MRSAPBP2a表达的影响因素及MecA基因的检测价值
耐药机制及特殊耐药性检测知识点整理
耐药机制及特殊耐药性检测知识整理1.耐药类型1)靶位改变●MRSA：抗药性金黄色葡萄球菌●VRE：抗万古霉素肠球菌2)产酶●ESBL：超广谱β-内酰胺酶●AmpC： AmpCβ内酰胺酶●CRE：耐碳青霉烯类肠杆菌3)多重耐药●MDR-PA：多重耐药铜绿假单胞菌●MDR-AB：多重耐药鲍曼不动杆菌2.M RSA抗药性金黄色葡萄球菌1)耐药机制：MRSA携带mecA基因，可编码产生低亲和力的青霉素结合蛋白（PBP2a），阻止药物与靶位的结合而造成耐药。
2)流行现状3)检测方法●1、苯唑西林的筛选平板。
不是甲氧西林！●2、常规药敏试验(苯唑西林MIC，头孢西丁MIC或纸片法)检测。
●3、mecA基因(PCR法)及其产物PBP2a(乳胶凝集试验)阳性均提示MRSA●抑菌圈内任何生长视为耐药。
4)检测●mecA和PBP2a：确定葡萄球菌属对甲氧西林(苯唑西林)耐药性最可靠的方法，阳性应报告为该菌株对甲氧西林(苯唑西林)耐药●苯唑西林筛选平板（显色平板）●常规药敏（苯唑西林MIC、头孢西丁MIC、纸片法）●PCR●金葡或所有凝固酶阴性葡萄球菌，如对苯唑西林(或甲氧西林)耐药，则对青霉素类、头孢菌素类(头孢罗膦除外)、碳青霉烯类和含酶抑制剂的复方制剂均应报告耐药，而不考虑其体外药敏结果。
3.V RSA-vanA耐万古霉素金葡1)定义：金黄色葡萄球菌对万古霉素●MIC＞16μg/ml——耐药●MIC=4-8μug/ml——中介●MIC＜2μg/ml——敏感。
2)耐药机制：葡萄球菌细胞壁有一段由4个氨基酸组成的短肽， 4肽的末端有2个重复氨基酸是万古霉素结合的靶位，由vanA基因介导的4肽末端改变为万古霉素低亲和力靶位，与万古霉素结合的亲和力下降1000倍。
3)检测方法：不推荐纸片法做万古霉素的敏感性检测4.V RE-vanA耐万古霉素肠球菌1)流行现状：几乎无药可治2)检测方法●肉汤或平板筛查法，万古霉素琼脂平板●纸片法、E-test●琼脂稀释法VRE筛选试验※3)耐药机制：vanA基因介导的4肽末端（D-丙氨酸- D-丙氨酸）改变为D-丙氨酸-D-乳酸4)结果解释：MIC高水平耐药，根据对万古霉素和替考拉宁耐药的程度可进⼀步区分为vanA、vanB、vanC、vanD等。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌研究进展
试验研究ＬＩＶＥＳＴＯＣＫＡＮＤＰＯＵＬＴＲＹＩＮＤＵＳＴＲＹＮｏ．１，２０２１耐甲氧西林金黄色葡萄球菌研究进展黄显晔１，谢宇庭２，张鹏宇３通信作者（１．黑龙江省大庆市杜尔伯特县畜牧技术服务中心，黑龙江大庆１６３０００；２．黑龙江省齐齐哈尔市畜牧总站，黑龙江齐齐哈尔１６１００６；３．黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院，黑龙江齐齐哈尔１６１０００）摘 要：近年来，抗生素的滥用导致了细菌耐药性情况越来越严重。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是一个典型的例子，成为了在临床上较难治愈的细菌。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌在动物上可分离出来，对动物的健康造成了消极的影响，也对公共卫生安全造成了威胁。
就耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌的临床特性、耐药情况以及治疗情况进行综述。
关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；耐药性；万古霉素；中药ｄｏｉ：１０．１９５６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８－０４１４．２０２１．０１．００５ 引言随着抗生素的广泛使用，细菌的耐药性问题逐渐显现出来。
其中，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ ＲｅｓｉｓｔａｎｔＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）是耐药细菌中的典型代表。
ＭＲＳＡ是指能抵抗甲氧西林以及其他β－内酰胺类药物的一类金黄色葡萄球菌。
在临床上由于其严重的耐药性，出现医治困难的情况，对人及动物安全造成较大影响，给公共卫生安全事业带来了不小的挑战。
近年来，在动物源，尤其是乳房炎以及子宫内膜炎病例中，经常分离出ＭＲＳＡ菌株，对畜禽养殖行业造成了不小的经济损失［１］。
科研人员对ＭＲＳＡ菌株进行了研究，探索其临床特性以及耐药机制，并不断寻找对其的治疗方法。
本文对ＭＲＳＡ菌株的流行病学、耐药机制以及防治研究进展进行综述。
流行病学甲氧西林于２０世纪５０年代在临床使用，由于其对青霉素酶稳定，曾有效控制住了耐青霉素金黄色葡萄球菌的流行。
但是，随着其广泛的使用，金黄色葡萄球菌对其的耐药性逐渐产生。
mecA、femA基因与MRS多重耐药性的相关性研究的开题报告
mecA、femA基因与MRS多重耐药性的相关性研究的开
题报告
题目：mecA、femA基因与MRS多重耐药性的相关性研究
背景：葡萄球菌（Staphylococcus）是一种常见的致病菌，其中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）可以引起各种感染，从皮肤感染到血流感染。
由于广泛使
用抗生素和医院设施的不良管理，金黄色葡萄球菌对多种药物表现出了多重耐药性（MRS），从而使治疗变得困难。
研究表明，mecA和femA基因是金黄色葡萄球菌耐药性的主要决定因素。
目的：本研究旨在探讨mecA和femA基因在MRS菌株中的表达水平与多重耐药性之
间的相关性，为MRS的治疗提供新的思路和策略。
方法：从临床分离的金黄色葡萄球菌中筛选出对多种抗生素表现出不同程度耐药性的
菌株，包括MRSA（甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌）和MSSA（甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌）等。
利用RT-qPCR技术检测这些菌株中mecA和femA基因的表达水平，并
分析其与多重耐药性之间的相关性。
预期结果：本研究预计可以揭示mecA和femA基因与MRS多重耐药性之间的相关性，并对MRS的治疗提供新的思路和策略，从而有效控制MRS的传播和流行。
意义：MRS已成为公共卫生的威胁，而针对MRS的治疗策略也面临着严峻的挑战。
本研究旨在了解MRS耐药性的基因机制，并为临床治疗提供新的思路和策略，从而具有重要的社会和临床意义。
金黄色葡萄球菌耐药的现状及临床治疗对策
金黄色葡萄球菌耐药的现状及临床治疗对策孙宏莉徐英春单位：中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院摘要：金黄色葡萄球菌，尤其是甲氧西林或苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）是引起院内感染的多重耐药菌。
目前MRSA已逐渐成为全世界院内感染的主要病原菌。
目前在许多国家仍在增长，MRSA几乎对所有?-内酰胺类抗生素耐药，甚至累及到红霉素，环丙沙星和庆大霉素。
本文对金黄色葡萄球菌的耐药现状、耐药机制以及金黄色葡萄球菌感染的危险因素和治疗对策进行了简要介绍。
关键词：金黄色葡萄球菌耐药现状耐药机制危险因素治疗对策答1. 甲氧西林或苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA ）是引起院内感染的多重耐药菌。
是吗？A.是B.不是2. 根据NCCLS 判定标准，对于金黄色葡萄球菌，万古霉素的MIC≤4ug/ml 时为敏感。
对吗？A.不对B.对金黄色葡萄球菌，尤其是甲氧西林或苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA ）是引起院内感染的多重耐药菌。
在第一个耐青霉素酶的β－内酰胺类抗生素甲氧西林用于临床治疗葡萄球菌感染不久，1961 年在英国发现了世界首例MRSA 。
从此，MRSA 逐渐成为全世界院内感染的主要病原菌。
目前在许多国家仍在增长，MRSA 几乎对所有β- 内酰胺类抗生素耐药，甚至累及到红霉素，环丙沙星和庆大霉素。
1996年在日本首次发现了MRSA对万古霉素敏感性下降的菌株，即万古霉素中介的金黄色葡萄球菌（VISA）。
VISA的出现预示着万古霉素治疗葡萄球菌感染的临床疗效下降，随之万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌（VRSA）临床株是否会分离到，成为人们监测和关注的热点。
如果葡萄球菌一旦对万古霉素耐药，临床将如何治疗？所以连续监测金黄色葡萄球菌的耐药现状，了解葡萄球菌的耐药机制，感染的危险因素及其治疗对策具有重要的临床意义。
金黄色葡萄球菌的耐药现状：我院细菌室从1988～2003 年连续监测金黄色葡萄球菌对常用抗生素的耐药性变迁，结果见表1 。
压电基因传感器阵列检测MRSA 的实验研究
论著 文章编号:100025404(2002)0120020203压电基因传感器阵列检测MRSA的实验研究刘明华1,府伟灵2,陈 鸣2,黄君富2,黄 庆2 (第三军医大学附属西南医院:1IC U;2检验科;重庆400038) 提 要:目的 探讨以压电传感阵列技术检测耐甲氧西林葡萄球菌的可行性。
方法 收集临床64株葡萄球菌标本,对其耐药标志基因mecA基因和金黄色葡萄球菌特有基因femA基因扩增后应用压电传感器阵列进行检测,并以PCR电泳检测作参照,与目前采用的常规药物敏感试验进行对比分析。
结果 传感器分析与PCR电泳分析结果完全一致。
而此两种方法与常规培养加药敏法比较,结果略有差异。
所有64株葡萄球菌中,2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRS A)的mecA为阴性;2株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSS A)的mecA为阳性。
1株耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRC NS)的mecA为阴性;2株甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌(MSC NS)的mecA为阳性。
结论 以压电传感阵列技术同时检测femA基因和mecA基因,既可鉴定出是否为金黄色葡萄球菌,又可判断其耐药类型,能为危重病人感染MRS A时的诊断和治疗提供依据。
关键词:耐甲氧西林葡萄球菌;压电晶体;传感器 中图法分类号:R446.5;TP212.3 文献标识码:ADetection of methicillin2resistant Staphylococci aureus by piezoelectric gene sensor ar2 raysLI U Ming2hua,FU Wei2ling,CHE N Ming,H UANGJun2fu,HUANG Qing(Department of Clinical Laboratories,S outhwest H ospital,Third M ilitary M edical University,Chongqing400038,China) Abstract:Objective T o investigate the feasibility of the detection of methicillin2resistant Staphylococci aureus(MRS A)by piezoelectric gene sens or arrays.Methods The resistant marker gene mecA and specific gene femA of Staphylococcus aureus were detected in64collected strains of staphylococcus and the results were com pared with those obtained by PCR and conventional antimicrobial susceptibility test.Re sults The results by sens or arrays were identical to those by PCR,but had s ome differences with those by antimicrobial susceptibility test.Am ong64strains of staphylo2 coccus,2strains of MRS A had negative mecA gene,2strains of methicillin2susceptible Staphylococci aureus(MSS A)showed positive to mecA,1 strain of methicillin2resistant coagulase2negative staphylococcus(MRC NS)showed negative to mecA,and2strains of methicillin2susceptible coagu2 lase2negative staphylococcus(MSC NS)encoded mecA gene fragment.Conclusion With the piezoelectric gene sens or arrays,mecA and femA gene can be detected at the same time,s o the instrument provides a rapid diagnosis for MRS A in fection. K ey w ords:methicillin2resistant Staphylococci aureus;piezoelectric crystal;sens or 耐甲氧西林葡萄球菌(Methicillin2resistant Staphylo2 cocci aureus,MRS A)是引起危重病人院内感染的主要病原菌之一。
苯唑西林敏感耐甲氧西林金黄色葡萄球菌研究进展
苯唑西林敏感耐甲氧西林金黄色葡萄球菌研究进展赵吴静;徐进强;武中庸;蒲万霞【摘要】金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)是革兰氏阳性菌,是目前临床感染常见的一种病原菌,能引起局部化脓性感染、关节炎、心内膜炎、蜂窝织炎、败血症、脓毒血症等全身感染.近些年来,由于抗生素不合理的使用,金黄色葡萄球菌的耐药性日益严重,特别是苯唑西林敏感耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(oxacillin-susceptible methicillin-resistant Staphylococcus aureus,OS-MRSA)的出现给临床治疗增加了巨大的难度.了解OS-MRSA的流行病学特点和耐药机制可帮助临床医师更好地选择治疗药物,鉴于此,作者针对OS-MRSA的流行病学及耐药机制研究进展进行综述.%Staphylococcus aureus(S.aureus)is a gram-positive bacteria which could cause many kinds of infections,such asarthritis,endocarditis cellulitis,septicemia,pyemia and other systemic infections.In recent years,due to the unreasonable use ofantibiotics,resistant Staphylococcus aureus increasedrapidly.Particularly,the oxacillin-susceptible methicillin-resistant Staphylococcus aureus(OS-MRSA),it is a great challenge for clinical treatment.Understand the epidemiological characteristics and the mechanism of drug resistance of OS-MRSA can help clinicians to choose therapeutic drugs much better.This review summarized the research progress of epidemiology and resistant mechanism of OS-MRSA.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2017(044)008【总页数】7页(P2458-2464)【关键词】苯唑西林敏感耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;流行病学;耐药机制【作者】赵吴静;徐进强;武中庸;蒲万霞【作者单位】中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州730050;甘肃农业大学动物医学院,兰州 730070;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州730050;西北民族大学生命科学与工程学院,兰州 730124;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,兰州730050【正文语种】中文【中图分类】R446.5近年来，细菌耐药性已成为全球热议的话题，尤以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SA)耐药菌株的出现，引起了全世界研究者的关注，它的出现使得人和动物的临床治疗愈来愈难，且造成了巨大的经济损失。
215株MRSA的临床分布、耐药特征和耐药基因mecA检测的分析性研究
215株MRSA的临床分布、耐药特征和耐药基因mecA检测的分析性研究张勇;闫志勇;杨秀珍;刘宏锋;孙玲玲;王斌【摘要】目的通过对我院分离的MRSA进行回顾性分析,为临床合理使用抗生素提供实验室依据.方法回顾性分析我院2010年1月-2013年12月分离到的215株MRSA的耐药性,总结其科室分布、标本来源类型情况、探讨耐药性变化趋势,并通过多重PCR检测其耐药基因mecA及其同源体基因mecALGA251.结果 2010年1月 2013年12月我院MRSA的分离率呈逐年增高趋势,ICU分离的MRSA最多,标本来源以痰液标本最多.药敏试验结果表明,215株MRSA对利奈唑胺、替考拉宁和万古霉素的敏感率均为100％,对其他11种药物,包括青霉素、克林霉素、苯唑西林、头孢唑林、头孢噻肟、红霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素及复方新诺明耐药率均很高,且随年份呈现增高趋势.215株MRSA通过多重PCR法均检测到mecA基因,另外有7株检测到同时含有mecALGA251基因.结论 MRSA 对利奈唑胺、替考拉宁和万古霉素的敏感性很高,可用于MRSA感染的治疗.mecA 基因同源体mecALGA251基因的出现,可通过多重PCR法对其进行检测.【期刊名称】《滨州医学院学报》【年(卷),期】2015(038)006【总页数】4页(P448-451)【关键词】MRSA;耐药;mecA基因;抗生素【作者】张勇;闫志勇;杨秀珍;刘宏锋;孙玲玲;王斌【作者单位】青岛大学医学院病原生物学教研室青岛 266021;淄博市中心医院临床检验科;青岛大学医学院病原生物学教研室青岛 266021;淄博市中心医院临床检验科;淄博市中心医院临床检验科;淄博市第五人民医院淄博市精神卫生中心;青岛大学医学院病原生物学教研室青岛 266021【正文语种】中文【中图分类】R446.5耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resisitant Staphylococcus aureus，MRSA）是引起医院感染的重要病原菌，MRSA致病性强，对多种抗生素耐药，给临床治疗带来巨大困难［1，2］。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三种筛查方法比较
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三种筛查方法比较目的: 以PCR检测的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的mecA基因为金标准，比较耐甲氧西林金葡菌快速胶乳凝聚检测法、头孢西丁纸片法、苯唑西林纸片法三种检验方法在MRSA筛查中的特异性和敏感性。
方法：采用NCCLS 推荐的30 μg头孢西丁纸片法和苯唑西林纸片法，以及快速乳胶法检测。
结果：苯唑西林纸片法检测MRSA阳性47株，阴性36株，敏感性94%，特异性94.7%。
头孢西丁纸片法检测MRSA阳性49株，阴性38株，敏感性98%，特异性100%。
快速胶乳检测法检测MRSA阳性49株，阴性37株，敏感性98.0%，特异性97.4%。
结论：头孢西丁纸片法、快速胶乳检测法与PCR法这个金标准有很高的一致性。
标签：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）；头孢西丁纸片法；快速乳胶检测法；苯唑西林纸片法；筛查耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 的临床院感率不断上升，在世界各地医院都有感染流行，甚至发生暴发流行，几乎在所有使用抗生素的地方都有MRSA 存在，已引起全球范围内的广泛关注[1]。
PCR法检测MRSA特异的青霉素结合蛋白2α（PBP2α）的mecA 基因，是国际公认的金标准，但因为设备、试剂费用高，实验要求严格等因素临床实验室难以常规开展。
本实验通过检测已经经过PCR法检测过的菌株88例，探讨苯唑西林纸片法、头孢西丁纸片法、快速乳胶检测法三种方法的敏感性、特异性和临床实用性。
现报道如下：1 材料与方法1.1 实验材料和试剂1.1.1 菌株来源实验菌株为2003年5月来本院微生物实验室从临床标本分离出的金黄色葡萄球菌88株，标准参考菌株ATCC 25923来自军事医学科学院微生物流行病研究所。
1.1.2 材料和试剂MRSA快速胶乳检测试剂由英国Oxoid公司生产。
头孢西丁纸片（30 μg）、苯唑西林纸片（1 μg）购自北京天坛药物生物技术公司。
水解酪蛋白（M-H）琼脂为杭州天和微生物试剂有限公司产品。
重要致病菌的耐药机制
重要致病菌的耐药机制1．甲氧西林耐药葡萄球菌(MRS) 金葡菌可产生一种特殊的青霉素结合蛋白PBP2a，其与β内酰胺类抗生素的亲和力减低，因而产生耐药性(MRSA)。
PBP2a 由mecA 基因编码，由转座子携带并整合至葡萄球菌染色体的mec 部位。
每株MRSA 菌都有mecA 基因，而敏感株则无。
MecRI-mecl 是调节基因，通过抑制mecA 的转录决定PBP2a 的合成水平而调节细菌的耐药程度。
在细菌基因组中还存在着辅助基因femA、femB、femC、femD，与甲氧西林耐药性的表达有关。
这些辅助基因与mecA 基因协调作用，产生对β内酰胺类抗生素的高度耐药。
MecA 基因广泛分布于金葡菌及凝固酶阴性葡萄球菌。
带有mecA 基因的菌株对青霉素类、头孢菌素类、单环β内酰胺类抗生素均呈耐药。
由于其所在的转座子常带有对其他抗生素的耐药基因，使耐甲氧西林葡萄球菌常可对红霉素、四环素类、夫西地酸、磺胺药、链霉素等氨基苷类及氟喹诺酮类同时耐药，但上述抗生素的耐药机制则各不相同。
1996 年欧洲首次报道了对万古霉素不敏感金葡菌，MIC 为8～16ug/ml，称为VISA(Vancomycin intermediate suscepitble 或GISA(Glycopeptide intermediate susceptible S aureus)，其机制尚未完全阐明，可能由于该菌产生过多的靶位，阻断了药物到达靶位，使之不能起抗菌作用。
2．耐万古霉素肠球菌肠球菌属对万古霉素的耐药性共有6 种基因型，即VanA、VanB、VanC1、VanC2/C3、VanD和VanE。
其中VanA、VanB、VanD、VanE为获得性耐药，VanC1和VanC2/C3为固有的耐药性。
万古霉素与细菌肽聚糖前体末端的D －丙氨酰－D－丙氨酸结合，抑制细胞壁肽聚糖的合成。
耐万古霉素菌株中VanA、VanB、VanD型可产生一组功能相似的连接酶，导致合成D－丙氨酰－D－乳酸取代正常的细胞壁肽聚糖末端的D－丙氨酰－D－丙氨酸，前者与万古霉素的亲和力仅为正常成分的，使万古霉素不能与其靶位结合，造成细菌对万古霉素耐药。
细菌培养和药敏试验报告你真看懂了吗
精心整理细菌培养和药敏试验报告，你真看懂了吗？现在由于抗生素的广泛使用细菌耐药现象比较严重，虽然近几年临床越来越重视，但情况仍不容乐观。
越来越多的医生和患者希望在用药前能够得知细菌的种类和药敏结果，但由于细菌检验结果的专业性强，大多数人对药敏报告的理解仅限于敏感（S）和耐药（R）等字面意思，报告中蕴含的海量信息并没有得到充分挖掘，（MRS）一、案例阳性，Er点评内酰胺类药物和苯唑西林的作用靶点为青霉素结合蛋白（PBPs），PBPs种类较多，对各种内酰胺类药物的结合力不同，其中结合力最差的就是PBP2a，该蛋白由MecA编码，绝大多数MRSA有此基因。
凡是MecA基因阳性的菌株，对多种药物的耐药性比MecA基因阴性的菌株高，对这样一类菌株，万古霉素几乎是唯一可选的抗生素，当然与四环素类、大环内酯类药物联合使用，可增强杀菌效果。
但在此案例中，红霉素诱导克林霉素耐药试验(Er）阳性，提示林可胺类（克林霉素、林可霉素）不宜选用。
二、产ESBLs菌株是什么意思，蕴含了哪些信息？案例/棒酸、点评对该类抗生素耐药。
ESBLs在大肠埃希菌和克雷伯菌中的表达研究得比较清楚，在药敏报告中都会有明确标注，其他细菌的表达目前还不明确。
对于未标注为ESBLs的菌株，如果临床怀疑其多重耐药，可以咨询细菌室，工作人员会告诉你一个大致的判断结果。
ESBLs能水解青霉素、单环类内酰胺药物（氨曲南）和一、二、三代头孢菌素，第四代头孢菌素可能在体外实验中敏感，但临床治疗效果不理想。
ESBLs不能水解炭青霉烯类（亚胺培南、美罗培南和厄他培南）和头霉素类（头孢西丁和头孢美唑），且能够被舒巴坦、他唑巴坦、克拉维酸（棒酸）等常见内酰胺酶抑制剂所抑制，因此对于ESBLs阳性细菌，应选择含有β内酰胺酶抑制剂的复方抗生素或炭青霉烯类抗生素。
但是如果质粒携带的不是ESBLs而是AmpC酶，上述β内酰胺酶抑制剂就显得无能为力了，因为上述β内酰胺酶抑制剂不能抑制AmpC酶，此时选择炭案例2015线检查/分，天后，20天然耐药，临床上能够选择的抗生素就只有炭青霉烯和三代及三代以上的抗生素，而头孢他啶的敏感性基本代表了第三代抗生素，根据药敏结果，含有β内酰胺酶抑制剂的舒普深是最佳选择，况且患者的症状在缓解，更是证明了初入院时的经验用药是正确的。
MRSA耐药机制及检测方法
• MRSA，methicillin resistant Staphylococcus aureus（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌）
1961年在英国由Jevons 首次发现，是引起医院 感染的重要病原菌之一
overview
• MRSA是携带mecA基因、编码低亲和力青霉 素结合蛋白，导致耐甲氧西林、所有头孢菌 素、碳青霉烯类、青霉素类+青霉素抑制剂 抗生素的葡萄球菌
•femC的作用引起谷氨 酰胺合成酶基因glnA
转录和活化及异谷氨
酰胺的酰胺化，其失
活时，糖肽的交叉连 接降低，MRSA对β-内
酰胺酶类抗生素耐药 性降低
femF基因的编码产物 涉及L-赖氨酸与胞壁酰 二肽链的连接，其突变 失活时引起的耐药性的 改变得具体机制还有待 研究。 femD和femE对细菌的 确切作用还未阐明
影响mecA表达的因素
• mecA基因的基本调节基因为mecI和mecR1
mecI基因编码mecI蛋白为抑制因子，当其
结合到mecA基因的启动子上时，抑制mecA基 因地转录，从而不能产生PBP2a
mecR1基因编码mecR1蛋白为诱导因子，
当其接触到诱导剂β-内酰胺类抗生素时被活化， 活化的mecR1蛋白能够去除mecI蛋白对mecA 基因地阻遏作用，使mecA编码产生PBP2a蛋 白
Detection for MRSA
传统方法
药物敏感试验方法 NCCLS推荐使用药 敏纸片法、苯唑西林 (oxacillin)盐琼脂筛 查法、β-内酰胺酶检 测、E-test 试验和试 管双倍稀释法等 缺点：易受培养基成 分影响，较耗时，且 错误应用抗生素会引 起更为严重耐药的耐 药菌株的出现
MALDI- TOF MS细菌指纹图谱法
MRSA感染的问题和治疗策略
MRSA基本特点
G+全球耐药状况 （2005-2006)
United States
MRSA
54%
VRE (E.faecium) 27 (72)%
MRSA的耐药机制
在甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（MSSA） 中含有5种与β－内酰胺类抗生素亲和力高的 青霉素结合蛋白(PBP)，总称为PBPs，主要 参与细胞壁粘肽层的合成。使用β－内酰胺类 抗生素时，药物可与PBPs结合，使其功能被 抑制，使细胞壁合成受阻，导致细菌因不能 抵抗外界的渗透压力而死亡。
葡萄球菌菌株数
R%
I%
527
0%
0%
1771
0%
0%
2616
0%
0%
7575
0%
0%
9901
0%
0%
13875
0%
0%
13550
0%
0%
S% 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100%
1、李家泰, Allan J Weinstein, 杨敏等. 中国细菌耐药监测研究. 中华医学杂志 2001;81(1):8-16 2-7. 国家细菌耐药性监测中心监测数据总结
• CLSI将金葡菌万古霉素这点从MIC≦4μg/mL改为 2μg/mL。但FDA规定的折点仍是4μg/mL
• 万古霉素传统的体外药敏和治疗重症MRSA感染的成功 率之间没有联系。
• 与抗MRSA新药比较，疗效并不逊色。万古霉素仍然治 疗MRSA感染的标杆，新药临床实验均以其作对照，虽 然某些新药在某些方面显示有点，但总体上还没有全面 超优万古霉素的新药。
中药含药血清对MRSAβ-内酰胺类抗生素耐药性及mecA＼femA基因的影响
中药含药血清对MRSAβ-内酰胺类抗生素耐药性及mecA＼femA基因的影响【摘要】目的：研究中药在体内对MRSAβ-内酰胺类抗生素耐药性的影响。
方法：采用中药含药血清与MRSA共同培养的方法进行耐药性逆转实验，用K-B 纸片扩散法观察实验前后受试菌抑菌环直径的变化，同时进行耐药基因mecA、femA的检测。
结果：对照组与实验组K-B纸片扩散法对比，五倍子、绿茶、防风、丹皮、黄芩、浙贝组对苯唑西林钠、头孢唑啉钠、头孢呋辛、头孢噻肟钠、头孢美唑等药物抑菌环直径扩大均有不同程度扩大，由耐药或中敏恢复为敏感；对青霉素抑菌环直径无影响，仍表现为耐药。
MRSA标准菌株、对照组菌株均检测出耐药特异性基因mecA、femA，丹皮、五倍子、防风、黄芩、浙贝、绿茶组未测出femA基因，mecA基因条带显示明显减弱。
结论：MRSA经五倍子、绿茶、防风、丹皮、黄芩、浙贝含药血清处理后均恢复了对耐酶β-内酰胺类抗生素的敏感性，且耐药基因mecA、femA的表达明显受抑制，推测其可能通过作用于mecA、femA或其调控因素，影响耐药基因的表达程度，使PBP2a产生减少或消除，从而达到耐药性逆转的作用。
【关键词】中药；MRSA；β-内酰胺；耐药；基因耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(meticillin resistant staphyloc occus aureus，MRSA)是医院感染的重要病原菌之一。
自1961年英国的Jevons首次报道MRSA感染以来，其发生率在全球范围内迅速增加，耐药程度不断加深。
对于MRSA的治疗方法，虽然在新药研制与联合用药等方面有一些进展，但万古霉素仍然是临床首选药物。
随着对万古霉素中敏或耐药金黄色葡萄球菌菌株R S 对照组黄芩组浙贝组丹皮组防风组绿茶组五倍子组苯唑西林钠≤10≥13 6 16 14 18 16 18 14青霉素≤28≥29 10 10 10 10 10 10 10头孢唑啉钠≤14≥18 16 22 18 18 18 18 24头孢呋辛≤14≥18 18 20 20 24 32 26 22头孢噻肟钠≤14≥23 14 20 20 20 30 28 20头孢美唑≤12≥16 12 16 16 18 16 16 163.2 mecA、femA基因检测MRSA标准菌株、对照组菌株均检测出耐药特异性基因mecA、femA，丹皮、五倍子、防风、黄芩、浙贝、绿茶组未测出femA 基因，mecA基因条带显示明显减弱。
乳腺癌术后切口感染金黄色葡萄球菌中mecA基因分布情况及耐药性分析
乳腺癌术后切口感染金黄色葡萄球菌中mecA基因分布情况及耐药性分析摘要：目的探讨分析2016年-2017年我院乳腺癌患者切口感染分离的金黄色葡萄球菌中MecA基因的分布及耐药性分析。
方法收集我院临床2016年1月-2017年12月分离的101株金黄色葡萄球菌，MIC法对其进行药敏试验，采用WHONET5.6进行药敏数据分析，采用聚合酶链反应（PCR）法对mecA基因进行筛查。
结果 101株SAU中，所有菌株均对万古霉素、利奈唑胺、达托霉素敏感。
对青霉素的耐药率最高，为92.1%（93/101），对苯唑西林的耐药率为25.7%（26/101）。
对红霉素、克林霉素的耐药率大于40%，对四环素的耐药大于10%，其余莫西沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素、喹奴普丁/达福普汀、复方新诺明和利福平的耐药率均小于10%。
101株SAU中发现mecA基因25株。
结论我院乳腺癌患者术后切口感染的SAU耐药情况逐年上升，mecA基因普遍存在MRSA当中。
临床应严格进行无菌操作及合理使用抗菌药物，并加强对MRSA菌的耐药性监控。
关键词：乳腺癌；金黄色葡萄球菌；mecA基因；耐药性分析乳腺癌是常见的需做切除手术治疗的癌症之一。
由于手术创口大、时间较长及术后渗出液较多等原因，易导致术后切口感染。
据报道[1]，乳腺癌患者术后切口感染率是普通外科切除手术的4~6倍左右。
金黄色葡萄球菌（SAU）是临床上引起乳腺癌患者术后切口感染常见的病原菌之一。
SAU可引起人类局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
近年来，由于广谱抗菌药物的乱用及滥用，在抗菌药物的选择压力之下，SAU的耐药性不断升高，耐多药SAU，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的持续出现，由于治疗MRSA感染的选择有限，已造成巨大的经济负担和对公共卫生的关切。
本文主要针对引起我院乳腺癌患者术后切口感染的SAU中mecA基因的分布以及耐药性进行分析，为临床合理用药、控制多重耐药菌的产生，提高乳腺癌手术治疗质量提供实验室依据。
MRSA的耐药机制及临床药物治疗方案相关研究进展
MRSA的耐药机制及临床药物治疗方案相关研究进展作者：陈方圆于秀妍马笑雪来源：《中外医疗》 2011年第17期陈方圆于秀妍马笑雪(中国医科大学基础医学院沈阳 110001)【摘要】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是一种具有强大的致病毒力因子以及耐药性的菌种,在医院和社区获得性感染中具有极其重要的地位。
【关键词】 MRSA 耐药性治疗【中图分类号】 R515 【文献标识码】 A 【文章编号】 1674-0742(2011)06(b)-0126-01耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)于1961年首先在英国发现,之后各国相继报道。
近几年MRSA感染几乎遍及全球,成为全世界范围内引起人类感染性疾病的首要病原菌。
1 MRSA的耐药机制MRSA的耐药机制主要是产生新的靶蛋白而改变抗生素作用靶位,所有的MRSA都能产生出一种青霉素结合蛋白PBP2a,这种蛋白可以在β-内酰胺类抗生素存在的情况下维持菌体细胞壁的合成从而使胞体内其它青霉素结合蛋白无法发挥活性。
PBP2a蛋白由基因mecA编码,mecA基因定位在一个被称作SCCmec的易变基因盒上(SCCmec是基础的可动遗传因子)。
除了耐药基因mecA外,SCCmec也携带有mecA调节基因mecI和mecR、插入序列元件基因IS431mec和特殊位点重组酶基因ccr。
SCCmec根据mecA基因和ccr基因丛分成Ⅰ到Ⅴ型,其中SCCmecⅠ到Ⅲ型在医院感染病人中常见,而SCCmecⅣ型元件在5种类型中最小,其在环境中变异性最大,因而在社区获得性感染的病人中常见。
蛋白PBP2a是由β-内酰胺类抗生素与mecR基因编码的细胞质膜传感器受体结合后诱导表达的。
辅助基因是近年来在金葡菌染色体上发现的一组影响MRSA耐药性表达的正常基因。
现已研究证明的辅助基因femA、B、C、D、E和F以及agr、sar等均是与细菌细胞壁合成有关的功能基因。
2 目前MRSA感染的治疗方案(1)对抗MRSA感染的一线药物主要有糖肽类抗生素万古霉素和替考拉宁,嗯唑烷酮类抗菌药物利奈唑胺等以及目前对MRSA活性最强的氨基糖苷类抗生素阿贝卡星。
快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的PCR方法学评价
快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的PCR方法学评价陈宇明;胡婷婷;倪洁;王蓓;蒋晓飞;关明;徐峰;刘维薇【摘要】目的对PCR法直接检测标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药基因mecA的可靠性进行评估.方法用经细菌表型鉴定的70株临床标本分离株进行方法学评估,其中MRSA 22株,非MRSA 48株,检测其最低检测限、重复性、灵敏度和特异性.同时对269份临床标本,包括67份痰液、82份血液、68份尿液以及52份无菌体液进行PCR检测和细菌表型鉴定,分析结果符合率.结果 PCR法的最低检测限为5×104 CFU/mL;菌数5×106和5×104 CFU/mL标本的批内变异系数(CV)为0.81％、0.94％,批间CV为1.48％、2.03％;检测经表型鉴定的菌株,敏感性和特异性均达到100％.痰液标本PCR检测和细菌表型鉴定符合率为98％,血液、尿液和其他体液标本均为100％.结论 PCR法检测mecA耐药基因,方便、快速且最低检测下限和重复性等性能指标均比较理想,与表型鉴定符合率较高,适于临床应用.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2013(031)011【总页数】3页(P833-835)【关键词】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;mecA基因;PCR法【作者】陈宇明;胡婷婷;倪洁;王蓓;蒋晓飞;关明;徐峰;刘维薇【作者单位】复旦大学附属华山医院检验医学科,上海200040;复旦大学附属华山医院检验医学科,上海200040;复旦大学附属华山医院护理部,上海200040;复旦大学附属华山医院检验医学科,上海200040;复旦大学附属华山医院检验医学科,上海200040;复旦大学附属华山医院检验医学科,上海200040;复旦大学附属华山医院皮肤科,上海200040;同济大学附属第十人民医院检验科,上海200072;上海市皮肤病医院检验科,上海200071【正文语种】中文【中图分类】R446.5耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)因对β-内酰胺类药物与酶抑制剂的复合剂耐药，已成为目前医院内感染的重要病原菌之一[1-3]。
抗MRSA-PBP2a转肽酶区蛋白单克隆抗体的制备、鉴定与初步应用的开题报告
抗MRSA-PBP2a转肽酶区蛋白单克隆抗体的制备、鉴定与初步应用的开题报告一、选题背景与意义耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是一种耐药菌，多数导致血液感染和皮肤软组织感染。
MRSA的耐药机制主要为其产生的PBP2a转肽酶（penicillin-binding protein 2a）。
目前临床上使用的β-内酰胺类、青霉素类等抗生素均对PBP2a转肽酶失去活性，因此对MRSA感染的治疗带来了严重的局限性。
因此，开发抗MRSA-PBP2a转肽酶区蛋白的单克隆抗体，对临床治疗具有重要的意义。
二、研究目的和内容本研究旨在制备抗MRSA-PBP2a转肽酶区蛋白的单克隆抗体，并进行鉴定和初步应用。
具体研究内容包括：1. 获取PBP2a转肽酶区蛋白的基因序列并进行原核表达；2. 构建抗原，并将抗原注射入小鼠体内，制备单克隆抗体；3. 鉴定所得单克隆抗体的亚型、特异性和交叉反应性；4. 利用所得单克隆抗体对MRSA菌株进行检测。
三、研究方法1. 基因工程技术：利用PCR扩增PBP2a转肽酶区蛋白的基因序列，并将其克隆至表达载体中进行原核表达。
并利用SDS-PAGE、Western blot等技术对表达蛋白进行鉴定。
2. 小鼠免疫技术：将抗原注射入小鼠体内，通过ELISA检测小鼠血清中是否产生抗体，并进行细胞融合以制备单克隆抗体。
3. 抗体鉴定技术：通过ELISA、Western blot等技术对所得单克隆抗体进行亚型、特异性和交叉反应性鉴定。
4. 菌株检测技术：利用所得单克隆抗体对临床分离的MRSA菌株进行检测。
四、研究预期成果1. 成功制备MRSA-PBP2a转肽酶区蛋白的单克隆抗体；2. 鉴定所得单克隆抗体的亚型、特异性和交叉反应性；3. 所得单克隆抗体可用于MRSA菌株的检测；4. 为临床MRSA感染的治疗提供一定的参考和帮助。
PBP2a的分子生物学特性及其与MRSA固有耐药的相关研究
PBP2a的分子生物学特性及其与MRSA固有耐药的相关研究吴本权【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】1999(005)001【摘要】甲氧西林耐药金葡菌(Methicillin Resistant Staphyloloccus Aureus,MRSA)是院内感染的重要致病菌之一,其致病性与甲氧西林敏感金葡菌(MetLicillinSensitiveS taphylococcus Aureus,MSSA)相似。
主要引起化脓性感染,但几乎对包括甲氧西林在内的所有抗生素耐药,目前只有万古霉素和利福平敏感。
自60年代Jevons首次报道MRSA以来,至80年代MRSA感染遍及全球,最高占金葡菌感染的53％。
国内开展的研究较晚,主要集中在MRSA的药敏试验、分型、分布方面的研究。
因此进一步研究其耐药机制,为合理使用抗生素或开发新的抗生素提供理论依据。
【总页数】3页(P14-16)【作者】吴本权【作者单位】中山医科大学附属第三医院【正文语种】中文【中图分类】R378.11【相关文献】1.MRSA的苯唑西林、头孢西丁MIC与PBP2a的相关性研究 [J], 于农;杨峰2.PBP2a的分子生物学特性及其临床应用研究进展 [J], 谢闺娥;徐霞3.MRSA耐药性产生的分子基础及耐药基因研究进展--内在固有基因与MRSA耐药性表达的关系 [J], 欧阳范献;鲍时翔4.头孢拉啶,头孢噻肟对MRSA PBP2a的诱导作用以及形态,耐药性… [J], 吴本权;唐英春5.MRSA表面标志物PBP2a的检出与苯唑西林MIC的相关性分析 [J], 艾辉;徐小平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MecA基因快速检测方法的评价
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MecA基因快速检测方法的评价李兴禄;张莉萍;黄长武;陈维贤;聂红;彭辉【期刊名称】《中华医院感染学杂志》【年(卷),期】2003(13)2【摘要】目的对MecA基因探针分析快速检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的可靠性和临床实用性进行评估。
方法临床分离的 96株金黄色葡萄球菌中 ,4 4株MRSA采用MecA基因探针快速分析 ,并与MecA基因的PCR结果比较。
结果MecA基因探针快速分析鉴定MRSA的灵敏度为 97.7% ,特异性为10 0 %。
结论该方法灵敏度高 ,特异性强 ,简单易行 ,90min即可完成 ,是常规实验室检出MRSA快速而可靠的分析方法。
【总页数】2页(P105-106)【关键词】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;MecA基因;快速检测方法;聚合酶链反应【作者】李兴禄;张莉萍;黄长武;陈维贤;聂红;彭辉【作者单位】重庆医科大学第二临床学院【正文语种】中文【中图分类】R378.11【相关文献】1.便携式血糖仪对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的灵敏检测方法研究 [J], 方杰;余文;陶一一;代涛;袁长婧;杨宇君;唐兰;谢国明2.靶向mecA基因纳米胶体金探针快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的建立 [J], 夏云;何云燕;黎颖;张莉萍3.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因检测的LAMP方法建立 [J], 陈凤华;欧红玲;吴丽芬;王岩;白静;张巧云;马盈盈;王欣茹4.快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的PCR方法学评价 [J], 陈宇明;胡婷婷;倪洁;王蓓;蒋晓飞;关明;徐峰;刘维薇5.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的超支化等温扩增PCR检测方法研究[J], 董剑;席家庄;王杉;何建春;赵峻英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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MRSA PBP2a表达的影响因素及MecA基因的检测价值吴本权,唐英春,张扣兴,张天托(中山医科大学附属第三医院内科,广东广州 510630)摘 要: 目的 探讨温度、pH、盐浓度对甲氧西林耐药金葡菌(methicillin-resistant staphy lococcus aur eus,M RSA)青霉素结合蛋白2a(penicillin-binding protein,PBP)表达的影响,以及PBP2a编码基因M ecA的检测价值。
方法 采用聚合酶链式反应(PCR)检测M RSA特异性M ecA基因和美国临床实验室标准委员会(N CCLS)推荐的琼脂板稀释法(32 ,pH7 2,40g/L N aCl 苯唑西林M IC 4mg/L)筛选M RSA。
检测20株M RSA在不同温度、pH、盐浓度时对苯唑西林、头孢唑林和头孢他啶的体外药物敏感性,测定M IC范围,M IC50和M IC90;SDS-PAGE分析10株M RSA膜青霉素结合蛋白(PBP2a)在不同培养条件时表达数量的差异,并进行配对差值的t检验。
结果 180株金葡菌检测出M ecA基因阳性M RSA56株,按琼脂板稀释法检出52株M RSA,4株未被检出(苯唑西林M IC分别为:2,2,1,0 5mg/L),37 、pH5 2和9g/L NaCl分别与32 、pH7 2和40g/ L NaCl条件下诱导10株M RSA,所表达的PBP2a含量前后比较差值有显著性(P 0.02~0.05,0.01~0.005,0.02~0.05)。
结论 不同温度、pH、盐浓度通过诱导耐药蛋白PBP2a的表达明显影响M RSA对苯唑西林、头孢唑林和头孢他啶耐药水平,而其M ecA基因却不受培养条件的影响,可以快速检测M R SA感染。
关键词:蛋白质结合;甲氧西林抗药性;葡萄球菌,金黄色;聚合酶链反应中图分类号:R378 1 文献标识码:A 文章编号:1000-257X(2000)02-0157-04Factor Influencing PBP2a Expression and the Significanceof Detecting MecA Gene in MRSAWU Ben-quan,TANG Ying-chun,ZHANG Kou-x ing,ZHANG T ian-tuo(Department of Internal M edicine,T hird Affiliated Hospital ofSun Y at-sen U niversity of M edical Sciences,Guangzhou510630,China)Abstract: Objective To investigate effect of culture conditions on PBP2a expression and significance of its M ecA gene detected by PCR in MRSA. Methods MRSA were identified by their specific MecA gene and agar plate dilution method recommended by NCCLS(32 ,pH7.2,40g/L NaCl,ox acillin M IC 4mg/L).The antimicrobial activities of oxacillin,cefazolin and ceftazidime against20MRSA at different culture conditions w ere tested and MIC range,M IC50and M IC90w ere counted and the relative amount of PBP2a in10M RSA w ere analyzed by SDS-PAGE.Statistical signifcance was analyzed w ith t-tests. Results 56M RSA w ere isolated from 180strains staphylococcus aureus through detecting M ecA,but only52M RSA were idendified using agar plate dilution method and4strains w ere missing for test(M IC of oxacillin2,2,1,0 5ug/ml,respectively).In add-i tion,the amount of PBP2a in10MRSA at37 ,pH5 2and9g/L NaCl were low er than32 ,pH7 2,and40g/ L NaCl(P:0 02~0 05,0 01~0 005,0 02~0 05). Conclusion T he results show ed that temperature,pH and concentration of salt have apparent effects on antimicrobial activities of oxacillin,cefazolin and ceftazidime a-g ainst MRSA,but the detection of M ecA gene may be used to diagnose M RSA infection earlier,without influ-enced by culture conditions.Key words:protein binding;methicillin resistance;staphylococcus aureus;polymerase chain reaction收稿日期:1999-11-03作者简介:吴本权(1964-),男,广东广州人,硕士,讲师.耐甲氧西林金葡菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)呈高度多重耐药,其感染病死率极高,早期诊断十分重要,但目前还没有可靠的鉴定方法[1]。
各地检出的MRSA占金葡菌的比例相差较大[2],常常漏诊,并因盲目大剂量使用 -内酰胺抗生素诱导出高度耐药的M RSA。
因此探讨培养条件对M RSA耐药性影响及其机制,寻找理想的诊断方法有重要意义。
我们比较不同培养条件对MRSA耐药性影响及其对耐药蛋白PBP2a(Pencillin-Binding-Protein,PBP2a)的诱导作用,并就PBP2a的编码基因M ecA检测与目前美国临床实验室标准委员会(NCCLS)推荐的方法对M RSA诊断价值作比较。
1 材料和方法1.1 菌 种180株金葡菌是从我院1995~1997年住院病人的痰标本中分离,按NCCLS推荐的琼脂板稀释法筛选52株MRSA,M RSA特异性MecA基因检测56株阳性。
1.2 主要试剂和配制方法用于M RSA鉴定的引物为M ecA基因文库中623bp(位置5 -1321~1943bp)的特异性片段:序列1,5 -AGTTGTAGTT GTCGGGTTT G-3 ;序列2,5 -AGTGGAACGAAGGTACATC-3 。
LB培养基(修改):NaCl40g,酵母浸膏5g,胰蛋白胨10g,蒸馏水1L;Mueller Hinton:牛肉浸膏2g,水解酪蛋白17 5g,淀粉1 5g,蒸馏水1L,苯唑西林(美国Sigma公司),头孢唑林(日本藤泽药品工业株式会社),头孢他啶(英国葛兰素公司)。
Lyostaphin (50mg/L),脱氧胆酸钠(10g/L)(美国Sig ma公司),磷酸钠缓冲液(50mmol/L Na3PO4,10mmol/ L MgCl2,pH7 2)。
1.3 MRSA鉴定方法琼脂板稀释法:参照NCCLS标准,将保存的180株金葡菌转种至LB培养基培养24h,配成1010CFU/L的细菌悬液,沾取2 L接种在琼脂板上,苯唑西林M IC 4mg/L为MRSA。
PCR检测MRSA特异性Mec A基因。
条件参照文献[3]。
1.4 体外药物敏感试验苯唑西林,头孢唑林,头孢他啶按对倍稀释法加入不同pH和不同盐浓度的M-H平板中,借助多头接种仪接种20株M RSA(107CFU/L)至上述平板中,在32 和37 两种温度中分别孵育24h后观察结果,测抗生素的抑菌范围及M IC50和M IC90。
1.5 PBP2a的诱导从L-B平板挑取单个MRSA菌落至10mL不同pH、不同盐浓度的LB液体培养基中在32 和37 两种不同温度中振荡过夜,再转种至300mL 同样条件的LB培养基至对数生长期,离心收集细菌加入葡萄球菌溶菌素超声粉碎(20kHz,10s,10次),4000g,4 离心15m in,上清液100000g,4 离心60min,调节膜片浓度4mg/L,加入脱氧胆酸钠(10g/L)10000g离心10min,上清膜蛋白行SDS-PAGE,用分光光度扫描仪测定PBP2a的相对含量[4]。
2 结 果2.1 培养条件对 -内酰胺药物的抗MRSA活性的影响在32 ,pH7 2,40g/L NaCl时耐药性较强,苯唑西林,头孢唑林和头孢他啶的M IC50、M IC90分别为200,400,400,1600,800,1600mg/L。
依次改变培养条件后MIC50、M IC90均有不同程度下降(表1)。
2.2 MRSA MecA基因的检测价值PCR检测180株金葡菌是否为携带MecA基因的M RSA,结果56株金葡菌MecA基因阳性,按表1 不同培养条件对M RSA体外药物敏感性的影响T able1 Effects of different culture co nditions on the antimicrobial susceptibilit yo in v itr o of M R SA ( B/mg L-1)Rang eOxacillin Cefazolin CeftazidimeM IC50Oxacillin Cefazolin CeftazidimeM IC90O xacillin Cefazolin Ceftazidime32 50~800 50~1600100~1600 200 400 800 400 1600 1600 37 3.12~400 6.25~400 25~80050100100400400800 NaCl(9g/L)1.56~50 3.12~100 6.25~200 3.1212.512.525100100NCCLS(32 ,pH 7 2,40g/L NaCl,苯唑西林M IC 4mg/L)标准有4株漏检(苯唑西林MIC:2,2,1,0 5mg/L),M ecA 基因检测却不受外界因素的影响[5],可以提高低度耐药菌的检出(图1)。