效液相色谱仪检测器的主要技术指标有噪声、灵敏度、检测下限和线性范围等。
这些指标对于评估检测器的性能和保证实验结果的准确性具有重要意义。
总之，高效液相色谱仪是一种功能强大的分析仪器，能够用于测定多种化学和生物指标，为科研和工业生产提供有力支持。
高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，用于分离
和定量分析化合物的混合物。
以下是HPLC的基本使用方法：
1. 样品准备：将待分析的混合物或溶液准备好，通常需要进行前处理，例如过滤、稀释或提取。
2. 系统准备：打开色谱仪的电源，启动仪器，确保所有组件处于正常工作状态。
检查液相、气相和其他溶剂的供应，并确保其质量良好。
3. 进样：将样品注射器连接到色谱柱，并根据实验要求设置注射器体积。
将样品注射器插入进样口，并将样品注入到色谱柱。
4. 创建梯度：根据分析要求，创建一个梯度程序。
这涉及到设置流动相的组成和梯度变化的速率。
5. 运行分析：点击开始按钮，启动分析过程。
色谱系统将自动进行溶剂梯度变化，使样品中的化合物逐步从色谱柱中分离出来。
6. 数据采集和分析：在分离过程中，色谱仪将采集到一系列数据点，包括峰高、峰面积、保留时间等。
使用相关的数据处理软件，可以对这些数据进行处理和分析。
7. 清洗和维护：在分析完成后，需要进行系统的清洗和维护。
这包括冲洗色谱柱、清理进样器和其他组件，并储存色谱仪在
正确的环境条件下。
以上是高效液相色谱仪的基本使用方法。
具体的使用流程和操作步骤可能会有细微的差异，取决于具体的仪器品牌和型号。
建议在使用前仔细阅读和理解相关的操作手册和使用说明。
高效液相色谱-检测器
D
氘灯
光门
波
暗盒
长
调
节
杆
凹面光栅
半透镜
光电池（测量） 流通池
光电池（参比）
《紫外/可见光检测器系统原理图》
单
光源
色
器 步进电机
半透反光镜
变压器
交流电源
键盘
直流 电源
冷却风机
显示屏
检测池
参比池
光 /电转换
CPU
前置放大器
A/D
时钟
并行口
讯号输出 (积分/记录)
局限：对紫外吸收差的化合物如不含不饱和键 的烃类等灵敏度很低。
➢1、特点： 灵敏度比紫外检测器高 ，噪音 低 ，线性范围宽 ，对流速和温度的波动不 灵敏，适用于梯度洗脱及制备色谱。
原理与结构：检测器的接收是由一组光电二极管（数量由 35～1024个不等）接收，并转换为电信号。光电二极管的 排列（数字分辨）和狭缝宽度（光学分析）决定了检测器的 全波长分析能力。还能获得色谱分离组分的三维光谱色谱图。
原理与结构：由光源发出的光，经激发光单色 器后，得到所需波长的激发光。通过检测池的 激发光部分被样品吸收，并使其被激发后发射 出荧光。在经选择发射波长的单色器分光后， 单一波长的发射光被送至光电检测器进行检测。 由于吸光强度与激发光强度成正比，光源应具 有高强度、连续、平滑、稳定的辐射输出功能。
结构图
流动相的选择受到一定限制，紫外吸收大的溶 剂不能做流动相。每种溶剂都有截止波长，当 小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的 透光率降至10%以下，因此，流动相的截止波 长不能大于紫外吸收检测器的工作波长。
光电二极管阵列检测器
(photodiode array detector， PDA )
高效液相色谱仪的原理及应用
（2）表面多孔型担体 （薄壳型微珠担体） 30～40μm的玻璃微球，
表面附着一层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。
表面积小，柱容量底；
2024/3/5
（3）化学键合固定相
化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C
稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N
2024/3/5
2. 流动相
按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯 、乙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活 调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调 整出峰时间。
2024/3/5
四、正相高效液相色谱
是由极性固定相和非极性（或弱极性）流动 相所组成的HPLC体系。其代表性的固定相是 改性硅胶、氰基柱等，代表性的流动相是正 己烷。吸附色谱也属正相HPLC。 溶剂洗脱强度近似地随溶剂的介电常数增加 而增大，洗脱能力越弱，溶质在柱上保留时 间越长。
2024/3/5
MeOH
梯度洗脱
95%
30%
优点：可提高分离度、缩短分离时间、 降低最小检测量和提高分离精度。
2024/3/5
2、进样系统
流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置：
2024/3/5
3、分离系统
高效分离柱
直型不锈钢管，内径1～8 mm，柱长5～40 cm。
高效液相色谱仪的基本原理
高效液相色谱仪的基本原理嘿，咱今儿就来说说这高效液相色谱仪的基本原理哈！你想啊，这高效液相色谱仪就好比是一个超级分拣员。
咱平常生活里不是会收到各种包裹嘛，然后快递员得把它们按地址啥的分清楚送到咱手里。
这高效液相色谱仪也差不多是这个道理呀！它呢，有个流动相，就像快递员的运输工具一样，带着样品往前跑。
而那固定相呢，就像是一个个不同的存放点。
样品里的各种成分就跟着流动相一路跑啊跑，遇到固定相的时候，不同的成分就会因为各自的性质不一样，有的跑得快，有的跑得慢，这不就分开啦！这多神奇呀！就好像一群小朋友一起赛跑，有的腿长跑得快，有的可能就慢悠悠的。
然后呢，通过各种检测手段，我们就能知道这些成分都是啥啦！你说这技术厉不厉害？这可给咱科研人员、分析人员帮了大忙啦！咱可以用它来分析药物的成分，看看是不是合格；可以用来检测食品里有没有啥不好的东西；还能在环境监测里发挥大作用呢！你想想，如果没有这高效液相色谱仪，咱好多事情得多难办呀！就好比你要在一堆沙子里找出金子，那可费劲了。
但有了它，就好像有了一双神奇的眼睛，能一下子就把咱要的东西给找出来。
它的精度还特别高呢！就跟那精确的尺子似的，一点都不含糊。
能把那些极其微小的差别都给分辨出来，这可真不是一般仪器能做到的哟！而且呀，它操作起来也没那么难。
只要你掌握了方法，就跟玩游戏似的，能轻松上手。
当然啦，要想玩得特别溜，那可得下点功夫去学习和练习。
咱再说说它的应用范围，那可真是广泛得很呐！从医药到化工，从食品到环保，哪儿都有它的身影。
它就像一个无处不在的小助手，默默地为我们的生活和工作提供着帮助。
所以啊，咱可别小瞧了这高效液相色谱仪。
它虽然不声不响的，但却在很多领域都发挥着巨大的作用呢！这就是它的魅力所在呀，咱得好好珍惜和利用它，让它为我们创造更多的价值！怎么样，现在是不是对它有了更深的了解啦？。
高相液相色谱仪原理
高相液相色谱仪原理
高效液相色谱仪（High-Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种基于溶液相相互作用的色谱分离技术。
其原理
主要包括样品注射、流动相传输、分离柱和检测等步骤。
首先，样品被注入至流动相中，并由进样器进行注射。
注射后的样品通过流动相传输至分离柱。
分离柱是高效液相色谱仪中的关键部件，其内部包含大量的填料，如C18矽胶。
填料的特性会根据样品的性质而选择，以
达到最佳的分离效果。
当样品通过分离柱时，样品中的组分将根据其在填料上的相互作用力不同而被分离。
这些相互作用力包括吸附、配位、离子交换等。
这样，样品中的各个组分将在柱内逐渐分离开来。
分离后的样品组分通过流动相传输至检测器进行检测。
常用的检测器包括紫外检测器（UV），光电二极管阵列检测器（PDA），荧光检测器等。
检测器将样品的吸收、发射、色
散等光学性质转化为电信号，并通过数据采集系统进行记录和分析。
通过对样品的分离和检测，可以得到样品中各个组分的峰值图谱。
根据峰的面积或峰高，可以定量分析样品中各组分的含量。
总的来说，高效液相色谱仪通过样品注射、流动相传输、分离
柱和检测等步骤，利用样品中的组分在填料上的相互作用力不同而实现样品分离和定量分析。
高效液相色谱仪的分类
高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析仪器，可以用于物质的分离、纯化和定量分析。
根据其分析模式、柱型和检测方式等因素，HPLC可以分为以下几类：1. 按分析模式分类：-反相色谱（Reverse Phase Chromatography，RPC）：样品以非极性或弱极性的固定相上进行分离，常用于非极性化合物的分析。
-正相色谱（Normal Phase Chromatography）：样品以极性的固定相上进行分离，常用于极性化合物的分析。
-离子交换色谱（Ion Exchange Chromatography）：基于离子交换原理进行分离，分离物质通过阳离子交换柱或阴离子交换柱进行分离。
-手性色谱（Chiral Chromatography）：用于分离手性化合物，通过手性柱实现对手性化合物的不对称分离。
2. 按柱型分类：-液固色谱（Liquid-Solid Chromatography）：固定相是在柱子表面涂上一层液体固定相材料。
-液液色谱（Liquid-Liquid Chromatography）：固定相是液体，主要通过液体相互分配来实现分离。
-离子交换色谱（Ion Exchange Chromatography）：基于离子交换原理进行分离，分离物质通过阳离子交换柱或阴离子交换柱进行分离。
3. 按检测方式分类：-紫外检测器（UV Detector）：利用分析物质在紫外光区域的吸收特性进行检测。
-荧光检测器（Fluorescence Detector）：利用分析物质的荧光性质进行检测。
-电化学检测器（Electrochemical Detector）：利用电化学原理进行检测，如电流和电位的变化。
-质谱联用（Mass Spectrometry，MS）：将质谱仪与HPLC联用，通过分析分子的质量和碎片信息进行检测。
这些分类方式可以根据具体的实验需求进行选择，并根据分析物质的性质进行优化和调整。
高效液相色谱仪原理
高效液相色谱仪原理
高效液相色谱（HPLC）是一种高效、高灵敏度的色谱分析技术，广泛应用于
化学、生物、药学等领域。
其原理是利用液相在高压下通过填充柱进行分离，再通过检测器进行检测，实现对样品中化合物的分离和定量分析。
首先，HPLC的原理是基于液相色谱的基本原理发展而来的。
液相色谱是利用
液相作为固定相，通过溶质在液相和固定相之间的分配作用，实现对混合物的分离和分析。
而HPLC相比传统液相色谱，其主要特点是在高压下进行分离，使得分
离效率更高、分析速度更快。
其次，HPLC的原理还涉及到柱和填料的选择。
柱是HPLC中至关重要的部分，其选择应根据样品的性质和分离要求进行合理选择。
填料则是柱内的固定相，其种类和粒径大小也会对分离效果产生影响。
通过合理选择柱和填料，可以实现对不同化合物的有效分离。
另外，HPLC的原理还包括流动相和检测器的选择。
流动相是指在色谱柱中流
动的溶剂，其选择应考虑到样品的性质和分离的需要。
检测器则是用于检测柱出口溶液中化合物的存在和浓度的检测，常见的检测器包括紫外-可见（UV-Vis）检测器、荧光检测器、质谱检测器等。
最后，HPLC的原理还涉及到色谱条件的优化。
色谱条件的优化包括流速、温度、洗脱剂的选择等，这些条件的优化可以使得分离效果更好、分析速度更快、峰形更尖锐。
总的来说，高效液相色谱仪的原理是基于液相色谱的基本原理，通过高压下进
行分离，利用合理选择的柱、填料、流动相和检测器，以及优化的色谱条件，实现对复杂混合物的高效分离和定量分析。
这种分析技术在化学、生物、药学等领域有着广泛的应用前景。
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高效液相色谱仪
四、高效液相色谱仪的 临床应用
• 生命科学研究 • 临床检验
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高效液相色谱仪
（二）进样系统 • 注射器：
优点：装置简单、使用方便、死体积小、 峰扩展小、有利分离。
缺点是进样量有限、重现性差、有时需停 泵进样、适用压力不能太高（高压下溶液漏 液）。
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高效液相色谱仪
• 六通阀
六 通 阀 进 样 装 置
进样量可由样品管控制，因此进样准确，重复性好。
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高效液相色谱仪
（五）数据记录处理系统 高效液相色谱仪的数据记录处理系统主
要有记录仪、积分仪或色谱工作站等，以完 成对检测信号的记录、处理和控制。记录仪 是记录色谱流出曲线；积分仪的作用主要用 于求色谱峰的面积。
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高效液相色谱仪
三、高效液相色谱仪的使用与维护 （一）高效液相色谱仪的使用
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高效液相色谱仪
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高效液相色谱仪
一、高效液相色谱仪的工作原理 高效液相色谱仪是用高压输液泵将具有不
同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、 缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱， 经进样阀注入样品，由流动相带入柱内，在 柱内各组分被分离后，依次进入检测器，记 录仪记录流出色谱信号，根据色谱峰的位置 和峰高(或峰面积) 进行定性和定量分析。
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高效液相色谱仪
二、高效液相色谱仪的基本结构 高效液相色谱仪主要包括输液系统、进样
系统、分离系统、检测系统和数据记录处理 系统。
高效液相色谱仪结构示意图
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高效液相色谱仪
（一）输液系统 提供流动相 • 贮液瓶 • 过滤器和脱气装置 • 高压输液泵 • 梯度洗脱装置 • 流量控制
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作
流
结果分析
根据实验所得结果进行分析，获得相关的信息，产生
程
报告
关机
先关灯，用相应溶剂充分冲洗系统。退出工作站，依提示关 泵及其他窗口，关闭计算机和仪器各模块电源开关
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高效液相色谱仪
（二）高效液相色谱仪的维护
为保证高效液相色谱仪能够正常运行、 处于良好状态，确保分析结果的准确性， 需做好仪器的维护。
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高效液相色谱仪
装柱
装好实验所需柱子，保证连接部分要不漏液
高
效 液
开机
依次打开电脑、仪器各模块电源，待自检完成后，启 动工作站并联机，打开“Purge”阀赶走管内气泡
相
色
参数设置
进入菜单，设置实验所需的各种参数
谱
仪
基线调节
按已设定的参数和程序，使基线走平
的
操
样品测定
根据要求给仪器进样，按开始键，仪器自动检测
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高效液相色谱仪
（三）分离系统 分离系统是高效液相色谱仪的重要部件，
其核心是色谱柱。
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高效液相色谱仪
（四）检测系统 检测器的作用是将色谱柱分离后组分的
量（或浓度）转变成电信号。 1. 紫外-可见光检测器 ➢固定波长检测器 ➢可变波长检测器 ➢光电二极管阵列检测器 2. 荧光检测器 3. 电化学检测器