Beclin1、LC3Ⅱ在宫颈病变组织中的表达及意义

Beclin-1、LC3－域在宫颈病变组织中的表达及意义刘洋１），卿清２），孙春意２），李岱株２），杨莹莹２），周红林２）（1）昆明医科大学第二附属医院生殖医学科；２）妇科，云南昆明650101）［摘要］目的检测Beclin-1、LC3－Ⅱ在宫颈病变组织及HPV 感染中的表达，并探讨其临床意义。

方法选取昆明医科大学第二附属医院妇科2014年10月至2016年6月的行宫颈癌筛查（HPV 、TCT ）的患者，筛查结果任意一项异常患者均行宫颈活检，最终选取病检结果为正常的宫颈组织40例（其中HPV 感染20例，无HPV 感染20例）；CIN Ⅰ30例；CIN Ⅱ/Ⅲ30例；年龄范围为25～55岁；妊娠及已行宫颈治疗过的患者不纳入研究范围。

用Western Blot 法检测正常宫颈组织、CIN Ⅰ及CIN Ⅱ/Ⅲ组织中Beclin-1、LC3－Ⅱ相对表达量。

结果（1）Beclin-1在正常的宫颈组织、CIN Ⅰ及CIN Ⅱ/Ⅲ组织中的相对表达量分别为（0.561±0.041）、（0.421±0.018）、（0.351±0.016）；LC3－Ⅱ在正常宫颈组织、CIN Ⅰ及CIN Ⅱ/Ⅲ组织中的相对表达量为（0.683±0.027）、（0.435±0.029）、（0.325±0.017）；Beclin-1、LC3－Ⅱ在3组间的相对表达量差异有统计学意义（<0.001）；Beclin 1，LC3-Ⅱexist in the relative expression between the 3group were statistically significant （<0.001）（2）病检结果为正常的宫颈组织中HPV 感染组中Beclin-1和LC3－Ⅱ的相对表达量均显著低于无HPV 感染组（<0.05）。

结论随着宫颈病变级别的增加，自噬相关基因Beclin-1、LC3－Ⅱ的相对表达量呈下降趋势，提示自噬基因活性下降或缺失可能参与宫颈癌的进展。

［关键词］宫颈病变；自噬；Beclin-1；LC3－Ⅱ［中图分类号］R737.33［文献标志码］A ［文章编号］2095－610X （2019）03－0024－05The Expression and Significance of Beclin-1and LC3－ⅡinCervical LesionsLIU Yang １），QING Qing ２），SUN Chun-yi ２），LI Dai-zhu ２），YANG Ying-ying ２），ZHOU Hong-lin ２）（1）Reproductive ；2）Gynecology ，The 2nd A ffiliated H ospital of K unming M edical U niversity ，YunnanKunming 650101，China ）［Abstract ］Objective To detect the expression and significance of Beclin-1and LC3－Ⅱin cervical lesionsand HPV infection ，and explore their clinical significance.Methods We selected patients in the department of gynecology of the second affiliated hospital of kunming medical university form October 2014to June 2016to accept cervical cancer screening （HPV ，TCT ），and if any result was abnormal ，the patient should be given cervical biopsy .Finally ，40cases of normal cervical tissues （including 20cases of HPV infection and 20cases of no HPV infection ）were selected as the disease test result.CIN Ⅰ30cases;CIN Ⅱ/Ⅲ30cases;the age range from 25to 55years old.The patients who received cervical lesions treatment and pregnant women were not included in the study.Western Blot was used to detect the relative transcript level of Beclin-1，LC3－Ⅱin normal cervical tissues and CIN Ⅰ，CIN Ⅱ/Ⅲ.Results （1）The relative expression levels of Beclin-1in normal cervical tissue and CIN ⅠandJournal of Kunming Medical UniversityCN 53-1221R昆明医科大学学报2019，40（3）：24耀28［收稿日期］2018－10－22收稿［基金项目］国家自然科学基金资助项目（81860515）；云南省卫生计划生育委员会医学后备人才培养项目（H －201629）；云南省卫生科技计划项目（2014NS092，2014NS091，2016NS286，2016NS287，2017NS277）；云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项基金资助项目[2018FB001（-055）]［作者简介］刘洋（1979～），女，吉林四平人，博士，主治医师，主要从事妇科肿瘤与生殖内分泌研究工作。

［通信作者］杨莹莹，E-mail:512459982@ ；周红林，E-mail:km20150515@CINⅡ/Ⅲtissuses were（0.561±0.041），（0.421±0.018）and（0.351±0.016）respectively；The relative expression levels of LC3-Ⅱin normal cervical tissue and CINⅠand CINⅡ/Ⅲtissues were（0.683±0.027），（0.435±0.029）and（0.325±0.017）.The difference in the relative expression of Beclin-1and LC3-Ⅱbetween the3groups were statistically significant（<0.001）.The relative expression of Beclin-1and LC3-II in normal cervical tissues with HPV infection was significantly lower than that in normal cervical tissues without HPV infection （<0.05）.Conclusion With the increase of cervical lesion level，autophagy related genes Beclin-1，the relative expression of LC3-Ⅱis on the decline，suggesting autophagy gene activity decline or loss may be involved in the progress of cervical cancer.［Key words］Cervical lesions；Autophagy；Beclin-1；LC3－Ⅱ宫颈癌为常见的女性恶性肿瘤，其发病率仅次于居第一位的乳腺癌。

全世界范围内宫颈癌每年新发病例约50万人，我国约占27%；每年因此病死亡的女性大约有20万人，我国约占26.5%，严重威胁着全球女性的身体健康，近年来发病率呈年轻化和上升趋势成为宫颈癌的发病特点[1-2]。

目前宫颈癌的发病机制尚不明确，尽管高危型HPV持续性感染是导致宫颈癌的必要条件，但并不是所有HPV感染者最终都会发展成宫颈癌，因此仅HPV 感染而致宫颈癌的条件远远不够，还存在其他因素共同作用导致宫颈癌。

内质网作为蛋白折叠和修饰的重要场所，同时也是病毒复制、成熟的重要细胞器。

当机体受病毒感染时，大量的病毒蛋白被合成，其中未折叠蛋白和错误折叠的蛋白导致内质网应激。

内质网应激状态指在缺氧缺血状态下使内质网功能受损，造成大量未折叠蛋白的聚集，继而激活自噬[3-4]。

细胞自噬为细胞通过溶酶体降解自身成分的途径，参与病原体、受损或多余蛋白质及细胞器的清除，对于维持细胞稳态有重大意义[5]。

已有研究表明，自噬调控途径的异常与肿瘤的发生有一定的关联[6]。

目前国内外有关宫颈病变与内质网应激以及HPV 感染后是否能启动内质网应激研究较少。

本研究通过对自噬相关蛋白Beclin-1、LC3－Ⅱ在不同程度宫颈病变组织及HPV感染组织中的相对表达量进行分析，旨在探究两者在宫颈癌进程中所起的作用，为宫颈病变及HPV感染的治疗提供新思路。

1资料与方法1.1研究对象选取昆明医科大学第二附属医院妇科2014年10月至2016年6月的行宫颈癌筛查（HPV、TCT）的患者，筛查结果任意一项异常患者均行宫颈活检，最终选取病检结果为正常的宫颈组织40例（其中HPV感染20例，无HPV感染20例）；CIN Ⅰ30例；CINⅡ/Ⅲ30例；年龄范围为25～55岁；妊娠及已行宫颈治疗过的患者不纳入研究范围。

用Western Blot法检测正常宫颈组织、CINⅠ及CINⅡ/Ⅲ组织中Beclin-1、LC3－Ⅱ相对表达量。

1.2方法1.2.1标本采集用配套宫颈刷插入宫颈口，在宫颈外口鳞柱状上皮交界处以宫颈外口为中心，沿同一方向顺时针或逆时针均匀旋转3～5周，取出宫颈刷，将刷头放入保存液内保存，先采集LCT 标本，再采集HC2标本，LCT送本医院病理科检测。

病检结果以该院病理科结果为准。

1.2.2Western Blot主要步骤正常宫颈组织及不同级别宫颈病变组织中总蛋白提取；SDS-PAGE电泳；转膜；杂交；显影。