荧光原位杂交实验室检测项目
原位杂交和免疫荧光
原位杂交和免疫荧光
原位杂交和免疫荧光是两种常见的分子生物学实验方法。
这两种
方法都可以用于研究生物分子的定位和分布情况，进而揭示生物学过
程和功能。
下面我们分别来介绍一下这两种方法。
原位杂交是一种常用的分子生物学技术，主要用于检测和定位细
胞或组织中特定的DNA或RNA序列。
原位杂交的基本步骤包括：制备
探针，标记探针，处理样品，杂交和探针探测。
通常情况下，原位杂
交用于检测单个基因或特定基因家族的成员，可用于研究基因组结构、基因表达和基因型等方面。
该技术在医学诊断和药物开发方面也有广
泛应用。
免疫荧光是一种检测生物分子定位和分布情况的常用方法。
它利
用抗体与标记化学物质（如荧光素）相结合，通过荧光显微镜观察生
物分子的定位和分布情况。
免疫荧光主要应用于研究细胞内的蛋白质
定位和分布，也可用于研究病毒感染等方面。
该技术不仅能够静态观
察生物分子的分布情况，还可以通过时间分辨光学显微镜观察生物分
子的动态行为。
虽然原位杂交和免疫荧光技术各自有其独特的应用范围和特点，
但它们有一个共同的优点，即能够在不破坏组织结构的情况下观察分
子分布及定位情况。
这种特性使得这两种技术成为研究生物分子功能
和生物学过程的重要工具。
总之，原位杂交和免疫荧光技术是分子生物学领域内的两个重要
实验方法。
它们都能够在细胞或组织中观察特定生物分子的定位和分
布情况，为揭示生物学过程和功能提供帮助。
荧光原位杂交实验PPP文档(最全版)
Y染色体探针、人外周血中期染色体细胞标本、恒温水浴锅、培养箱、染色缸、载玻片、Nikon E-400、荧光显微镜、盖玻片、封口膜 、200μL移液器、20μL移液器、暗盒、指甲油、甲酰胺、氯化钠、柠檬酸钠、氢氧化钠、吐温20。 由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以将探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。 由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以将探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。 掌握原位杂交技术的操作方法，熟练掌握荧光显微镜的使用方法。
荧光原位杂交实验
一、实验目的
• 通过实验了解荧光原位杂交技术的基本 原理和在生物学、医学领域的应用。
• 掌握原位杂交技术的操作方法，熟练掌 握荧光显微镜的使用方法。
二、实验原理
• FISH的基本原理是用已知的标记单链核酸为探针，按 照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进 行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于 DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列， 因而可以将探针直接与染色体进行杂交从而将特定的 基因在染色体上定位。与传统的放射性标记原位杂交 相比，荧光原位杂交具有快速、检测信号强、杂交特 异性高和可以多重染色等特点，因此在分子细胞遗传 学领域受到普遍关注。目前这项技术已经广泛应用于 动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、 病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组 进化研究等许多领域。
三、实验用具及材料
• Y染色体探针、人外周血中期染色体细胞 标本、恒温水浴锅、培养箱、染色缸、 载玻片、Nikon E-400、荧光显微镜、盖 玻片、封口膜、200μL移液器、20μL移 液器、暗盒、指甲油、甲酰胺、氯化钠、 柠檬酸钠、氢氧化钠、吐温20。
细胞荧光原位杂交检查
细胞荧光原位杂交检查细胞荧光原位杂交是一种常用的分子生物学技术，可用于检测细胞中特定的核酸序列。
该技术主要基于细胞荧光信号的原理，能够在不同的细胞组织中快速定位并鉴别靶标分子的位置、表达水平、结构与功能。
检测原理：细胞荧光原位杂交检查是利用一种特殊的探针，通过与目标DNA或RNA特异性配对，从而使荧光探针和目标结合，从而显示出细胞内的目标分子的位置和表达情况。
具体而言，探针会有一段能与目标分子互补配对的区域，这个区域域可以被定放在靶标分子上的特定区域，利用标记有荧光信号的核苷酸分子，通过被荧光激光器激发，并能够发出荧光信号，通过显微镜观察，从而显示出靶标分子是否存在或表达水平。
应用场景：细胞荧光原位杂交技术广泛应用于癌症、遗传性疾病、病毒感染等疾病的诊断与治疗、基因定位、基因表达分析等方面。
在肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤的分析中，可以检测肿瘤细胞中致癌基因的突变和拷贝数变化，通过观察荧光信号的强度和位置区分良性与恶性病变细胞，有着重要的临床价值。
在遗传研究中，细胞荧光原位杂交可以定量和比较不同组织和细胞类型中基因表达水平的差异，有助于分子生物学的研究和系统生物学的发展。
在新药研发中，细胞荧光原位杂交可以用来评估靶标和药物之间的相互作用，优化药物筛选和发展流程，提高新药研发成功率。
需要注意的是，细胞荧光原位杂交技术需要使用特殊的设备、药剂和反应条件，操作时需要仔细、精确、严谨，特别是在显微镜下观察细胞时必须严格控制条件，避免误差。
同时，不同类型的靶标分子，探针的选择、合成和设计都有一定的限制，需要深入了解相关知识，根据具体情况采用不同的方案和技术。
总之，细胞荧光原位杂交技术是一项广泛应用的分子生物学技术，具有高度特异性和灵敏性，是研究细胞结构和功能、诊断和治疗疾病、新药研发等领域不可或缺的工具。
在掌握技术原理和操作技巧的基础上，合理利用、探索和创新，将有助于推动分子生物学和临床医学的发展。
tsa荧光原位杂交法
tsa荧光原位杂交法
TSA荧光原位杂交法（Tyramide Signal Amplification Fluorescence In Situ Hybridization）是一种用于检测蛋白质或
核酸表达的方法。
该方法是在常规原位杂交的基础上引入了TSA荧光信号放大
技术。
在该方法中，首先将标记有特定荧光物质的探针与待测样品中的目标分子结合，形成杂交复合物。
然后使用辣根过氧化物酶结合物（HRP）标记的亲和试剂结合到杂交复合物上，再加入过氧化物酶底物和有机过氧化物，促使荧光信号的产生。
由于有机过氧化物的作用，信号放大，使得目标分子的表达区域更加明显，并且可以在荧光显微镜下观察和定量化。
TSA荧光原位杂交法具有高灵敏度、高特异性和高分辨率的
优点，并且可以应用于细胞、组织和固定的病理学切片等多种样品类型。
它在生物医学研究、基因组学和分子诊断等领域发挥着重要作用，有助于了解基因表达和蛋白质定位等关键信息。
荧光原位杂交实验具体步骤及详细说明
荧光原位杂交实验具体步骤及详细说明荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）是一种用于确定DNA或RNA序列在细胞或组织中的位置的技术。
下面将详细介绍荧光原位杂交的具体步骤和相应的详细说明。
1.细胞准备首先，需要准备细胞样本。
可以选择使用原代细胞，细胞悬液或切片等。
2.固定将细胞固定在载玻片或载玻片上面。
固定通常使用的试剂是乙酸乙酯和甲醇的混合物，通常比例为1:33.水合将载玻片中的组织或细胞水合处理。
这一步可以通过将载玻片浸泡在去离子水或缓冲液中进行。
4.处理将载玻片进行预处理，以使DNA或RNA序列更易于杂交。
常用的预处理方法有：-煮沸：将载玻片浸泡在2×SSC（1×SSC：0.15MNaCl,0.015MNa3C6H5O7·2H2O,pH7.0）中，然后置于热盖板上加热至100°C，持续约10-20分钟。
-碱性水解：将载玻片浸泡在10%NaOH中，进行碱性水解，然后在盐溶液中冲洗。
5.杂交探针准备荧光探针或荧光标记的引物。
探针的选择取决于要检测的DNA或RNA序列。
探针的设计通常基于目标序列的序列信息，并且通过化学修饰和荧光标记以增加其杂交效率和检测灵敏度。
6.杂交将探针加到载玻片上的样本上，并与目标序列进行杂交。
杂交过程中，探针与目标序列进行互补配对，形成探针-目标复合物。
杂交的温度取决于探针的碱基组成和目标序列的GC含量。
7.洗涤将载玻片在洗涤缓冲液中进行洗涤，以去除未与目标序列杂交的探针。
8.检测使用荧光显微镜观察载玻片上的标记。
荧光标记的探针将通过荧光显微镜检测获得荧光信号。
根据荧光信号的数量和强度，可以确定目标序列的位置和数量。
9.成像和分析通过拍摄荧光显微镜图像来记录荧光信号。
使用图像处理软件进行图像分析，包括亮度分析和定量信号分析。
总结：荧光原位杂交是一种用于确定DNA或RNA序列在细胞或组织中位置的强大技术。
c-met扩增fish判读标准
c-met扩增fish判读标准C-met扩增FISH（荧光原位杂交）是一种用于检测c-met基因扩增的分子生物学技术。
c-met是一种编码肝细胞生长因子受体的基因，在多种癌症中被发现扩增。
FISH技术可以帮助确定肿瘤细胞中c-met基因的扩增情况，从而为临床诊断和治疗提供重要信息。
在进行c-met扩增FISH检测时，通常会使用荧光标记的探针与待测组织样本中的c-met基因进行杂交。
通过观察荧光信号的数量和分布，可以判断c-met基因的扩增情况。
下面是一些常见的c-met扩增FISH判读标准：1. 扩增定义，通常情况下，c-met扩增被定义为存在大量额外的c-met信号。
标准可以根据实验室的具体操作和设备进行微调，但一般来说，超过20%的肿瘤细胞显示c-met扩增被认为是阳性的。
2. 信号数量，除了百分比外，还需要考虑c-met信号的数量。
通常情况下，如果细胞核中存在5个或5个以上的c-met信号，就可能被认为是阳性的。
3. 细胞形态，除了数量外，观察c-met信号的形态也很重要。
扩增的c-met信号通常呈现为明亮而不规则的斑点状分布，而非扩增的情况下信号则比较均匀。
4. 结合其他检测，在判读c-met扩增FISH结果时，通常还需要结合临床病理资料和其他分子生物学检测结果，以确保最终的诊断和治疗决策的准确性。
需要注意的是，不同的实验室和临床实践可能会有不同的标准和解读方法，因此在进行c-met扩增FISH检测时，应该由具有相关经验和资质的专业人员进行操作和解读。
同时，对于c-met扩增FISH结果的解读也应该结合临床背景和其他辅助检查结果进行综合分析，以确保最终的诊断和治疗决策的准确性。
荧光原位杂交操作步骤
荧光原位杂交操作步骤荧光原位杂交听起来很复杂呢，其实操作步骤也有章可循啦。
一、样本准备。
要做这个实验，先得把样本处理好。
如果是细胞样本的话，就得把细胞乖乖地固定在载玻片上，就像把小娃娃放在小床上一样安稳。
这一步可不能马虎，固定不好后面就不好办啦。
要是组织样本呢，得把组织切成薄片，薄到像纸片一样精致才行。
然后同样把它固定好，这就为后面的杂交打下了好基础。
二、探针准备。
接下来就是探针啦。
探针就像是专门去找目标的小侦探。
得按照实验要求把探针配好，浓度要刚刚好哦，太浓了可能会乱了阵脚，太稀了又可能找不到目标。
把探针在合适的缓冲液里调配好，就像给小侦探准备好装备一样。
三、杂交反应。
然后就到了杂交这一步啦。
把准备好的探针滴到有样本的载玻片上，再盖上盖玻片。
这时候就像把小侦探放到了有目标的地方，让它们去寻找匹配的东西。
然后把载玻片放到一个合适温度的环境里，这个温度很关键呢，就像给小侦探们创造一个舒适的工作环境。
在这个环境里让探针和样本中的目标DNA或者RNA去结合，这个过程需要一点时间，就像小侦探寻找目标也不能太着急呀。
四、洗涤。
杂交完了之后呢，就要把那些没有结合的多余探针洗掉。
这就像是把那些凑热闹的家伙赶走，只留下真正找到目标的小侦探。
用合适的洗涤液轻轻地洗，可不能太粗暴，不然把已经结合好的也冲走了就糟糕啦。
五、检测。
最后就是检测啦。
这时候要用专门的荧光显微镜去看。
打开显微镜，就像打开一个神秘的宝藏盒子。
如果杂交成功了，就能看到漂亮的荧光信号啦，就像在黑暗中看到了闪闪发光的小星星。
那些荧光信号所在的地方就是探针找到目标的地方呢。
荧光原位杂交虽然有点复杂，但是按照这些步骤一步一步来，就像照顾小宠物一样细心，也能顺利完成这个有趣的实验啦。
荧光原位杂交试验方案
FISH鉴定反硝化聚磷菌试验方案1 试验材料与方法1.1 试验仪器高速离心机：可达36000转/分钟高压灭菌锅：160℃以上杀菌恒温箱：为杂交提供恒定温度荧光显微镜：捕捉荧光图片恒温水浴锅纯水机1.2 试验所用试剂及配置方法（1）0.2mol/L（pH 7.4）磷酸缓冲溶液（PB）试剂为NaH2PO4·2H2O和Na2HPO4·12H2O。
首先称取NaH2PO4·2H2O 31.2g，加重蒸水至1000mL溶解即为0.2mol/L的NaH2PO4溶液；称取Na2HPO4·12H2O 71.632g，加重蒸水至1000mL溶解即为0.2mol/L的Na2HPO4溶液。
取19mL的NaH2PO4溶液和81mL的Na2HPO4溶液充分混合即为0.2mol/L（pH 7.4）磷酸缓冲溶液。
常温保存。
（2）0.01mol/L磷酸盐缓冲溶液（PBS）试剂为NaCl和PB。
称取NaCl 8.5g和0.2mol/L的PB 50mL，加入到1000mL的容量瓶中，最后加重蒸水至1000mL，充分摇匀即可。
常温保存。
0.02mol/L的PBS，只需使PB的量加倍，即取100mL的PB即可。
以此类推。
（3）4%多聚甲醛溶液称取40g多聚甲醛，置于三角瓶中，加入500mL的0.1mol/L的PB，加热至60℃左右，持续搅拌使粉末完全溶解，滴加少量1mol/L NaOH使溶液清亮，再用1mol/L的HCl将PH 调至7.4，最后补足0.1mol/L的PB至1000mL，充分混匀即可。
（4）0.5mol/L（pH7.4）Tris-HCl缓冲液主要试剂为Tris（三羟甲基氨基甲烷）。
先用400mL蒸馏水溶解60.57gTris，加入大约420mL的HCl后，用1 mol/L的HCl或1 mol/L的NaOH将pH调至7.4，最后加重蒸水至1000mL。
4℃冰箱保存。
（5）铬矾明胶液在1000mL烧杯中用800mL水加热溶解4g明胶，待其完全溶解后，再加入0.5g铬矾（十二水·碳酸钾铬）。
荧光原位杂交(FISH)实验步骤
FISH（原位杂交）SOP流程------探针直接带荧光标记一、FISH实验步骤1、石蜡切片脱蜡至水：将挑选好的组织切片置于切片架上放入烘箱中65℃烤片2-3h（观察组织周围石蜡是否被熔化流至切片边缘），烤片完成后将组织切片放入脱蜡机中脱蜡。
脱蜡完成后取出切片，进行抗原修复。
2、抗原修复：脱蜡完成后取出切片，进行酶修复。
稍甩净切片上水分，水平放置在孵育盒，用组化笔在组织周围画圈（过程中组织不能干片，组化笔不能碰到组织，否则会损坏组织或使抗体无法孵育到组织；不可用力按压组化笔以免笔内液体流出覆盖组织），蛋白酶K（PK）37度孵育15-20min，修复完后用PBS冲洗，再将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
3、固定：甩去残留在片子上的PBS，滴加4%多聚甲醛，室温孵育5min。
用PBS冲洗。
再将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
4、预杂交：滴加Hyb buffer（预杂交液）55度避光预杂交2小时。
5、准备探针：将探针原液与Hyb buffer按比例稀释，混合均匀后85℃变性3min,37℃平衡2min。
6、杂交：预杂交结束后，吸去Hyb buffer，滴加平衡后的杂交工作液，切片平放于湿盒内，37-42°C（杂交温度依据探针TM值确定）孵育过夜（湿盒内加少量水防止杂交液蒸发）。
7、洗涤：用1XSSC冲洗，浸泡2min。
（洗涤时间不宜过长，可能会洗掉表达）。
8、DAPI复染细胞核：切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育20min。
9、封片：PBS冲掉DAPI，切片稍甩干后用WGA封片剂封片（封片时应避免组织上出现气泡）。
10、镜检拍照：切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。
（蓝光紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm；FITC绿光激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm；CY3红光激发波长510-560，发射波长590nm）二、荧光结果判读DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色，阳性表达为相应荧光素标记的红光或者绿光。
荧光原位杂交(FISH)检测
从遗传学角度检测染色体和基因的异常
02
辅助血液疾病的诊断，判断预后，疗效检测及微小残留检测
03
应用：
骨髓移植术后（性别不同的移植献者）、 性别鉴定、CMPD和ALL初诊、CML末次化 疗结束两周以上、AML-M3/M2等疾病
பைடு நூலகம்技术特点
1
可分析间期细胞，不需培养；操作简单、检测快速重复性好、空间定位精确；灵敏性和特异性高
单击添加副标题
荧光原位杂交（FISH）检测
康圣环球医学特检集团
概述 FISH-目前新兴的分子遗传学技术，原理是采用荧光标记的DNA探针，利用探针与检测样本中DNA碱基对的互补性，在探针与标本的DNA杂交后，通过荧光显微镜检测荧光信号而得出结果，从而检测细胞、组织样本中的染色体和基因异常。
临床意义
2
当染色体核型分析不成功或不明确时，可利用FISH检测弥补不足，并可发现复杂易位
探针种类
01
双色单融合探针 双色分离探针
01
ES探针 双色双融合探针 每类探针的检测和适用范围不同，决定其用处不同
01
标本要求 送检标本：骨髓3ml（CML和CLL患者可直接用外周血2ml） 保存条件：肝素钠抗凝，4摄氏度，24h送检 禁忌：冰冻或凝块 注意：建议做FISH的同时做常规细胞遗传学分析。若只要求做FISH，请转交一份近期的细胞遗传学报告。如果无细胞形态学或遗传学的检查，建议作进一步检查！！
报告时间：周一至周五，7个工作日
报告示例：略 结果判读：每个探针检测镜下分析200个细胞核。20例没有造血系统疾病且核型正常的骨髓标本作为正常对照，以此计算分裂信号的平均数和标准差。如果有异常杂交信号的细胞百分比超过正常标准差的3倍，结果将被认为异常。
荧光原位杂交(FISH)检测
目
CONTENCT
录
• 荧光原位杂交(fish)检测概述 • FISH检测的基本原理与技术流程 • FISH检测在临床诊断中的应用 • FISH检测的优势与局限性 • FISH检测的实际案例分析
01
荧光原位杂交(fish)检测概述
定义与特点
定义
荧光原位杂交（FISH）是一种基于荧光标记的DNA探针与目标DNA 结合，通过荧光显微镜观察并检测细胞内特定基因或染色体异常的 技术。
FISH技术可以应用于各种样本类型，如细胞、 组织切片、石蜡包埋组织等。
直接观察
FISH技术可以直接在细胞或组织的显微镜下观 察杂交信号，无需进行额外的染色或标记。
灵敏度高
FISH技术能够检测单个基因拷贝数的变化，灵 敏度较高。
局限性
成本高
FISH技术需要使用特殊的探针和 荧光染料，因此成本较高。
80%
基因突变
FISH技术可以检测基因突变，如 抑癌基因突变、致癌基因突变等 。
基因表达分析
基因表达水平
FISH技术可以检测基因表达水 平，了解基因在细胞中的表达 情况。
基因定位
FISH技术可以确定基因在染色 体上的位置，了解基因的染色 体定位。
基因互作
FISH技术可以检测基因间的相 互作用，了解基因间的关系。
细胞或组织的通透性处理
使用适当的试剂使细胞或组织的膜通透性增加，以便探针能 够进入。
杂交反应
探针与靶DNA的杂交
将制备好的探针与固定在样本上的靶 DNA进行杂交，形成探针-靶DNA复 合物。
去除未结合的探针
通过洗涤去除未结合的游离探针，提 高杂交信号的特异性。
信号检测与图像分析
fish报告解读
FISH报告，全称荧光原位杂交（Fluorescence in situ Hybridization）报告，是一种用于检测染色体异常的实验室检测方法。
FISH技术可以用于诊断染色体数目异常、结构异常和基因重排等问题。
在解读FISH报告时，需要关注以下几个方面：
1. 样本来源：了解样本的来源，如血液、组织或细胞等，以及采集方法。
2. 检测目的：明确本次FISH检测的目的，如诊断某种疾病、评估预后或监测治疗效果等。
3. 探针信息：报告中会列出使用的探针名称、编号和荧光素颜色等信息。
这些探针通常针对特定的染色体或基因区域，用于检测目标区域的异常情况。
4. 检测结果：报告中会详细描述每个探针的杂交信号分布情况。
正常的染色体或基因区域应该呈现出均匀的杂交信号，而异常区域则可能出现缺失、重复或易位等现象。
此外，报告中还会给出异常区域的染色体位置、大小和比例等信息。
5. 结论：根据检测结果，报告会给出相应的结论，如正常、异常或待进一步分析等。
对于异常结果，报告还会给出可能的病因、临床意义和建议等。
6. 注意事项：报告中可能会提醒一些与检测结果相关的注意事项，如某些异常可能与遗传性疾病相关，或者需要结合其他检查结果进行综合分析等。
fish实验室基本原理
fish实验室基本原理
FISH（荧光原位杂交）实验室是一种分子生物学技术，它用
于在细胞或组织样本中检测和定位特定的DNA或RNA序列。
FISH实验室的基本原理可以分为以下几个步骤：
1. 标记探针：FISH实验中使用的探针是一种DNA或RNA序列，经过标记后可以与目标序列特异性结合。
探针通常被标记上荧光染料，以便在显微镜下观察和定位。
2. 去除样本细胞核：FISH实验通常从组织样本或培养细胞中
提取细胞核。
这一步骤可以使用细胞裂解液或其他方法来破坏细胞膜，并释放出细胞核。
3. 杂交：将标记的探针添加到细胞核中，使其与目标序列结合。
在杂交过程中，探针与目标序列的互补碱基进行特异性配对，形成探针-目标DNA或RNA的杂交复合物。
4. 洗涤：将未与目标序列结合的探针和其他非特异性结合的物质洗掉。
通过洗涤的过程，只有与目标序列结合的探针能够留在样本中。
5. 显微镜观察：在荧光显微镜下观察样本。
荧光染料的激发和发射光谱特性使得可以检测到标记的探针，并确定目标序列的位置和存在情况。
FISH实验室是一种高分辨率的细胞遗传学技术，可以用于研
究细胞基因组结构、染色体重排、染色体异常等。
它在研究遗传疾病、癌症等领域具有广泛的应用。
原位荧光杂交操作规程(3篇)
第1篇一、目的原位荧光杂交技术是一种在细胞或组织切片上进行DNA或RNA定位的方法，通过对特定序列的DNA或RNA进行标记，从而实现对特定基因或染色体的定位和定量分析。
本规程旨在规范原位荧光杂交操作，确保实验结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本规程适用于所有原位荧光杂交实验，包括细胞原位杂交、组织切片原位杂交等。
三、材料与设备1. 材料：- 标本：细胞或组织切片- 探针：标记有荧光染料的DNA或RNA探针- 酶标抗体：针对探针标记的荧光染料- 洗涤液：如磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）- 抗荧光抗体：用于检测酶标抗体- 封片剂：如甘油封片剂2. 设备：- 荧光显微镜- 原位杂交仪- 热循环仪- 高速离心机- 显微镜载物台- 离心管- 移液器四、操作步骤1. 标本制备：- 将细胞或组织切片固定在载玻片上，进行脱水和透明处理。
- 将载玻片放入烘箱中，进行烘烤，使切片紧密贴合在载玻片上。
2. 探针制备：- 将探针进行变性，使其单链化。
- 将变性后的探针与标记有荧光染料的探针混合，进行杂交反应。
3. 杂交反应：- 将杂交混合物滴加在载玻片上的标本上，用封片剂封口。
- 将载玻片放入原位杂交仪中，进行杂交反应。
4. 洗涤：- 将杂交后的载玻片放入洗涤液中，进行洗涤。
- 洗涤过程中，注意轻柔操作，避免破坏杂交结构。
5. 酶标抗体反应：- 将酶标抗体滴加在载玻片上的杂交结构上，进行抗体结合反应。
- 将载玻片放入原位杂交仪中，进行抗体结合反应。
6. 洗涤：- 将抗体结合后的载玻片放入洗涤液中，进行洗涤。
7. 抗荧光抗体反应：- 将抗荧光抗体滴加在载玻片上的杂交结构上，进行荧光抗体结合反应。
- 将载玻片放入原位杂交仪中，进行荧光抗体结合反应。
8. 洗涤：- 将荧光抗体结合后的载玻片放入洗涤液中，进行洗涤。
9. 封片：- 将封片剂滴加在载玻片上的杂交结构上，进行封片。
10. 观察与分析：- 将载玻片放入荧光显微镜中，进行观察和分析。
荧光原位杂交检测 比例尺
荧光原位杂交检测比例尺荧光原位杂交（Fluorescence In Situ Hybridization，FISH）是一种常用的细胞遗传学技术，可用于检测基因组中某个特定区域的存在及其相对位置。
而比例尺在荧光原位杂交技术中扮演着重要的角色，它是确保检测结果准确可靠的关键因素。
一、荧光原位杂交简介荧光原位杂交是一种基于细胞核酸序列互补性的技术，主要用于检测细胞或组织中特定的DNA序列。
该技术通过将特异性标记的DNA 探针与待检测样品中的目标序列结合，通过荧光显微镜观察探针与目标序列的匹配程度，从而判断目标序列的存在与定位。
二、荧光原位杂交检测原理1. DNA探针制备：根据待检测的目标序列设计与其互补的DNA探针，可以通过化学合成或PCR扩增等方法获得。
2. 样品固定与预处理：将待检测细胞或组织样品进行固定处理，通常使用福尔马林或乙醚等方法进行细胞膜和核膜修复，以保持细胞结构和染色体的形态完整性。
3. 探针杂交：将已标记的DNA探针溶液滴在固定的样品上，通过退火等方法进行DNA探针与目标序列的杂交。
探针与目标序列之间的互补性使其结合并形成稳定的双链结构。
4. 检测与可视化：利用荧光显微镜观察检测结果，通过荧光染料的激发和发射，可以将目标序列的位置以及数量进行定量和定位分析。
三、比例尺在荧光原位杂交中的意义比例尺在荧光原位杂交技术中起到了至关重要的作用。
通过引入比例尺，我们可以对目标序列的数量和分布进行准确测量和分析，从而为生物学研究提供可靠的数据支持。
同时，比例尺还可以用于校准显微镜系统的放大率，确保显微镜观察到的图像与实际情况相匹配，从而提高实验的准确性和可重复性。
常用的比例尺包括均一染色体带状、核小体、聚集体、粒状物和测序法等。
这些比例尺都具有一定的大小和数量固定特征，并且可以通过荧光显微镜直接观察到。
研究人员可以根据这些比例尺的特征，对目标序列的相对数量和位置进行计算和确定。
四、比例尺的选择与应用在选择比例尺时，需要考虑到目标序列的特点和待测样品的条件。
荧光原位杂交实验室检测项目
收 费 代 码
收费名称
FISH检测项目
收费标准
标 本 要 求
报告时间
E976
病理切片肿瘤基因原位杂交检测-荧光法（FISH）
Her-2基因扩增检测
1900元
新鲜组织、石蜡包埋组织、白片、胸腹水白片须用涂胶防脱片，组织切片
厚度4~5μm
自接到标本或申请单之日起3个工作日
EGFR基因拷贝数检测
ALK-EML4融合基因检测
ALK基因断裂检测
C-Met基因扩增检测
PTEN基因缺失检测
TopoⅡα基因异常检测
神经母细胞瘤N-myc
基因扩增检测
胶质瘤1p、19q缺失检测
IGH/BCL2染色体易位
IGH/c-myc染色体易位
IGH/CCND1染色体易位
API2/MALT1染色体易位
IGH/MALT1染色体易位
BCL6基因断裂检测
滑膜肉瘤SS18基因断裂检测
尤文/Ewings肉瘤EWS
基因断裂检测
腺泡状横纹肌肉瘤
PAX3-FKHR易位检测
前列腺癌TM PRSS2-ETS
融合基因检测
尿路上皮脱落胞染色体异常检
hTERC基因扩增检测
E948
白血病融合基因分型
BCR-Abl基因融合
935元
外周血、骨髓
荧光原位杂交检测报告
荧光原位杂交检测报告
一、检测目的
本次检测旨在探究目标基因在细胞核内的位置以及其存在的数量，以确保基因研究可靠性及准确性。
二、检测方法
采用荧光原位杂交技术（FISH）进行检测。
首先，获取样本组织切片并制备。
然后，利用荧光信号染色体常规核型分析技术，将采集的细胞进行体外细胞培养，用血白进行标本制备，完成荧光原位杂交，最后在荧光显微镜下观察目标基因信号。
三、检测结果
本次检测结果显示：目标基因存在于细胞核的特定区域且数量适当，未出现缺失或多余现象。
具体细节如下：
1. 细胞核内目标基因存在的数量为正常情况下的1个；
2. 目标基因位于常染色体的20号染色体的长臂上；
3. 目标基因信号强度适中，无杂乱信号干扰；
4. 目标基因存在于所有观察到的核中，未出现缺失现象。
四、检测结论
本次荧光原位杂交检测结果显示目标基因存在于样本组织细胞核内且数量适当，位置确定，验证了该基因在实验研究中的可靠性和准确性。
鉴于本次检测结果，应确保实验人员、化学品、仪器设备、试卡等相关实验材料的检测标准及操作规范，提高实验质量及结果准确率。
五、附注
1. 此次检测的基因为【填写基因名称】；
2. 本次检测结果仅供参考，如需获取更多相关信息或进一步检测，请再次联系本实验室。
细胞荧光原位杂交检查
细胞荧光原位杂交检查
细胞荧光原位杂交（Fluorescence In Situ Hybridization, FISH）是一种用于检测细胞内基因组序列的分子生物学技术。
它通过将特定的DNA或RNA探针与目标序列杂交，并用荧光素标记探针，然后在荧光显微镜下观察杂交信号，从而确定目标序列的位置和数量。
FISH检查可用于研究细胞中基因组序列的改变，如染色体异常、基因扩增、基因缺失等。
它也可用于检测某些基因在特定组织或细胞类型中的表达情况。
下面是FISH检查的一般步骤：
1. 准备探针：根据需要，设计并制备特异性探针，通常为DNA或RNA探针。
2. 制备细胞样品：从组织或细胞培养物中制备样品，一般需要用胰蛋白酶消化、固定等步骤处理细胞。
3. 杂交：将探针与样品中的目标序列进行杂交，一般需要在一定温度和离子强度下进行。
4. 洗涤：去除未结合的探针，减少背景干扰。
5. 荧光素标记：用特定的荧光素标记探针，以便在荧光显微镜下观察。
6. 观察：用荧光显微镜观察杂交信号，并记录目标序列的数量和位置。
FISH检查的优点包括高特异性、高灵敏度、能够准确定位目标序列的位置。
然而，它也存在一些局限性，如需要昂贵的设备和试剂、需要训练有素的技术人员等。
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ALK基因断裂检测
C-Met基因扩增检测
PTEN基因缺失检测
TopoⅡα基因异常检测
神经母细胞瘤N-myc
基因扩增检测
胶质瘤1p、19q缺失检体易位
IGH/CCND1染色体易位
API2/MALT1染色体易位
IGH/MALT1染色体易位
BCL6基因断裂检测
滑膜肉瘤SS18基因断裂检测
尤文/Ewings肉瘤EWS
基因断裂检测
腺泡状横纹肌肉瘤
PAX3-FKHR易位检测
前列腺癌TM PRSS2-ETS
融合基因检测
尿路上皮脱落细胞染色体异常检
hTERC基因扩增检测
E948
白血病融合基因分型
BCR-Abl基因融合
935元
外周血、骨髓
荧光原位杂交实验室检测项目
收 费 代 码
收费名称
FISH检测项目
收费标准
标 本 要 求
报告时间
E976
病理切片肿瘤基因原位杂交检测-荧光法（FISH）
Her-2基因扩增检测
1900元
新鲜组织、石蜡包埋组织、白片、胸腹水白片须用涂胶防脱片，组织切片
厚度4~5μm
自接到标本或申请单之日起3个工作日
EGFR基因拷贝数检测