关于HPLC主成分自身对照法检查有关物质时检测波长确定的讨论

浅议有关物质分析方法验证的接受标准

浅议有关物质分析方法验证的接受标准李正邦(杭州民生药物研究院有限公司，杭州311121)摘要目的：阐述HPLC有关物质分析方法各验证项目的接受标准。

方法与结果：介绍HPLC有关物质分析方法各验证项目的目的和操作，参阅文献并结合实际工作经验，通过对比分析提出其接受标准。

结论：正确理解有关物质分析方法验证的目的，是制定合理接受标准的基础；规范的方法验证需要一个较为公认的接受标准。

关键词：HPLC；有关物质；方法验证；接受标准Discussion on Acceptance Criteria of Analytical Method Validation of Related SubstancesLi Zhengbang (Hangzhou Minsheng Institute for Pharma Research Co., Ltd., Hangzhou 311121 )Abstract Objective: To elaborate the acceptance criteria for each validation subject of HPLC analytical method for related substances. Methods and Results: Introduce the purpose and operation of method validation for HPLC related substances, combining literature research with actual work experience, and propose the acceptance criteria by comparative analysis. Conclusion: Formulating reasonable acceptance criteria is based on understanding correctly the purpose of method validation of related substances. It is necessary to establish more recognized acceptance criteria for standardizing method validation.Key words: HPLC; related substances; method validation; acceptance criteria有关物质主要是指药品在生产过程中带入的起始原料、中间体、反应副产物，以及贮藏过程中的生成降解产物等。

《中华人民共和国药典》利福平及制剂标准中有关物质测定方法的修改建议

·1356·Hemld of Medicine V01．31No．100ctober2012分平均总含量的80％～200％为限度范围，即每克含总转移率不是很高，这可能是制备过程中，麻黄采用水药膏体中含盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱两种成分的总煎煮工艺，而麻黄碱和伪麻黄碱均有一定的挥发性，在量应为0．090～0．230 mg。

约100℃因挥发损失而导致转移率偏低。

2010年版《中华人民共和国药典》一部麻黄项下参考文献规定，麻黄含水量不得过9．O％；按干燥品计算，含盐[1] 肖崇厚，杨松松，洪筱坤，等．中药化学[M]．上海：上海科学技术出版社，1997．酸麻黄碱(C。

H。

，N0·HCl)和盐酸伪麻黄碱(C，。

H。

，[2] 陈德昌．中药化学对照品工作手册[M]．北京：中国医药N0·HCl)的总量不得少于0．80％。

上述测定结果表科技出版社，2000．明，用于中试投料的麻黄饮片符合2010年版《中华人[3] 国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北民共和国药典》要求。

根据以上测定结果，可以计算3京：中国医药科技出版社，2010：1．批中试样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的平均总转[4] 梁生旺．中药制剂分析[M]．北京：中国中医药出版社，移率约46．81％。

2007．3讨论DO I lO．3870／vvdb．2012．10．034 3批中试样品盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的平均《中华人民共和国药典》利福平及制剂标准中有关物质测定方法的修改建议余忠1，朱江2，徐婷婷1(1．湖北省随州市中心医院药剂科，441300；2．湖北省随州市食品药品监督检验所，441300) 摘要目的对2叭0年版《中华人民共和国药典》中利福平及其制剂质量标准中有关物质测定方法存在的问题进行探讨。

方法采用反相高效液相色谱法，Si ncom C。

色谱柱(含碳量为11％)(150m m×4．6mm，5斗m)，甲醇一乙腈一0．075mol·L“磷酸二氢钾溶液一1．O mo l·L“枸橼酸溶液(10：50：36：4)为流动相，检测波长为254nm。

制订新药质量标准时有关HPLC法检查有关物质的点滴经验

・经验交流・制订新药质量标准时有关HP LC法检查有关物质的点滴经验Ξ卢彩霞1　林力行21南京金鹰医药科技开发有限公司　(南京　210029)　2江苏吴中苏药医药开发公司　(南京　210009)中图分类号　R927.1 文献标识码　A 文章编号　10072306(2004)03262202 尽管薄层色谱法是“有关物质”检查的首选方法,但由于它的分离能力、定量准确性、重复性等均不及液相色谱法,加上含量测定有时也用液相色谱法,两者可方便地同时进行,故液相色谱法用于检查有关物质就越来越多。

2000年版《中国药典》二部收载液相色谱检查“有关物质”,据作者统计有107个品种,而1990年时仅为7个品种。

“有关物质”是指工艺性杂质,如生产过程中原料、中间体、岐副反应产物和存放过程中产生的降解产物。

用液相色谱法测定“有关物质”的关键是防止微量有关物质峰漏检,除了正确地设定色谱峰检测参数(如斜率、峰宽、最小峰面积等)外,还应注意检测方法。

现版《中国药典》有3种方法:①增加进样量。

即将含量测定时的进样量增加若干倍,以放大增加杂质量,产生较高峰响应信号,使大于噪音水平,以防小峰漏检,如已酸羟孕酮。

②调节测定有关物质检测灵敏度,使高于含量测定时的检测灵敏度,也可使杂质峰较含量测定时扩大,以防漏检,如辅酶Q10。

③在增加进样量的同时,又调节检测灵敏度,如吡喹酮。

这3种方法测定时,主峰高度都已超过记录仪满刻度,超满刻度的程度就是有关物质峰扩大的程度。

可用下式表示:超满刻度%=供试品溶液进样量×对照品溶液调节满刻度%对照品溶液进样量现版药典并未具体规定超满刻度的程度,其存在着不超满刻度(如已烯雌酚)至超满刻度300倍,如吡喹酮。

上述3种做法,第1法最好,又简便,只多配一个浓溶液、多进一次样,可沿用含量测定时条件,不再调试峰参数,更有利的是使原先低于检测限的小峰被检出。

第2法省事省时,用面积归一化法计算时不必另配任何溶液,只是以改变检测灵敏度、扩大小峰响应信号,但若此小峰信号与噪音相近,因此噪音信号也被扩大,小峰仍会漏检(通常这类小峰检出已无意义)。

高效液相色谱波长确定原则

高效液相色谱波长确定原则
高效液相色谱（HPLC）波长确定原则是指在HPLC分析中，通过选择合适的检测波长进行检测，以达到最佳的分离和检测效果。

HPLC分析中，通常会选择比较敏感的检测波长进行分析。

这些波长通常是化合物的最大吸收波长或者是在特定波长下具有特定吸
收峰的波长。

同时，考虑到样品的色谱性质和检测灵敏度，选择合适的波长也是非常关键的。

在HPLC波长确定过程中，常用的方法包括：根据荧光性质选择波长、通过UV-Vis吸收光谱分析选择波长、参照文献中的已知波长等。

值得注意的是，在选择检测波长时，还需要考虑到样品的化学性质和色谱条件。

例如，对于含有多种化合物的混合物样品，需要选择不同的波长进行检测以达到最佳的分离效果；同时，在HPLC色谱条件中，如流速、柱温等参数的控制也会对检测波长的选择产生影响。

综上所述，HPLC波长确定原则需要综合考虑样品的化学性质、色谱性质和检测灵敏度等因素，以选择最合适的检测波长，从而达到最佳的分离和检测效果。

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hplc 主成分自身对照法在药物杂质检查中的原理

hplc 主成分自身对照法在药物杂质检查中的原理下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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有关物质测定HPLC方法的建立

有关物质测定hplc方法的建立一、开始之前必须明白：1、有关物质来源的两种途径：1）合成过程中的中间体和副产物；2）储存过程中产生的降解产物；2、分析你的样品结构，熟悉样品的基本性质；3、样品中可能含有的中间体；4、样品的基本稳定性和可能产生的降解产物；二、准备工作1、查阅文献，看看是否同行已经做过类似的工作，有的话就简单了，直接奔主题了。

2、没有文献（苦！），那就很是麻烦了。

1）分析结构，看看有无紫外吸收，有就比较简单，选用紫外检测器就行了，没有的话那就麻烦，可以选用蒸发光散射检测器等；2）分析结构，看看选用何种色谱方式进行分离（正相或者反相色谱）；3）分析结构，看看流动相该如何选择，要不要选用一些离子对试剂。

4）分析结构。

5）与同类产品进行比较；三、开工（以紫外检测为例）1、流动相的选择（采用粗品进行选择）1）、有文献，按文献进行优化。

不过我得提醒一下，文献的方法参考是可以的，要想完全按照他的条件做出来是很难的。

2）、没有文献。

a、紫外扫描一下，看看哪里有最大吸收。

将能得到的中间体、副产物、分解产物、样品配成相同浓度，在紫外扫描分光光度计上扫描一下，选择所有物质具有相同的最大吸收处的波长作为测定波长。

要是有pda检测器就不需要这一步了。

b、还是得找一些资料，看看类似的样品的流动相，以它为起始流动相进行选择，如果没有，那就找专业书吧，看看它是怎么教你选择流动相的。

2、最低检测限3、系统适应性试验重复进样5次，记录色谱图，给出系统评价报告4、考察中间体及副产物和样品的分离度。

同时定出中间体在色谱图中的出峰位置，为定质量标准提供依据。

5、考察降解产物和样品的分离情况。

这个一般是通过破坏性试验来考察。

常用的一般是高温、强光、氧化、强酸、强碱五个因素进行考察，通过考察，应该可以知道色谱图中那些峰是由于什么因素产生，这个也可为定质量标准提供依据。

6、根据上面的试验，应该可以知道样品的一些大概情况了，样品中有哪些杂质应该比较明确了。

HPLC法校正因子研究中的几个问题

HPLC法校正因子研究中的几个问题20111207HPLC法具有将不同物质分离后逐一定量的分离分析能力，在药品有关物质检测中发挥着越来越重要的作用，成为药品杂质控制中常用而有效的手段之一。

在杂质对照品法、加校正因子的主成分自身对照法、不加校正因子的主成分自身对照法、峰面积归一化法等几种常用的杂质定量方式中，校正因子的研究对于选择合适定量方式，准确定量杂质具有重要意义，因而成为杂质分析方法研究中的重要内容之一。

但从目前注册申报资料实际情况来看，校正因子的研究和使用中尚存在一些需要进一步思考和关注的问题。

1.校正因子的定义及特点一般来讲，HPLC定量测定中，物质的检测量W与色谱响应值（峰面积等）A之间的比值称为绝对校正因子，即单位响应值（峰面积等）所对应的被测物质的量（浓度或质量）；而某物质i与所选定的参照物质s的绝对校正因子之比，即为相对校正因子，即通常所讲的校正因子。

目前校正因子主要用于“加校正因子的主成分自身对照法”定量相关特定杂质，这种定量方式因考虑了杂质与主成分的绝对校正因子的不同所引起的测定误差，将标准物质的赋值信息转化为常数，固化在质量标准中，且不需长期提供标准物质，因而成为现阶段杂质控制较为理想可行的手段。

但这种方法有时会因不同仪器及色谱条件的波动，可产生一定范围的误差，需进行充分的方法耐用性验证，并结合色谱峰定位控制等措施，将误差控制在一定范围内。

2.校正因子的测定在校正因子的研究和使用中，标准物质、色谱条件、溶剂、检测波长等均是重要的影响因素，研究中需要予以关注。

2.1 校正因子的测定需要用到特定杂质及主成分的标准物质，这些标准物质应具备量值准确的特点，符合标准物质（对照品）的相关要求；其次，确定校正因子的分析方法应与最终确定的质量标准方法一致，色谱条件等需经筛选优化后确定，如有变更，需考虑对校正因子的影响，必要时重新确定；第三，要关注影响待测物UV吸收的各种因素，如溶液制备所用溶剂最好与最终确定的流动相相同，检测波长最好在特定杂质及主成分UV曲线的峰或谷处，避开吸收值急剧变化波段，以保证测定方法具有较好的耐用性，并保持测定结果的恒定。

HPLC-加校正因子的主成分自身对照法同时测定奥美沙坦酯氢氯噻嗪片中4种有关物质含量

HPLC-加校正因子的主成分自身对照法同时测定奥美沙坦酯氢氯噻嗪片中4种有关物质含量作者：李浩贤林华庆李俊健王远见刘荣余楚钦来源：《中国药房》2020年第07期摘要目的：建立同时测定奥美沙坦酯氢氯噻嗪片中4种已知有关物质（奥美沙坦、奥美沙坦酯二聚体、奥美沙坦酯烯、苯并噻二嗪杂质，简称杂质A、B、C、D）的方法。

方法：采用高效液相色谱（HPLC）-加校正因子的主成分自身对照法进行测定。

色谱柱为YMC-Triart C8;流动相A为乙腈-0.015 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至2.8）（70 ∶ 30，V/V），流动相B为乙腈-0.015 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至2.8）（15 ∶ 85，V/V），梯度洗脱;流速为0.8 mL/min;检测波长为265 nm;柱温为25 ℃;自动进样器温度为4 ℃;进样量为10 μL。

结果：杂质A、B、C、D的校正因子分别为1.42、1.17、0.89、0.92。

奥美沙坦酯、氢氯噻嗪和杂质A、B、C、D的质量浓度线性范围分别为0.252 7～7.580 0、1.152 1～4.562 9、0.244 0～18.299 0、0.244 7～3.670 8、0.265 2～3.978 3、 0.149 9～4.497 3 μg/mL（r 均不低于0.999 7），检测限分别为0.084 2、0.050 7、0.081 3、0.081 6、0.088 4、0.050 0μg/mL，定量限分别为0.252 7、0.152 1、0.244 0、0.244 7、0.265 2、0.149 9 μg/mL，中间精密度、稳定性（24 h）、重复性试验结果均符合相关要求，平均回收率分别为104.00%～108.04%、102.00%～104.94%、100.99%～106.89%、92.00%～95.18%、102.00%～105.06%、103.90%～107.00%（n=3）。

HPLC测定有关物质和含量方法验证

HPLC测定有关物质和含量方法验证1．有关物质（适用于API，制剂，也适用于起始物料，中间体）有关物质方法验证的前提条件：1.各杂质与主峰的混合溶液能用拟定的分析方法有效分离2.根据混合溶液中各峰的紫外吸收波长（或单独测定各组分紫外吸收），选择合适的检测波长。

多波长检测（如有）则分别考察。

3.在检测波长下，选择峰高最小的，计算S/N，预估主成分浓度4.各杂质纯度已知5.根据合成跟踪检测，合理制定各杂质的限度6.供试品溶解方法和提取方法得到合理证明1.1专属性：1.1.1概念在其他成分（如其他杂质，辅料，溶剂）可能存在的情况下，拟定的分析方法能正确测定被检测物的能力。

1.1.2试验方法1.1.2.1定位试验：A.目的对各已知杂质和主峰进行定位B.试验方法：a．配制一定浓度（能够显示出峰纯度，一般为0.1mg/ml）的各已知杂质溶液、拟检测浓度的主成分作为定位溶液b．配制限度浓度各已知杂质与检测浓度的主成分的混合溶液作为分离度试验溶液c．使用拟定分析方法分别进行定位。

C.试验要求：a．空白应不干扰各杂质的测定：如杂质附近有空白峰，二者分离度应大于1.5；杂质峰保留时间处不得为梯度峰拐点b．定位溶液中，已知杂质与主峰的峰纯度应符合规定c．分离度试验溶液中，主峰与相邻杂质的分离度应大于2.0（至少1.5）；各已知杂质之间的分离度应大于1.5（至少1.2）；1.1.2.2强制降解试验A.目的一是通过考察药品在一系列剧烈条件下的稳定性，了解该药品内在的稳定特性及其降解途径与降解产物。

其二，这些试验也能在一定程度上对有关物质分析方法用于检查降解产物的专属性进行验证。

B.试验方法对于高温、光照、强酸、强碱及强氧化剂的浓度及时间、取样方式等没有明确的规定。

具体品种具体模索，初步试验了解样品对影响的因素（高温、光照、酸、碱、氧化）等条件基本稳定情况后，进一步调整破坏试验条件，只要使主药有一定量的降解，并对可能的降解途径和降解机制进行分析，保证实验的意义即可。

(2)HPLC法校正因子研究中的几个问题

HPLC法校正因子研究中的几个问题张哲峰化药药学二部HPLC法具有将不同物质分离后逐一定量的分离分析能力，在药品有关物质检测中发挥着越来越重要的作用，成为药品杂质控制中常用而有效的手段之一。

在杂质对照品法、加校正因子的主成分自身对照法、不加校正因子的主成分自身对照法、峰面积归一化法等几种常用的杂质定量方式中，校正因子的研究对于选择合适定量方式，准确定量杂质具有重要意义，因而成为杂质分析方法研究中的重要内容之一。

但从目前注册申报资料实际情况来看，校正因子的研究和使用中尚存在一些需要进一步思考和关注的问题。

1.校正因子的定义及特点一般来讲，HPLC定量测定中，物质的检测量W与色谱响应值（峰面积等）A之间的比值称为绝对校正因子，即单位响应值（峰面积等）所对应的被测物质的量（浓度或质量）；而某物质i与所选定的参照物质s的绝对校正因子之比，即为相对校正因子，即通常所讲的校正因子。

目前校正因子主要用于“加校正因子的主成分自身对照法”定量相关特定杂质，这种定量方式因考虑了杂质与主成分的绝对校正因子的不同所引起的测定误差，将标准物质的赋值信息转化为常数，固化在质量标准中，且不需长期提供标准物质，因而成为现阶段杂质控制较为理想可行的手段。

但这种方法有时会因不同仪器及色谱条件的波动，可产生一定范围的误差，需进行充分的方法耐用性验证，并结合色谱峰定位控制等措施，将误差控制在一定范围内。

2.校正因子的测定在校正因子的研究和使用中，标准物质、色谱条件、溶剂、检测波长等均是重要的影响因素，研究中需要予以关注。

2.1 校正因子的测定需要用到特定杂质及主成分的标准物质，这些标准物质应具备量值准确的特点，符合标准物质（对照品）的相关要求；其次，确定校正因子的分析方法应与最终确定的质量标准方法一致，色谱条件等需经筛选优化后确定，如有变更，需考虑对校正因子的影响，必要时重新确定；第三，要关注影响待测物UV吸收的各种因素，如溶液制备所用溶剂最好与最终确定的流动相相同，检测波长最好在特定杂质及主成分UV曲线的峰或谷处，避开吸收值急剧变化波段，以保证测定方法具有较好的耐用性，并保持测定结果的恒定。

HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸特拉唑嗪片中有关物质的含量

HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸特拉唑嗪片中有关物质的含量作者：周燕丽余永华马佳丽顾超群谢明华来源：《中国药房》2019年第05期中图分类号 R927.2；O657.72 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2019）05-0627-05DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.05.10摘要目的：建立测定盐酸特拉唑嗪片中有关物质含量的方法。

方法：采用高效液相色谱加校正因子的主成分自身对照法。

色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse XDB C18，流动相为乙腈-高氯酸溶液（20 ∶ 80，V/V），流速为1.0 mL/min，检测波长为246 nm，进样量为20 μL，柱温为50 ℃；绘制盐酸特拉唑嗪和杂质A、B、C的线性方程，以斜率计算各杂质相对于盐酸特拉唑嗪的校正因子，用相对保留时间确定各杂质位置，测定3批盐酸特拉唑嗪片中杂质A、B、C的含量，并与杂质对照品法测得的结果进行比较。

结果：盐酸特拉唑嗪杂质A、B、C的相对保留时间分别为0.39、0.74、2.77，检测质量浓度线性范围均为0.25～3.0 μg/mL，校正因子分别为0.75、1.09、0.84，检测限分别为0.35、0.51、0.43 ng，定量限分别为0.70、1.02、0.86 ng。

3批盐酸特拉唑嗪片中杂质A、B、C的含量分别为0.11%～0.13%、0.03%、0.09%～0.12%，杂质B未检出；与杂质对照品法测定结果一致。

结论：该方法简便快速，可准确测定盐酸特拉唑嗪片中有关物质的含量。

关键词盐酸特拉唑嗪片；有關物质；高效液相色谱法；校正因子Determination of Related Substance in Terazosin Hydrochloride Tablets by HPLC and Principal Component Self-control with Correction FactorZHOU Yanli1，YU Yonghua2，MA Jiali3，GU Chaoqun3，XIE Minghua1（1.Dept. of Pharmacy，Hangzhou Yuhang District First People’s Hosp ital， Hangzhou 311100， China；2.Hangzhou SINOVO Pharmaceutical Co.， Ltd.， Hangzhou 310015， China；3.College of Pharmacy， Zhejiang College of TCM， Hangzhou 310403， China）ABSTRACT OBJECTIVE： To establish the method for the content determination of related substance in Terazosin hydrochloride tablets. METHODS： HPLC and principal component self-control with correction factor were adopted. The determination was performed on Agilent Zorbax Eclipse XDB C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-perchloric acid solution （20 ∶80， V/V） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 246 nm， and sample size was 20 μL. The column temperature was 50 ℃. The linear equations of terazosin hydrochloride， impurity A， B， C were drawn. The correction factors of each impurity related to terazosin hydrochloride were calculated by slope， and relative retention time was used to determinethe position of impurities. The contents of impurity A， B and C in 3 batches of Terazosin hydrochloride tablets were determined and compared with the results of impurity control method. RESULTS： The relative retention time of impurity A， B， C was 0.39， 0.74， 2.77，respectively； the linear range of them were 0.25-3.0 μg/mL， respectively. The correction factors were 0.75， 1.09， 0.84， respectively. The detection limits were 0.35， 0.51， 0.43 ng， and the limits of quantification were 0.70， 1.02， 0.86 ng， respectively. The contents of impurity A， B and C in 3 batches of Terazosin hydrochloride tablets were 0.11%-0.13%， 0.03% and 0.09%-0.12%； impurity B did not detected. The results are consistent with the determination of impurity control method. CONCLUSIONS： The method is simple， rapid and accurate for the content determination of related substances A， B， C in Terazosin hydrochloride tablets.KEYWORDS Terazosin hydrochloride tablets； Related substances； HPLC； Correction factor特拉唑嗪是一种α-肾上腺受体拮抗药，临床上可用于治疗轻度或中度高血压，还适用于良性前列腺增生（BPH）和男性下尿路症状（LUTS）[1]。

HPLC测定有关物质和含量方法验证小结

本贴的目的：讨论目前审评尺度下，药品研发过程中，分析方法的验证项目及目的，试验方法,试验要求本帖仅仅针对于HPLC方法进行讨论方法开发的内容不在本帖讨论范围内1．有关物质（适用于API,制剂，也适用于起始物料，中间体）有关物质方法验证的前提条件:1.各杂质与主峰的混合溶液能用拟定的分析方法有效分离2.根据混合溶液中各峰的紫外吸收波长（或单独测定各组分紫外吸收），选择合适的检测波长。

多波长检测（如有）则分别考察.3.在检测波长下,选择峰高最小的，计算S/N，预估主成分浓度4。

各杂质纯度已知5.根据合成跟踪检测，合理制定各杂质的限度6。

供试品溶解方法和提取方法得到合理证明1.1专属性：1.1。

1概念在其他成分（如其他杂质，辅料，溶剂）可能存在的情况下，拟定的分析方法能正确测定被检测物的能力。

1.1.2试验方法1.1。

2.1定位试验：A.目的对各已知杂质和主峰进行定位B.试验方法：a．配制一定浓度（能够显示出峰纯度，一般为0。

1mg/ml）的各已知杂质溶液、拟检测浓度的主成分作为定位溶液b．配制限度浓度各已知杂质与检测浓度的主成分的混合溶液作为分离度试验溶液c．使用拟定分析方法分别进行定位。

C。

试验要求:a．空白应不干扰各杂质的测定：如杂质附近有空白峰，二者分离度应大于1。

5;杂质峰保留时间处不得为梯度峰拐点b．定位溶液中,已知杂质与主峰的峰纯度应符合规定c．分离度试验溶液中，主峰与相邻杂质的分离度应大于2.0（至少1.5);各已知杂质之间的分离度应大于1.5(至少1.2)；1。

1。

2.2强制降解试验A。

目的一是通过考察药品在一系列剧烈条件下的稳定性，了解该药品内在的稳定特性及其降解途径与降解产物。

其二，这些试验也能在一定程度上对有关物质分析方法用于检查降解产物的专属性进行验证.B。

试验方法对于高温、光照、强酸、强碱及强氧化剂的浓度及时间、取样方式等没有明确的规定.具体品种具体模索，初步试验了解样品对影响的因素（高温、光照、酸、碱、氧化）等条件基本稳定情况后，进一步调整破坏试验条件，只要使主药有一定量的降解，并对可能的降解途径和降解机制进行分析,保证实验的意义即可。

HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸特拉唑嗪片中有关物质的含量

HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸特拉唑嗪片中有关物质的含量1. 引言1.1 研究背景高效液相色谱（HPLC）是一种高效、精确的分析方法，已广泛应用于药物分析领域。

在HPLC分析过程中，由于色谱柱的运用、温度变化等因素，可能会导致色谱峰的漂移，造成定量分析的误差。

为了解决这一问题，加入校正因子及主成分自身对照法成为一种常用的校正方法。

本研究旨在利用HPLC加校正因子的主成分自身对照法，对盐酸特拉唑嗪片中有关物质的含量进行准确测定，以提高药物质量的控制水平，保证药物的安全有效使用。

通过本研究，将为药物检测方法的改进与发展提供参考，并推动相关领域的研究进展。

1.2 研究目的研究目的是为了建立一种可靠、准确的方法来测定盐酸特拉唑嗪片中有关物质的含量，以确保药品质量符合标准要求。

通过使用HPLC 加校正因子的主成分自身对照法，可以提高测定的准确性和精确度，为药物生产和质量控制工作提供有力支持。

本研究旨在探讨该方法在实际药品分析中的应用前景，为相关领域的研究和实践提供参考和借鉴，推动药品检验技术的不断创新与提高。

通过深入研究盐酸特拉唑嗪片中的有关物质含量测定方法，可以为进一步优化药品生产工艺、提高产品质量和安全性提供科学依据，促进药品行业的可持续发展和健康发展。

1.3 研究意义盐酸特拉唑嗪片是一种常用的药物，用于治疗胃酸过多引起的胃溃疡、十二指肠溃疡等消化系统疾病。

而在药品生产和质量控制中，准确测定药物中的活性成分含量是至关重要的。

研究如何准确、快速地测定盐酸特拉唑嗪片中有关物质的含量具有重要的意义。

HPLC加校正因子的主成分自身对照法是一种常用的药物含量测定方法，具有高灵敏度、高分辨率和高准确性的特点。

通过该方法可以有效地对药物中的活性成分进行定量分析，为药品的生产质量提供有力支持。

本研究拟通过HPLC加校正因子的主成分自身对照法，对盐酸特拉唑嗪片中的活性成分进行含量测定，旨在为药品质量控制提供更加可靠的分析方法，并为相关药物的生产和质量管理工作提供参考。

高效液相色谱法测定药品有关物质时的操作要点

高效液相色谱法测定药品有关物质时的操作要点发表时间：2017-06-22T11:18:36.573Z 来源：《医药前沿》2017年6月第16期作者：王磊刘远[导读] 本文对药品有关物质测定中HPLC操作要点进行探讨，为提高测定质量提供参考。

（天津科技大学天津 300222）【摘要】药品安全与人们的生命健康密切相关，因此，加强药品测定方法的研究，对确保药品安全意义重大。

药品测定中高效液相色谱法（HPLC）在测定药品有关物质时具有较高精准度，优点突出，被广泛应用在药品物质测定中。

本文对药品有关物质测定中HPLC操作要点进行探讨，为提高测定质量提供参考。

【关键词】高效液相色谱法；药品；有关物质；测定【中图分类号】R927 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）16-0322-01药品中的相关物质主要指药物生产、贮存环节引入的有机杂质，不仅给药物纯度造成较大影响，而且影响药物疗效的正常发挥，甚至引起不良反应。

HPLC在当前药品中有关物质测定中应用广泛，如何把握测定操作中的要点，提高测定结果准确性，受到越来越多业内人士的关注。

1.溶液配制及系统适用性试验1.1 配制溶液如使用自身对照法进行测定，应分别配制两份对照溶液、供试品溶液，均需进行两次进样。

当需进行复验、产生边缘数据或采用外标法时在分别配制两份的同时，至少各进行三次进样。

另外，使用外标法时，还需对其中一份溶液进行五次连续进样。

1.2 系统适用性试验系统适用性是否满足规范要求直接影响药品有关物质测定结果准确性，其中拖尾因子、重复性、分离度是系统适用性试验中的重要参数，应引起足够的重视。

首先，使用反相高效液相色谱法测定药品中有关物质时，借助峰面积实现，通常对拖尾因子不做要求，而如果出现严重的拖尾现象，会给测量峰面积以及分离效果造成不利影响，甚至会包含杂质，严重影响测定结果准确性，因此，应注重对拖尾因子严加控制。

其次，重复性。

当杂质含量不足0.5%时，要求峰面积相对标准差不能达到10%；当含有0.5%～2%的杂质时峰面积相对标准差不能达到5%。

加校正因子的主成分自身对照法测定马来酸依那普利片有关物质

第一作者简介：魏凯，副主任药师；研究方向：药物分析与质量标准研究。

ＴｅＬ：０４５１５７３５２１６０；１８０４５０６０６２８；Ｅｍａｉｌ：ｗｅｉｋａｉｔｉｍｅｓ＠１６３ｃｏｍ加校正因子的主成分自身对照法测定马来酸依那普利片有关物质魏凯１，李欣２（１．黑龙江天宏药业股份有限公司，哈尔滨１５００３５；２．哈尔滨市食品药品检验中心，哈尔滨１５０００１）摘要　目的：建立加校正因子的主成分自身对照法测定马来酸依那普利片有关物质的含量。

方法：用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲溶液（００１ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸二氢钾溶液，用磷酸调ｐＨ值为２２）乙腈（７５∶２５）为流动相；检测波长２１５ｎｍ；柱温为５０℃。

测定依那普利拉（杂质Ⅰ）和依那普利双酮（杂质Ⅱ）相对于依那普利的校正因子，并进行定量分析。

结果：各色谱系统中依那普利与相邻杂质及各已知杂质间分离良好，依那普利和杂质Ⅰ、杂质Ⅱ在０５～３０μｇ·ｍＬ－１浓度范围内线性关系良好（ｒ＞０９９９）；杂质Ⅰ、杂质Ⅱ校正因子分别为０７１、０９２；杂质Ⅰ的定量方式以加校正因子的主成分自身对照法为宜，加校正因子的主成分自身对照法和外标法测得结果无显著性差异。

结论：该方法简便快速，可准确测定马来酸依那普利片的有关物质。

关键词：马来酸依那普利片；有关物质；校正因子；高效液相色谱法中图分类号：Ｒ９２１２文献标识码：Ａ文章编号：１００９－３６５６（２０２１）０１－００２６－０６ｄｏｉ：１０１９７７８／ｊｃｈｐ２０２１０１００５ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｒｅｌａｔｅｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｓｉｎＥｎａｌａｐｒｉｌＭａｌｅａｔｅＴａｂｌｅｔｓｗｉｔｈｍａｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｅｌｆｃｏｎｔｒｏｌｍｅｔｈｏｄｗｉｔｈｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＷＥＩＫａｉ１，ＬＩＸｉｎ２（１．ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＴｉｍｅｈｏｍｅＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｈａｒｂｉｎ１５００２５，Ｃｈｉｎａ；２．ＨａｒｂｉｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｈａｒｂｉｎ１５０００１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｍａｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｅｌｆｃｏｎｔｒｏｌｃｏｒｒｅｃｔｅｄｗｉｔｈｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｒｅｌａｔｅｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｓｉｎＥｎａｌａｐｒｉｌＭａｌｅａｔｅＴａｂｌｅｔｓＭｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅｔｅｓｔｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｉｎｏｃｔｙｌｓｉｌａｎｅｂｏｎｄｅｄｓｉｌｉｃａｇｅｌｃｏｌｕｍｎｕｎｄｅｒｔｈｅｅｌｕｔｉｏｎｏｆｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎ（ａｄｊｕｓｔｉｎｇｐＨｔｏ２２ｗｉｔｈｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄ）ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（７５∶２５）Ｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ５０℃，ａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２１５ｎｍＴｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓｏｆＥｎａｌａｐｒｉｌａｔ（ｉｍｐｕｒｉｔｙⅠ）ａｎｄｅｎａｌａｐｒｉｌｄｉｋｅｔｏｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ（ｉｍｐｕｒｉｔｙⅡ）ｒｅｌａｔｉｖｅｔｏｅｎａｌａｐｒｉｌｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ，ｔｈｅｎｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓｗａｓｍａｄｅＲｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎＥｎａｌａｐｒｉｌａｎｄｔｈｅａｄｊａｃｅｎｔｐｅａｋｓａｓｗｅｌｌａｓｔｈｅｋｎｏｗｎｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓａｌｌｍｅｔｔｈｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓＴｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｏｆＥｎａｌａｐｒｉｌａｎｄｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓⅠ，Ⅱｗｅｒｅｌｉｎｅａｒｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ０５－３０μｇ·ｍＬ－１（ｒ＞０９９９）ＴｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓｏｆｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓⅠａｎｄⅡｗｅｒｅ０７１ａｎｄ０９２，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙＴｈｅｍａｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｅｌｆｃｏｎｔｒｏｌｍｅｔｈｏｄｗｉｔｈｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓｈｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄｆｏｒｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｉｍｐｕｒｉｔｙⅠ ＴｈｅｒｅｗｅｒｅｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅｅｘｔｅｒｎａｌｓｔａｎｄａｒｄｍｅｔｈｏｄａｎｄｔｈｅｍａｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｅｌｆｃｏｎｔｒｏｌｍｅｔｈｏｄｗｉｔｈｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅａｎｄａｃｃｕｒａｔｅ，ａｎｄｉｔｉｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｒｅｌａｔｅｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｓｉｎＥｎａｌａｐｒｉｌＭａｌｅａｔｅｔａｂｌｅｔｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＥｎａｌａｐｒｉｌＭａｌｅａｔｅＴａｂｌｅｔｓ；ｒｅｌａｔｅｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ；ｒｅｌａｔｉｖｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ；ＨＰＬＣ依那普利片（Ｅｎａｌａｐｒｉｌ）是临床上常用于抗高血压的血管紧张素酶抑制剂。

(2)HPLC法校正因子研究中的几个问题

HPLC法校正因子研究中的几个问题张哲峰化药药学二部HPLC法具有将不同物质分离后逐一定量的分离分析能力，在药品有关物质检测中发挥着越来越重要的作用，成为药品杂质控制中常用而有效的手段之一。

在杂质对照品法、加校正因子的主成分自身对照法、不加校正因子的主成分自身对照法、峰面积归一化法等几种常用的杂质定量方式中，校正因子的研究对于选择合适定量方式，准确定量杂质具有重要意义，因而成为杂质分析方法研究中的重要内容之一。

但从目前注册申报资料实际情况来看，校正因子的研究和使用中尚存在一些需要进一步思考和关注的问题。

1.校正因子的定义及特点一般来讲，HPLC定量测定中，物质的检测量W与色谱响应值（峰面积等）A之间的比值称为绝对校正因子，即单位响应值（峰面积等）所对应的被测物质的量（浓度或质量）；而某物质i与所选定的参照物质s的绝对校正因子之比，即为相对校正因子，即通常所讲的校正因子。

目前校正因子主要用于“加校正因子的主成分自身对照法”定量相关特定杂质，这种定量方式因考虑了杂质与主成分的绝对校正因子的不同所引起的测定误差，将标准物质的赋值信息转化为常数，固化在质量标准中，且不需长期提供标准物质，因而成为现阶段杂质控制较为理想可行的手段。

但这种方法有时会因不同仪器及色谱条件的波动，可产生一定范围的误差，需进行充分的方法耐用性验证，并结合色谱峰定位控制等措施，将误差控制在一定范围内。

2.校正因子的测定在校正因子的研究和使用中，标准物质、色谱条件、溶剂、检测波长等均是重要的影响因素，研究中需要予以关注。

2.1 校正因子的测定需要用到特定杂质及主成分的标准物质，这些标准物质应具备量值准确的特点，符合标准物质（对照品）的相关要求；其次，确定校正因子的分析方法应与最终确定的质量标准方法一致，色谱条件等需经筛选优化后确定，如有变更，需考虑对校正因子的影响，必要时重新确定；第三，要关注影响待测物UV吸收的各种因素，如溶液制备所用溶剂最好与最终确定的流动相相同，检测波长最好在特定杂质及主成分UV曲线的峰或谷处，避开吸收值急剧变化波段，以保证测定方法具有较好的耐用性，并保持测定结果的恒定。

不同波长下测定药品有关物质的讨论

不同波长下测定药品有关物质的讨论某片剂，主药在220nm、254nm下均有较强吸收，254nm吸收值约比220nm大一倍，含量测定采用254 nm，现想对该药物进行有关物质检查，波长初步选择为254nm，经查国内外相关文献，并无该药品的有关物质检查报道，我们想在质量研究中增加在不同波长下考察有关物质的大小试验。

现分别采用220nm和254nm进行同一份样品进行有关物质检测，大致现象为:(1)220nm：杂质峰面积明显增大，主峰峰面积明显减小，故归一化法杂质明显增大，总杂质约1.5%，新增2个杂质，共5个杂质；(2)254nm：杂质峰面积小，主峰面积大，归一化法总杂质约0.3%，共3个杂质；试问，在这种情况下，该如何合理的对比杂质大小、个数？（丁香园版主，lyslinjiu）我资料中体现了粗品与强制降解产物的全波长扫描，当时考虑到各杂质的最大吸收均在280nm，因此就选择了280nm作为有关物质的检测波长，当时也比较了低波长处的归一化限度均小于280nm，但是没有写到资料里去，因此感觉比较冤。

这也体现出目前对杂质研究的重视，对于杂质来说在有较强吸收的地方，分别比较杂质的检出个数与总量，最终根据杂质的量与个数确定合适的波长，当然DAD检测器成为首选，以粗品与降解产物进行DAD测定是目前的基本要求，审核人员希望看到你为建立专属性强的方法做了全面的工作，所选波长基本能检出所有杂质，并且杂质量也是最多的。

曾经咨询过专家的意见，很多品种含量下降与有关物质增加不符合，甚至相差5～10倍，建立专属的有关物质方法是现在审核的中心。

基于上述理由严重建议做充分的工作，比较粗品与强制降解产物的杂质检出个数与数量（你新增的杂质不一定是新增，可能由于浓度低而未检出，采用强制降解一般不会出现上述问题，毕竟有关物质与样品的母体基本相同），最终确定有关物质波长，你的理论上应该选择220nm而非254nm。

最好以DAD检测器得到的结果来证明。

液相方法开发波长选择

液相方法开发波长选择
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析方法，特别是在药物开发和质量控制中。

开发HPLC的方法涉及多个方面的选择与优化，其中波长的选择是非常关键的一步。

1. 找到目标化合物的峰：首先需要确定目标化合物的吸收波长。

这通常可以通过文献查阅或实验来确定。

2. 色谱柱的选择：原料药生产对产品的纯度和杂质含量的要求非常苛刻，因此需要选择具有较高理论塔板数的色谱柱，以提供更好的分离度。

3. 流动相的选择：流动相pH、有机溶剂等是影响选择性的重要因素，需要进行筛选。

4. 检测波长的选择：在确定了目标化合物的吸收波长后，还需要进一步调整以获得最佳的峰形和分离效果。

5. 梯度的优化：除了固定波长外，还可以考虑使用梯度洗脱来进一步提高分离效果。

6. 方法验证：在确定了最佳的色谱条件后，还需要进行方法验证，确保所选的条件能够稳定、可靠地运行。

总的来说，液相方法的开发是一个系统性的过程，需要结合理论知识和实践经验，通过不断的试验和优化来确定最佳的色谱条件。