微生物及无菌操作 PPT课件

微生物生长的影响因素





1．营养物：水分、碳源、氮源、无机盐类 、生长因子 。 2．pH值：各种微生物都有其最适宜的pH值，大多数细菌最适pH为 6.8~7.4，但一般有较大的容忍度，在4~9也可存活和生长，少数细菌能在 极端pH值范围内生长。真菌适于pH值3~6的微酸性环境，但在2~10也可生 长。 3．温度：微生物适于生长繁殖要有适宜的温度，当超过其最低或最高可耐 受的温度时，即停止生长或死亡。一般细菌最适温度为30~40℃，真菌为 20~30℃。 4．氧气：大多数细菌和所有霉菌都是需氧菌（在有氧环境中才能生长）， 少数细菌是厌氧菌（在无氧环境中才能生长），有些细菌和酵母菌是兼性 需氧厌氧的，在有氧或无氧环境中都能生长繁殖。 5．渗透压：微生物细胞膜和所有生物膜一样是一种半透膜，可让水自由通 过，对溶质则有选择性。由于细胞壁的保护，微生物能存活在低渗透压的 水中。而在高渗溶液（如高浓度的盐溶液或糖溶液、40%甘油）中，细胞 会脱水并停止生长繁殖。但也有一些专性耐高盐细菌只有在高盐（10~15%） 条件下才生长。 6．表面张力：表面活性剂可降低表面张力，它是影响细菌生长的因素之一。 很多革兰氏阴性菌，特别是大肠菌群可很好地在表面活性剂包围的介质中 生长，而大多数革兰氏阳性菌在表面张力低时（0.05N/m）不能很好生长。 阳离子表面活性剂对很多有机体有毒性，阴离子表面活性剂毒性很小，非 离子表面活性剂几乎没有毒性，并可成为某些微生物的营养物。
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洁净室的卫生与管理

人是药品生产中最大的污染源之一， 所以要求人员健康、工作时穿 洁净服，进入洁净区要自我约束。工作服和洁净服根据不同生产工段 而定 必须使工作人员对洁净室的重要性和整个安装系统有广泛了解 应制定洁净室管理、使用、灭菌制度 妇女不可用粉、头发喷雾剂、指甲油之类的化妆品，以减少污染源 操作人员应尽可能减少讲话和室内活动
微生物及无菌操作
微生物是什么


微生物是广泛存在于自然界的一群体形微小（直径小于 1mm）、结构简单、肉眼看不见，必须藉助光学或电子显微 镜放大数百至数万倍才能观察到的生物。需要说明的是，微 生物是一个比较笼统的概念，界线有时非常模糊。如单细胞 藻类和一些原生动物也应算是微生物，但通常它们并不放在 微生物中进行研究。 微生物具有以下特点：①体积小，面积大；②吸收多，转化 快（2000倍体重/h）；③生长旺，繁殖快（20min分裂一 次）；④易变异，适应强；⑤分布广，种类多（10万种以 上）。
污染的概念
预防污染是药品GMP的目标要素之一，药品生产过程必须要有防止污染的措施。
污染：指当某物与不潜逃的或腐坏物接触或混合在一起从而使该物变得不 纯净或适用时，它即受到污染。一个比较简单的定义为：“为一个产品中 存 在有不需要的物质时，它即受到污染。” 交叉污染及药物污染的途径： 交叉污染：在生产中，一种原料、中间产品或成品被另一原料或成品污染。 生产中交叉污染及微生物污染的预防措施。特别强调了在生产中应避免原 料或产品被另一原料或产品污染、在加工中原料和产品引发的尘埃、气体、 蒸气、喷雾状或生物体、设备的残留物，昆虫侵入以及操作者的衣服、皮 肤等均有引起交叉污染的危险。
无处不在的微生物




我们所生活的环境中，到处都存在着大量的微生物。在一般空气中，微生物达 800~3500个/m3，在土壤中达1~500×108个/g，在严重污染的水中可达107个 /ml。（饮用水要求细菌总数≤100个/ml，大肠杆菌≤3个/ml。经水塔或贮水池贮 存后，短期内可繁殖至105~106个/ml。）人的头皮上有140万个/cm2，两手上 约有4~40万个，1g指甲污垢有38亿个，1g粪便可达10~1000亿个。可以说微生 物是无处不在，无处不有。许多以前被人们认为是极端（高温、高压、强酸、强 碱、低温等）甚至是致死的环境，现在已发现生活着各种类型的微生物（称为极 端微生物）。事实说明，微生物有特别顽强的生存、繁殖和变异能力来适应环境。 微生物种类繁多，有的对人有益，有的有害，有的无益也无害。但在药品生产过 程中，不可能对环境中的各种微生物加以区别对待，为保证药品的安全有效，需 要对其进行控制。空气中的微生物多数附着在灰尘上，或以芽孢形式悬浮于空气 中，1μm以下者处于悬浮状态，10μm以上者会逐渐沉下来而形成菌尘。所以也 要对尘粒进行控制。 大量临床资料表明，注射剂（尤其是静脉注射剂）如污染了7~12μm的尘粒，可 导致热原反应、肺动脉炎、微血栓或异物肉芽肿等，严重的还会致人死命。而如 果污染了细菌，轻则局部红肿化脓，重则引起全身细菌性感染。因此，对微生物 和尘粒进行更加严格的控制对于针剂生产洁净室非常重要。 人是洁净室最大的污染源，占90%左右。一般男性每人每分钟向周围排放1000 个以上的含菌粒子，女性为750个以上。穿无菌服时，静止时的发菌量为10~300 个/min，一般活动时发菌量为150~1000个/min，行走时发菌量为900~2500个 /min。咳嗽一次发菌量为70~700个/min，喷嚏一次为4000~60000个/min。所以 在洁净室中，人的数量和活动应有特别严格的限制。



工作服应选用不易产生静电、不易脱落纤维的涤纶和尼龙织物
定期清洗与灭菌。室内保持清洁整齐，定期清洁四壁和设备，保证无 尘埃等
卫生的概念


对卫生定义为“身体、精神与社会适应上处于完全良好的状态”。 药品GMP的有关卫生的要素是指的清洁卫生。 在环境卫生方面，厂区要经常保持整洁，不允许堆放设备、物料或 废料，堆放垃圾要远离生产车间，及时清运。 在工艺卫生方面，对操作室、实验室、包装室、仓库、更衣室及卫 生间，以及各种设备、仪器、仪表、物料、容器、照明设施及门窗 等，都必须经常保持整洁，无灰尘。 药品生产企业必须有整洁的生产环境，有防止污染的卫生措施，建 立健全各项卫生管理制度，才能在GMP各要素（包括卫生）共同作 用下生产出优质的药品。
洁净室的净化度标准
洁净度 级别 尘粒最大允许数/m3 ≥0.5μm ≥5μm 微生物最大允许数 浮游菌 /m3 5 100 500 沉降菌/皿
100 500,000
0 2,000 20,000
1 3 10
300 000 10,500,000 60,000