GUS基因表达检测
gus染色原理
gus染色原理Gus染色原理Gus染色原理是一种常用的分子生物学实验技术，用于检测和观察基因的表达情况。
它基于酶反应原理，通过染色剂Gus的添加和酶反应的发生，使得目标基因在组织或细胞中显示出特定颜色，从而可以直观地观察基因的表达水平和组织分布情况。
Gus染色原理的基本步骤如下：1. 样品处理：首先需要获取待检测的组织样品或细胞，可以是植物组织、动物组织或细菌等。
样品需要经过一系列处理步骤，如固定、脱水、透明化等，以保证染色的准确性和可靠性。
2. Gus染色液制备：Gus染色液通常由染色底物、缓冲液和酶反应辅助物质组成。
常用的染色底物有X-β-Glucuronide，它是一种无色底物，在酶反应中会被酶催化分解为产生特定颜色的产物。
缓冲液的选择要根据实验的需要，可以是酸性缓冲液或碱性缓冲液。
3. Gus染色反应：将处理好的样品与Gus染色液进行充分混合，使得染色底物与目标基因的酶发生反应。
在反应过程中，底物被酶催化分解，产生特定颜色的产物。
染色的时间和温度需要根据实验要求进行控制，以保证染色效果的准确性和可靠性。
4. 观察结果：染色反应完成后，观察样品的颜色变化。
正常情况下，目标基因的表达区域会显示出特定颜色，可以是蓝色、紫色等，而未表达的区域则没有颜色变化。
观察结果可以使用显微镜或肉眼进行观察和记录。
Gus染色原理的优点在于其操作简单、成本低廉，可以在大量样品中快速进行检测。
同时，由于染色结果直观明了，可以用肉眼观察和记录，无需复杂的仪器设备。
因此，Gus染色在基因表达研究、遗传工程和植物学等领域得到广泛应用。
然而，Gus染色原理也存在一些限制和注意事项。
首先，染色结果的可视化程度受样品的固定和处理等步骤的影响，不同的样品处理方法可能导致染色结果的差异。
其次，染色结果只能显示目标基因的表达水平和组织分布情况，无法提供更详细的信息，如基因的调控机制和表达动力学等。
此外，由于染色底物的选择和反应条件的不同，染色结果可能存在一定的差异性，需要在实验设计和数据分析中进行合理控制。
利用GUS基因表达观察启动子功能b
GUS染液的配制 母液 20mM X-gluc in dimethyformamide 0.2mM Na2HPO4 0.2mM NaH2PO4 100mM EDTA 10mM 高铁氰化钾 1% Triton-X100 最终反应液(100ul) 0.2mM Na2HPO 430.5ul 0.2mM NaH2PO4 19.5ul 100mM EDTA 10ul 10mM高铁氰化钾 10ul 1% Triton-X100 10ul X-gluc 母液 5ul ddH2O 15ul
实验步骤
育苗:拟南芥 (IAA2::uidA )种子经表面消毒后接 种于无菌的B5琼脂培养基. 生长素处理:将拟南芥小苗转接至含有生长素 (0.1M IAA)的新鲜培养基中处理1天. GUS染色:染色0.5-1.5h,叶子部分需80%酒精 中脱色30min后观察. 镜检:观察GUS表达的组织特异性,IAA对GUS表达 的影响.
Figure 1. Analysis of IAA accumulation in wild-type and aux1 Arabidopsis root apices. (A) High resolution IAA quantitation in Arabidopsis wild-type () and aux1 () root segments. (B) DIC image of whole-mount GUS-stained wild-type IAA2::uidA root apex. (C) DIC image of whole-mount GUS-stained aux1 IAA2::uidA root apex. (D) Radial section of GUS-stained wild-type IAA2::uidA root apex. Scale bars, 50 m.
GUS酶活检测方法
荧光光度计定量分析转化植株GUS基因稳定表达活性试剂准备：1.GUS提取缓冲液：50mmol 磷酸钠(PH7.0)10mmol EDTAO.1% Triton X-1000.1% Sarcosyl10mmol/l β-巯基乙醇2.1mmol/1 4-MU(4-甲基伞形酮)：称取19．82mg4-MU钠盐，用1ml乙醇溶解，dH2O定容至100ml。
4℃暗处可以贮存一个月。
贮存中有可能发生结晶。
3.反应缓冲液：GUS提取缓冲液中加入1mmol/l MUG（100ml 加入35.23mg），4℃可以保存2周。
4.考马新亮旒G250溶液：lOOmg考马斯亮蓝G250溶于50m1 95％乙醇中，加lOOml磷酸，dH2O定容至1L过滤后于4℃贮存。
操作步骤：新鲜的植物组织6US蛋白的提取：1．取0.1g叶片样品，用液氮研磨成粉。
2．加入3倍体积的提取缓冲液，研成匀浆。
3．4000rpm离心lOmin，收集上清液，于-20℃冰箱中保存备用。
GUS蛋白提取液蛋白含量测定：1.制作标准曲线：BSA母液（ml）H2O（ml）BSA浓度（ug/ml）0.25 4.75 1.250.5 4.5 2.51.0 4.0 5.01.5 3.5 7.52.03.0 10.02.5 2.5 12.55.0 0.0 25.0配制25ug／ml BSA母液：称取2.5mgBSA，加入0.5ml提取缓冲液，用H2O定容至lOOml。
按上表制作BSA梯度液。
从中取4ml加入lml考马斯亮蓝G-250溶液，混匀，室温下放置2min，测定595nm 的吸收值。
吸收值对蛋白浓度作图绘制标准曲线。
取植物材料GUS蛋白提取液20ul，加H2O至4ml，加入lml考马斯亮蓝，混匀，室温下放置2min。
测定595nm光吸收值根据标准曲线计算蛋白质含量。
GUS酶活反应：1. 将反应缓冲液于37℃预热。
2．取6支1.5ml离心管，各加入900ul反应终止液，编号。
GUS报告基因范文
GUS报告基因范文GUS报告基因是一种用于筛选转基因植物的报告基因。
它在植物细胞内表达的酵素β-葡萄糖苷酶（β-Glucuronidase，GUS），能够将葡萄糖醛酸（X-Gluc）转化为蓝色产物。
通过观察和分析植物组织的GUS活性，可以判断是否发生了基因转化。
下面将详细介绍GUS报告基因的特点、应用以及实验方法。
1.GUS报告基因的特点（1）GUS基因来自于大肠杆菌，它很少在真核生物中表达，因此不会对植物正常生长发育产生影响。
（2）GUS基因编码的酵素活性能够方便、快速地用染色剂标记出来，实验结果直观可见。
（3）转GUS基因的步骤相对简单，转化率较高，且不需要使用昂贵的设备。
2.GUS报告基因的应用（1）植物转基因筛选：通过观察和分析转基因植物的GUS活性，可以确定哪些植株成功地转化了外源基因。
（2）基因调控研究：GUS报告基因可以用来研究目的基因的表达调控机制，例如在转基因植物中瞬时表达GUS基因，观察其在各种组织和发育阶段的表达情况，可以推测目的基因的启动子活性。
（3）信号传导途径研究：通过构建GUS基因的操纵，可以研究植物信号传导途径中特定基因的表达情况，进而了解信号传导途径的效率和调节机制。
3.实验方法以下是GUS报告基因实验的一般步骤：（1）构建GUS载体：将GUS基因与适合的植物表达载体进行连接，形成GUS转化载体。
（2）遗传转化：将GUS转化载体导入要进行转基因植物研究的植物细胞中，使用适当的生物技术方法（如冲击法、农杆菌介导法）实现遗传转化。
（3）植物筛选：选择经过转化的植株进行分析，通常可以通过PCR、Southern blot、Western blot等技术检测GUS基因的存在。
（4）组织切片染色：收集不同部位的植物组织，例如叶片、根、花等，制作切片。
使用X-Gluc作为底物加入切片中，观察蓝色染色产物的形成。
（5）定量分析：通过测定GUS活性，使用亲合素、含有底物的液体培养基等方法，可以 quantitatively 地测定GUS酶活性。
实验五、GUS染色检测基因瞬时表达
问题解决能力
实验态度转变
在实验过程中遇到问题时，我学会了独立 思考和团队协作，积极寻找解决方案。
通过认真对待每一个细节，ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ培养了严谨 的实验态度和科学精神。
gus染色检测基因瞬时表达的未来发展方向
应用拓展
除了基础研究，gus染色检测基因瞬时表 达在医学诊断和治疗等领域也有广阔的应
用前景。
A 技术优化
01
02
03
研究基因功能
通过瞬时表达技术可以快 速检测特定基因的功能， 了解其在细胞中的作用。
药物筛选
利用瞬时表达技术筛选对 特定基因有调控作用的候 选药物。
基因治疗
瞬时表达技术可用于基因 治疗的研究，为疾病治疗 提供新思路。
02 实验原理
gus染色检测基因瞬时表达的生物学基础
基因瞬时表达
基因瞬时表达是指通过转录和翻译在 短时间内产生大量蛋白质的过程。在 植物和某些微生物中，瞬时表达常用 于研究基因的功能和表达调控。
学习gus染色检测基因瞬时表达的方法
准备实验材料
X-Gluc、缓冲液、DNA转染试 剂、细胞培养板等。
GUS染色
将转染后的细胞用X-Gluc染色 ，观察蓝色产物。
转染DNA
将目的DNA与转染试剂混合， 加入细胞培养板中，使DNA瞬 时表达。
结果分析
根据蓝色产物的多少判断GUS 基因的瞬时表达量。
掌握gus染色检测基因瞬时表达的应用
显色反应
在适宜的温度和pH条件下，GUS酶 催化底物水解，产生蓝色产物。
结果观察
通过观察蓝色产物的生成情况，判断 目的基因是否成功瞬时表达。
03 实验步骤
准备实验材料和试剂
准备所需的gus基因瞬时表 达载体。
gus报告基因
gus报告基因随着基因科技的不断发展，越来越多的人开始关注自己的基因信息。
而近年来，Gus报告基因成为了热门话题之一。
那么什么是Gus报告基因呢？Gus报告基因是由Gus Health公司提供的基因检测服务，旨在通过对个体DNA样本的分析，为客户提供关于健康、运动、营养、皮肤护理、基因亲属关系等方面的个性化建议和指导。
近年来，越来越多的人通过Gus报告基因获取自己的基因信息，并通过这些信息来优化自己的生活方式。
Gus报告基因的检测流程十分简单，客户只需要在网上下单，收到检测包裹后依照说明书采集口腔唾液后将样本寄回公司。
约两周后，客户可以获得自己的基因检测结果，并获得个性化的建议和指导。
那么Gus报告基因检测的结果都包括哪些内容呢？首先是健康方面。
Gus报告基因可以检测出客户是否携带有害突变基因，以及是否存在易感基因，提前了解个体健康的风险，有利于尽早采取措施进行预防和治疗。
其次是运动方面。
据研究，每个人的身体对不同类型的锻炼有不同的反应。
Gus报告基因检测结果可以显示客户是否适合进行高强度训练、有氧运动还是力量训练等不同类型的锻炼。
再者是营养方面。
Gus报告基因可以检测出客户是否存在乳糖不耐受、咖啡因代谢能力等基因变异，为客户提供更加个性化的饮食建议。
此外，Gus报告基因还可以检测出客户皮肤老化的风险，提供关于皮肤护理的建议；并且可以通过DNA亲属检测，了解亲属间的遗传关系。
但是需要注意的是，Gus报告基因并不是一份“命运报告单”，不能确定一个人未来发生某种疾病的概率。
每个人的基因信息都受到许多因素的影响，因此仅仅基于基因信息来进行健康管理是远远不够的。
另外，Gus报告基因也不应被视为100%准确的检测解决方案。
每种基因检测技术都有其局限性和误差率。
因此，必须对检测结果不以基因为唯一依据，而是作为综合评估的参考之一。
总的来说，Gus报告基因是一项非常有用的检测服务，可以为人们提供个性化的健康管理指导。
gus报告基因
gus报告基因GUS报告基因。
GUS报告基因是一种用于植物基因表达研究的重要工具。
它是由β-葡萄糖苷酶（β-glucuronidase）基因构建而成，可以被广泛地应用于植物遗传转化和表达分析中。
GUS报告基因的研究对于理解植物基因表达及其调控机制具有重要意义。
首先，GUS报告基因可以用于植物遗传转化的研究。
通过将GUS报告基因导入植物细胞，可以观察到该基因在植物体内的表达情况。
这对于研究外源基因在植物中的表达特点以及转基因植物的遗传稳定性具有重要意义。
通过对GUS报告基因的研究，可以更好地了解植物转基因技术的应用前景及其潜在风险。
其次，GUS报告基因也可以用于植物基因表达分析。
通过将GUS报告基因与目标基因进行融合，可以观察到目标基因在植物体内的表达情况。
这对于研究目标基因在不同组织和发育阶段的表达模式，以及其受到外界环境因素影响的调控机制具有重要意义。
通过对GUS报告基因的研究，可以更好地了解植物基因表达调控的分子机制及其在植物生长发育过程中的作用。
此外，GUS报告基因还可以用于植物转基因技术的研究与应用。
通过对GUS报告基因的表达情况进行定量和定位分析，可以更好地评估转基因植物的表达效率和稳定性。
这对于改良转基因植物的遗传背景和表达性能具有重要意义。
通过对GUS报告基因的研究，可以更好地指导植物转基因技术的开发和应用，为农业生产和生物技术研究提供有力支持。
综上所述，GUS报告基因在植物基因表达研究中具有重要的应用价值。
通过对GUS报告基因的研究，可以更好地理解植物基因表达及其调控机制，促进植物遗传转化和基因功能研究的进展，为植物生物技术的发展和应用提供重要支持。
因此，对GUS报告基因的深入研究具有重要的理论和实际意义，值得进一步深入探讨和应用。
荧光光度计定量分析转化植株GUS基因稳定表达活性
荧光光度计定量分析转化植株GUS基因稳定表达活性一、试剂准备：1.GUS提取缓冲液：●50mmol 磷酸钠(PH7.0)●10mmol EDTA●0.1% Triton X-100●0.1% Sarcosyl●10mmol/l β-巯基乙醇2.1mmol/L 4-MU(4-甲基伞形酮)：称取19．82mg4-MU钠盐，用1ml乙醇溶解，dH2O定容至100ml。
4℃暗处可以贮存一个月。
贮存中有可能发生结晶。
3.反应缓冲液：GUS提取缓冲液中加入1mmol/l MUG（100ml 加入35.23mg），4℃可以保存2周。
4.考马新亮旒G250溶液：lOOmg考马斯亮蓝G250溶于50m1 95％乙醇中，加lOOml磷酸，dH2O定容至1L过滤后于4℃贮存。
二、操作步骤：新鲜的植物组织6US蛋白的提取：A.取0.1g叶片样品，用液氮研磨成粉。
B.2．加入3倍体积的提取缓冲液，研成匀浆。
C.3．4000rpm离心lOmin，收集上清液，于-20℃冰箱中保存备用。
GUS蛋白提取液蛋白含量测定：1.制作标准曲线：BSA母液（ml）H2O（ml）BSA浓度（ug/ml）0.25 4.75 1.250.5 4.5 2.51.0 4.0 5.01.5 3.5 7.52.03.0 10.02.5 2.5 12.55.0 0.0 25.0配制25ug／ml BSA母液：称取2.5mgBSA，加入0.5ml提取缓冲液，用H2O定容至lOOml。
按上表制作BSA梯度液。
从中取4ml加入lml考马斯亮蓝G-250溶液，混匀，室温下放置2min，测定595nm 的吸收值。
吸收值对蛋白浓度作图绘制标准曲线。
取植物材料GUS蛋白提取液20ul，加H2O至4ml，加入lml考马斯亮蓝，混匀，室温下放置2min。
测定595nm光吸收值根据标准曲线计算蛋白质含量。
GUS酶活反应：1. 将反应缓冲液于37℃预热。
2．取6支1.5ml离心管，各加入900ul反应终止液，编号。
gus染色技术在遗传学实验教学中的应用
gus染色技术在遗传学实验教学中的应用Gus染色技术是一种常用的植物细胞组织活性染色技术，它可以用来
观察植物细胞中酵素表达的变化情况。
在遗传学实验教学中，Gus染色技
术被广泛应用，它可以帮助学生更好地了解植物基因表达的过程，同时也
可以培养他们的实验操作能力和科学思维能力。
以下是Gus染色技术在遗传学实验教学中的几个应用场景：
1.观察基因表达的时空特点。
Gus染色是一种靶向不同时间和组织区域检测基因表达的方法，可以
在植物发育早期就对各种组织部位的基因表达进行检测。
学生可以通过观
察Gus染色结果来探索基因表达的时空特点，并分析影响基因表达的因素。
2.研究转基因植物的表达情况。
Gus染色技术是一种便捷而又经济的评价转基因植物表达情况的方法。
学生可以借助Gus染色法观察转基因植物中Gus基因的表达情况，从而研
究转基因植物在不同条件下的表达情况和转基因效率。
3.分析基因调控。
Gus染色技术还可以用于研究基因调控，尤其是在探讨转录因子对基
因表达的影响时。
学生可以将GUS基因与某些特定基因的启动子结合，以
便对基因表达的调节进行详细的观察和研究。
4.探究物种间的基因表达差异。
Gus染色技术可以用于探究不同物种之间基因表达的差异。
学生可以
通过比较不同物种的Gus染色结果，了解它们的遗传差异和进化关系，并
深入探究这些差异引起的生物学功能变化。
总之，Gus染色技术在遗传学实验教学中具有重要的应用和意义，它可以帮助学生深入了解植物基因表达的机制，掌握实验操作技能，并启发他们的科学思维和能力。
gus报告基因作用原理
gus报告基因作用原理
Gus报告基因作用原理
基因是生命的基本单位，它们控制着生物体的生长、发育和功能。
基因作用原理是指基因在生物体内的作用方式和机制。
Gus报告基因是一种常用的基因标记技术，它可以用来研究基因的表达和调控。
Gus报告基因是一种β-葡萄糖苷酶（β-glucuronidase）基因，它可以将X-葡萄糖苷（X-Gluc）转化为蓝色产物。
Gus报告基因可以被插入到其他基因的上游或下游区域，从而形成Gus报告基因转录本。
当这些转录本被转录和翻译时，Gus报告基因就会被表达出来，从而产生蓝色染色。
Gus报告基因的作用原理是基于基因表达的调控机制。
基因表达是指基因转录和翻译的过程，它受到许多因素的调控，包括转录因子、启动子、增强子、剪接和RNA降解等。
Gus报告基因可以被插入到这些调控元件的上游或下游区域，从而研究它们对基因表达的影响。
Gus报告基因可以用来研究基因的表达模式、组织特异性和响应信号等。
例如，可以将Gus报告基因插入到一个特定的基因的上游或下游区域，从而研究它在不同组织和发育阶段的表达模式。
此外，还可以将Gus报告基因插入到一个响应信号的基因的上游或下游区域，从而研究它对该信号的响应机制。
Gus报告基因是一种常用的基因标记技术，它可以用来研究基因的
表达和调控。
它的作用原理是基于基因表达的调控机制，通过插入到调控元件的上游或下游区域，从而研究它们对基因表达的影响。
Gus报告基因的应用可以帮助我们更好地理解基因的功能和调控机制，为生命科学研究提供重要的工具和方法。
遗传学实验 用GUS基因表达观察启动子功能
用GUS基因表达观察启动子功能摘要通过GUS基因表达染色程度判定启动子关键序列。
1.引言在真核生物中，主要通过顺式调控元件启动子和反式作用因子转录因子的相互作用，对基因表达进行调控。
启动子的功能可以利用报告基因进行检测。
报告基因GUS基因存在于E.coli等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶。
β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。
由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此这个基因被广泛应用于植物基因调控的研究中。
科研工作中发现，盐芥液泡焦磷酸酶基因启动子（TsVP1）在除了种子以外的所有组织中都有活性，它的活性在根和叶中能被盐诱导，尤其在根尖中。
为了研究启动子的关键序列，构建了盐芥液泡焦磷酸酶基因启动子（TsVP1）不同长度启动区控制的β-葡萄糖苷酸酶（GUS）载体pCAMBIA1391z（PTsVP::GUS），转染拟南芥，获得转基因拟南芥PT1，PA1和P7。
发现PT1，PA1和P7具有不同的GUS活性及盐诱导活性。
表明启动区长度对启动子功能有影响，由此推测启动子的关键序列及诱导特点。
2.实验材料2.1实验材料2.1.1材料拟南芥种子PT1、PT2、PT7、PT82.1.1试剂配制MS培养基所需的母液，琼脂，蔗糖，1 mol/L的NaOH溶液，70％乙醇，无菌水， 10％次氯酸钠，琼脂粉，NaCl，1mol/L GUS染色液。
2.1.1器具量筒，移液枪，烧杯，天平，玻璃棒，滴管，pH计，500 mL锥形瓶，高压蒸汽灭菌锅，培养皿，EP管，人工培养箱，吸管，吸水纸。
2.2实验方法2.2.1配制MS培养基MS培养基：Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。
GUS 活性检测(总)
GUS 活性检测目的：通过Gus活性测定了解或研究Gus基因是否转化进入植物细胞；Gus基因在植物组织、细胞内的表达部位；Gus基因在植物细胞内瞬时表达量及稳定表达量；外源基因在植物细胞内的表达调控。
材料：转化的植物组织、器官、原生质体、种子的胚及萌发的幼苗等。
一、组织化学染色法试剂：(1)200mmol/L 磷酸钠缓冲液（pH7.0）制备方法：A液：称取NaH2PO4·2H2O3.12g溶于蒸馏水，定容至100ml。
B液：称取Na2HPO4·12H2O7.17g溶于蒸馏水，定容至100ml。
取100ml B液与40ml A液混合（混合后pH值约7.03），用NaH2PO4·2H2O 调至7.0。
(2)＊说明：GUS活性的精确定位需要有亚铁离。
GUS酶水解其底物X-Gluc产生可溶性无色的吲哚基衍生物，它可扩散到其他部位，必须经氧化缩合成二聚体，才能形成不溶性的蓝色沉淀，二聚体化由氧化催化剂(如亚铁氰化钾、过氧化物酶或过氧化氢酶等)催化，若不加Fe2－，则仅形成可溶性中间产物而扩散，加亚铁氰化钾后因吲哚基二聚体化而不扩散，不溶性蓝色沉淀形成越快，GUS酶的定位越精确。
(3)FAA固定脱色液：5％甲醛，5％乙酸，5％乙醇。
材料准备：(1) 瞬时表达检测取浸染后1-5天的材料，稳定表达取转化后处理6周后的材料。
(2) 叶片、幼根等制成徒手切片（或剪成小块、小片）。
(3) 悬浮细胞、原生质体低速离收集，无菌等渗液洗涤。
(4) 清洁的愈伤组织可以直接使用直接染色法(1)将准备好的材料浸泡在染液中，于25-37℃保温1小时至过夜。
(2)叶片等绿色材料转入70％乙醇中脱色2-3次，到阴性对照材料呈白色。
(3)肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。
固定染色法(1)将材料浸入固定液中，必要时可抽真空1分钟，室温下轻摇30-60分钟。
(2)取出材料，用磷酸钠缓冲液漂洗3-4次。
GUS活性的定量检测
GUS活性的定量检测目的：定量检测转基因植株中报告基因GUS的表达水平用途：比较某个启动子在不同组织中的表达强度，比较不同启动子在同一组织中的表达强度。
试剂：①磷酸缓冲液母液：0.2M Na2HPO4：71.64g/L Na2HPO4·12H2O0.2M NaH2PO4：31.21g/L NaH2PO4·2H2O②GUS抽提液（1L）：PH=7.00.2M Na2HPO4152.5mL0.2M NaH2PO497.5mL14.3M β-ME 700uLNa2-EDTA·2H2O 3.72gTriton-X 100 1mL③10mM 4-MUG（10×）：105.6mg 4-MUG溶于30mL GUS抽提液中，4℃避光保存。
（注意：存放时间越久本底信号越强，尽量现配现用）。
④0.2M Na2CO3反应终止液（1L）：21.2g Na2CO3溶于1000mL ddH2O。
⑤BSA母液（4ug/ul）：40mgBSA溶于10mL ddH2O⑥4-MU母液（10mM）：17.6mg 4-MU溶于10mL 0.2M Na2CO3中，4℃避光保存。
⑦Protein Assay Buffer（5×，Bio-Rad cat.no.500-0006）：使用前要用ddH2O稀释成1×工作液仪器及用品：酶标仪TECAN Infinite M200酶标板（Nunclon 96 Flat Transparent和Greiner 96 Flat Black）操作步骤与注意事项：1.材料于液氮中研磨成粉末，取适量粉末加入3倍体积的GUS抽提液，充分混匀，置冰上。
（注意，尽量保证每个样品所取的粉末量都比较一致，这样抽提出来的总蛋白浓度比较接近，方便后续操作。
）2.10000g 4℃离心10min，上清液转移到新的1.5mL离心管，则得到总蛋白粗提液（可于4度短期保存或于-70℃长期保存；但不要存于-20℃，该温度下GUS不稳定）。
GUS基因检测实验报告
一、实验原理：1、适宜的反应条件下，β- 葡萄糖苷酸酶（GUS）可将X－Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。
二、实验步骤：1、将准备好的拟南芥植株放入小EP管中，加入染色液浸没试材，封好盖子；2、37℃培养箱中温育1小时至过夜；3、将浸染过的试材转入70%或95%乙醇中脱色2-3次（除去叶绿素），至阴性对照材料呈白色为止。
4、观察结果。
三、实验结果：转基因拟南芥野生型拟南芥（上）转基因拟南芥；（下）野生型拟南芥转基因拟南芥（作图上行从左数第一个的放大）四、分析讨论：1、预期结果：转基因植株被染成蓝色，野生型植株不被染色。
实际结果：与预期结果一致，但野生型脱色不完全，有几片叶子的叶绿素未被脱掉。
分析：实验较为成功。
由上图可知，转入的基因在整棵植株都有表达，其中蓝色在叶脉中最深，推测转入的基因在叶脉中表达最多。
在野生型植株中，大部分叶子被乙醇脱去叶绿素而呈现浅黄色。
2、gus基因是目前常用的一种报告基因，是β－D－葡萄糖苷酸酶(gus)基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)能催化裂解一系列的β－葡萄糖苷酸，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）分解为蓝色的物质,也可以将4-甲基-伞形花酮-β-D-葡萄糖苷酯(4-MUG)分解为蓝色物质。
其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。
3、gus基因的最大优点是它能测定外源基因表达的具体细胞和组织部位，这是其它报告基因所不能及的。
4、gus基因是一种报告基因，报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。
把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。
报告基因是研究基因调控的有力工具，常用于判断试验基因的转化效率以及基因的调控与功能的研究实验中。
转基因植物中报告基因GUS组织化学定位检测
转基因植物中报告基因GUS组织化学定位检测一、实验目的1、掌握基因GUS的表达的检测方法2、了解GUS基因的应用二、实验原理GUS基因就是转β-葡糖醛酸酶基因，它存在于E.coli等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶。
β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其分解产物呈蓝色。
由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此这个基因被广泛应用于基因调控的研究中。
根据地gus基因检测所用的底物不同，可以选择三种检测方法：组织化学法、分光光度法和荧光法（灵感度为分光光度检测法最高），其中最为常用的是组织化学法。
组织化学法检测：以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X-Gluc）作为反应底物。
将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡，若组织细胞被转入了GUS基因，并表达出Gus，在适宜的条件下，该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物，这是由其初始产物经氧化二聚作用于形成的靛蓝染料，它使具Gus活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或在显微镜下可看到，且在一定程度下根据染色深浅可反映出Gus活性。
因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织，甚至单个细胞内的表达情况。
三、实验材料、试剂拟南芥AK12-pro、GUS工作液四、实验步骤1、取2支1.5ml离心管，各加入0.3ml 1mol/L GUS染色液；2、用镊子夹取转基因和野生型拟南芥幼苗各1根，分别放入上述离心管中；3、37℃浸泡过夜。
4、倒掉染色液，加入75%乙醇脱色；30min后换一次75%乙醇脱色；肉眼下观察染色情况；拍照。
如果有GUS基因表达产物，则出现蓝色。
五、实验结果从上述照片中科一看出，将野生型和转基因型拟南芥用含有底物的缓冲液浸泡，转β-葡糖醛酸酶基因将X-Gluc水解生成蓝色产物，说明组织细胞被转入了GUS基因，并表达出GUS，这是由其初始产物经氧化二聚作用于形成的靛蓝染料，在一定程度下根据染色深浅可反映出Gus活性，图中拉瑟比较深，说明Gus活性相对较高。
GUS 基因定量试剂盒使用说明
GUS 报告基因定量检测试剂盒GUS定量试剂盒储存:-20℃保存，一年有效。
华越洋GUS定量试剂盒组成:提取液50 mL 100 mL4-MU(1mM) 1 mL 1 mLx24-MUG 底物液10 mL 10 mLx2终止液100 mLx2 100 mLx4GUS定量试剂盒说明:GUS 能与4-MUG 反应产生荧光物质4-MU。
4-MU 的激发波长为365 nm，发射波长为456nm。
其含量可由荧光分光光度计测出。
因此，我们可以根据单位质量的植物总蛋自在单位时间内产生的荧光物质的多少来定量的检测GUS 的含量。
荧光分光光度计测定的是相对值，因此用荧光分光光度计测定时必须用标准物4-MU 进行校准。
GUS定量试剂盒使用方法:一、植物总蛋白提取1.取新鲜的植物组织100 mg 左右，用液氮将材料急速冷冻，然后采用液氮研磨的方式在研钵里磨碎组织。
如果无法立即研磨，可以先将液氮冷冻处理的植物组织储存于-80 ℃冰箱。
2.将研磨破碎的组织转到EP 管里，并竟即加入1mL的提取演，充分混匀。
3. 12 000 rpm，4 ℃离心10 min。
4.将上清转至另一洁净的EP 管，12,000 rpm，4℃离心10 min.5.所得上清即为蛋白提取物，可以置于冰上待用，或者-80 ℃保存。
二、蛋白浓度的测定(Bradford 法)参照本公司产品Bradford 蛋白浓度测定试剂盒(华越洋右手)使用说明书。
三、标准溶液配制用终止液稀释4-MU，建议稀释至浓度1-10uM，即为标准液(避光放置)。
用于标准曲线绘制。
四、GUS 表达水平的定量测定1.在3个1mL的离心管中分别加入900 uL 的终止液，置于37 ℃温浴。
2. 取150 uL 蛋白提取物，加入150 uL 4-MUG 底物液，37 ℃温浴，即为反应液。
3.分别在10 min，20 min，30 min 时，从上述反应体系中，取100uL加入步骤1中温浴的900 uL终止液中，避光放置直至测量结束。
GUS基因检测实验报告
一、实验原理：1、适宜的反应条件下，β- 葡萄糖苷酸酶（GUS）可将X－Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。
二、实验步骤：1、将准备好的拟南芥植株放入小EP管中，加入染色液浸没试材，封好盖子；2、37℃培养箱中温育1小时至过夜；3、将浸染过的试材转入70%或95%乙醇中脱色2-3次（除去叶绿素），至阴性对照材料呈白色为止。
4、观察结果。
三、实验结果：转基因拟南芥野生型拟南芥（上）转基因拟南芥；（下）野生型拟南芥转基因拟南芥（作图上行从左数第一个的放大）四、分析讨论：1、预期结果：转基因植株被染成蓝色，野生型植株不被染色。
实际结果：与预期结果一致，但野生型脱色不完全，有几片叶子的叶绿素未被脱掉。
分析：实验较为成功。
由上图可知，转入的基因在整棵植株都有表达，其中蓝色在叶脉中最深，推测转入的基因在叶脉中表达最多。
在野生型植株中，大部分叶子被乙醇脱去叶绿素而呈现浅黄色。
2、gus基因是目前常用的一种报告基因，是β－D－葡萄糖苷酸酶(gus)基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)能催化裂解一系列的β－葡萄糖苷酸，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）分解为蓝色的物质,也可以将4-甲基-伞形花酮-β-D-葡萄糖苷酯(4-MUG)分解为蓝色物质。
其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。
3、gus基因的最大优点是它能测定外源基因表达的具体细胞和组织部位，这是其它报告基因所不能及的。
4、gus基因是一种报告基因，报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。
把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。
报告基因是研究基因调控的有力工具，常用于判断试验基因的转化效率以及基因的调控与功能的研究实验中。
GUS基因检测
2. 染色步骤（1）染色：加入适量配制好的GUS 染液于24孔板的孔中，将待测样品浸到GUS染液中，将24孔板置于37℃保温箱中放置6 h。
（2）漂洗：先后用50%，70%，100%的乙醇漂洗样品，每次浸泡5分钟。
（3）脱色：加入100%乙醇浸泡直至完全脱色。
（4）记录：在体视显微镜下拍照记录。
二、GUS报导基因的定量检测GUS 能与底物MUG（分子量352.3，4-甲基伞型酮-β-葡萄糖醛酸苷，4-methylumbelliferylβ-D-glucuronide）反应产生荧光物质MU（分子量198.2，4-甲基伞型酮，4-methylumbelliferone）。
MU的激发波长为365 nm，发射波长为456 nm，其含量可由荧光分光光度计测出。
因此，我们可以根据单位质量的植物总蛋白在单位时间内产生的荧光物质的多少来定量的检测GUS含量。
1.试剂配制（1）1 mol/L Na2HPO4溶液：35.814 g Na2HPO4溶于100 ml水。
（2）1 mol/L NaH2PO4溶液：15.601 g NaH2PO4溶于100 ml水。
（3）0.1 M 磷酸缓冲液(pH7.0)：1 mol/L Na2HPO4取5.77 ml，1 mol/L NaH2PO4取4.23 ml，定容至100 ml。
（4）10%SDS溶液：将90 ml 水稍微加热，加10 g SDS，搅拌溶解，加入几滴浓盐酸调节pH至7.2，然后加水定容至100 ml。
（5）0.5 M EDTA (pH8.0)：在80 ml 水中加入18.61 g Na2EDTA•2H2O，用NaOH调pH至8.0（约需2 g 左右的固体NaOH），溶解后定容至100 ml。
（6）GUS酶提取液：0.1 M 磷酸缓冲液（pH7.0）取50 ml；10% SDS取1 ml；0.5 M EDTA(pH8.0)取2 ml；Triton X-100取100 ul；β-巯基乙醇100 ul；用水定容至100 ml。
GUS基因检测
GUS基因检测一、仪器设备：恒温箱、超净工作台二、器具：1.5ml的塑料管、镊子、解剖刀等三、材料：转化的愈伤组织四、试剂及其配制：50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH 7.0）：A液：取NaH2PO4.2H2O 3.12g溶于蒸馏水，定溶至100ml。
B液：取Na2HPO4.12H2O 7.17g溶于蒸馏水，定溶100ml。
取A 液39ml与B 液61ml混合，定容至400ml，调PH至7.0。
50mmol/L铁氰化钾母液：称3.295g，用蒸馏水定容至200ml50mmol/l亚铁氰化钾母液：称4.224g ，用蒸馏水定容至200ml。
0.5mol/l EDTA母液（pH8.0）：药品分子量100ml 500mlEDTA Na2 2H2O 372.24 18.6g 93.06g双蒸H2O 80ml 400ml用NaOH调PH至8.0 6g 10gDdH2O定容至100ml 500mlGUS检测液的配制：甲醇、Gluc、DMF100mgGluc，先溶于1ml的DMF。
取80ml 50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH 7.0），加入1ml 50mmol/L铁氰化钾、1ml 50mmol/L亚铁氰化钾和2ml 0.5mol/l EDTA （PH 8.0），再加入已溶解的Gluc，再加20ml的甲醇，混匀。
（配制方法参考《现代植物生理学实验指南》p348）将配好的GUS检测液分装于1.5ml的塑料管中（1ml/管，1组1管），－20°C 保存备用。
gus基因就是转β-葡糖醛酸酶基因该基因产物为GUS 蛋白质，相当稳定而不易降解，并为一水解酵素，有简易的测定方法；且可使用市售的基质(substrate) 在原位(in situ) 显现出酵素的活性，以肉眼即可检测其产物，非常方便。