小菜蛾肌球蛋白重链部分cDNA序列克隆、表达概况及分析
小菜蛾泛素延伸蛋白基因的克隆与原核表达
的研 究主 要集 中在 高 等 动 植 物 中 ， 对 昆虫 泛 素 研 而
主要 试 剂 及 工 具 酶 ： ＮＡ 提 取 试 剂 盒 、 Ｒ ＡＭＶ
究较 少 。近年来 ， 多种 昆虫 泛素 的基 因结 构 、 白 反转 录酶 、Ｔ ｑＤＮＡ 聚 合酶 、 胶 Ｄ 对 蛋 ｒ ａ 凝 ＮＡ 回收 试剂
素延伸蛋 白基 因 Ｐｚｕ ｉＧ ｎ ａ ｋＮ ． Ｊ ２ ４ ９ ， 苷酸序 列全 长 ５ ７ｂ ， 中开 放 阅读 框全 长 ３ ７ｂ ， ． ｂ（ ｅＢｎ ｏＦ５７８）核 ￣ ３ ｐ 其 ８ ｐ 编码
１ ９ 氨基 酸 残 基 ， 测 分 子 质 量 为 １． ｕ 等 电点 为 ９ １ 与 已知 真 核 生 物 泛 素 延 伸 蛋 白 的 同源 性 为 ９ ～ ２个 预 ６ ７ｋ ， ．， ２ ９ 。Ｒ － Ｃ 结 果 显 示 Ｐ ￣ｂ 在小 菜蛾 不 同 生 长 发 育 时期 均有 表 达 ， 中卵 期 、 龄 期 和预 蛹 期 含 量 较 高 ， ８ ＴＰ Ｒ ａｕ ｉ 其 ３ 而
小 菜 蛾 泛 素 延 伸 蛋 白基 因 的 克 隆 与 原 核 表 达
李 晓梅 陈 永 李 殉 钟 国华
华 南农 业 大 学 昆 虫毒 理 研 究 室 ， 州 ５ ０ ４ 广 １６ ２
摘要
利用 Ｒ －Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ和 ＲＡ Ｅ技 术 ， 小 菜 蛾 （ ｕｅｌ ｙｏｔｌ ） 幼 虫 的 ｃ Ａ 为 模 板 ， 隆获 得 泛 Ｃ 以 Ｐｌｔｌ ｘ ｌｓ ｌ ３龄 ａ ｅａ ＤＮ 克
水解 酶复 合体 通路 （ ｂｑ ｉｎｐｏｅｓｍｅｐｔｗａ ， Ｐ ｏ ｇ 公 司 ； 达 载 体 ｐ Ｔ一２ （ ） ｕ ｉｕｔ ｒｔａｏ ａｈ ｙ ｒ ｍｅ ａ ｉ 表 Ｅ ３ ａ ＋ 由华 南 农 业
小菜蛾p38MAPK基因的克隆与生物信息学分析
小菜蛾p38MAPK基因的克隆与生物信息学分析作者：胡霞谷希树刘晓琳等来源：《山东农业科学》2013年第08期摘要：小菜蛾（Plutella xylostella L）是一种危害十字花科植物的世界性害虫，研究其基因功能为寻找新的小菜蛾防治方法具有重要意义。
本研究克隆了小菜蛾p38 MAPK基因的开放阅读框（ORF），并根据其DNA序列推导出了蛋白一级结构，发现该基因编码一个含有349个氨基酸残基的蛋白。
通过SMART网站分析发现该蛋白在第20～304位氨基酸残基区域存在着一个典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域，说明它是一个潜在的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。
Blast比对发现Pxp38基因与家蚕Bmp38基因、酿酒酵母ScHOG1基因、人类Homo sapiensp38 基因在蛋白一级结构上的相似性分别是917%、516%和786%，说明p38 MAPK基因在进化上具有较高的保守性。
关键词：小菜蛾；p38基因；MAPK；丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶；生物信息学分析中图分类号：Q785：Q969.42+5.2 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2013）08-0015-04小菜蛾（Plutella xylostella L）属鳞翅目（Lepidoptera）菜蛾科（Plutellidae），其分布范围广，繁殖能力强，主要取食十字花科植物，严重危害蔬菜生产[1，2]。
由于小菜蛾的抗药性发展十分迅速，因此，寻找新的防治方法已经变得十分迫切[3，4]。
为了更好地实现小菜蛾的防治，需要更多地了解小菜蛾的基因尤其是耐药基因及响应外界刺激相关基因的生物学功能[5～。
2012年福建农林大学的尤民生教授等[7]领导的国际合作小组第一次完成了小菜蛾的全基因7]组序列图谱的绘制，这为小菜蛾基因功能的研究以及发展新的防治手段揭开了新的篇章，具有重要意义。
本研究就是在小菜蛾全基因组测序的基础上完成的。
蛋白质在细胞内发挥生物学功能经常需要磷酸化和去磷酸化修饰，细胞中具有磷酸化修饰功能的酶是蛋白激酶[8]。
小菜蛾泛素基因的克隆与分析
因的功能提供了参考．
［ 关键词 ］ 小菜 蛾 ， 泛素基 因家族 ， Ｒ Ｎ Ａ干扰 ， 基因沉默
［ 中图分类号 ］ ￥ ４ ８ １ ＋ ４ ［ 文献标 志码 ］ Ａ ［ 文章编 号］ １ ０ ０ １ — ４ ６ １ ６ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ３ — ０ ｌ １ ６ 一 ｏ ４
ｐ ｏ ｌ ｙ ｍ ｅ ｒ ａ ｓ ｅ ｃ ｈ ａ ｉ ｎ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ （ Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ） ． Ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ Ｒ Ｎ Ａ ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ （ Ｒ Ｎ Ａ ｉ ） ， ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ｓ ｙ ｓ ｔ ｈ ｅ ｓ ｉ ｚ ｅ ｄ ｄ ｏ ｕ ｂ ｌ ｅ — ｓ ｔ ｒ ａ ｎ ｄ ｅ ｄ Ｒ Ｎ Ａ
Ｃ ｌ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ Ａｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ Ｕｂ ｉ ｑ ｉ ｔ ｉ ｎ Ｇｅ ｎ ｅ ｓ ｏ ｆ Ｐ ｌ ｕ ｔ ｅ ｌ ｌ ａ Ｘ ｙ ｌ ｏ ｓ ｔ ｅ Ｕ ａ （ Ｌ． ）
Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｈｏ ｎ ｇ ， Ｄｕ Ｙａ ｑ ｉ ｏ ｎ ｇ ， Ｌ ｉ Ｆ ｅ ｎ ｇ ｌ ｉ ａ ｎ ｇ ， Ｚ ｈ ｏ ｕ Ｚ ｈ ｏ ｕ ， Ｇｕ Ｓ ｈ ｕ ｙ ｕ ， Ｃｈ ｅ ｎ ｇ Ｌ ｕ ｏ ｇ ｅ ｎ
江西农业大学学报第1～6期总目次
牛 Ａ Ｇ Ｔ４基因结构 和功能的生物信息 学分 析 …………………………… …… …… …… 马 云， 莹莹 ， 芬 ， （３ ） Ｎ ＰＬ 骆 李 等 １５
肠道病原性大肠杆菌和宿主细胞问的相互作用 肠侵袭性大肠杆菌感染野猪 的诊断和药敏试验
・
……………………… ………… …………………… 李正平 ， 倩（ ４ ） 杨 １ １ ………………………………………… 何光 志， 田维毅 ， 平 ， （４ ） 王 等 １４
・
杂种马褂木无性系生根遗传变异 的研究 …………………………………………………… 余发 新， 小艳 ， 柱 ， ９ ） 孙 高 等（０ 江西大岗山常绿阔叶林 土壤养分特征研究 ………………………………………………… 王 燕 ， 苑秋 ， 刘 曾平生 ， （６ 等 ９） 退化红壤区不同重建模 式森林土壤微生物碳氮特征研究
园艺科学 ・
……………………… …… … 巩 效伟 ， 焰青 ， 段 黄静文 ， （ １ 等 ３）
不同水分处理对甜椒穴 盘老化苗形成 的影 响 …………… …… …… ……………………… 刘韶焕 ， 瑞 ， 赵 高凌娜 ， （５ 等 ３）
・
猕猴桃采后软化过程中 １ ３一甘露 聚糖 酶活性变化 ……………………………………… … 任 艳芳 ， 兰兰， 张 何俊 瑜 ， （０ 等 ４） 壳聚糖处理对 “ 杨小 一 ，” 丰蜜桔果实采后生理及贮藏效果 的影 响 … …………………………… 林 玲 ，陈金 印（５ ２６ 南 ４）
柑 橘 类植 物 Ｇ Ａ Ｐ Ｔ基 因 片段 克 隆 和 Ｓ Ｐ分 析 Ｎ … … … … … … … … … … … … … … … … … … …… …… … 吴 波 ， 勇 （ １ 刘 ５）
小菜蛾细胞色素P450基因的cDNA片段克隆及其序列分析
，
也是 抗 药性容 易产 生 和增 强 的害虫 之一 ， 为探 明
小菜蛾对杀虫剂的抗性机制 ， 我们利用简并引物 ， 采
用 Ｒ —Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ方法 克隆 小 菜 蛾 细 胞 色 素 Ｐ ５ ４ ０基 因 的
物的解毒中起重要作用 ， 迄今已有 ２ １ Ｐ ５ ８ 个 ４０家族 基 因和 ５ ２个亚 家 族 基 因被发 现¨ 。细 胞 色 素 ４ Ｊ Ｐ５ 与昆虫的抗药性关 系密切 Ｊ但 目前有关细 ４０ ，
中圈分类号 ： ￥ ３． ４ ３４ 文献标 识码 ： Ａ 文章编号 ： １０ ￣４０ ２０ ） １０２ ４ ００ ！４ （０ ６ ０ －０ ９３ ． ４
Ｃｌｎ ｎ ｎ ｅ ｕ ｎ ｅ Ａｎ ｌｓｓｏ ＤＮＡ ａ ｍｅ ｔｏ ｔ ｃ ｏ ４ ０ ｏ ｉ ｇ ａ ｄ Ｓ ｑ ｅ ｃ ａ ｙ ｉ ｆａ ｅ Ｆｒ ｇ ｎ ｆＣｙ ｏ ｈｒ ｍｅ Ｐ ５
ａ ａｙ ｉ ｎ ｌｓｓ
自 １６ ９７年 Ｒ ｙ首 先 在 家 蝇 （ ｓ ｄ ｅｔａ ａ Ｍｕｃ ｏｍ ｓｃ ） ａ ｉ
集 中于家蝇 、 果蝇 、 棉铃虫上 。小菜蛾 Ｐｕ ｌ ｙ ｌｅａｘ－ ｔｌ ｌ ｔｌ Ｌ ） ｏｅａ（ ． 是世 界上 十字花科蔬菜 的主要 害虫之 ｓｌ
一
中确定细胞色 素 Ｐ ５ ４ ０的存在后 ， 已证 明细胞 色素 Ｐ５ 广 泛存 在 于原 核 和真 核生 物 中。细 胞 色素 ４０ Ｐ ５ 是结构 、 ４０ 性质类似但又有差异的一族蛋 白质 ， 在原核和真核生物对药物 、 杀虫剂 、 植物毒素等外源
ｉａ ｉ ｏｄ ａｋｍ ｔ，（ ｌ ｅａＸ ｌ ｔｌ） ａｓｓｅｔ ｌ ｓ ａ ｉ Ｃ０ｏ ３ ． ５ｍ ／ ｎａ ｒｔ ｉ ｌｂｒｔ ｙ ｎ ｒｄ ｍ ｎ ｂｃ ｏ ｔ ａ ｈ Ｐｕ ｌ ｙ ｓ ｌ ， ｕｃｐｉ ｅ ｔ ｉ ｗｔ Ｌ ５ ｆ ８ ７ ｇ Ｌ ｔ ｆ ｖｌ ａ ｎ ａｏａ ｒ ｔｔ ｏ ｅａ ｂ ｒｎ ｈ ｏｅ ｅ ｅ ｏ ｃｎ ｉｏ．Ｓｑ ｅｃ ｎｌ ｉ ｓｏ ｅ ａ ｔｅｅｉ ａｈｇ ｍｌｒｙｂｔｅｎｔｅｆ ｇ ｅｔ ｆ Ｄ Ａａ ｄＣ ｐ ａ ｉ ． ｏｄｔ ｎ ｅｕ ｎｅａａ ｓ ｈｗ ｄｔ ｔｈｒ ｓ ｉｈｓ ｉ ｉ ｅ ｅ ａｍ ｎ Ｎ ｎ ｙ６ｆｍ ｌ ｉ ｙｓ ｈ ｉ ａｔ ｗ ｈ ｒ ｏｅ ｙ Ｋｅ ｏｄ ： ｄａ ｏ ｄ ａｋｍ ｔ （ ｌ ｅａｘｌ ｔ ａ ；ｃｔ ｈｏ ｅＰ ５ ｙｗ ｒ ｓ ｉｍ ｎ ｂ ｃ ｏ Ｐｕ Ｕ ｙｏ ｅ ） ｙ ｃ ｒｍ ４ ０；ｃｏｉｇｏ Ｄ Ａ ｆ ｇ ｅ ｔ ｅｕ ｎｅ ｈ ｔ ｓＵ ｏ ｌｎｎ ｆ Ｎ ｒ ｍ ｎ ；ｓｑｅ ｃ ｅ ａ
鹅肌球蛋白重链1基因MyHC1全长cDNA克隆、序列及胚胎期表达特征分析
鹅 Ｄ ＮＡ克 隆 、 序 列及 胚 胎 期表 达 特 征分析
李 艳艳 邵 芳 吴小 娟 ２ 石亦 静 郁建 锋 。 顾 志 良
ｌ苏州大学 基础 医学与生物科学学院 ， 苏州 ２ １ ５ １ ２ ３ ； ２常熟理工学院 生物与食品工程学院， 常熟 ２ １ ５ ５ ０ ０ ； ３ 南京医科大学 附属常州市第二 人 民医院肿瘤科 ， 常州 ２ １ ３ ０ ０ ３ 通讯作者 ， ｚ ｈ ｉ ｌ ｉ ａ ｎ ｇ ｇ ｕ ８ ８ ＠ｈ ｏ ｔ ｍａ ｉ ｌ ． Ｃ Ｏ １ Ｔ Ｉ
摘
要
肌 球 蛋 白是组 成肌 原 纤维 粗丝 的主 要 成分 ， 在肌 肉生 长 发育和 运 动收缩 过 程起 重要 作用 。本 研
究采用反转录 Ｐ Ｃ Ｒ和 快 速 扩 增 ｃ ＤＮＡ末 端 （ ｒ ａ ｐ ｉ ｄ ａ ｍｐ ｌ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ＤＮ Ａ ｅ ｎ ｄ ｓ ， Ｒ Ａ Ｃ Ｅ ） 方法 ， 从 太湖 鹅 ａ ｎ ｓ ｅ ｒ ａ ｎ ｓ ｅ ｒ ） 肌 肉中克 隆 到肌 球 蛋 白重链 １ 基 因（ ｍｙ ｏ ｓ ｉ ｎｈ ｅ ａ ｖ ｙ ｃ ｈ ａ ｉ ｎ １ ， Ｍｙ Ｈ Ｃ １ ） 的全 长 ｃ Ｄ ＮＡ， 并运 用生 物信 息 学 的方 法 对其 进 行分 析 ， 实 时 荧光 定量 Ｐ Ｃ Ｒ （ Ｒｅ ａ ｌ — ｔ ｉ ｍｅ ｌ ｆ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｔ ｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｐ Ｃ Ｒ ， ｑ Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ ） 检 测 Ｍｙ ＨＣ １ 基
因 在 鹅 胚 胎 期 的 表 达 情 况 。研 究 结 果 表 明 ， 鹅 Ｍｙ Ｈ Ｃ １ 基因（ Ｇｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ登录 号： Ｋ Ｍ６ ７ ５ ４ ６ ９ ） ｃ ＤＮ Ａ全长 ６
湖南部分地区小菜蛾抗药性监测及小菜蛾ABCG2基因的表达特征研究
湖南部分地区小菜蛾抗药性监测及小菜蛾ABCG2基因的表达特征研究小菜蛾plutella xylostella(L.)是一种针对十字花科蔬菜危害十分严重的世界性害虫。
茚虫威是一种作用机理独特,杀虫广谱,且对非标靶生物低毒性的嗯嗪类杀虫剂,但由于长期不问断的使用,小菜蛾对其产生的抗药性日趋严重,导致其对于小菜蛾的防治的应用价值降低。
本文首先对湖南部分地区田间小菜蛾进行抗药性监测,以期为湖南部分地区田间小菜蛾的综合防治提供一些建设性的意见。
ABC转运蛋白超家族基因在生物体对外源毒性物质的吸收、转运、代谢中起着至关重要的作用,很可能是导致生物体对药物产生抗性的一种机制,ABCG2基因是其中的一员。
本研究另一方面,对小菜蛾茚虫威抗性品系进行了选育并检测了ABCG2基因在小菜蛾不同龄期、不同组织部位mRNA表达量的差异以及对茚虫威抗敏品系间ABCG2基因转录水平的表达量变化进行了分析,以了解小菜蛾ABCG2基因在茚虫威抗性产生过程中起到的作用。
1.小菜蛾抗药性监测采用叶片浸渍饲喂法测定湖南3个地区的田间小菜蛾对9种杀虫剂的抗性。
结果表明,小菜蛾对定虫隆、阿维菌素、茚虫威、高效氯氟氰菊酯表现为高水平至极高抗性水平,对溴虫腈、甲维盐、多少菌素表现为中等水平抗性,对氯虫苯甲酰胺、苏云金芽孢杆菌相对敏感。
因此,湖南这3个地区不适合继续使用定虫隆、阿维菌素、茚虫威、高效氯氟氰菊酯,应该交替使用溴虫腈、甲维盐、多少菌素,并侧重对氯虫苯甲酰胺及苏云金芽孢杆菌的轮换使用,从而延缓、控制抗药性的发展。
2.小菜蛾茚虫威抗性品系的室内选育茚虫威抗性品系(R)室内在茚虫威持续处理,抗性倍数达到208.52倍,致死中浓度LCso为39.62mg/L。
3.小菜蛾ABCG2基因表达特征分析试验发现ABCG2基因在小菜蛾整个生命过程中都有表达,表达量在幼虫期间呈升高趋势,而且雄虫的表达量明显比其几个生长阶段要高,分别是3龄期幼虫的5.63倍、4龄期的3.67倍、蛹期7.36倍、雌虫的3.51倍。
小菜蛾PxALP1基因时空表达谱分析
小菜蛾PxALP1基因时空表达谱分析摘要：小菜蛾是最早对Bt毒蛋白产生抗性的重要农业害虫之一，而膜结合碱性磷酸酶是小菜蛾体内疑似Bt毒蛋白的直接受体之一。
我们在之前的工作中克隆了小菜蛾碱性磷酸酶编码基因PxALP1，本研究对该基因的时空表达谱进行了分析。
在小菜蛾所有生命阶段中，PxALP1基因在3龄幼虫中表达水平最高；而在小菜蛾3龄幼虫不同组织中，PxALP1基因在中肠中表达水平最高，这些都可能与PxALP1基因对Bt毒蛋白产生抗性的生物学功能密切相关关键词：小菜蛾；PxALP1；碱性磷酸酶；Bt毒蛋白受体；表达谱中图分类号：S436.341.2+4：Q786 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2017）04-0001-04Analysis of Plutella xylostella ALP1 Gene ExpressionPatterns at Different Time and SpaceHu Xia，Xu Weihong，Liu Baiming，Zou Deyu，Xu Jingyang，Liu Xiaolin，Bai Yichuan，Gu Xishu （Tianjin Institute of Plant Protection，Tianjin 300384，China）Abstract The diamondback moth，Plutella xylostella（L.），is one of the important agricultural pests firstly producing resistances to Bt toxin. The membrane bound alkaline phosphatase is a potential direct receptor of Bt toxin in diamondback moth. We had cloned the coding ORF of Plutella xylostella alkaline phosphatase gene PxALP1 in previous works，so we analyzed the expression patterns of this gene at different time and space in this paper. Through the whole life span of Plutella xylostella，PxALP1 gene had the highest expression level in the 3rd instar larvae；and among all the tissues and organs of the 3rd instar larvae，PxALP1 gene had the highest expression level in the midgut. The expression patterns of PxALP1 gene might be closely related to the resistant function of Bt toxin.Keywords Plutella xylostella；PxALP1；Alkaline phosphatase；Bt toxin receptor；Expression patterns 小菜蛾[Plutella xylostella （L.）]属于鳞翅目（Lepidoptera）菜蛾科（Plutellidae），又被称为菜蛾、吊丝虫等，是一种为害十字花科蔬菜的世界性害虫，寄主多达40种以上，在我国各地均有分布[1]。
几种鳞翅目昆虫几丁质酶基因的克隆与表达研究
Linker区一般要经过O-位的高度糖基化修饰,而在催化区也会有部分N-位糖基化修饰。利用NetOGlyc 2.0软件发现在甜菜夜蛾几丁质酶氨基酸序列中有23个O-位糖基化位点,粘虫几丁质酶氨基酸序列中有21个O-位糖基化位点,而玉米螟和二化螟几丁质酶氨基酸序列中均具有29个O-位糖基化位点。
N-位糖基化修饰的位点数目也是不一样的,甜菜夜蛾、粘虫和玉米螟3种昆虫几丁质酶氨基酸序列中存在2个N-位糖基化位点,二化螟几丁质酶氨基酸序列中存在3个N-位糖基化位点。除O-位和N-位糖基化位点以外,昆虫几丁质酶氨基酸序列中还存在多个硫酸化和磷酸化位点,这些位点可以通过Expasy分子生物学服务器上的Prosite软件找到,它们的存在对于蛋白功能的发挥均起到一定的作用。
通过NCBI上的Blast软件比较分析,甜菜夜蛾几丁质酶氨基酸序列与烟草天蛾几丁质酶氨基酸序列同源性达到81%,与棉铃虫几丁质酶氨基酸序列同源性达到87%,与斜纹夜蛾几丁质酶氨基酸序列同源性达到96%,与美国白蛾几丁质酶氨基酸序列同源性达到83%,与其他鳞翅目昆虫几丁质酶氨基酸序列同源性达到也达到75%以上。其他3种昆虫几丁质酶氨基酸序列与已经发表的昆虫几丁质酶氨基酸序列进行比较也得到了类似结果,说。
小菜蛾PxALP1基因的克隆与生物信息学分析
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｔ ｈ ｅ ｄ ｉ ａ ｍ ｏ ｎ ｄ ｂ ａ ｃ ｋ ｍｏ ｔ ｈ ， Ｐ ｌ ｕ ｔ ｅ ｌ ｌ ａ ｘ ｙ ｌ ｏ ｓ ｔ ｅ ｌ ｌ ａ（ Ｌ ． ） ，ｉ ｓ ｏ ｎ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｗ ｏ ｒ ｌ ｄ ｗ ｉ ｄ ｅ ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ ｐ ｅ ｓ ｔ ｓ
Ｈｕ Ｘｉ ａ ，Ｌ ｉ ｕ Ｘｉ ａ ｏ ｌ ｉ ｎ，Ｂ ａ ｉ Ｙｉ ｃ ｈ ｕ ａ ｎ，Ｘｕ Ｗｅ ｉ ｈ ｏ ｎ ｇ，Ｌ ｉ ｕ Ｂ ａ ｉ ｍｉ ｎ ｇ ，Ｚ ｏ ｕ Ｄｅ ｙ ｕ，Ｘｕ Ｊ ｉ ｎ ｇ ｙ ａ ｎ ｇ ，Ｇ ｕ Ｘｉ ｓ ｈ ｕ
（ Ｔ ｉ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆＰ ｌ ａ ｎ ｔ Ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ， Ｔ ｉ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ３ ０ ０ ３ ８ ４ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
小菜蛾 Ｐ ｘ Ａ Ｌ Ｐ １基 因的克隆与生物信 息学分析
胡 霞， 刘 晓琳 ， 白义川 ， 徐 维红 ， 刘佰 明， 邹德玉 ， 许静杨 ， 谷希树
（ 天津市植物保护研究所 ， 天津 ３ ０ ０ ３ ８ ４ ） 摘要 ： 小菜 蛾是一种世界性分布的重要农业害虫 ， 也是最早对无公害生物农药 Ｂ ｔ 毒素产生抗性 的种群 之
型的跨膜结构域 ， 说 明它是一个潜在的膜结 合碱性磷 酸酶 。通 过进化 树分析 ， 发 现小菜蛾 Ｐ ｘ Ａ Ｌ Ｐ １与鳞翅 目 昆虫家蚕膜结合碱性磷酸酶 的亲缘关 系最 近 ， Ｂ Ｌ Ａ Ｓ Ｔ比对发现 Ｐ ｘ Ａ Ｌ Ｐ １与家蚕 Ｂ ｍ Ａ ｌ ｐ ｍ在氨基 酸序列上 的一
致性 （ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｔ ｙ ） 为３ ６ ． ３ ％， 相 似性 （ ｓ ｉ ｍ ｉ ｌ ａ ｉ ｒ ｔ ｙ ） 为５ ０ ． ３ ％， 说 明二者之间具有较好 的进化保守性 。
小菜蛾和甜菜夜蛾鱼尼丁受体基因克隆及分子药理学研究
小菜蛾和甜菜夜蛾鱼尼丁受体基因克隆及分子药理学研究自氟虫双酰胺和氯虫苯甲酰胺成功创制以来，作用于昆虫鱼尼丁受体（RyR）的化合物合成以及昆虫鱼尼丁受体基因克隆成为研究热点。
两种杀虫剂对鳞翅目昆虫均具有较好的活性，然而具体的作用位点尚未明确。
本文以小菜蛾幼虫和甜菜夜蛾脂肪体细胞为研究对象，利用RT-PCR克隆两种昆虫的RyR基因。
并利用荧光定量PCR首次研究了二酰胺类杀虫剂对小菜蛾和甜菜夜蛾脂肪体细胞鱼尼丁受体基因表达量的差异。
结论如下：1）本研究克隆了小菜蛾鱼尼丁受体（Px-RyR）基因cDNA全长，为15748bp，开放阅读框为15372bp，预测其可以编码5123个氨基酸，分子量为579.5kDa，等电点为5.45。
通过对氨基酸二级结构分析，小菜蛾鱼尼丁受体基因，在C-末端存在6个跨膜区域，且存在一个成孔区域GVRAGGGIGD，在小菜蛾鱼尼丁受体基因的N-端存在RyR结构域，此序列出现四次重复，平均相似性为33%。
小菜蛾RyR氨基酸序列与烟芽夜蛾和家蚕的相似性均为92%，与果蝇的相似性为78%，与脊椎动物鼠RyR1、RyR2、RyR3的相似性分别为45%、47%、46%。
采用实时荧光定量PCR研究发现鱼尼丁、氟虫双酰胺、氯虫苯甲酰胺、溴氰虫酰胺处理均使敏感小菜蛾3龄幼虫鱼尼丁受体表达量增大。
且对氯虫苯甲酰胺产生16.8倍抗性的小菜蛾体内鱼尼丁受体mRNA表达量是敏感小菜蛾的5.79倍。
而对照药剂甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和溴虫腈对小菜蛾幼虫鱼尼丁受体表达量均无影响。
2）本研究也克隆了甜菜夜蛾脂肪体细胞鱼尼丁受体基因cDNA开放阅读框，为15357bp，预测其可以编码5118个氨基酸，分子量为578.7kDa，等电点为5.44。
其余特性与小菜蛾均相似。
本研究表明氯虫苯甲酰胺可以使甜菜夜蛾脂肪体细胞RyR表达量上调。
随着氯虫苯甲酰胺浓度(0.1nM,1nM,10nM,1M,100M)的增大，在处理后24h Se-RyR表达量是逐渐增大的。
项目名称小菜蛾基因组的研究
项目名称：小菜蛾基因组的研究提名推荐奖种：福建省自然科学奖提名推荐单位：专家提名项目简介：小菜蛾Plutella xylostella (L.) 是为害十字花科蔬菜的一种重要的世界性害虫，由于其分布范围广、繁殖速度快、抗性水平高，已经成为最难防治的害虫之一。
全世界每年因小菜蛾造成的损失和防治费用达40-50亿美元（在我国高达7.7亿美元）。
由于缺乏基因组信息，制约了小菜蛾猖獗危害和灾变过程分子遗传机理的系统研究。
项目组克服了小菜蛾基因组高度杂合的特点，成功破译小菜蛾基因组，揭示了其广泛适应性的遗传学基础以及解毒寄主植物化学防御物质和化学农药的分子机理，为小菜蛾的有效防治和可持续控制奠定了重要理论基础。
（1）自主研发拼接软件Rabbit，率先破译小菜蛾基因组，为研究复杂基因组提供了范例。
针对小菜蛾基因组高度杂合的特点，采用Fosmid-to-Fosmid结合WGS的测序和组装技术，自主研发配套的基因组组装软件Rabbit，解决了大片段重叠序列组装和杂合区域排除的技术难题，成功破译小菜蛾基因组（343 Mb；N50=737 kb）。
在面临国际上多个单位几乎同时启动小菜蛾基因组研究项目的激烈竞争中，率先完成并在Nature Genetics发表了小菜蛾基因组的研究成果，在国际上得到广泛的应用。
（2）发现并解析基因组的结构变异，阐明了小菜蛾广适应性并成为一种世界性害虫的遗传学基础。
在转录组测序和表达谱分析的基础上，项目组开展了小菜蛾基因组的注释和比较基因组的研究，鉴定了18,071个蛋白质编码基因，新增小菜蛾基因16,619个（92%），创建了小菜蛾基因组和转录组数据库，奠定了我国在小菜蛾基因组研究领域的国际领先地位。
利用已有的基因组信息构建了昆虫系统发育进化树，发现小菜蛾是鳞翅目昆虫中一个基础物种；通过个体间基因组的比较研究，发现小菜蛾种群内部存在着大量的基因组变异，阐明了小菜蛾广适应性并成为一种世界性害虫的遗传学基础。
小菜蛾普通气味结合蛋白Ⅰ基因的克隆及原核表达的开题报告
小菜蛾普通气味结合蛋白Ⅰ基因的克隆及原核表达
的开题报告
一、研究背景及目的：
小菜蛾（Platynota stultana）是一种在全世界都广泛分布的重要农
业害虫，以为害瓜、豆科等蔬菜作物而著称。
小菜蛾对植物花香和气味
十分敏感，因此，利用其嗅觉特性，通过研究其感觉系统的分子机制，
为其有效的控制提供重要的科学依据。
小菜蛾普通气味结合蛋白（General odorant-binding protein，GOBP）是其嗅觉感受器官中的一种重要蛋白质，参与了昆虫的嗅觉识别过程。
因此，本研究旨在通过克隆
小菜蛾的GOBP基因，并利用原核表达系统进一步研究其生物学特性和
生物活性。
二、研究内容和方案：
1、小菜蛾GOBP基因的克隆
从小菜蛾感觉器官中提取总RNA，通过反转录PCR方法合成cDNA。
基于序列比对，在已知的昆虫GOBP蛋白序列中设计特异性引物，利用PCR技术扩增得到小菜蛾GOBP基因的全长cDNA序列，并进行生物学信息分析。
2、小菜蛾GOBP基因的原核表达
将小菜蛾GOBP基因的编码序列克隆至原核表达载体上，通过大肠
杆菌表达系统在大肠杆菌中表达大量的小菜蛾GOBP蛋白并进行纯化。
运用Western blot和凝胶过滤层析等方法对其进行生物学活性的评估。
三、研究预期结果和意义：
通过本研究，预计能够获得小菜蛾GOBP的全长cDNA序列，并成
功进行原核表达，得到可溶性且具有生物活性的蛋白。
这将为小菜蛾嗅
觉感受器官的分子机制研究提供重要的工具和基础，同时也有助于为小菜蛾的控制提供科学依据。
小菜蛾类钙粘蛋白cDNA片段的克隆和序列分析
小菜蛾类钙粘蛋白cDNA片段的克隆和序列分析杨峰山;张友军;张文吉;吴青君;徐宝云;邱德文【期刊名称】《农业生物技术学报》【年(卷),期】2005(013)003【摘要】鳞翅目昆虫中肠刷状缘膜囊泡（brush border membrane vesicles，BBMV）有两类能与Cryl毒素结合的受体蛋白，一类是氨基肽酶N（APN），另一类是类钙粘蛋白（cadherin-like protein）。
Gahan等（2001）报道了烟芽夜蛾中肠类钙粘蛋白基因失活导致了烟芽夜蛾（Heliothis viresce）对Bt毒素CrylA产生了高抗性，引起了各国科研人员的关注。
近年来，先后有多种昆虫类钙粘蛋白基因被克隆和测序（Gahan et al．，2001：Morin et al．，2003）。
【总页数】2页(P396-397)【作者】杨峰山;张友军;张文吉;吴青君;徐宝云;邱德文【作者单位】中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京,100081;中国农业大学理学院,北京,100094;中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京,100081;中国农业大学理学院,北京,100094;中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京,100081;中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京,100081;中国农业科学院生物防治研究所,北京,100081【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.烟夜蛾幼虫中肠类钙粘蛋白基因cDNA片段的克隆与序列分析 [J], 李卫华;苗雪霞;黄勇平;安世恒;郭线茹2.小菜蛾细胞色素P450基因的cDNA片段克隆及其序列分析 [J], 李洪山;戴华国;王娟3.生物信息学在克隆去势SD大鼠cDNA消减差异片段SCn4的全长cDNA及其序列分析中的应用 [J], 王松;沈霖;陈国庆;金丽4.小菜蛾乙酰胆碱酯酶cDNA片段的克隆和序列分析 [J], 王建军;韩召军;王荫长5.小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体α亚基cDNA片段的克隆和序列分析 [J], 韩招久;韩召军;李凤良;李忠英;陈之浩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小菜蛾整合素integrin β1基因的克隆及其功能分析
小菜蛾整合素integrin β1基因的克隆及其功能分析郑锦龙;许小霞;余静;张展滔;兰可可;仇培;金丰良【期刊名称】《环境昆虫学报》【年(卷),期】2018(040)004【摘要】整合素(Integrin)是一种由α和β亚基组成的跨膜异二聚体蛋白,在昆虫血细胞对外物的包囊过程中起着重要的作用.为阐明integrinβ1参与小菜蛾Plutella xylostella体内细胞免疫中的功能,本研究利用RT-PCR结合RACE技术克隆了小菜蛾integrinβ1基因的cDNA全长序列,命名为PxIntβ1(GenBank登录号GQ178290).小菜蛾PxIntβ1的cDNA全长序列为2 832 bp,开放阅读框为2 487 bp,编码828个氨基酸,成熟的氨基酸序列中有一个跨膜区和一个integrin亚基.系统进化树显示小菜蛾PxIntβ1与亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis整合素的同源性最高,两者同源性达到78％.利用半定量RT-PCR技术检测PxIntβ1基因在小菜蛾不同发育历期(卵、1-4龄幼虫、蛹、成虫)、不同组织(血细胞、体壁、脂肪体、中肠、马氏管)和细菌(金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液)诱导下的表达模式.半定量结果表明小菜蛾PxIntβ1基因在小菜蛾整个发育历期除了卵之外都有表达,4龄幼虫转录水平最高,在血细胞中特异性的高表达,昆合细菌诱导2-48 h后,PxIntβ1基因在小菜蛾诱导后24 h达到诱导表达高峰.为了进一步获得重组蛋白PxIntβ1,本研究构建了原核表达质粒pET-32a-PxIntβ1,融合蛋白在大肠杆菌Eschericha coli BL21中获得高效表达,Ni-NTA一步纯化了融合蛋白,并免疫新西兰大白兔,获得了多克隆抗体anti-PxIntβ1.SDS-PAGE电泳和Western blot分析结果表明,His抗体和多克隆抗体anti-PxIntβ1能特异性识别融合蛋白PxIntβ1;进一步利用显微镜观察了小菜蛾血细胞对凝胶珠Sephadex-A25的包囊情况,结果表明抗血清anti-PxIntβ1处理过的小菜蛾血细胞对Sephadex-A25凝胶珠的包囊作用受到明显抑制,重组蛋白Px Intβ1可以提高小菜蛾血细胞对Sephadex-A25凝胶珠的包囊作用;以上研究结果表明小菜蛾Pxlntβ1在小菜蛾细胞免疫中起着重要的作用.【总页数】14页(P880-893)【作者】郑锦龙;许小霞;余静;张展滔;兰可可;仇培;金丰良【作者单位】华南农业大学农学院,广东省生物农药创制与应用重点实验室,广州510642;华南农业大学农学院,广东省生物农药创制与应用重点实验室,广州510642;华南农业大学农学院,广东省生物农药创制与应用重点实验室,广州510642;华南农业大学农学院,广东省生物农药创制与应用重点实验室,广州510642;华南农业大学农学院,广东省生物农药创制与应用重点实验室,广州510642;华南农业大学农学院,广东省生物农药创制与应用重点实验室,广州510642;华南农业大学农学院,广东省生物农药创制与应用重点实验室,广州510642【正文语种】中文【中图分类】Q963;S433.4【相关文献】1.小菜蛾钙黏蛋白PxCR10-11结构域的克隆、原核表达及功能分析 [J], 许炼;刘波;潘志针;朱育菁;高焕娟;陈清西2.小菜蛾保幼激素受体基因PxMet-1和PxMet-2的分子特性、表达模式与功能分析 [J], 彭露;杨一帆;邹明民;王清;尤民生3.小菜蛾PGRP-S2基因的克隆表达及功能分析 [J], 杜少萱; 吴程; 苏月华; 杨梅4.寒地冬小麦膨胀素基因TaEXPB12同源基因的克隆及功能分析 [J], 冯珊珊;徐永清;赵梓颐;李凤兰;胡宝忠5.基因组步移法克隆小菜蛾CYP9G2基因的上游序列 [J], 申本昌;江红;乔传令因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小菜蛾幼虫cDNA文库的构建及序列初步分析
小菜蛾幼虫cDNA文库的构建及序列初步分析靳贵晓;王中康;高贵芳;王宇;殷幼平【期刊名称】《农业生物技术学报》【年(卷),期】2010(018)006【摘要】为寻找小菜蛾(Plutella xylostella)重要的生理功能相关基因,以小菜蛾为材料,用SMART(Switching mechanism at 5'end ofRNA transcript)技术构建了小菜蛾2龄幼虫cDNA文库,对文库的部分序列进行测序及分析,结果表明,该文库原始库容达到1.1×106,扩增库容达到2.6×109,重组率达到92%,平均插入片段大小为1 kb左右,文库质量达到要求.序列分析得到了小菜蛾的部分新基因,其中部分已登录到GenBank(登录号为GW883877～GW883893、GU014922).对其中第11号基因(GenBank登录号:GU014922)表达产物及其二级结构和高级结构域的预测结果显示,该基因可能为丝氨酸蛋白酶家族基因的一个新成员,参与小菜蛾体内重要的代谢、免疫反应.该文库的构建为研究小菜蛾的生理功能相关基因和进一步研究小菜蛾基因功能提供了技术平台.【总页数】6页(P1197-1202)【作者】靳贵晓;王中康;高贵芳;王宇;殷幼平【作者单位】重庆大学生物工程学院,重庆基因功能与调控重点实验室,重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心,重庆,400030;重庆大学生物工程学院,重庆基因功能与调控重点实验室,重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心,重庆,400030;重庆大学生物工程学院,重庆基因功能与调控重点实验室,重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心,重庆,400030;重庆大学生物工程学院,重庆基因功能与调控重点实验室,重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心,重庆,400030;重庆大学生物工程学院,重庆基因功能与调控重点实验室,重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心,重庆,400030【正文语种】中文【相关文献】1.药用真菌鸡爪苓子实体全长cDNA文库构建及EST序列初步分析 [J], 栾换东;蒋雨函;梁运江;赵洪颜;许广波2.芜菁夜蛾斯氏线虫G26侵染期幼虫cDNA文库的构建及表达序列标签分析 [J], 马娟;张军鸽;李秀花;李敏权;陈书龙3.西施舌浮游幼虫cDNA文库构建及EST序列初步分析 [J], 郭永明;孟学平4.副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)诱导拟穴青蟹(Scylla paramamosain)血淋巴cDNA文库构建及表达序列标签初步分析 [J], 蔡小辉;彭银辉;赵鹏;宋忠魁;张琴;黄国强5.中华鳖（Pelodiscussinensis）肝脏cDNA文库的构建和EST序列的初步分析[J], 张海琪;何中央;邵健忠;钱国英;张超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小菜蛾颗粒体病毒DNA酶切分析及hr-1克隆
小菜蛾颗粒体病毒DNA酶切分析及hr-1克隆
樊磊;黎路林
【期刊名称】《科技风》
【年(卷),期】2011(000)013
【摘要】同源重复区(homologousrepeatedregions,hrs)是杆状病毒的DNA复制起始位点和转录增强子,对杆状病毒的复制周期具有重要的调节作用,本文克隆了小菜蛾颗粒体病毒(Plutellaxylostella Granulovirus,PlxyGV)的hr-1序列,为进一步研究plxyGV的复制周期奠定了基础.
【总页数】1页(P238)
【作者】樊磊;黎路林
【作者单位】华中师范大学,湖北武汉,430079;华中师范大学,湖北武汉,430079【正文语种】中文
【相关文献】
1.黄地老虎颗粒体病毒DNA片段的克隆与颗粒体蛋白基因的定位 [J], 陈东;谢天恩;金锋
2.小菜蛾颗粒体病毒PP31蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 [J], 王思民;张鸿杰;黎路林
3.用DNA转染法研究小菜蛾颗粒体病毒在草地贪夜蛾细胞内复制 [J], 孟小林;Thiem,SM
4.犬Ⅱ型腺病毒弱毒DNA的酶切分析及分子克隆 [J], 童光志;赵永军;白丽萍;吴保成;郭英宁;岳军明;王玫;殷震
5.犬Ⅰ型腺病毒DNA的酶切分析及分子克隆 [J], 白丽萍;童光志;赵永军;吴保成;岳军明;王玫;殷震
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基因组步移法克隆小菜蛾CYP9G2基因的上游序列
基因组步移法克隆小菜蛾CYP9G2基因的上游序列申本昌;江红;乔传令【期刊名称】《动物学杂志》【年(卷),期】2009(44)5【摘要】利用4种产生平端切头的限制性内切酶消化小菜蛾(Plutella xylostella)的基因组DNA,然后利用DNA连接酶的催化作用,在4种不同平端切头的小菜蛾基因组DNA上连接一个氨基化的基因组步移衔接头序列,针对衔接头及已克隆的CYP9G2基因的序列,设计两对PCR上、下游引物,进行PCR扩增、T-A克隆和阳性克隆的巢式PCR验证,通过测序克隆到了小菜蛾CYP9G2基因上游未知序列约1.8 kb。
通过对该基因的上游序列进行信息分析,发现1个可能的节肢动物动物转录起始子(Inr),3个CAAT样盒及1个抗氧化剂样反应因子,共5个可能的顺式调控元件。
研究还表明,利用基因组步移方法可以快速地克隆已知序列的上游未知序列,实验操作经济、简便,对于已知cDNA序列或部分基因组序列的基因,其上游调控序列的克隆,基因组步移具有较高的实用价值。
【总页数】5页(P112-116)【关键词】小菜蛾;CYP9G2;顺式调控元件;基因组步移;聚合酶链反应【作者】申本昌;江红;乔传令【作者单位】广州医学院基础学院医学遗传学与细胞生物学教研室;中国科学院动物研究所农业虫害与鼠害综合治理研究国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】Q963【相关文献】1.应用基因组步移克隆小鼠Doc-1R基因组序列 [J], 生秀杰;姜莉;周伟强;王太一;张学2.小菜蛾传染性软腐病病毒的全基因组序列及其进化分析 [J], 陈大嵩;戴建青;韩诗畴3.小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白基因5'上游调控区域的克隆及序列分析 [J], 龚亮;张彦博;耿鹏;胡美英4.小菜蛾MAP4K4基因上游5'-侧翼序列克隆与结构分析 [J], 郭乐;郭兆将;康师;孙丹;周君雷;龚莉君;张友军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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和分析小菜蛾肌球蛋 白重链部分 ｃ Ｎ Ｄ Ａ序列 ， ｅ Ｂ ｎ Ｇ ｎ ａｋ登 录号 为 Ｆ４ ２ １ 其长 ４ ８个 碱基 ， Ｊ６７ ２， ０ 推测 编码 １５个 ３ 氨基酸 。同源分析表 明： 多肽序列与凤蝶 、 蚕 、 此 家 果蝇 的同源性分别 为 ９ ％ ，３ ，２ 。半定量 Ｒ Ｐ Ｒ研 ５ ９ ％ ８％ Ｔ— Ｃ 究表 明： 菜蛾 ＭＨ 小 Ｃ基 因在 不同的生长发育阶段的表达 皆不相 同， 在老熟幼 虫和成虫 中 的表 达量显著高 于低 龄幼虫和蛹。为进一步鉴定小菜蛾肌球蛋 白重链 的生理特征提供基 因序列信息 。
ＧＯＮＧ ｉ ｎ Ｌ ａ ｇ，ＺＨＯＮＧ ｏ ｈ ａ， Ｇｕ — ｕ ＲＥＮ ｈ ｎ ｚ ｅ ＨＵ ｅ — ｉ ｇ Ｚ ｅ — ｈ ｎ， Ｍ ｉｙ ｎ
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江西 农业 大学 学报
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小 菜 蛾 肌 球 蛋 白重 链 部 分 ｃ Ｎ Ｄ Ａ序 列 克 隆 、 表 达 概 况 及 分 析
龚 亮 ， 国华， 钟 任珍珍 ， 胡美英
（ 华南农业大学 农药 与化 学生物学教育部重点实验室 ， 广东 广 州 ５ ０ ４ ） １６ ２
摘 要 ： 肉肌 球 蛋 白重 链 在 生 物运 动 过 程 中 具 有 至 关 重 要 的作 用 ， 在 昆 虫 中此 类 基 因极 少 被 报 道 。首 次 克 隆 肌 但