糖皮质激素抑制人前列腺癌PC_3细胞系增殖的可能机制

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激素对癌症细胞增殖的调控机制

激素对癌症细胞增殖的调控机制癌症是一种复杂的疾病，其发生机制涉及多个因素，其中激素在其中扮演着重要的角色。

激素是一种化学物质，通常由内分泌腺产生，并通过血液和淋巴系统传递到靶组织进行调节。

激素包括多种类别，如雌激素、雄激素、甲状腺激素等，它们对身体的生长、代谢和免疫等方面都有重要作用。

然而，激素过多或过少会影响身体的正常功能，而且某些激素还与癌症发生关系密切。

本文将探讨激素对癌症细胞增殖的调控机制。

激素对细胞增殖的作用激素可以通过不同的机制调控细胞的增殖，包括直接促进细胞生长、诱导细胞进入增殖期、维持细胞分化状态等。

其中，雌激素是最常被人们提及的一种激素，它在女性生殖系统发育、妊娠和经期等方面发挥着重要作用。

然而，雌激素与乳腺癌之间的关系也备受关注。

雌激素能够结合乳腺细胞表面的受体，促进癌细胞的增殖和分化，从而引发乳腺癌的发生。

此外，雄激素也与前列腺癌的发生有关。

雄激素能够结合前列腺细胞表面的受体，促进癌细胞的增殖和转移，从而导致前列腺癌的发生和转移。

激素调控细胞的信号通路激素通过受体结合启动相应的信号通路，调控细胞的生长和分化。

激素受体分为两大类：核内受体和细胞膜受体。

核内受体可以与激素结合，形成复合物并进入细胞核，调控DNA转录过程，从而影响细胞生长和分化。

而细胞膜受体则通过激活不同的蛋白激酶信号通路调控细胞的增殖和存活。

例如，雌激素通过核内受体（ER）结合，激活ERα信号通路，调控细胞周期中的G1阶段，进而影响细胞的增殖和存活。

此外，雌激素还可以通过表观遗传学的机制，调控细胞的基因转录，从而影响细胞增殖和分化。

雌激素依靠范德华力与受体结合成为复合物，激活信号通路，使基因启动子开放，转录因子进入核内结合并启动表观遗传机制，通过DNA甲基化修饰、组蛋白重构等方式改变染色质的构象和表观基因表达，进而影响细胞的增殖和分化。

激素的参与调控癌症细胞增殖在癌症细胞中，激素的参与发生了一些变化，一些激素能够促进癌细胞的增殖和转移，而另一些激素则能够抑制癌细胞的生长和分化。

连翘三萜类化合物对前列腺癌PC-3细胞增殖抑制及放疗敏感性的实验研究

摘要：目的
探讨连翘三萜类化合物达玛＿一一一２烯３乙酰氧基一ｓ（Ｍ）人前列腺癌Ｐ－细胞的增殖抑４Ｂ２一Ｄ对０醇Ｃ３
采用流式细胞术检测不同浓度ＤＭ液对Ｐ一Ｃ３细胞周期、凋亡的影响；Ｃ３Ｐ－细胞接受６ｍ－Ｖ
制及放疔增敏作用。方法
ｉｄｃｄｂａｍａ－一ｎ一３ａｅａ－０ — （Ｍ）ＭｅｈｄＣｌｃｃｅａｄａｏｔｉｏＣ３ｃｌｉｕｎｅｙｄ－ｎｕｅｙＤｍｒ４ｅｅ－ｃｔｅ２ｓｌＤ．ｔｏｓｅｙｌｓｎｐｐｓｆ一ｅｆｅｃｄｂｉ２３ｔｏｌｏｓＰｌｎｌｆ
ｆｒｎｏｃｎｒｔｎｆＤＭｒｅｅｔｄｗｉｏｃｔｍｅｒ；ｔｅｓｒｉａｒｃｉｎｆＰＣ３ｃｌｗｅｅｓｕｉｄｂｏｏｙｅｅｔｃｎｅｔａｉｓｏｏｗｅｅｄｔｃｅｔｆｗｙｏｔｈｌｙｈｕｖｌｆｔｓｏ－ｅｌｒｔｄｅｙｃｌｎ — ｖａｏｆｒｔｎｅｆｉｎｅａｔｒ６ｍＶＸｒｙｒｄｏｈｒｐｓａｍｉｉｔｔｄｏＣ３ｃｌ，ａｄｓｎｉｚｔｎｅｈｎｅｎａｉｓｏｍａｉｆｃｅｅｆ－ａａｉｔｅａｙｗａｄｎｓａｅｎＰ一ｅｌｎｅｓｉａｉｎａｃｍｅｔｔｗａｏｉｅｒｔｏｒｏ
ｘ线照射，用克隆形成法检测细胞存活分数、计算放疗增敏比；端粒重复序列扩增法检测ＤＭ对Ｐ一细胞端粒酶活性Ｃ３
的抑制作用；实时定量ＰＲ测定ＤＣＭ对Ｐ－Ｃ３细胞周期相关基因表达的影响。结果ＤＭ可诱导Ｐ一Ｃ３细胞凋亡，其作用６ｈ后肿瘤细胞端粒酶活性降低，８ｈ后渐恢复至正常。Ｄ可使细胞周期相关基因ｐ１ＴＦＢＳａ３表达增加，４Ｍ２、Ｇ — 、ｍｄＣｃｉＤ、Ｄ２Ａ表达降低（ｙｌ１ＣＣ５ｎＰ均＜．５。Ｄ００）Ｍ有放疗增敏作用，其放疗增敏比为１８。结论．０关键词：前列腺肿瘤；Ｃ３细胞；Ｐ－达玛＿一３一２烯－Ｂ乙酰氧基－０一；４２ｓ醇放射治疗

Maspin在前列腺癌PC_3细胞生物学行为中的作用

Roles of maspin in biological behaviors of PC － 3 prostate cancer cells
LIU Mei － qin，ZHOU Jun，MA Liang，GUO Feng
（ Central Laboratory，the First Affiliated Hospital of Soochow University，Suzhou 215006 ，China． E － mail： guofeng27@ suda． edu． cn）［ABSTRACT］ AIM： To investigate the roles of maspin in the biological behaviors of prostate cancer cells． METHODS ： Specific shRNA targeting maspin gene was designed． The plasmid targeting maspin gene was constructed and lentiviral expression system was used for transfection． qRT － PCR and Western blotting were performed to identify the stable maspin － shRNA － transfected PC － 3 cells． The expression of apoptosis － related genes was analyzed by qRT － PCR． Dynamic observation of cell growth and doubling time were conducted by an xCELLigence system． The cell death upon proteasome inhibitor treatment was determined by flow cytometry analysis． The expression levels of RelA and RelB were detected by Western blotting． RESULTS： The recombinant plasmid containing maspin － shRNA was successfully constructed． Limited dilution was performed to obtain monoclonal PC － 3 － siMaspin cells． The doubling time of PC － 3 － siMaspin cells was 26． 83 h while that of PC － 3 － control cells was 37． 95 h． The mRNA expression of bcl － 2 and A20 in PC － 3 － siMaspin cells was increased，while that of bax and bim was down － regulated． The cell death rates of PC － 3 － control cells and PC － 3 － siMaspin cells after treated with MG － 132 were 27． 1% ± 5． 6% and 7． 5% ± 2． 3% at 8 h ，24． 2% ± 3． 7% and 8. 2% ± 2． 5% at 24 h，and 28． 7% ± 3． 7% and 7． 6% ± 2． 5% at 36 h after treatment， respectively． RelA expression was decreased in PC － 3 － control cells treated with MG － 132 while that in PC － 3 － siMaspin cells stayed unchanged． CONCLUSION： Maspin expression is increased in androgen － independent prostate cancer PC － 3 cells． Maspin silencing significantly reduces the doubling time and accelerates the cell growth． Maspin silencing markedly reduces the sensitivity of PC ［收稿日期］ 2012 － 02 － 25 ［修回日期］ 2012 － 05 － 07

松萝酸抑制前列腺癌PC-3M细胞增殖的生物学效应

非依赖性前列腺癌细胞株，１宫城县立癌中由３本心惠赠）真菌松萝购自黑龙江省大兴安岭林。
区。松萝酸由本中心的中心实取弃掉培养液，ａｋ液Ｈｎｓ洗３次。胰酶消化后，培养液终止消化，加收集细胞于玻纤滤纸上，用液闪仪测定ｃｍ值，ｐ以表示
后，光镜下观察，照组细胞贴壁，对多数呈梭形与
悬液，对照组加ＰＳ溶液，中含０２Ｂ其．％松萝酸溶
剂的培养液。每组设５个复孔。各孔用培养液补足至终体积为２０Ｉ。置３Ｉ、％Ｃ箱内孵０ｌｘ７Ｇ５Ｏ孵二
育２后，入噻唑蓝ＰＳ溶液（Ｌ，孔４ｈ加Ｂ５）每２ｌ７Ｇ反应４ｈ，Ｏ。３Ｉ二后吸弃培养液及未反应的噻唑蓝，每孔加入ＤＳＭＯ溶液１０Ｉ，０ｌ震荡后室温ｘ下静止１ｎ０ｍｉ。用酶标仪于５０ｎ测定吸收光７ｍ处
Ｈ—ＴＲ的掺入量。ｄ
偶氮唑蓝（Ｔ）美国Ｓｇａ公司产品； — ＭＴ为ｉｍＨ
ＴＲ购自上海原子核研究所。ｄ
１２方法．
１２５统计学分析．．
用松萝酸干扰体外培养的癌
细胞后，Ｐ将Ｃ一３细胞生长抑制率与 —ＴＲＭＨｄ应用ＳＳ００软件进行直线相关与回归分析。ＰＳ１．
维普资讯
《阳部沈
药》

吡格列酮诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的实验研究

除原培养液，入含吡格列酮浓度分别为０对照加（
与Ｐａ关系密切，望成为预防、疗Ｐａ的新ｃ有治ｃ
位点。
ＰＡＲ７属于核激素受体超家族的成员，Ｐ一主要
组）０１１ｉ，０ｌｌＬ的Ｆ２培养液（，．，，０１０／／ｍｏ１无血清培养液）５ｍＬ，理２，８７，处４４，２ｈ每天用倒置显微镜
ＰａＰ一胞，ｅＣ３细以不同浓度（．．，，０１０／ｌＬ的吡格列酮干预细胞，氮唑蓝比色法（Ｔ和原位细胞凋Ｏ０１１１，０￣／）ｍｏ四ＭＴ）亡检测法（ｕｎ１检验吡格列酮对ＰａＰ－细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用，Ｔｎｅ）ｃＣ３流式细胞术检测其对Ｃｓａｅａｐｓ－３表
前列腺癌（ｒｓａｅｃｎｅ，ｃ）ｐｏｔｔａｃｒＰａ是男性生殖系
１２实验方法．１２１分组对照组（甲基亚枫，ＭＳ组）．．二ＤＯ和
吡格列酮组（．，，０１０ｇｌＬ４亚组）０１ｌ１，０ｍｏ／个。
疗Ｐａｃ提供实验依据。
１材料与方法
关键词：噻唑烷二酮类；前列腺肿瘤；胞凋亡；瘤细胞．养的细肿培
中图分类号：Ｒ７７２０２３．５．２文献标识码：Ａ文章编号：１７－１４２０）５００ —４６２４９（０８０ —４４０

β-干扰素对人PC-3前列腺癌细胞系的生物学效应

文献标识码：Ａ
文章编号：０９８９（０９０－０２－０１０－１４２０）１１６３
ＩＮ具有多种生物学效应。ＩＮＢ有抑制细胞增殖、制ＦＦ —具控细胞凋亡、节免疫和抗病毒的作用。（）制细胞增殖：调１抑ＩＮＢ制细胞增殖依赖于细胞的类型，ＤｕｉＦ —抑如ａｄＢ细胞株在少量ＩＮ的作用下增殖即被抑制而多数细胞在不同剂量Ｆ的ＩＮ作用下均无抑制，Ｆ这种抑制作用主要通过ｄ — ＮＡ依ｓＲ
被Ｃ８Ｄ的Ｔ细胞识别的ＭＨＣＩ分子；导细胞表达粘 —类诱附分子或协同刺激分子；调Ｎ细胞的穿孔素（ｅｆｒｓ上Ｋｐｒｉ）ｏｎ
水平并促使其增殖；持Ｔｌ胞和Ｔｈ保ｈ细２细胞的平衡；高提
是一种具有多种生物学活性的细胞因子，仅可用于某些感不
和核糖核酸酶（Ｎａｅ完成，外ＩＮ还可以通过上调周Ｒｓ）此Ｆ期依赖性激酶抑制物Ｐ１ｃｃｉｄｐｎｅｔｉａｅｉｉｉｏ２（ｙｌ — ｅｅｄｎｎｓｈｂｔｒｎｋｎ
系［，广范应用于前列腺癌的研究。在体内和体外，ＮＢ７其］Ｉ — Ｆ
对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞Ｐ－Ｃ３系的作用明显，本文对ＩＮＢ体外对Ｐ一Ｆ —在Ｃ３的生物学效应作了综述。

人PC-3细胞系中前列腺癌干细胞的富集与鉴定

中图分类号：Ｒ３．７７２５
文献标志码：Ａ
文章编号：１７ — ５４２１）６０７ — ６６２３５（０００～８８０
ＥｒｃｍｅｔａｄｌｅｔｃｔｎｏｏｔｔｎｅｔｍｌｎｉｈｎｎｄｎｉａｉｆＰｒｓａｅＣａｃｒＳｅＣｅｌｉｆｏｓ
成效率约为（．１），第５天时明显增多（＜ｏ０）Ｃ３浮成球细胞具有自我更新和分化能力，体外可以连续、２６± ．％较ＯＰ．。Ｐ一悬５在稳定传代，ＳＭ中滴加血清后可以分化，替培养于ＳＭ和ＳＭ中可以实现与贴壁细胞之间的相互转化。Ｃ３悬浮成球在Ｆ交ＳＦＰ．细胞中Ｃ４Ｃ３细胞比率为１．４，Ｐ细胞含量为３１，显著高于常规培养的Ｐ．壁细胞（别为０７％和Ｄ４Ｄ１３３９％Ｓ．％均Ｃ３贴分．７
ｉＨｕｍａｏｔｅＣａｅｎｎＰｒｓａｔｎｃｒＰＣ．ｌｎｅ３ＣｅｌＬｉ
ＺＨＡＮＧＢＡＮＸｉ－ｎ，ＬＮＴａ —ｉｏ，Ｆｎ／Ｉｉｎｘｎ，ＸＵＫｅｗｅ，ＨＵＡａ — ｉＮＧＪａｉｎ
ｗｅｅｉｏａｅ．Ｔｅｒｓｌｔｄｈｎ，ｔｅｉｌｔｄｆａｉｇＰ３ｓｈｒ —ｏｍｉｇｃｌｉｈｒｐｒｅｆｃｎｅｔｍｅｌ，ｓｃｓｓｏｇｈｓａｅｏｔＣ一ｐｅｅｆｒｎｅｌｗｔｔｅｐｏｅｔｓｏａｃｒｓｏｌｎｓｈｉｅｃｌｕｈａｔｎｓｒ

Cyclopamine对人前列腺癌PC-3细胞增殖凋亡及Bcl-2,Bax,caspase-9蛋白表达的影响

Ｑｉｈａｇａｂ０６０；３ｅｐｒｍｅｔｒｌｙＳｒｅｎｕｎｄｏＨｅｄ，６００．ＤａｔｎＵｏｏｕｇｒｆｏｇｙ，ＦｒｔｉｌｔｓＡｉｅａｄＨｏｉｉｏｉｇＭｅｉｌｏｌｅＪｎｈｕ，ＬａｎｎｓｍｌｆＬａｎｎｄｃｌｇ，ｉｚｏｐｏａＣｅｉｏｉｇ，１１０）２０１
摘要：目的研究ｃｃｐｍｉｅ人前列腺癌Ｐ－胞增殖和凋亡的作用及对Ｂｌ，Ｂｘａｐｓ一ｙｌａｎ对ｏＣ３细ｃ２ａ，ｃｓａｅ９蛋白表达的影响，一
并探讨其机制。方法
体外培养的Ｐ－Ｃ３细胞应用ｃｃｐｍｉ处理后，通过ＭＴｙｌａｎｏｅＴ测定细胞增殖抑制情况；电镜下观察肿瘤组ＭＴＴ法结果显
２１００年第ｌ第５４卷期ｌｉｌｄｃｅｉＰａｔｅｏｒｌｆｉｃｉｎｒｃｉｎＣｎａＭｅｉｎｃ－４・５
Ｃｃｏａｎｙｌｐｍｉｅ对人前列腺癌Ｐ一胞增殖凋亡Ｃ３细及Ｂｌ，ａ，ａｐｓ一ｃ一Ｂｘｃｓａｅ９蛋白表达的影响２
ＡＳＲＴ：ｊｃｉｓＴｔｄｅｆｎｔｎｏｏｆｒｔｎａｄａｏｔｓｎｈｘｒｓＢＴＡＣＯｂｅｔｅｏｓｙｔｕｃｉｆｌｅａｉｎｐｐｏｉａｄｔｅｅｐｅ— ｖｕｈｏｐｉｏｓ
ｓｎｆＢｌ，ａｎａｐｓ一ｒｔｉｓｏｕａｒｓａｅｃｎｅｅｌｌｅＰ３ｉｄｃｄｂｙｉｓｃ一Ｂｘａｄｃｓａｅ９ｐｏｅｎｎｈｍｎｐｏｔｔａｃｒｃｌｉＣ一ｎｕｅｙｃ — ｏｏ２ｎｃｏａｎ，ａｄｔｕｔｅｎｅｔａｅｔｉｍｅｈｎｓｉｄｃｄｂｈｍ．ｅｈｄＡｆｅＣ一ｅｌｌｐｍｉｅｎｏｆｒｈｒｉｖｓｉｔｈｓｇｃａｉｍｎｕｅｙｔｅＭｔｏｓｔｒＰ３ｃｌｓ

Survivin与前列腺癌关系的研究进展

在正常组织中Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的生成和降解是以细胞周期依赖的方式进行的。Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的表达和功能的调节是复杂的。可以发生在各个阶段：如转录水平，差别剪接，蛋白降解和通过与配基结合而在细胞内被螯合。Ｓｕｒｖｉｖｉｎ在多数肿瘤中高表达。认为与Ｗｎｔ途径、ＳＡＳＴ３，ＯＸ—吣（ｃａｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｍｅｓｓａｇｅｓ），ＡＫＴ。ＮＦ－ＫＢ等在肿瘤中的过度表达有关【７ｌ。其机制町能是Ｓｕｒｖｉｖｉｎ在转录水平。被ＮＦ—ＫＢ、ＡＫＴ、ＳＡＳＴ一３上调，导致转录、翻译的产物增多，从而影响肿瘤的发生发展。
３Ｓｕｒｖｉｖｉｎ与肿瘤的相关性
Ｓｕｒｖｉｖｉｎ在多数人类肿瘤细胞中具有显著性表达。研究证明其可能对肿瘤细胞的发生发展起促进作用．并且可能与肿瘤的转移和预后有关。可能成为肿瘤检测的早期指标及治疗靶点。
Ｓｕｒｖｉｖｉｎ表达与几乎所有的人类肿瘤细胞有关。Ｓｕｒｖｉｖｉｎ在肺癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌、黑色素瘤和血液系统肿瘤等人类恶性肿瘤中具有明显的表达１９’１１１．临床研究显示通过免疫组化法在肿瘤中检测到Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的高表达。提示肿瘤有更强的攻击性和转移性。通过
中国现代医药杂志２０１０年１月第１２卷第ｌ期ＭＭＪＣ，Ｊａｎ２０１０，Ｖｏｌ１２，Ｎｏ．１
·１２３·
综述·
Ｓｕｒｖｉｖｉｎ与前列腺癌关系的研究进展
张红森王健
Ｓｕｒｖｉｖｉｎ（生存素）是哺乳动物凋亡抑制蛋白（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｐｒｏｔｅｉｎ，ＩＡＰ）基因家族中的一员。其在肿瘤细胞中高表达。并且认为与肿瘤的化疗耐药相关，它在抑制凋亡蛋白的作用上具有双重的作用：即阻止凋亡和调节有丝分裂Ｉｌｌ。Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的作用机制较为复杂．可以通过多种细胞因子的多个网络途径发挥功能，可能在不同的组织细胞类型中，有不同的细胞因子网络发挥作用［２１。目前对于Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的研究较为热门，主要集中在Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的表达水平、作用机制和靶向抑制的治疗作用。本文对Ｓｕｒｖｉｖｉｎ在前列腺癌中的研究进展进行综述。

MADD抑制人前列腺癌PC-3细胞凋亡作用的研究

腺癌组织中的表达高于ＢＰＨ组织（Ｐ＝０．０００）；人前列腺癌细胞株ＬＮＣａＰ、ＰＣ一３Ｍ和ＰＣ一３中ＭＡＤＤ表达水平明显高于良性前列腺细胞株ＢＰＨ１（Ｐ＝０．００９、Ｐ＝０．００１、Ｐ＝Ｏ．０００），沉默ＰＣ一３细胞中ＭＡＤＤ表达，导致活化型ｃａｓｐａｓｅ一３和ＰＡＲＰ降解产物表达增加，并诱导ＰＣ一３细胞凋亡增加和增殖活力降低（０．０００）。结论：前列腺癌组织中ＭＡＤＤ表达明显增高。ＭＡＤＤ在前列腺癌中可能作为凋亡抑制因子发挥功能。
【关键词】含促分裂素原活化蛋白激酶激活死亡结构域蛋白；前列腺癌；良性前列腺增生；凋亡；增殖
【中国图书分类法分类号】Ｒ７３７．２５
【文献标志码】Ａ
【收稿日期】２０１３ — ０４ — ２７
ＲｏｌｅｏｆＭＡＰＫ— ａｃｔｉＶａｔｉｎｇｄｅａｔｈｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｉｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｈｕｍａｎｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒＰＣ－３ｃｅｌｌｓ
ａｎｄｂｅｎｉｇｎｐｒｏｓｔａｔｉｃｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ（ＢＰＨ）ｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｓｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｏｔａｌｌｙ４０ｓａｍｐｌｅｓｏｆ

AMACR siRNA表达载体对前列腺癌PC-3细胞生物学特性的影响

因治疗手段。关键词：前列腺肿瘤；ＡＣＭＡＲ；ＲＡ干扰Ｎ中图分类号：Ｒ９．１３２１文献标识码：Ａ
ｓＮｉＡ干涉载体瞬时转染Ｐ一ＲＣ３前列腺癌细胞系后，６ｈ细胞３
增殖率开始明显下降，软琼脂集落形成减少，流式细胞分析示细胞周期阻滞在Ｇ／（８６，ｎｅｉＦＴｏＧ期８．％）ＡｎｘＶ—ＩＣ法示早期ｎ利用ＲＡ干涉技术抑制了前列腺癌Ｐ一ＮＣ３细胞系的增生，可能会成为一种有效的前列腺癌基
ＭｅｈｄＵｓｇＬｐｆｃＡｎＴ００ｒａｅｔＲＮＡｉｅｋｒｏｉｘｒｓｉｎｖｃｏｓｐｉｎｅ／ｔｏｓｉｉｏｅｔｍｉｅ２０ｅｇｎｎＭｕａｙｔｅｐｅｓｏｅｔｒＳｌｅｒＡＭＡＣｎｏｔｌｖｃｏＳｌｎｅ — ｅｅＲ１ａｄｃｎｒｅｔｒｐｉｃｒｏｅ
ＥｅｔｏｆｃｆＡＭＡＣＲＲＮＡｉｕａｙｔｘｒｓｉｎｖｃｏｓｏｉｌｇｃｌｃａａｔｒｓｉｓｏｋｒｏｉｅｐｅｓｏｅｔｒｎｂｏｏｉａｈｒｃｅｉｔｆＰＣ－ｅｌｌｅｅｃｃ３ｃｌｉｎ
山西医科大学学报（ｈｎｉＭｄｎ）２箜１，ＪａｘｅＵｉＱＳｖ月
— —
（１
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３・９
文章编号：１０６１（０９００３００７— ６表达载体对前列腺癌Ｐ－胞生物学特性的影响ＣＲＡｉＣ３细

左旋棉酚诱导人前列腺癌细胞PC-3和DU-145凋亡的效果观察

—
细胞培养及药物处理同前，物处理２收集细药４ｈ后胞，悬浮于１ｍ培养基中，ｌ加入ｌｌＯ３４存０Ｉ３３２储ｘＨ
液混匀，７℃染色１ｎ将细胞置于冰上冷却后，３５ｍｉ；离心弃上清；细胞重悬于１ｍＢ将ｌＳ中，人５ｌＰ加Ｐ储存液，即用荧光显微镜进行观察分析（Ｉ立激发
丕医麴Ｑ璺生筮８卷第２期８
左旋棉酚诱导人前列腺癌细胞Ｐ一Ｃ３和Ｄ一４Ｕ１５凋亡的效果观察
詹文华，闫钢，淑萍邵（宁夏医学院附属医院，宁夏银川７００）５０４
［摘要］将不同浓度的左旋棉酚与醋酸棉酚作用于人前列腺癌Ｐ一Ｃ３和Ｄ４Ｕｔ５细胞，利用ＭＴ１ｒ法检测其有
７加入ＭＴ孵育４ｈ加人二甲亚砜震荡，２ｈ后Ｔ，酶联免疫仪检测，综合计算法得出Ｉ值。Ｃ１２３透射电镜观察细胞凋亡情况．．将Ｐ．Ｃ３和
Ｄ一４Ｕ１５细胞加人０２％胰酶消化成细胞悬液，．５置
毒性低、活性高，目前已成为抗肿瘤药物研究的热
点。本实验通过观察左旋棉酚和醋酸棉酚对人前列
腺癌Ｐ一Ｃ３和Ｄ一４Ｕ１５细胞增殖、凋亡的影响．旨在为临床用药提供依据。
１材料与方法
离心弃上清，ＢＰＳ液洗涤，次离心５７７２
［文献标识码］Ｂ

PPAR-α激动剂非诺贝特抑制前列腺癌PC-3细胞生长和诱导凋亡的作用研究

第49卷第4期2020年7月内蒙古师范大学学报(自然科学汉文版)J o u r n a l o f I n n e rM o n g o l i aN o r m a lU n i v e r s i t y (N a t u r a l S c i e n c eE d i t i o n )V o l .49N o .4J u l y 2020收稿日期:2019-10-24基金项目:内蒙古自然科学基金资助项目(2015M S 08115);内蒙古医科大学附属医院重大科研资助项目(N Y F Y Z D 2014011);内蒙古自治区卫生计生科研计划资助项目(201701066)作者简介:陈鹏飞(1982-),男,内蒙古呼和浩特人,内蒙古医科大学主管药师,E -m a i l :787070318@q q.c o m 通讯作者:岳根全(1974-),男,内蒙古呼和浩特人,内蒙古医科大学主任医师,E -m a i l :y u e g e n qu a n 1128@s i n a .c o m.P P A R -α激动剂非诺贝特抑制前列腺癌P C -3细胞生长和诱导凋亡的作用研究陈鹏飞1,于蕾2,肖云峰3,岳根全4(1.内蒙古医科大学附属医院药剂科,内蒙古呼和浩特010050;2.内蒙古自治区中医医院药剂科,内蒙古呼和浩特010020;3.内蒙古医科大学新药安全评价研究中心,内蒙古呼和浩特010110;4.内蒙古医科大学附属医院泌尿外科,内蒙古呼和浩特010050)摘要:探讨过氧化物酶体增殖因子激活受体α(P P A R -α)激动剂非诺贝特对前列腺癌P C -3细胞生长的抑制和诱导凋亡的作用㊂分别用0㊁25㊁50㊁75㊁100μm o l /L 浓度的非诺贝特作用于P C -3细胞,经过24h ㊁48h ㊁72h 后,分别采用M T T ㊁W e s t e r nb l o t 检测不同组别P C -3细胞的生长或凋亡情况㊂M T T 结果显示:非诺贝特对P C -3细胞的增值存在显著的抑制影响,并且抑制效果和所加入的溶液浓度存在正相关性;流式细胞结果表明:非诺贝特经过24h ㊁48h 及72h 处理后,测定得到的凋亡细胞总百分比分别为8.41%±2.05%㊁16.77%±3.16%和23.65%±4.43%,较对照组4.65%±1.12%明显升高㊂W e s t e r nb l o t 的检测结果显示:50μm o l /L 非诺贝特处理P C -3细胞,48h 后其凋亡因子C a s pa s e 3和A I F 的表达均有明显的增加㊂据此,非诺贝特能够显著激活前列腺癌P C -3细胞凋亡因子C a s pa s e 3和A I F 的表达,实现诱导细胞凋亡,从而表现出对P C -3细胞增殖的抑制作用㊂关键词:前列腺癌;非诺贝特;细胞增殖;细胞凋亡中图分类号:R737.25 文献标志码:A 文章编号:1001-8735(2020)04-0298-05d o i :10.3969/j.i s s n .1001-8735.2020.04.003根据世界卫生组织(W o r l dH e a l t hO r ga n i z a t i o n ,WHO )2015年的估计,在全球172个国家的91个国家中,70岁之前死亡原因为癌症的排名为第一或第二;而在剩余的国家中,癌症也是重要的死亡原因㊂据估计,2018年全球有近130万例前列腺癌(pr o s t a t e c a n c e r ,P C a )新增病例和359000相关死亡病例,P C a 是男性发病率第二高的癌症,并且是第五大癌症死因,严重影响男性的身体及心理健康[1]㊂研究表明,P C a 已经开始在我国的部分地区呈现较高的发病率,并呈现逐年增长趋势[2-3]㊂P C a 早期发病隐匿,一旦出现症状,就已经发展为进展性前列腺癌,常常并发远处转移㊂在目前就诊发现的前列腺癌症中,绝大部分是对雄性激素具有一定依赖性的恶性肿瘤㊂经过多年的临床就诊和研究,国内已经形成了一套较为成熟的治疗体系,常用的具有代表性的治疗方案是雄激素剥夺疗法,简称A D T ,也称去势疗法㊂该疗法效果较好,能有效抑制癌细胞的扩散和转移,但在接受治疗及服用相关药物后,大部分患者在不到两年的时间里就会对A D T 出现耐药反应,这给后续的治疗带来极大的困难,并且导致病情迅速进展为转移性去势抵抗型前列腺癌(m e t a s t a t i c c a s t r a t i o n -r e s i s t a n t p r o s t a t e c a n c e r ,m C R P C )[4-5]㊂目前,治疗m C R P C 已经成为国内外研究机构的主要攻克目标和研究热点,也是临床治疗前列腺癌的主要难点㊂P P A R -α激动剂非诺贝特是属于贝特类的一种药物,临床上主要用于饮食控制疗法没有良好效果的高甘油三酯血症和高胆固醇血症的治疗;同时对糖尿病引起的并发症,如视网膜病变㊁肾脏病变㊁微血管病变等也具有一定的治疗效果,由于药效显著,目前已经成为常用药物[6-7]㊂随着医学的发展和研究的深入,已有理论证实和临床实践表明非诺贝特同时具有抗肿瘤细㊃992㊃第4期陈鹏飞等:P P A R-α激动剂非诺贝特抑制前列腺癌P C-3细胞生长和诱导凋亡的作用研究胞增殖以及诱导肿瘤细胞发生凋亡的功效[8-10]㊂已有报道发现,非诺贝特抑制雄激素依赖型前列腺癌细胞系L N C a P的生长的作用是通过激活氧化应激反应,抑制雄激素受体表达水平并诱导细胞凋亡实现[11]㊂因此,本文主要探讨P P A R-α激动剂非诺贝特对雄激素非依赖型前列腺癌P C-3细胞生长的抑制作用和诱导凋亡的可能机制㊂1 材料与方法1.1 实验材料人前列腺癌细胞P C-3(A T C C,M a n a s s a s,V A公司,美国);不完全D M E M高糖培养液(昆山凯基生物科学技术有限公司,中国);F B S血清(I n v i t r o g e n公司,美国)0.25%T r y p s i n-E D T A(C o r n i n g公司,美国);C e l lA p o p t o s i sK i t(昆山凯基生物科学技术有限公司,中国);MT T试剂M5655(S i g m a公司,美国);其他常用化学分析纯试剂(S i g m a公司,美国);非诺贝特(S i g m a公司,美国);G A PD H抗体(S a n t aC r u z公司,美国);β-A c t i n抗体(S a n t aC r u z公司,美国);c l e a v e d C a s p a s e3㊁T o t a lC a s p a s e3㊁A I F(C e l lS i g n a l i n g T e c h n o l o g y公司,美国)㊂1.2 仪器设备电子天平(S a r t o r i u s公司,美国);超纯水机(M i l i p o r e公司,美国);成像系统(B I O-R A D公司,美国);流式细胞仪(B D公司,美国)㊂1.3 实验方法1.3.1 细胞培养 P C-3细胞为贴壁生长型细胞㊂在完全高糖D M E M培养基(10%F B S+青霉素及链霉素各100U/m L),37℃㊁5%C O2培养箱中培养24~48h㊂待细胞生长汇合度达到85%,用0.25%胰蛋白酶消化1m i n,一式两份分装消化完成的细胞液㊂1000r/m i n,离心5m i n,弃上清,一份采用1m L完全D M E M培养基重悬细胞沉淀,进行传代;另一份采用事先配置好的冻存液混选细胞沉淀,放入冻存管,置于梯度冻存盒,进行冻存㊂传至第三代时,选取符合实验条件且处于对数生长期的细胞用于相关的实验研究和分析㊂1.3.2 MT T检测细胞活力选取上述P C-3细胞置于无菌培养皿中,0.25%胰蛋白酶消化处理1m i n,再1000r/m i n离心5m i n,D M E M完全培养液重悬细胞,制成细胞悬液,在96孔规格的细胞培养板上进行细胞接种(细胞计数3.0×103c e l l s/m L)㊂待细胞贴壁生长后,给予50μM非诺贝特干预(3个复孔),对照组给予等量的0.5‰D M S O溶液(3个复孔),分别于24h㊁48h㊁72h时,向每孔加入20μL MT T(5m g/m L),培养箱孵育㊂4h后将孔内溶液清除,保持干燥㊂随后每孔加入一定量的D M S O,利用酶标仪检测并记录各组的吸光度,设为(A)值㊂实际的细胞活力指数用以下表达式进行表述,即:(A)值=(A值药物组-A值调零孔)/(A值对照孔-A值调零孔)×100%㊂1.3.3 流式细胞仪检测细胞凋亡取对数生长期的P C-3细胞,0.25%的胰蛋白酶,消化,离心处理,D ME M完全培养液重悬细胞,制成细胞悬液,接种于6孔细胞培养板(细胞计数5.0×104c e l l s/m L)㊂待细胞贴壁生长后,给予50μM非诺贝特干预(3个复孔),对照组给予等量的0.5‰D M S O溶液(3个复孔),分别于24h㊁48h㊁72h时,加入不含E D T A的胰酶消化细胞,随即加入100μL含有1μL膜联蛋白-V(a n n e x i n V)和2μL碘化丙啶(P I)染料的缓冲液,常温避光孵育15m i n后加入200μL缓冲液终止反应,然后把采集的标本放置于准备好的冰块之上,用流式细胞仪A P C通道检测A n n e x i nV荧光,P E通道检测P I荧光㊂1.3.4 W e s t e r nb l o t检测蛋白表达取上述对数生长期P C-3细胞,0.25%胰蛋白酶进行消化处理,在离心后对细胞进行常规裂解30m i n㊂低温高速(4℃,12000r/m i n)离心20m i n后,取上清,以B S A为标准,测定蛋白浓度㊂取适量蛋白样品,10%S D S-P A G E电泳;100V转移1.5h至N C膜;5%脱脂牛奶室温封闭1h;分别加入不同一抗(c l e a v e dC a s p a s e3,C a s p a s e3,A I F),4℃过夜后洗膜,加入辣根过氧化物酶标记的二抗,在室温条件下孵育1h后洗膜,显色,曝光㊂用I m a g eL a b图像分析测定目标蛋白条带灰度值做定量分析㊂1.3.5 统计学方法数据处理采用S P S S19.0软件分析,数据均以均数±标准差(x±S D)表示㊂多组间比较采用O n e-w a y A N O V A检验,两两比较采用独立样本t检验㊂P<0.05认为差异有统计学意义㊂㊃003㊃内蒙古师范大学学报(自然科学汉文版)第49卷 2 结果2.1 非诺贝特对雄激素非依赖型前列腺癌P C-3细胞的增殖具有抑制作用选取不同浓度(0㊁25㊁50㊁75㊁100μm o l/L)的非诺贝特分别作用细胞24h㊁48h㊁72h,利用MT T法分别测定并记录每组P C-3细胞的增殖情况㊂结果显示,非诺贝特对雄激素非依赖型前列腺癌P C-3细胞的生长具有显著(P<0.05)的抑制作用,且这种抑制作用对时间和剂量呈现依赖性,结果见表1㊂表1 不同浓度和作用时间的非诺贝特对P C-3细胞增殖的抑制百分比T a b.1I n h i b i t i o n p e r c e n t a g e o fP C-3c e l l p r o l i f e r a t i o n i nd i f f e r e n tf e n o f i b r a t e c o n c e n t r a t i o n s a n d t i m e s o f t r e a t m e n t%浓度/(μm o l/L)24h48h72h090.11±10.3493.56±9.0495.78±10.232589.15±9.1675.29±12.47*55.07±14.18*#5082.36±10.0563.77±11.27*44.27±10.63*#7576.38±9.9350.71±9.96*40.21±12.06*#10070.98±9.5243.96±12.77*40.92±11.64*#注 *与24h相比较,P<0.05;#与48h相比较,P<0.052.2 非诺贝特诱导P C-3细胞凋亡当非诺贝特作用P C-3细胞的浓度为50μm o l/L,处理时间分别为24h㊁48h和72h时,测定每组细胞的凋亡总百分比分别为8.41%±2.05%㊁16.77%±3.16%和(23.65%±4.43%,较对照组4.65%±1.12%明显升高,比较结果如图1所示㊂图1 不同处理时长下50μm o l/L的非诺贝特对P C-3细胞增殖的影响F i g.1E f f e c t o f d i f f e r e n t t r e a t m e n t t i m e s o f f e n o f i b r a t e(50μm o l/L)o nP C-3c e l l p r o l i f e r a t i o n2.3 非诺贝特增加凋亡因子C a s p a s e3和A I F的表达用浓度为50μm o l/L的非诺贝特处理P C-3细胞48h之后,细胞凋亡因子C a s p a s e3和A I F的表达显著增加,W e s t e r nb l o t结果如图2所示㊂第4期陈鹏飞等:P P A R -α激动剂非诺贝特抑制前列腺癌P C -3细胞生长和诱导凋亡的作用研究图2 50μm o l /L 的非诺贝特在不同作用时长对因子C a s pa s e 3和A I F 表达的影响F i g .2E x p r e s s i o no f a p o p t o s i sm a r k e r sC a s pa s e 3a n dA I Fw i t hd i f f e r e n t t r e a t m e n t t i m e s o f f e n o f ib r a t e (50μm o l /L )3 讨论近年来的相关实验和研究充分证明,P P A R a 激动剂非诺贝特对肿瘤有着显著的抑制作用,不过关于抑制作用和P P A R a 的激活是否存在一定的关联,目前尚未得到证实,还需后续进行相关的实验和研究[12]㊂非诺贝特最初应用于临床,主要是治疗高胆固醇及高甘油三酯血症,后期扩展到糖尿病并发症的预防[13-15]㊂本研究的实验数据提示,非诺贝特通过上调诱导凋亡因子C a s p a s e 3和A I F 的表达,发挥抑制雄激素非依赖型前列腺癌P C -3细胞增殖的作用㊂目前,非诺贝特用于抑制雄激素非依赖型前列腺癌细胞生长的研究还处于起步阶段,相关的实验数据相对较少,属于全新的研究方向㊂L u t y 等开展了非诺贝特对前列腺癌细胞耐药性的作用研究,结果显示,非诺贝特通过干扰前列腺癌细胞的耐药性和能量代谢,降低了化疗药物多西他赛的有效剂量㊂因此,非诺贝特可以用作节律剂以增强前列腺癌的姑息化学疗法的效率[16]㊂T a o 等认为非诺贝特通过调节自噬和内质网应激来抑制前列腺癌的生长[17]㊂L i a n 等发现,非诺贝特通过诱导凋亡显著抑制了P C -3细胞的增殖,这与m T O R /p 70S 6K 依赖性细胞存活途径的失活有关[18]㊂Z h a o 等研究发现,非诺贝特通过抑制雄激素受体(a n d r o g e n r e c e pt o r ,A R )的表达发挥抗前列腺癌(P C a )细胞L N C a P 的增殖作用;同时,其通过引起氧化应激诱导L N C a P 细胞凋亡[11]㊂本研究结果表明,非诺贝特能够显著抑制P C -3细胞生长,并且具有明确的时间依赖性和剂量依赖性,同时,流式细胞术的结果也进一步证实了MT T 法的结果㊂C a s p a s e -3酶隶属于半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族,在程序性细胞死亡的内在和外在途径以及细胞增殖中都起着至关重要的作用㊂C a s p a s e -3酶的检测是早期检测某些癌症和凋亡相关疾病以及监测药物以及癌症化学疗法和放射疗法的有效性的重要工具[19]㊂凋亡诱导因子(a p o p t o s i s -i n d u c i n g f a c t o r ,A I F ),又名程序性细胞死亡蛋白8(p r o g r a mm e d c e l l d e a t h8,P D C D 8),是一类不依赖C a s p a s e 而执行凋亡作用的,存在于线粒体内外膜之间的保守的黄素蛋白[20]㊂本研究中,非诺贝特在处理24h ㊁48h 和72h 后明显增加了C a s pa s e 3和A I F 的表达㊂这提示非诺贝特通过线粒体凋亡通路激活C a s pa s e 3和A I F 表达,从而诱导细胞凋亡㊂综上所述,非诺贝特通过线粒体途径激活C a s pa s e 3并增加A I F 释放,最终诱导细胞凋凋亡,从而发挥抑制前列腺癌细胞生长的作用㊂但非诺贝特在P C -3细胞中是直接调控细胞凋亡通路,还是通过其他途径调控凋亡通路,目前尚不清楚,仍需要进一步研究明确㊂㊃103㊃㊃203㊃内蒙古师范大学学报(自然科学汉文版)第49卷参考文献:[1] F R E D D I E B,J A C Q U E SF,I S A B E L L ES,e ta l.G l o b a l c a n c e rs t a t i s t i c s2018:G L O B O C A Ne s t i m a t e s o f i n c i d e n c ea n dm o r t a l i t y w o r l d w i d e f o r36c a n c e r s i n185c o u n t r i e s[J].C A-AC a n c e r J o u r n a l f o rC l i n i c i a n s,2018,68(6):394-424.[2] C H E N R,R E NS,Y I U M K,e t a l.P r o s t a t e c a n c e r i nA s i a:Ac o l l a b o r a t i v e r e p o r t[J].A s i a n J o u r n a l o fU r o l o g y,2014,1(1):15-29.[3] C E N T E R M M,J E MA L A,L O R T E T-T I E U L E N TJ,e t a l.I n t e r n a t i o n a l v a r i a t i o n i n p r o s t a t e c a n c e r i n c i d e n c e a n 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i n h u-m a n p r o s t a t e c a n c e r c e l l s[J].B i o c h e m i c a l a n dB i o p h y s i c a lR e s e a r c hC o mm u n i c a t i o n s,2018,496(1):70-75.[19] Y A G AM IT,Y AMAMO T O Y,K OMA H.P a t h o p h y s i o l o g i c a l r o l e so f i n t r a c e l l u l a r p r o t e a s e s i nn e u r o n a l d e v e l o p m e n ta n dn e u r o l o g i c a l d i s e a s e s[J].M o l e c u l a rN e u r ob i o l o g y,2019,56(5):3090-3112.[20] D I N GL,L I J,L IW,e t a l.p53-a n dR O S-m e d i a t e dA I F p a t h w a y i n v o l v e d i nT G E V-i n d u c e da p o p t o s i s[J].J o u r n a l o fV e t e r i n a r y M e d i c a l S c i e n c e,2018,80(11):1775-1781.(下转第308页)㊃803㊃内蒙古师范大学学报(自然科学汉文版)第49卷 T h eD i v e r s i t y o f t h eS p r i n g B i r d s i nB a y i n W e n d u e rD e s e r t,I n n e rM o n g o l i a L I N C h e n1,Z H A N G R u i-d o n g1,W E NS u y a l a t u2,WA N GJ i n g-y u a n2,WA N GS h u-s e n3(1.C o l l e g e o f L i f eS c i e n c e,I n n e rM o n g o l i aN o r m a lU n i v e r s i t y,H o h h o t010022,C h i n a;2.W u l a t e h o uB a n n e rF o r e s t r y B u r e a u,W u l a t e h o uB a n n e r015500,I n n e rM o n g o l i a,C h i n a;3.C o l l e g e o f D e s e r tC o n t r o l,I n n e rM o n g o l i aA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y,H o h h o t010018,C h i n a)A b s t r a c t:T os t u d y t h es p e c i e sd i v e r s i t y,d i s t r i b u t i o na n dh a b i t a to fs p r i n g b i r d s i nt h i sd e s e r t,w e c a r r i e d o u t a n i n t e g r a t e d i n v e s t i g a t i o n i nM a y2019a tB a y i nW e n d u e rD e s e r t.T h e r e s u l t s h o w e d t h a t a t o t a l o f51s p e c i e sb e l o n g i n g t o24f a m i l i e su n d e r10o r d e r sw a s r e c o r d e d,i n w h i c h8s p e c i e sw e r en a t i o n w i d e p r o t e c t e db i r d s.A m o n g a l lt h e s es p r i n g b i r d s,w ef o u n d17r e s i d e n tb i r d s,30s u mm e rr e s i d e n tb i r d s, 6p a s s i n g m i g r a n tb i r d sa n d1i n d e t e r m i n a t er e s i d e n tb i r d.T h e r e w e r e47s p e c i e so fr e p r o d u c t i v eb i r d s (i n c l u d i n g s u mm e r a n d r e s i d e n t b i r d s),a c c o u n t i n g f o r92.2%o f t h e t o t a l.P a l a e o a r c t i c a v i f a u n aw a s d o m i-n a t e d i n t h e r e s e r v ed u r i n g s p r i n g s e a s o n,m a k i n g u p85.1%o f t h e r e p r o d u c t i v eb i r d s.T h e i n v e s t i g a t i o n p r o v i d e d t h eb a s i cd a t af o rt h ef u r t h e rs t u d y o fb i r dd i v e r s i t y i n B a y i n W e n d u e rD e s e r ta n db i o l o g i c a l i n d i c a t o r s f o r t h e f u t u r e d e t e c t i o no f t h e e f f e c t o f t h em a n a g e m e n t i n t h e d e s e r t.K e y w o r d s:b i r d;d i v e r s i t y;t h eB a y i n W e n d u e rD e s e r t;t h e W u l a t eS a x a u l-M o n g o l i a n W i l dD o n k e y N a t u r eR e s e r v e【责任编辑乔子栩】(上接第302页)P P A R-αA g o n i s tF e n o f i b r a t e I n h i b i t s t h eG r o w t ha n d I n d u c e sA p o p t o s i s o f t h eP r o s t a t eC a n c e rC e l l L i n eP C-3C H E NP e n g-f e i1,Y U L e i2,X I A O Y u n-f e n g3,Y U EG e n-q u a n4(1.D e p a r t m e n t o f P h a r m a c y,A f f i l i a t e dH o s p i t a l o f I n n e rM o n g o l i a M e d i c a lU n i v e r s i t y,H o h h o t010050,C h i n a;2.D e p a r t m e n t o f P h a r m a c y,I n n e rM o n g o l i a H o s p i t a l o f T r a d i t i o n a lC h i n e s eM e d i c i n e,H o h h o t010020,C h i n a;3.T h e C e n t e r f o rN e w D r u g S a f e t y E v a l u a t i o na n dR e s e a r c ho f I n n e rM o n g o l i a M e d i c a lU n i v e r s i t y,H o h h o t010110,C h i n a;4.D e p a r t m e n t o f U r o l o g y,A f f i l i a t e dH o s p i t a l o f I n n e rM o n g o l i a M e d i c a lU n i v e r s i t y,H o h h o t010050,C h i n a)A b s t r a c t:T os t u d y t h e i n h i b i t o r y e f f e c to f p e r o x i s o m e p r o l i f e r a t o r-a c t i v a t e dr e c e p t o ra l p h aa g o n i s t f e n o f i b r a t eo nt h e g r o w t h a n d a p o p t o s i so fa n d r o g e n-i n d e p e n d e n t p r o s t a t ec a n c e r P C-3c e l l sa n dt h e p o s s i b l em e c h a n i s m,t h eP C-3c e l lw a s t r e a t e dw i t h0,25,50,75a n d100μm o l/Lo f f e n o f i b r a t e t od e t e c t e d i t s p r o l i f e r a t i o na n d a p o p t o s i s b y MT Ta s s a y a n d f l o wc y t o m e t r y a t24h,48ha n d72ha n de x p r e s s i o no f a p o p t o s i sm a r k e rC a s p a s e3a n d a p o p t o s i s i n d u c i n g f a c t o r(A I F)b y W e s t e r nb l o t t i n g.T h e r e s u l t s o fMT T s h o w e d t h a tf e n o f i b r a t es i g n i f i c a n t l y i n h i b i t e dt h e g r o w t ho fP C-3c e l l si nat i m ea n dd o s ed e p e n d e n t m a n n e r a n d t h e f l o wc y t o m e t r y a n a l y s i s i n d i c a t e d t h a t t h e t o t a l p e r c e n t a g eo f a p o p t o t i c c e l l s t r e a t e dw i t h f e n o f i b r a t e a t24,48a n d72hw e r e8.41%±2.05%,16.77%±3.16%a n d23.65%±4.43%r e s p e c t i v e l y, s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n4.65%±1.12%o f t h e c o n t r o l g r o u p.W e s t e r nb l o t t i n g r e v e a l e d t h a t t h e e x p r e s-s i o no fC a s p a s e3a n d A I F w a ss i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d w i t hf e n o f i b r a t et r e a t m e n t f o r48h.T h er e s e a r c h d e m o n s t r a t e dt h a t f e n o f i b r a t e i n h i b i t e dt h e g r o w t ho fP C-3c e l l s m a i n l y b y i n d u c i n g a p o p t o s i st h r o u g h a c t i v a t i n g C a s p a s e3a n dA I F.K e y w o r d s:p r o s t a t e c a n c e r;f e n o f i b r a t e;c e l l p r o l i f e r a t i o n;a p o p t o s i s【责任编辑乔子栩】。

核小体结合蛋白调控CXCR4抑制前列腺癌PC-3细胞的侵袭作用

侵袭能力的作用机制。方法
法观察细胞活性变化，ｒｎｗｌ实验观察细胞侵袭能力的变化，Ｔａｓｅｌ应用Ｗｅｔｎｂｏ技术检测ＮＢ１ＣＣ４蛋ｓｒ．ｌｅｔＳＰ、ＸＲ
白的变化情况。结果
抑制ＮＢ１表达水平后非激素依赖性前列腺癌细胞系Ｐ．ＳＰＣ３细胞活性降低，侵袭能力通过慢病毒转染抑制ＮＢ１的表达可以抑制非激素依赖性ＳＰ
ｐｏｉｒｔｎｎｉｖｓｏｒｌｅａｉａｄｎａｉｎ，ａｄａｔｅｓｍｅｔｔｅｅｐｅｓｎｏＣＲｐｔｉａｓｄｃｅｅ．ｆｏｎｔｈａｉｍｅｈｘｒｓｉｆＸＣ４ｏｏｒｅｎｌｏｅｒａｄｓＣｏｃｕｉｎＫｎｃｉｇｄｗｆＢ１ｉｄｃｅｒａｅｏｅｌｐｏｉｒｔｎａｄｉｖｉｎｗｉｈｍａａｅｒｌｎｎｌｓｏｓｏｋｎｏｎｏＮＳＰｎｕｅｄｃｅｆｃｌｒｌｅａｉｎｎａｏ，ｈｃｙｈｖｏｅｉｓｆｏｓＳ－／ＤＦ１ＣＸＣ４ｗａｓＲｙ．
ｌｎｉｉｓｍｅｉｔｄｋｏｋｏｎｏＳＰｏｅｕｉａｅｔｅｏｃｇｎｃｒｌｆＮＳＰ１ｉｒｓｔａｃｒＰ－ｅｌＭｒｅｔｒｄａｅｎｃｄｗｆＮＢ１ｔｌｃｄｔｈｎｏｅｉｅｏＢｎｐｔｅｃｎｅＣ３ｃｌ，ｌｖｕｏｏａＴｓａｎｒｓｅｌｓａｅｅｕｅｏｏｓｒｅｅｌｒｌｅａｉｎｎａｉＷｓｅｎｂｏａｕｅｏｔｓａｓｙａｄｔｎｗｌａｓｙｗｒｓｄｔｂｅｖｄｃｌｐｏｉｒｔｎａｄｉｖｓｎ，ｅｔｒ — ｌｔＷｓｄｔｅｔｔｅａｆｏｏｓｈ

前列腺癌细胞株PC-3中PKB信号通路拮抗TGF-β信号

前列腺癌细胞株Ｐ一Ｃ３中ＰＢ信号通路Ｋ拮抗ＴＦｐ信号Ｇ—
王惠强李伟陈斌邢金春
【摘要】目的研究前列腺癌中蛋白激酶ＢＰＢ信号通路对转化生长因子ｐＴＦｐ信号通（Ｋ）（Ｇ —）
路的调节作用，探讨两信号通路在前列腺癌发生发展中的作用。方法号通路对ＴＦｐ信号的调节作用。结果Ｇ— 通过生长抑制实验、细胞周期停滞实验、荧光素酶报告基冈、反转录聚合酶链反应（ＴＰＲ）免疫共沉淀检测Ｐ一Ｒ —Ｃ、Ｃ３细胞中ＰＢ信ＫＰＢ信号通路可以抑制ＴＦＢ反应性的ＣＧＫＧ— ＡＡ报告基因活性；应用Ｌ２４０（ＫＹ９０２ＰＢ通路特异性抑制剂）可以增强ＴＦＢ抗增殖和诱导细胞周期停滞作用；Ｇ— ＰＢ信号通路的活化和抑制均不能影响ＴＦｐ通路信号分子的表达；Ｙ９０２和ＴＦｐ可以协同ＫＧ— Ｌ２４０Ｇ— 抑制ｃｃｎ１ｙｌＤ的表达；Ｙ９０２ｉＬ２４０增强ＴＦＢ诱导的Ｐ５表达；ＫＧ— １ＰＢ与Ｓｄｍａ３之间存在蛋白质相互作用。结论ＰＢ信号通路通过凋节ｃｃｎ１Ｐ５的表达拈抗ＴＦｐ诱导的抗增殖和诱导细胞周期ＫｙｌＤ和１ｉＧ— 停滞作用，ｍｄＰＢ的相互作用可能介导了该作用。ＰＢ信号通路通过上述拈抗性作用促进了前Ｓａ３与ＫＫ
Ｌｅ，ＨＮＢｎＸＮｉ— ｕ．ｅａｔｅｔｏｒｏｙＦｒｏｉｌｏＸａｅ，ｆｌｔｏＦｊｎＩＷｉＣＥｉ，ＩＧＪｃｎＤｐｒｎｆＵｏｇ，ｉｔＨｓｔｉｍｎＡｉｅｔｕａｎｈｍｌｓｐａｆｉｆａｄｉ

姜黄素对前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用

姜黄素对前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用目的研究姜黄素对PC-3细胞增殖活性的影响。

方法以不同浓度（10、20、40、60、80μmol/L）的姜黄素及顺铂作用于体外培养的PC-3细胞24 h，以中效浓度（40μmol/L）的姜黄素及顺铂作用于体外培养的PC-3细胞4、12、24、48、72 h，后用MTT法检测在不同浓度及时间作用下PC-3细胞的抑制率，应用流式细胞仪检测PC-3细胞周期的变化。

结果姜黄素对PC-3细胞的增殖抑制作用与顺铂相似（P＞0.05），具有剂量时间依赖性，并随着药物浓度及时间的增加，抑制率逐渐增高，流式细胞仪检测显示：姜黄素和顺铂组都能使PC-3细胞生长明显阻滞于G2/M期，两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

各实验组与空白对照组比较均有显著性差异（P＜0.05）。

结论姜黄素可以明显抑制PC-3细胞的增殖，在临床治疗前列腺癌方面有着良好的应用前景。

标签：姜黄素；人前列腺癌细胞系；细胞增殖；细胞凋亡Inhibitory effect of curcumine on prostate cancer cell line PC-3LI?Jianhua1??ZHOU?Jie2??LU?Suqing3??OUYANG?Xinping4??CHEN?Xin4? ?ZHANG?Tao51.Department of Pharmacy,the First People’s Hospital of Chenzhou, Chenzhou 423000,China;2.General Surgery,the 163rd Hospital of PLA,Hengyang 421001,China;3.Department of Urology,Affiliated Hospital of Guilin Medical College,Guilin 541001,China;4.Medical College,University of South China,Hengyang 421001,China;5.Second Hospital Affiliated University of South China,Hengyang 421001,China[Abstract] Objective To study the inhibitory effect of curcumine on prostate cancer cell line PC-3. Methods By means of different concentrations(10,20,40,60,80μmol/L)of curcumin and Platinol role PC-3 cells for 24 h,by means of lente concentration (40μmol/L) of curcumin and Platinol role PC-3 cells for 4,12,24,48,72 h. MTT method was used to measure the proliferation of PC-3 cells;and detect the cell cycle changes by flow cytometry. Results The depressant effect of curcumine on PC-3 is similar to Platinol(P＞0.05),with a concentration and time-dependent. As the drug concentration and time increases,the inhibition rate increased gradually.Flow cytometry showed that,curcumine and Platinol make PC-3 cell growth arrest at G2/M phase, there was no significant difference between the two groups(P＞0.05). Each experimental group compared with the control group had significant difference(P＜0.05). Conclusion Curcumine can significantly inhibit the proliferation of PC-3 cells and has a better value of clinical application and exploitation in the treatment of prostate cance.[Key words] Curcumine;PC-3;Proliferation;Apoptosis姜黄素（curcumin）是从姜黄、莪术、郁金等姜科姜黄属植物的根茎中提取的一种有效成分，可溶于甲醇、乙醇、碱、醋酸、丙酮和氯仿等有机溶剂，具有抑癌、防氧化、抗炎、抗动脉粥样硬化等广泛的药理作用[1-2]。

慢病毒干扰SKA1对前列腺癌PC-3细胞增殖及CDK4和cyclin D1表达的影响

慢病毒干扰SKA1对前列腺癌PC-3细胞增殖及CDK4和cyclin D1表达的影响王阳;曹志华;牛桂林;刘磊;朱清;胡跃世;李征【摘要】目的探究慢病毒介导纺锤体和动粒相关蛋白1(SKA1)沉默对前列腺癌PC-3细胞增殖及细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)水平的影响.方法构建慢病毒表达载体Lv-shSKA1,转染PC-3细胞.实验分为空白组、Lv-shCon组和Lv-shSKA1组.用实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测细胞SKA1 mRNA表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞周期,用蛋白质印迹(Western blot)技术检测SKA1、CDK4及cyclin D1蛋白表达.结果①与LvshCon组比较,Lv-shSKA1组细胞中SKA1 mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P＜0.05).②与Lv-shCon组比较,Lv-shSKA1组细胞增殖速率显著较慢(P＜0.05).③与Lv-shCon组比较,Lv-shSKA1组G0/G1期细胞数显著减少(P＜0.05),S 期细胞数显著增加(P＜0.05).④与Lv-shCon组比较,Lv-shSKA1组细胞CDK4、cyclin D1蛋白表达水平均显著下调(P＜0.05).结论慢病毒介导的SKA1沉默可抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,且细胞增殖相关蛋白CDK4、cyclin D1表达显著下调,提示SKA1可能是前列腺癌基因治疗的新靶点.【期刊名称】《现代泌尿外科杂志》【年(卷),期】2018(023)010【总页数】6页(P785-789,799)【关键词】前列腺癌;慢病毒;纺锤体和动粒相关蛋白1;细胞增殖;细胞周期蛋白依赖性激酶4;细胞周期蛋白D1【作者】王阳;曹志华;牛桂林;刘磊;朱清;胡跃世;李征【作者单位】南阳市中心医院泌尿外科,河南南阳473000;南阳市中心医院泌尿外科,河南南阳473000;南阳市中心医院泌尿外科,河南南阳473000;南阳市中心医院泌尿外科,河南南阳473000;南阳市中心医院泌尿外科,河南南阳473000;南阳市中心医院泌尿外科,河南南阳473000;南阳市中心医院泌尿外科,河南南阳473000【正文语种】中文【中图分类】R737.25前列腺癌是欧美地区男性发病率最高的恶性肿瘤，也是导致发达国家男性癌症相关死亡的重要原因。

葡萄汁对人前列腺癌PC-3细胞的凋亡作用

葡萄汁对人前列腺癌PC-3细胞的凋亡作用罗琼;王丽红;杨明亮;崔晓燕;庞雅琴;阎俊【期刊名称】《毒理学杂志》【年(卷),期】2006(20)6【摘要】目的研究葡萄汁对人前列腺癌PC-3细胞的影响。

方法将低、中、高剂量(分别为16、32和64μl/ml)的葡萄汁加入体外培养的人前列腺癌PC-3细胞,检测葡萄汁对PC-3细胞的毒性作用,用单细胞凝胶电泳测其对DNA损伤作用,流式细胞术测细胞凋亡,免疫组化法测凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达。

结果3种剂量的葡萄汁能抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖;DNA迁移长度与彗星细胞拖尾率逐渐增高,拖尾细胞率最高为71%;能诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡,细胞凋亡率分别是14.5%3、2.1%和40.5%,促凋亡基因Bax表达率分别是36.8%、50.4%和64.8%;抑凋亡基因Bcl-2表达率依次为39.1%、25.0%和12.4%。

结论葡萄汁可抑制人前列腺癌PC-3细胞增长,诱导其细胞凋亡,能上调促凋亡基因Bax的表达,下调抑凋亡基因Bcl-2的表达。

【总页数】4页(P373-376)【关键词】葡萄汁;人前列腺癌PC-3细胞;细胞凋亡【作者】罗琼;王丽红;杨明亮;崔晓燕;庞雅琴;阎俊【作者单位】武汉大学公共卫生学院营养与食品卫生学系【正文语种】中文【中图分类】R114;R285.5【相关文献】1.苦参碱抑制人雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3细胞增殖和诱导凋亡机制的研究 [J], 张鹏;王子明;纪宗正;种铁;黄辰;高彩霞2.微小RNA-21对前列腺癌PC-3细胞增殖的影响及对程序性细胞凋亡因子4表达的调控作用 [J], 李天;孙祥宙;江先汉;黄奕桥3.β干扰素基因修饰人骨髓间充质干细胞对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响[J], 詹以安;王共先;汪泱;胡红林;傅斌4.葡萄汁对人前列腺癌PC-3细胞抑制作用 [J], 王丽红;杨明亮;崔晓燕;张晋卿;赖晨挺;邵细琴;江敬红;罗琼5.葡萄汁对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响 [J], 罗琼;庞雅琴;杨明亮;阎俊;王丽红;崔晓燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

糖皮质激素诱导肿瘤细胞抗凋亡机制的研究进展

糖皮质激素诱导肿瘤细胞抗凋亡机制的研究进展摘要】糖皮质激素指的是人体的肾上腺分泌出的一类甾体激素，组织成分比较复杂，皮质醇占到70.8%左右，具有调节糖、脂肪等广泛的生理作用，另外还具有抗炎、抗毒、抗休克等作用。

在临床上，糖皮质激素不仅诱导成熟的淋巴瘤细胞、肝癌细胞以及白血病细胞等凋亡，而且对未成熟的肿瘤细胞同样有效。

根据相关研究表明，糖皮质激素作用于肿瘤细胞主要是通过与体内的糖皮质激素手受体相结合，激活体内与肿瘤细胞凋亡的一系列信号通路。

对糖皮质激素诱导肿瘤细胞抗凋亡机制进行深入的研究对于治疗改疾病具有重要的作用和意义。

【关键词】糖皮质激素肿瘤细胞凋亡机制研究进展【中图分类号】R73-3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）23-0349-02Research Progress of glucocorticoid-induced tumor cell anti-apoptotic mechanism 【Abstract】 Glucocorticoid (glucocorticoid, GCS) bundle with a class of steroid hormone secretion by the adrenal cortex, cortisol, have to adjust the sugar, fat, and protein biosynthesis and metabolism, but also inhibits the immune response, anti-inflammatory, anti-drug and anti-shock effect. In clinical practice, the glucocorticoid is not only induced lymphoma cells mature, apoptosis of hepatoma cells and leukemia cells, etc., but equally effective in the tumor cells of immature. Research indicates that the glucocorticoid effect on tumor cells mainly by the glucocorticoid hand vivo receptor combination, a series of signaling pathway activation in vivo tumor cell apoptosis. Glucocorticoid-induced tumor cell anti-apoptotic mechanism has an important role and significance of in-depth research for treatment change disease. 【Keywords】 glucocorticoid tumor cell anti-apoptotic mechanism Research Progress糖皮质激素（glucocorticoid，GCS）指的是人体的肾上腺分泌出的一类甾体激素，组织成分比较复杂，皮质醇占到70.8%左右，具有调节糖、脂肪等广泛的生理作用，另外还具有抗炎、抗毒、抗休克等作用。

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第二军医大学学报Acad J Sec Mil Med Univ　2006Aug ;27(8)・885　・・研究快报・糖皮质激素抑制人前列腺癌PC 23细胞系增殖的可能机制王　燕,陈玉霞,刁　飞,卢　建3(第二军医大学基础医学部病理生理学教研室,上海200433)[摘要]　目的:观察地塞米松对前列腺癌PC 23细胞中转录因子N F 2κB 及其下游靶基因cyclinD1的调节作用,探讨其抑制PC 23细胞增殖的可能机制。

方法:M T T 法检测地塞米松对PC 23细胞增殖的影响;转染和报告基因的方法比较多种肿瘤细胞中NF 2κB 的基础转录活性并检测地塞米松对PC 23细胞N F 2κB 转录活性的调节;Western 印迹法检测地塞米松对PC 23细胞cyclinD1蛋白表达的影响。

结果:地塞米松抑制PC 23细胞的增殖;PC 23细胞中N F 2κB 处于组成型激活状态,地塞米松抑制PC 23细胞中转录因子N F 2κB 的转录活性;地塞米松下调PC 23细胞中cyclinD1蛋白的表达。

结论:地塞米松抑制前列腺癌PC 23细胞的增殖,这可能与其抑制转录因子N F 2κB 的转录活性及其下游的靶基因cyclinD1的蛋白表达有关。

[关键词]　地塞米松;前列腺肿瘤;细胞增殖[中图分类号]　R 737.25 [文献标识码]　A [文章编号]　02582879X (2006)0820885203Inhibitory effects of dexamethasone on grow th of human prostate cancer cell line PC 23:the possible mechanismWAN G Yan ,CH EN Yu 2xia ,DIAO Fei ,L U Jian 3(Department of Pathophysiology ,College of Basic Medical Sciences ,Second Military Medical University ,Shanghai 200433,China )[ABSTRACT ]　Objective :To investigate the regulatory effect of dexamethasone on N F 2κB and its target gene cyclinD1in humanprostate cancer cell line PC 23,so as to explore the anti 2proliferation mechanism of dexamethasone.Methods :The inhibitoryeffects of dexamethasone on growth of PC 23cells were determined by M T T.The basic transcriptional activity of N F 2κB in many kinds of tumor cells and the effects of dexamethasone on the activation of PC 23cell N F 2κB were determined by reporter gene as 2say.The expression of cyclinD1protein was determined by Western blots.R esults :Dexamethasone inhibited the growth of PC 23cells and N F 2κB was constitutively activated in the PC 23cells.Dexamethasone also inhibited the activation of NF 2κB anddown 2regulated the expression of cyclinD1protein in PC 23cells.Conclusion :Dexamethasone can inhibit cell growth of prostatecancer cell line PC 23,which might be related to the inhibitory effect of dexamethasone on the transcriptional activation of N F 2κBand cyclinD1protein.[KE Y WOR DS]　dexamethasone ;prostatic neoplasms ;cell proliferation[Acad J Sec Mil Med Univ ,2006,27(8):8852887][基金项目]　国家自然科学基金(30470671).Supported by National Natural Science Foundation of China (30470671).[作者简介]　王　燕,硕士.3Corresponding aut hor.E 2mail :lujian326@ 国内外研究发现,糖皮质激素(glucocorticoid ,GC )能通过诱导T GF 2β1[1]和对细胞周期G 1期的阻滞[2]抑制细胞的增殖,但作用机制仍然不甚清楚。

转录因子N F 2κB 在多种肿瘤细胞中具有促进增殖和抑制凋亡的作用[3],但在雄激素非依赖性前列腺癌(A IPC )细胞如PC 23中,N F 2κB 是否介导了Dex 对该细胞增殖的抑制作用并未见报道。

本研究主要观察人工合成的GC ———地塞米松(dexamet hasone ,Dex )对PC 23细胞N F 2κB 转录活性的影响,以进一步揭示GC 抑制细胞增殖的机制。

1　材料和方法1.1　材料　含有转录因子N F 2κB 反应元件(2个拷贝)的荧光素酶(luc )报告基因质粒p G L32N F 2κB 2luc 由我校基础医学部免疫学教研室徐红梅博士馈赠[4];内参照p RL 2T K 2Renilla 2luc 质粒、双荧光素酶检测试剂盒、Dex 以及小鼠抗兔A P (碱性磷酸酶)标记的二抗购自Sigma 公司;小牛血清购自PAA 公司,cyclinD1一抗购自NeoMarkers 公司。

1.2　细胞及细胞培养　A IPC 细胞株PC 23(来源于人前列腺癌骨转移组织),人卵巢癌细胞株HO 28910,人宫颈癌细胞株HeLa ,人肝癌细胞株SMMC 27721,胰腺癌细胞株SW 21990常规培养于含10%小牛血清的RPM I 1640培养基中,在37℃、5%CO 2培养箱中孵育,每周传代1～2次。

1.3　细胞瞬时转染　按Lipofectamine TM 2000转染试剂盒说明书,PC 23细胞(2×105/孔)接种于24孔培养板,24h 内共转染400ng p G L32N F 2κB 2luc 质・886　・第二军医大学学报　2006年8月,第27卷粒和1ng p RL2T K2Renilla2luc质粒。

其他肿瘤细胞的处理同PC23细胞。

6h后换以含1%去激素血清的RPM I1640培养基,37℃恢复6h,0、0.1、1、10、100、1000nmol/L Dex分别处理18h,或者100 nmol/L Dex处理0、4、8、12、18、24h,对照细胞加与Dex等体积的无水乙醇。

双荧光素酶检测系统检测荧光素酶的活性。

1.4　细胞增殖实验(M T T法)　PC23细胞(1×104/孔)接种于24孔板内,无血清RPM I1640培养基饥饿细胞24h后,分别换成含5%去激素血清和0、1、10、100nmol/L Dex的培养液,对照细胞加与Dex等量的无水乙醇,每一浓度设4个平行孔。

隔日换液,细胞分别培养2、4、6d后,加300μl含5 mg/ml M T T溶液(30μl)的培养液,继续培养4h,弃去上清,加DMSO300μl每孔,振荡混匀后用酶联检测仪检测570nm波长处的D值。

1.5　Western印迹法　PC23细胞接种于6孔板,同上用0、0.1、1、10、100、1000nmol/L Dex处理细胞24h,100nmol/L Dex处理细胞0、4、8、12、24、36 h,裂解液裂解细胞后超声,10000r/min离心10 min,得上清液为待检蛋白样品,沸水浴加热上清液使样品变性,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳后转膜至硝酸纤维膜上,然后与一抗反应过夜,免疫复合物与A P标记的兔二抗反应并显色。

1.6　统计学处理　数据用 x±s表示,所有实验至少重复3次,两两比较用t检验。

2　结　果2.1　Dex抑制人前列腺癌PC23细胞的增殖(M T T 法)　与对照细胞相比,1、10和100nmol/L Dex在第6天对PC23细胞的增殖抑制率分别是(15.5±0.6)%、(24.9±0.7)%、(45.4±0.8)%,均有显著性差异(P<0.01)。

见图1。

图1　Dex抑制人前列腺癌PC23细胞的增殖Fig1　Dex inhibited grow th of PC23cells3P<0.05,33P<0.01vs control group;n=4, x±s 2.2　PC23细胞中N F2κB基础转录活性的检测　PC23细胞N F2κB的基础转录活性分别是卵巢癌HO28910细胞、宫颈癌HeLa细胞、肝癌SMMC2 7721细胞和胰腺癌SW21990细胞的15.1、13.2、8.8和2.1倍,这表明PC23细胞中N F2κB处于组成型激活状态。

2.3　Dex抑制PC23细胞中N F2κB的转录活性　Dex能够以时间和浓度依赖的方式抑制N F2κB报告基因的转录活性,100nmol/L Dex处理细胞18 h,N F2κB的转录活性抑制率为(38±1.8)%(P< 0.01)。

2.4　Dex抑制PC23细胞中cyclinD1的表达　Dex 能够以时间和浓度依赖性方式抑制cyclinD1蛋白的表达。

其中,100nmol/L Dex处理24h组的cy2 clinD1的表达量为对照的(71±1.3)%(P<0.05)。

见图2。

图2　Dex以浓度依赖(A)和时间依赖(B)的方式下调PC23细胞中cyclinD1蛋白的表达Fig2　Dex dow n2regulated expression of cyclinD1protein ina dose2(A)and time2(B)dependent m anner in PC23cells　126:0,0.1,1,10,100,1000nmol/L Dex,respectively;7212:0,4, 8,12,24,36h after treat ment of Dex,respectively3　讨　论 PC23细胞是雄激素非依赖性前列腺癌(A IPC)细胞。