实验实训三 植物组织培养中常用设备和仪器的使用
植物组织培养实验室的组成仪器设备及基本操作
植物组织培养实验室的组成仪器设备及基本操作1. 引言植物组织培养实验室是进行植物细胞培养、植物组织培养和植物遗传转化等研究工作的重要场所。
该实验室的组成仪器设备和基本操作对于顺利进行植物组织培养实验至关重要。
本文将详细介绍一个典型的植物组织培养实验室的组成仪器设备及其基本操作。
2. 仪器设备2.1. 无菌操作台无菌操作台是植物组织培养实验室中最关键的设备之一，用于保持操作区域的无菌条件。
它通常由一个工作台和一个无菌工作区组成。
无菌操作台配备了紫外线灯和高效过滤器，可以杀灭空气中的微生物，并防止外界空气中的微生物进入无菌工作区。
2.2. 培养箱培养箱是用于培养和生长植物组织的设备。
它可以提供恒温、恒湿和光照条件，从而满足不同植物组织培养实验的要求。
培养箱通常配备了温度控制器和湿度控制器，可以精确地控制环境参数。
2.3. 培养基配制设备在植物组织培养实验中，需要制备不同种类的培养基用于培养和生长植物组织。
培养基配制设备包括天平、培养基配制器和pH计。
天平用于精确称量各种培养基成分的质量，培养基配制器用于自动配制培养基，pH计用于测量培养基的酸碱度。
2.4. 高压灭菌器高压灭菌器用于对实验室的培养器具、培养基和试剂进行高温高压的灭菌处理。
灭菌是植物组织培养实验的基本操作之一，可以有效杀灭培养器具和培养基中的微生物，保证实验的无菌性。
2.5. 显微镜显微镜是用于观察和分析植物组织培养过程中的细胞和组织结构的设备。
它可以放大样本，使研究人员能够观察细胞中的微小结构。
显微镜通常配备了不同倍数的物镜和目镜，以满足不同观察需求。
2.6. 高速离心机高速离心机用于分离植物组织培养中的混合物。
在植物组织培养实验中，常常需要将悬浮细胞和培养基分离以获得纯净的细胞。
高速离心机通过离心力将混合物中的悬浮细胞沉降到管底，从而实现分离的目的。
3. 基本操作3.1. 灭菌操作在进行植物组织培养实验之前，必须对实验室的培养器具、培养基和试剂进行灭菌处理，以确保实验的无菌性。
植物组织培养实验室组成仪器设备及基本操作
显微镜的使用方法包括样品 制备、观察和拍照等。
显微镜的维护和保养包括清 洁、校准和更换灯泡等。
摇床
作用：用于培 养植物组织， 促进细胞分裂
和生长
结构：主要由 底座、摇杆、 摇板、夹具等
组成
操作方法：将 植物组织放入 摇板，调整摇 杆高度，设定 转速和时间，
开始摇动
注意事项：摇 动过程中避免 剧烈震动，以 免影响植物组
结构：主要由箱体、加热器、制冷器、加湿器、光照系统等组成
操作：设置温度、湿度、光照等参数，将植物组织培养材料放入培养箱，定期观察并记录生 长情况
注意事项：保持培养箱清洁，定期更换培养基，避免污染和交叉污染。
灭菌锅
作用：对培养基、 器皿等进行灭菌 处理
原理：利用高温 蒸汽对培养基、 器皿等进行灭菌 处理
细胞培养与观察
培养基的制备：选择合适的培养基，按照配方进行配制
细胞接种：将细胞接种到培养基中，进行培养
细胞观察：使用显微镜观察细胞生长情况，记录细胞形态和生长速度
细胞分离与纯化：使用细胞分离技术，如差速离心法、流式细胞术等， 将细胞进行分离和纯化
细胞培养条件的优化：调整培养条件，如温度、pH值、气体环境等， 以获得最佳的细胞生长效果
恒温水浴锅：用于加热 和冷却培养基
03
基本操作流程实验准备准备培养基： 选择合适的培 养基，如MS培 养基、B5培养
基等
准备培养皿： 选择合适的培 养皿，如玻璃 培养皿、塑料
培养皿等
准备无菌操作 台：确保操作 台无菌，避免
污染
准备培养室： 确保培养室温 度、湿度、光 照等条件适宜，
避免污染
组织取材与消毒
止污染和感染
试剂：如激素、抗生素 等，用于调节植物组织
植物组织培养实验室组成仪器设备及基本操作精要
大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、 Mg、S 分别占植物干重的百分数为18％、 10％、70％、0.3%、0.07％、0.3%、0.3 ％、0.07%、0.05％。
微量元素：Fe、B、Mn、Zn、Mo、Cu、 Co、Cl等。
微量元素中，铁的用量较大，它对叶绿 素的合成起重要作用，由于在较高pH下， FeCl3极易形成Fe（OH）3沉淀，难以被 吸收，所以多用乙二胺四乙酸二钠盐与 硫酸亚铁形成的螯合物，并且单独配制。
（二）有机成分：
主要包括各种维生素和氨基酸
常用的维生素：硫胺素（VB1）、吡哆醇（VB6）、烟酸 （VB3）、泛酸钙（VB5）、生物素、钴胺素（VB12）、叶 酸等。
c.不少培养基颜色加深。
d.体积和浓度有所变化。
e.营养成分有时受到破坏。
3、不耐高温材料的灭菌：
采用过滤灭菌，如IAA、ZT、天然有机 添加物等。
4、外植体的表面灭菌：
采用70－75％乙醇（10-30秒）、有效 氯1％的次氯酸钠（5-30分钟）、0.1－ 0.2%的氯化汞（2-15分钟）等杀菌剂中加 入几滴吐温－20或80（Tween－20或80） 效果较好。
37.3
组成成分
FeSO4·7H2O CuSO4·5H2O
蔗糖
pH 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇 激动素 2,4－D 盐酸硫铵
数量(mg/l) 27.8 0.025 40 5.5 100 1.0 1.0 0.1
0.1－1.0 10
表3 N6培养基的组成和配方
组成成分
KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O KH2PO4 (NH4)2SO4 KI
植物组织培养所用器具
组织培养过程中所用到的用具在植物组织培养过程中，使用的用具类型多样，如培养基配置用具、培养用具、接种用具等。
在使用这些用具时，必须了解它的基本用途并学会它们的基本用法。
1、培养基配置用具（1）烧杯用于盛放、溶解化学药剂等，常用的规格有50ml、100ml、200ml、250ml、500ml、1000ml等。
（2）容量瓶用于配制标准溶液，常用的规格有50ml、100ml、500ml、1000ml 等。
（3）量筒用于量取一定体积的液体，常用的规格有25ml、50ml、100ml、500ml、1000ml等。
（4）刻度移液管用于量取一定体积的液体，常用的规格有1ml、5ml、10ml、20ml等。
（5）吸管用于吸取液体，调节培养基的pH值及溶液定容时使用。
（6）玻璃棒用于溶解化学药剂时搅拌时用。
2、培养用具（1）试管植物组织培养中常用的一种玻璃器皿，适合少量培养基及实验不同配方用。
选用1.0cm*15cm和3.0cm*20cm规格的试管。
（2）三角瓶植物组织培养中常用的培养容器，适合各种培养，如固体培养或液体培养，大规模或一般的少量培养。
规格有50ml、100ml、150ml、200ml、500ml等，其口径均为25mm。
三角瓶的好处是采光好，瓶口较小不易失水。
3、接种用具（1）酒精灯用于金属接种工具的灭菌。
（2）手持喷雾器盛装70%的酒精，用于接种器材、外植体和操作人员手部等的表面灭菌。
（3）镊子使用于转移外植体和培养物，接种操作及继代培养时移取织物材料用。
（4）剪刀用于剪取外植体材料及接种时用。
3、小型器具移液枪用于配制培养基时添加各种母液及吸取定量植物生长调节物质溶液。
有固定式和可变式两种，规格有25、100、500、1ml、5ml、10ml。
微波炉、电炉等加热器具用于加热生化试剂时，溶解琼脂。
4、仪器（1）酸度计植物组织培养基的pH值的调整十分重要。
因此，配制培养基时，需要用酸度计来测定和调整pH值。
植物组织培养的基本条件—组培常用的仪器设备及使用
目录
基本仪器与设备 无菌操作设备 培养器皿及实验工具
灭菌设备 材料培养设备
一、基本仪器与设备
1、天平
天平存放的环境要求： 干燥、无震动、无腐蚀性药品的地方，避免移动，天平匣内应放硅胶或其他 中性干燥剂以保持干燥（如万分之一天平）。 A.电子天平 精度高、称量快。
恒温水浴锅
恒温箱
4、培养箱
生化培养箱 光照培养箱
生化培养箱Βιβλιοθήκη 光照培养箱5、解剖镜
用于剥离茎尖。 多采用双筒实体解剖镜，在分离茎尖等较小组织时，便于观察、操作，通常 放大5-80倍。
6、显微镜
双目体视显微镜用的较多，多用于剥离茎尖以及隔瓶观察内部植物组织生长 情况。
双目体视显微镜
生物显微镜，用以观察花粉发育时期以及培养过程中细胞核的变化 生物显微镜
A. 烘箱类 有些材料需要烘干，或器皿需要干燥，实验室需要配备烘干设备。烘箱和干 燥箱差别不大，主要在烘干时间上以及强度上有差异。 迅速干燥，在烘箱内烘干，80-100℃为宜。 干热灭菌，温度升至150-180℃，持续1-3h。 培养物分析，在80℃条件下烘干。
B. 恒温箱类 恒温箱用于原生质体和酶制剂保温，也用于暗培养。 恒温箱内装上日光灯可进行温度及光照小型实验。 恒温水浴锅可用于超低温保存的材料的解冻实验。
B.分析天平
精度为0.0001g，用来称取微量元素和植物生长调节物质及微量附加物。 选择平稳，干燥，没有腐蚀性药品和水气的地方放置。
2、冰箱和冰柜
A.普通冰箱 很多材料需要提前配制（如母液），于冰箱内保存。 B.低温冰箱 某些试剂、药品和母液需要低温保存，有些材料需低温处理。
3、烘箱、干燥箱、恒温箱和恒温水浴锅
植物组织培养常用设备及价格参考
垂直标准型
PLT-DDC
980x720x1620mm,单人单面，垂直送风洁 净度：100级送风风速：0.3-0.6m/s,高档不 锈钢台面，带紫外线灯。无隔板，进口风机，冷 轧板三道酸化工序精制烤漆。
6100
PLT-SDC
1500x720x1620,单人单面，垂直送风 洁净 度：100级送风风速：0.3-0.6m/s,高档不锈 钢台面，带紫外线灯。无隔板，进口风机，冷轧 板三道酸化工序精制烤漆。
PLT-DDS
900x750x1430mm，单人单面，水平送风洁 净度：100级送风风速：0.3—0.6m/s,高档不 锈钢台面，带紫外线灯。无隔板，进口风机，冷 轧板三道酸化工序精制烤漆。
5600
PLT-SDS
1500x700x1430mm,双人单面，水平送风， 洁净度：100级送风风速：0.3-0.6m/s,高档 不锈钢台面，带紫外线灯。无隔板，进口风机， 冷轧板三道酸化工序精制烤漆。
植物组织培养设备 一、称量配药
1.各种封口膜和实验室常用耗材
产品名称
规格
价格
备注
无菌培养容器封口膜
12*12 cm，500张/袋
70
16*16 cm，500张/袋
80
琼脂粉
强度1200+g/cm2，每升用量4.5g
135/1kg
强度1300+g/cm2，每升用量3.5g
155/1kg
干粉培养基
MS、B5、White、N6、1/2MS
称量范围0-5000g，精度5g
500
3.蒸馏水器、纯水机、超声波清洗器、搅拌器、灌装机
产品名称
规格
单价
备注
蒸馏水器
植物组织培养的基本设备和无菌操作培训
植物组织培养的基本设备和无菌操作培训植物组织培养是一种重要的生物技术，它可以用来繁殖纯种植物、快速繁殖难以繁育的植物、生产无性系等。
在进行植物组织培养实验时，需要一些基本的设备和无菌操作培训，以确保实验的准确性和成功率。
首先，进行植物组织培养实验需要准备一个无菌工作台。
无菌工作台是用于提供无菌工作环境的设备，它可以有效地防止外界微生物的污染。
在工作台上进行操作时，可以通过UV灯消毒空气和工作台表面，以确保实验材料的无菌状态。
其次，植物组织培养实验需要使用无菌培养箱。
无菌培养箱是专门用来培养植物组织的设备，它可以提供恒温、恒湿和无菌的环境，保证植物组织的生长和繁殖。
在培养箱中进行实验时，需要定期清洁、消毒和更换无菌培养基，以保证培养环境的无菌性。
此外，进行植物组织培养实验还需要使用一些基本的无菌操作器具，如无菌吸管、无菌移液器、无菌培养瓶等。
这些器具可以帮助实验人员在无菌条件下进行操作，避免外界微生物的污染。
对于实验人员来说，他们需要接受一定的无菌操作培训，以掌握正确的无菌操作技能。
在无菌操作过程中，实验人员需要穿戴无菌手套、口罩和无菌服装，严格按照无菌操作规程和流程进行操作，避免外界微生物的污染。
总的来说，植物组织培养的基本设备和无菌操作培训是非常重要的，它们可以帮助实验人员在无菌条件下进行植物组织培养实验，保证实验的准确性和成功率。
只有做好无菌操作，才能获得高质量的植物组织培养材料，为后续的应用研究和生产提供可靠的支持。
植物组织培养是一项重要的生物技术，在农业、园艺和植物育种等领域具有广泛的应用。
通过植物组织培养，可以获得大量无病害的植物材料，实现植物繁殖、植物株型改良、基因转化等目的。
然而，植物组织培养实验过程中，需要一定的无菌操作技能和必要的设备，才能保证培养物的无菌状态，从而确保实验的准确性和成功率。
在进行植物组织培养实验时，无菌工作台是必不可少的设备之一。
无菌工作台能够提供无菌环境，有效地阻止外界微生物的污染。
组培室常用仪器设备的用途和使用方法(下)
常规的植物组织培养需要大量的仪器设备，如电子天平、高压灭菌器、烘箱、酸度计、超净工作台、光照培养箱、电蒸馏水器等。
下面我来介绍一下常用组培仪器设备的功能和使用。
1 超净工作台在投资少的情况下，可以用接种箱来代替超净工作台，但是超净工作台具有操作方便、舒适、准备时间短、工作效率高等优点。
特别是对于工厂化生产，是非常理想的设备。
1.1 用途用于组培过程中的接种转移等无菌操作的平台。
1.2 工作原理超净工作台功率在145-260W左右，它装有小型鼓风机，使空气穿过一个前置过滤器，在这里把大部分空气尘埃先过滤掉，然后再使空气穿过一个细致而高效的过滤器，它除去大于0.3微米的尘埃、细菌和真菌孢子等。
超净空气的流速为每分钟24-30米，这已足够防止附近空气袭扰而引起污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯对接种工具等的灼烧消毒。
在这样的无菌条件下操作，就可以保证无菌材料在转移接种过程中不受污染。
1.3 使用方法1.3.1 接通电源，打开紫外灭菌灯，并打开风机。
1.3.2 20分钟后可关闭紫外灯，用75%的酒精棉球擦拭双手和工作台，开始进行无菌操作。
1.3.3 使用完后，把各种废弃物品从工作台清除，兵打开紫外灯灭菌20-30分钟，关闭电源。
2 光照培养箱光照培养箱内有温度调节器，还配有光源。
2.1 用途用于植物材料的培养。
2.2 使用方法2.2.1 把接种后的培养材料放入培养箱内的搁架上，注意保持出风口畅通。
2.2.2 接通电源，按下电源开关。
2.2.3 按下温度控制仪的“设置”键，设定培养温度。
2.2.4 按下光照控制仪的“设置”键，设定光周期，即分别设定开灯和关灯时间，然后设定光照强度即可。
3 烘箱烘箱也称恒温鼓风干燥箱。
3.1 用途温度保持80-100℃用于干燥洗净的玻璃器皿，温度保持170℃用于干热灭菌。
3.2 使用方法3.2.1 把要烘干的物品放置在烘箱的搁架上，关紧烘箱门，接通电源。
3.2.2 设定烘干温度和时间。
组培实验仪器的设备和耗材
组培实验仪器的设备和耗材一、实验环境专业的植物组培实验室是植物组织培养成功的关键因素之一。
植物组织培养的整个过程都必须要在无菌的环境中进行，从外植体的消毒、修剪、接种到后期的无菌苗培养，都离不开无菌的实验环境，一个专业而且洁净的植物组培实验室是植物组培实验成功不可缺少的条件，它可以很大程度的降低组培操作和无菌苗培养过程中的污染几率。
二、实验仪器设备和耗材1.超净工作台：是一种提供局部高洁净度工作环境通用性较强的空气净化设备，是植物组织培养中的核心仪器，可以提供的洁净程度可达到百级。
没有超净工作台提供的无菌环境，植物组培的成功率几乎为零。
在常规的实验室环境内，是无法进行植物组织培养操作的，即使完成实验操作，最后培养的无菌苗也会被外界的微生物污染。
川布兰超净工作台具有防紫外线伤害装置，是国家的专利保护产品。
此装置能防止学生在操作不当忘记关闭紫外灯进行实验的情况下，免受紫外灯照射造成伤害，是植物组织培养成功的必备“武器”。
2.高压蒸汽灭菌锅：是植物组织培养实验的另一核心仪器，在植物组织培养的过程中进行培养基、接种仪器的灭菌，使其达到无菌的目的。
在2012北京川布兰组培大赛中，由于部分学校没有购买高压蒸汽灭菌锅，而是使用普通家用高压锅对培养基进行灭菌，(家用高压锅的灭菌温度未能达到完全杀死细菌的温度)，最后实验结果表明，其污染的概率达到了70%以上，致使没能完成本次组培大赛;而大部分使用高压灭菌锅灭菌培养基并结合超净工作台使用的学校，能有效的把污染几率控制在10%以下，有的学校甚至达到零污染，总而言之，超净工作台和高压灭菌锅是植物组织培养成败的决定性仪器，而选择专业的组培必备仪器更有利于实验的开展和成功。
3.微量可调移液器及吸头：量取微量液体的实验工具，用于量取少量和微量的激素母液，调节各种培养基中所需要的激素浓度。
微量可调移液器在其他实验中的应用率同样较高，而有些实验要求所用仪器保证无菌，即可以进行高温高压灭菌和紫外线的照射，传统的移液器是无法完成的，而由川布兰的微量可调移液器在设计开发时充分考虑到了这点。
实验室常用仪器及其使用
实验室常用仪器及其使用实验室是科研和教学中必不可少的环节，为了进行实验，常常需要使用各种仪器设备。
下面是一些实验室常用仪器及其使用方法的介绍。
1.显微镜显微镜是实验室中最常用的仪器之一，用于放大和观察微小的细胞、组织和器官。
使用显微镜时，首先要将待观察的物品放置在显微镜平台上，并调节物镜和目镜的放大倍数，使画面清晰可见。
调节焦距时，可通过轻轻调节焦距旋钮使清晰焦点出现，然后再微调。
如果需要观察透明样品，可以使用相差显微镜或相差干涉显微镜来增加对比度。
2.电子天平电子天平用于精确称量物质的质量。
使用电子天平时，首先将称量纸放在天平平台上，并调零天平以消除秤盘上的重量。
然后将待称量的物质放在称量纸上，并读取天平显示的质量数值。
为了确保精确度，应该注意避免气流干扰和静电干扰。
3.pH计pH计用于测量溶液的酸碱性。
使用pH计时，首先将电极插入待测溶液中，并等待数秒使电极与溶液达到平衡。
然后读取pH计显示屏上的pH 值。
在使用pH计时，应该注意将电极清洗干净，并校准pH计以确保准确度。
4.离心机离心机用于分离混合物中的固体和液体。
使用离心机时，首先将待分离的混合物放在离心管中，然后将离心管放在离心机内。
设定离心机的转速和时间，然后启动离心机。
转速过高可能会造成离心管破裂，需要注意安全。
完成离心后，谨慎取出离心管。
实时PCR仪用于检测和量化DNA的存在和浓度。
使用实时PCR仪时，首先将待检测的DNA样品和特定的引物和荧光探针混合，并分配在PCR管或微孔板中。
然后将PCR管或微孔板放置在实时PCR仪中，并设置所需的PCR程序。
运行PCR程序后，实时PCR仪会对样品进行温度循环，并测量荧光信号的强度来评估目标DNA的存在和浓度。
6.气相色谱仪（GC）气相色谱仪用于分析和鉴定化合物的组成。
使用GC时，首先将待测试样品注入色谱柱，并设置所需的操作参数，如载气流速和温度梯度。
然后将样品注入设备并开始测试。
GC会将样品中的化合物分离并传送到探测器中，通过探测器测量并记录化合物的信号。
实验实训三植物组织培养中常用设备和仪器的使用.doc
实验实训三植物组织培养中常用设备和仪器的使用一、目的要求通过实训，使学生掌握植物组织培养的主要设备和仪器的使用方法、操作规程及保养方法等。
二、仪器和设备电子分析天平、超净工作台、高压灭菌器、酸度计等。
三、方法步骤（一）电子分析天平（感量O.OOOlg）以FA/jA型多功能电子天平为例说明电子天平的使用方法，这里重点介绍几个常用功能键的操作方法。
1. 天平的放铬天平应路于稳定的工作台上，避免震动、阳光照射和气流干扰。
2. 操作方法（1）天平调平在使用前观察水平仪，如水平仪水泡偏移，需调整水平节脚，使水泡位于水平仪中心。
（2）开机接通电源。
天平通电后就开始工作（显示器未工作），通常需预热以后，方可开启敁示器进行操作使用。
（3）开启显示器键（ON）只要轻按一下ON键，显示器全亮“土8888888%”对显示器的功能进行检查，约2秒后显示天平的型号，例如：“-1004-”，然后是称量模式“O.OOOOg”。
（4）清零、去皮键（TAR）铬称量容器或称量纸于秤盘上，显示出容器或称量纸的质量，然后轻按TAR键，显示消隐，随即显示“O.OOOOg”，容器或称量纸质量值已去除，即去皮重。
(5) 称量用试剂勺轻轻将试剂铬于称量容器或称量纸中，称取所需要的量。
试剂不可掉在容器或称量纸外。
(6) 关闭显示键移去称量容器或称量纸，轻按OFF键，显示器熄灭，淸扫电子天平。
若要较长时间不再使用天平，应从电源插座上拔下插头。
(二)梅特勒-托利多320pH计1. 设铬校准点要获得最精确的pH值，必须周期性的校准电极。
320pH 计允许选择一组(三种)校准缓冲液。
校准时可采用所选之缓冲液组中的两种溶液。
有三组缓冲液供选择：组l(b=l)： pH 4.00、7.00、10.00;组 2 (b=2)： pH 4.01、7.00、9.21；组 3 (b=3)： pH 4.01、6.86、9.18。
按下列步骤选择校准缓冲液：按“on/off”关闭显示屏。
植物组织培养实验设备及培养条件
植物组织培养实验设备及培养条件引言植物组织培养技术是一种通过培养植物细胞、组织和器官的方法，以便进行植物生长、繁殖和遗传改良的技术。
在植物组织培养实验中，适宜的实验设备和培养条件是实现高效培养和增殖的关键。
本文将介绍常用的植物组织培养实验设备以及适宜的培养条件。
实验设备无菌工作台无菌工作台是植物组织培养实验中必不可少的设备之一。
它是一个封闭的工作环境，能够提供洁净的实验条件，防止外源性杂质进入培养环境。
无菌工作台通过空气过滤器过滤空气，并提供紫外线杀菌功能，确保实验操作的无菌性。
培养室培养室是为植物组织培养提供稳定的温度、光照和湿度的环境。
通常，培养室被设置在黑暗的地方，以防止光照对实验结果的影响。
培养室还应配备通风系统，以确保空气流通，并保持合适的湿度和温度。
培养箱培养箱是用于培养植物组织的常见设备。
它提供了一种恒温、恒湿的环境，可以控制温度、湿度和光照条件。
培养箱通常分为两个区域：生长区和照明区。
生长区提供适宜的温度和湿度，而照明区则提供光照。
培养瓶和培养皿培养瓶和培养皿是用来放置植物组织培养基和培养植物组织的容器。
培养瓶通常是透明的塑料或玻璃容器，有通气膜或通气塞以保证氧气和二氧化碳的交换。
培养皿可以用于培养无菌的植物组织块。
培养基配置设备培养基是植物组织培养中必不可少的营养来源。
培养基配置设备包括天平、移液器、pH计等。
天平用于准确称量培养基成分，移液器用于精确添加液体试剂，pH计用于调节培养基的酸碱平衡。
培养条件温度温度是植物组织培养中一个重要的生长因素。
不同的植物组织对温度的要求有所不同。
通常情况下，室温（20-25摄氏度）是适宜的生长温度范围。
对于某些特定植物组织培养，可能需要调节温度以促进生长或诱导分化。
光照光照是植物生长和光合作用的关键因素。
在植物组织培养中，光照条件需要根据具体的实验要求进行调节。
对于光照要求较高的组织培养，可以使用培养箱提供合适的光照强度和周期。
湿度湿度是植物组织培养中另一个重要的环境因素。
植物组织培养实验设计及常用设备的使用与维护
植物组织培养实验设计及常用设备的使用与维护一．实验目的1、熟悉植物组织培养实验室的组成及设备2、掌握植物组织培养实验室的设计要求3、熟悉植物组织培养所需的仪器设备4、能根据要求进行植物组织培养实验室及温室的设计5、能正确操作使用植物组织培养实验室中各种仪器设备及器械二．实验原理植物组织培养是通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
要达到无菌操作和无菌培养，就需要人为创造无菌的环境，使用无菌的器皿及器械，同时还需要人工控制的温度,光照，湿度等培养条件。
无菌环境和培养条件的创造需要一定的设施及设备。
三．实验步骤1.实验室的设计要求功能齐全、布局合理、环境清洁、易于灭菌2.实验室的组成及功能实验室的组成：（1）、准备室，包括洗涤室、药品室、称量室、培养基配制室、灭菌室（2）、接种室（3）、培养室（4）、温室实验室的功能：洗涤室用于玻璃器皿、实验用具的清洗、干燥、培养材料清洗、预处理也可在本室完成。
室内应建造大型水槽和一个或几个浸泡池，水槽最好上一内衬白瓷片的水泥槽，为防止碰坏玻璃器皿，下面可铺一活动的橡胶板。
备有晾瓶架，用于放置刷净的培养器皿，配备有一定数量的周转盘或小推车，用于运输培养器皿。
地面要注意防滑，排水通畅，墙壁要有耐湿、防潮功能。
药品室用于存放各种药品试剂。
室内要求干燥、通风，避免光照，配有药品柜、冰箱等设备。
化学试剂物品分类存放于柜中，有毒物质如升汞需要专人密封保存。
原药可室温下存放，配好的母液，宜置于4℃冰箱中保存。
药品室紧邻称量室较好，便于工作。
称量室进行化学药品的称量。
要求干燥、密闭，无直射光照，避免腐蚀性药品和水气直接接触。
有固定的水磨石平台，安放普通天平、精密天平和分析天平，要有电源插座，最好设计在阴面的房间，这样对怕光药品的保存和称量有利，称量室紧邻培养基配制室较好，以方便配制母液和培养基。
房间较少时，可以与药品室合二为一。
植物病理实验室基本仪器设备及其使用
植物病理实验室基本仪器设备及其使用植物病理实验室常需要进行病原菌的分离、纯化、接种和显微观察等，所需的基本仪器设备，除了本书各有关章节已专门介绍的以外，尚有一些常用的仪器设备。
一、玻璃器皿使用及洗涤(一)常用玻璃器皿的种类及用途1．培养皿倒人适量的固体培养基制成平板，可用于病原菌的分离培养、纯化、鉴定、菌落形态观察等。
是病理实验室中需用量最多的玻璃器皿之一。
一般所用的规格为直径9cm，高1．5cm。
质量，要求皿底要平，明亮无杂色，能耐高温、高压。
2．试管用于分离培养保存菌种，也是病理实验室中需用量最多的器皿之一。
一般所用规格以1．6cmxl3．6em为宜。
试管口以无翻卷的或光滑的为好。
3．三角瓶主要用于盛装培养基和灭菌水，需用量也较多。
所用规格主要为250ml，其次为200ml及50ml。
4．玻璃棒和玻璃管玻璃棒用于配置溶液时的混匀搅拌。
一般使用直径0.5cm左右的玻棒较多，根据需要可配备长短不等的玻棒多个。
玻璃棒和玻璃管还可烧制各种玻璃小用具。
5．滴瓶主要用于盛装各种试剂及染液。
其规格以60ml容量为宜。
有无色透明的和棕色的。
棕色滴瓶用于盛放应避光的试剂。
6．吸管用于吸取各种溶液或菌液。
其规格有0．5ml、1ml、2ml、5ml、lOml等，应各具备一定数量。
有单刻度的移液管和多刻度吸管。
使用时，对于lml以下的吸管都必须将尖端遗留的液体吹人配制溶液的容器中。
lml以上(包括lml)的不应吹出尖端遗留的液体，当液体不再流出时，应使该管尖端紧靠容器内壁一段时间。
7．烧杯用于各种溶液的配置。
100--600ml不同规格的应各具备一定数量。
另外，也应有少量的作为分离材料表面消毒用的lOml烧杯。
8．载玻片用于病原菌的显微检查、临时性或永久性制片。
有两种，一种为普通载玻片，是平的；另一种为凹载玻片，其上有一个或两个凹窝。
普通载玻片以薄而无色的较好，厚而发绿的质量较差。
普通载玻片大小为7．5cm×2．5cm×0．1cm。
植物组织培养的设备与使用方法
植物组织培养的设备与使用方法植物组织培养是在严格的无菌条件下培养植物材料。
要达到无菌操作和无菌培养，就需要认为创造无菌的环境，使用无菌的器具，同时还需要人工控制的温度、光照、湿度等培养条件。
无菌环境和无菌条件的创造需要一定的设备，实验设备因工作的目的、具体的任务和所具有的条件而异。
但大多数采用化学实验室、微生物实验室及医疗上的一些设备、器材和用具。
图1 组培室分区布局1.实验室基本组成a)无菌操作室在植物组织培养中，无菌操作室（clean chamber）是进行植物材料的分离及培养体转移的一个重要场所。
由于植物组织培养需长时间的无菌操作，所以无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。
微生物的培养生长时间短，而植物组织培养短的一个月，长的达几年。
所以，防止细菌和霉菌混入是提高工作效率和影响生产成本的关键。
无菌操作室基本要求是：干净无菌、密闭、光线好。
一般安装滑动门，使空气不致流动，以防外界菌及尘埃的侵入；墙壁光滑平整，地面平坦无逢，便于清洁工作；室内安装紫外灯，以便灭菌，还要有照明装置及灯座，以备临时增加设备之用；室内有超净工作台、移动式载物台（医用平板推车）、广口瓶、试管、三角瓶、酒精灯、接种工具等。
面积根据工作性质可大可小，小的无菌操作室一般一间5~7㎡即可。
接种室内主要安放超净工作台，分单人使用和双人同时连续作业使用两种。
超净台中准备接种用的器具，如尖头小镊子、弯头小镊子、接种针、解剖刀、手术剪刀等，以及酒精灯、储存70%酒精浸泡的棉球的广口瓶等。
如果进行生长点或幼胚等细小结构的分离与接种，还应当在超净工作台内放置一台小型的双目解剖镜，以便观察、解剖和分离细小的外植体。
小型离心机主要用于分离和收集液体培养中的细胞、单花粉及原生质体等，也可用来筛选处于不同发育阶段的胚状体。
无菌室外最好设置预备室作为缓冲间，以防工作人员进出时带进杂菌。
控温光照培养箱可以安放在缓冲间内。
预备室与无菌室之间最好以玻璃相隔，便于观察和参观。
植物细胞组织培养器皿及实验用具
植物细胞组织培养器皿及实验用具1．玻璃器皿在组织培养中应用法硼硅酸盐玻璃器皿或碱性溶解度小的硬质玻璃器皿，因钠玻璃对组织培养的材料来说通常是有毒害的，特殊是在举行长时光重复用法时毒害会更显然，长时光地贮藏母液，也需要用优质玻璃瓶。
培养器皿还要求透光度好，能耐高压高温，能便利放入培养基和培养材料的器皿。
三角瓶(锥形瓶)或烧杯无论是静置培养还是振荡培养均可用到，最常用的规格有100mL、250mL、500mL1L；容量瓶普通用100mL、500mL、1L；量筒普通用25mL50mL、100mL、500mL、1L；刻度移液管普通用1mL、2mL、5mL、10mL；试管普通用2cm×15cm、2．5cm ×15cm、3cm×15cm；试剂瓶(棕色)多采纳100mL、500mL、1000mL；培养皿常用6cm、9cm、12cm等规格；培养瓶外形有长方形和圆形，大小规格不一，其优点是可以从瓶外用显微镜观看植物细胞分裂和生长状况，常用规格有200～500mL；另有玻璃棒、漏斗、玻璃管、注射器等。
瓶口封塞应具有一定的通气性和密闭性，以防止培养基干燥和杂菌污染。
以前封口常用棉塞，但这种封口方法极易污染，且不易保持培养瓶的湿度，现多采纳聚丙烯塑料薄膜封口。
目前，培养器皿和培养基所需的玻璃器皿逐渐被塑料器皿代替，塑料制品具有质轻，透亮、不易破裂、成本低等优点，如培养容器多为平底方盒形，可提高培养空间利用率，并可一层层地重叠起来，从而节省了空间，这种类型的制品多采纳聚丙烯材料制成，能耐高温，可举行高压灭菌。
2．镊子类主要用以举行接种和继代。
按照操作需要有各种类型，组织块、愈伤组织移植不时用长20～25cm长形钝头镊子。
分别植物叶片表皮时，则可用尖头韵钟表镊子和鸭嘴镊子。
尖头镊子则用于撕掉叶片表皮，普通以不锈钢做的镊子较好。
3．剪刀类常用的有眼科剪、手术剪。
长18～25cm的弯头剪，特殊适于深化到试管内剪取茎段、叶片等；坚硬植物枝条的取材和剪取则要用修枝剪。
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实验实训三植物组织培养中常用设备和仪器的使用
一、目的要求
通过实训，使学生掌握植物组织培养的主要设备和仪器的使用方法、操作规程及保养方法等。
二、仪器和设备
电子分析天平、超净工作台、高压灭菌器、酸度计等。
三、方法步骤
（一）电子分析天平（感量0.0001g）
以FA/JA型多功能电子天平为例说明电子天平的使用方法，这里重点介绍几个常用功能键的操作方法。
1．天平的放置天平应置于稳定的工作台上，避免震动、阳光照射和气流干扰。
2．操作方法
（1）天平调平在使用前观察水平仪，如水平仪水泡偏移，需调整水平节脚，使水泡位于水平仪中心。
（2）开机接通电源。
天平通电后就开始工作（显示器未工作），通常需预热以后，方可开启显示器进行操作使用。
（3）开启显示器键（ON）只要轻按一下ON键，显示器全亮“±8888888%”对显示器的功能进行检查，约2秒后显示天平的型号，例如：“-1004-”，然后是称量模式“0.0000g”。
（4）清零、去皮键（TAR）置称量容器或称量纸于秤盘上，显示出容器或称量纸的质量，然后轻按TAR键，显示消隐，随即显示“0.0000g”，容器或称量纸质量值已去除，即去皮重。
（5）称量用试剂勺轻轻将试剂置于称量容器或称量纸中，称取所需要的量。
试剂不可掉在容器或称量纸外。
（6）关闭显示键移去称量容器或称量纸，轻按OFF键，显示器熄灭，清扫电子天平。
若要较长时间不再使用天平，应从电源插座上拔下插头。
（二）梅特勒-托利多320pH计
1．设置校准点要获得最精确的pH值，必须周期性的校准电极。
320pH计允许选择一组（三种）校准缓冲液。
校准时可采用所选之缓冲液组中的两种溶液。
有三组缓冲液供选择：
组1（b=1）：pH 4.00、7.00、10.00；
组2（b=2）：pH 4.01、7.00、9.21；
组3（b=3）：pH 4.01、6.86、9.18。
按下列步骤选择校准缓冲液：按“on/off”关闭显示屏。
按住“mode”且再按“on/off”。
松开“mode”显示屏显示b=1（或选择的缓冲液组）。
按“cal”显示b=2，或b=3，按“read”在缓冲液组显示时选择合适的组别。
即使断电，320pH计也可保留此项设置，不需要经常进行此项设置。
2．校准pH电极如果使用ATC探测器（或含ATC的电极），缓冲液温度会被测定并补偿。
如果不使用ATC探测器，320pH计则认为温度是25℃。
第一点校准：选用与pH7接近的缓冲液校准第一点，将电极放入第一个缓冲液并按“cal”，320pH计在校准时自动确定终点（即显示该缓冲液的pH值），要人工定义终点，按“read”，当到达终止时指示器显示相应的缓冲液pH值。
第二点校准：应使用与被测样品接近的缓冲液进行第二点校准操作。
因植物组织培养的培养基大多数pH范围为5.5～6.0，因此宜选用4.00（或4.01）的缓冲液。
将电极放入第二种缓冲液，按“cal”，并按第一点校准步骤操作。
当显示静止时电极斜率值会简要显示。
注意：校准pH电极的两种缓冲液pH应与设置的校准点缓冲液一致。
例如：设置校准点为组3（b=3），则校准pH电极第一点时缓冲液应为pH6.86，第二点时缓冲液应为pH4.01。
3．测定pH值要测定某一样品的pH，将电极放入样品中并按“read”启动测定过程，小数点会闪动。
显示屏同时显示数字式及模拟式pH值。
4．注意事项
（1）在使用电极之前，将保湿帽从电极头处拧去，并将橡皮帽从填液孔上移走。
（2）在将电极从一种溶液移入另一溶液之前，需要用蒸馏水或下一个被测溶液清洗电极，用吸水纸将水吸干，切勿擦拭电极，否则会产生极化和反应迟缓现象。
（3）小心使用电极，切勿将之用作搅拌器。
在拿放电极时勿触碰电极膜。
电极膜的损伤会导致精度降低和反应迟缓现象。
（4）测定小体积样品时，请确保液体连接部能被浸没。
（5）使用结束时，电极需在填充液内保存，不能使其干燥！
（三）立式压力蒸汽灭菌器
1．结构与特点以上海医用核子仪器有限公司生产的LS-B50L型立式圆形压力蒸汽灭菌器为例说明其使用方法。
灭菌器内装电加热器、灭菌计时器、压力温度自动控制调节器、安全阀、放汽阀、压力温度指示表以及灭菌结束报警器和自动切断加热电源等装置。
2．高压灭菌器操作程序加水-→放置需灭菌器物-→密封-→预置灭菌温度-→设置灭菌时间-→加热（排放冷空气）-→灭菌-→结束。
（1）加水。
打开灭菌器盖，取出灭菌桶，向灭菌容器内注入清洁软化水，水位应浸没容器内水位标志。
（2）堆放。
将被灭菌之物包扎好后，顺序放置在灭菌桶内的筛板上，包与包之间必须
留有适当的空隙。
（3）密封。
灭菌桶放入主体后，将灭菌器盖盖好，按顺序将相对方位的紧固螺栓予以均匀地旋紧，使盖与桶体密合，不宜旋得太紧，以免损坏橡胶密封垫圈。
打开放汽阀，安全阀不可打开。
（4）预置灭菌温度。
预置灭菌温度是通过压力——温度控制器旋钮预置，温度预置范围109℃～126℃。
顺时针方向旋转钮，灭菌温度预置值减小，反之，预置值增大。
满刻度值为126℃，可根据需要预置灭菌温度（见图3-1）。
（5）设置灭菌时间。
按照不同的灭菌物品，将计时器旋钮按顺时针方向旋至所需的时间刻度上。
培养基常用的灭菌时间为20min。
图3-1 灭菌器上的压力控制器、定时器、防汽阀
（6）加热—排冷空气。
首先合上漏电过载保护器开关，将电源按至“开”位置，电源指示灯亮，灭菌器进入等待状态，当预置灭菌温度，预置灭菌时间后，灭菌器自动进入加热程序。
“加热”指示灯亮，电热管工作。
开始加热时应将放汽阀扳手拨至放汽位置（见图3-1），使灭菌器内冷空气排放，待有较急促的蒸汽喷出时，将扳手拨至关闭位。
此时压力表随着加热逐渐上升，指示出灭菌器内的压力。
（7）灭菌。
当灭菌器内蒸汽压力、温度升至预置灭菌温度值时，加热灯由“亮”变“熄灭”，同时计时指示灯“亮”，灭菌计时器自动进入并自锁，开始计时。
此时应微调压力——温度控制器，使灭菌器压力——温度值达到预置值，确保灭菌效果。
在预置灭菌时间内自动进入恒温控制程序，电热管自动间歇工作。
待灭菌时间到达设置时间后，灭菌结束，蜂鸣器发出响声，自动切断加热控制电路。
（8）结束。
将“电源”接至“关”位置。
如消毒灭菌物品为溶液和培养基等，在灭菌结束后，切忌立即放汽，否则会由于压力突然降低而剧烈沸腾，导致瓶子破裂溶液溢出。
应让其自然冷却，容器内压力因冷却而下降至接近“零”位时，再将放汽阀打开，方能打开灭菌器盖取出灭菌桶。
3．注意事项
（1）在灭菌器开始加热时，必须将“放汽阀”扳至放汽位置，使灭菌器内的冷空气逸出，确保良好的灭菌效果。
（2）不同类型的物品最好不要同时灭菌，以免顾此失彼，造成损失。
被灭菌物品的溶液，应灌注在耐高温的玻璃瓶内，切勿灌注太满。
一般灌至瓶容积的1/2～3/4即可，且勿
用没有通孔的瓶塞（如橡胶塞或软木塞等）。
（3）压力温度控制器一旦调定预置值后，一般来说，可重复使用，以后不必再重新调定，但要经常观察比值有否变动。
（4）过载漏电保护试验按钮具有用于检验该保护器是否能正常工作的功能。
此按钮平常不要经常使用，保护器开关也不能作为电源开关使用，以免影响保护器精度。
（5）其他厂家生产的高压灭菌器在使用方法上会有一些不同，使用前必须认真阅读使用说明书，或向实验指导教师请教，且不可盲目操作。
（四）超净工作台
1.结构与特点超净工作台是植物组织培养技术中常用的仪器，是提供局部无菌工作环境的空气净化设备。
工作台由机箱、高效过滤器、可变风量送风机组、工作台面、操作板等几大部件组成。
其工作原理是将室内空气经预过滤器过滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器过滤后从出风面吹出，形成洁净气流。
洁净气流以均匀的断面风速流经工作区，从而形成高洁净的工作环境。
2.使用操作
（1）新安装的或长期未使用的工作台，使用前必须用超净真空吸尘器或不产生纤维的物品认真进行清洁工作。
长期不使用的工作台应拔下电源插头。
（2）使用前应提前20min同时开启紫外灯和风机组工作，工作20min后关闭紫外灯。
要经常用75%乙醇将紫外灯表面和工作区的表面擦干净，保证其灭菌效率。
（3）工作台面上禁止存放不必要的物品，以保持工作区的洁净气流不受干扰。
（4）禁止在工作台面上记录书写，工作时应尽量避免做明显扰动气流的动作。
（5）当需要调节风机风速时，用工作台操作面板上的轻触型开关进行调节（按电压分为五档：140V，150V，160V，180V，220V）。
风机调节电压指示由红、绿双色光排显示。
风速每递增一档，光排增加两格红色替代原来的绿色；反之，风速每递减一档，光排增加两格绿色替代原来的红色显示。
（6）禁止在预过滤器进风口部位放置物品，以免挡住进风口造成进风量减少，降低净化能力。
四、实训报告
1. 天平使用中应注意哪些事项？
2．pH计使用中应注意哪些事项？
3．高压灭菌器使用中应注意哪些事项，如何确定冷空气已排出？
4．超净工作台使用中，应注意哪些事项？。