禽流感病毒分子生物学检测方法
禽流感的流行特点和检测技术
中国动物保健2021.06禽流感（avian influenza ，AI ）的潜伏期一般较短，通常为4～5d 。
发病时精神沉郁，食欲、饮欲降低甚至废绝，被毛散乱，体温升高，趴卧不动，偶有流泪。
头部、面部水肿，脚鳞发紫出血，肉垂和鸡冠呈干枯紫色，甚至坏死。
呼吸困难，咳嗽，听诊呈啰音；下痢，粪便呈淡黄或白色。
出现神经症状，共济失调，不能站立或行走。
并且该病为人畜共患病，处理不好不但会危害养禽业的经济发展，还会危害人类身体健康。
1禽流感的流行病学特点1.1传染源主要由感染或携带禽流感病毒的鸡、鸭、鹅等家禽，野外野生鸟类，特别是迁徙性水禽相互传染所致。
1.2传播途径主要通过病禽的分泌物、排泄物、尸体，污染的饮水、饲料和其他物体，直接或间接接触引发感染，主要感染途径为呼吸道和消化道，以及直接接触病毒毒株感染。
人工接种可通过气溶胶经口鼻内、气管内、眼结膜、腹腔、肌肉、静脉和泄殖腔内等途径使易感禽类感染。
1.3易感动物禽流感病毒在世界范围内广泛分布。
许多家禽、野禽、人类、特别是鸭等迁徙水禽，发生病毒感染的概率比其他禽类高，而家养的鸡和火鸡所发生的流感最为严重。
1.4特点多为大流行，世界范围流行。
过去呈三年小流行，五年大流行。
该病主要在寒流较多，气温变化大的秋冬、冬春交替季节流行。
2禽流感的检测技术2.1血清学诊断技术中和试验中和试验的操作步骤复杂，容易造成材料的浪费，临床上不常用，但其为最原始的病毒检测技术，常用来做标准与其他检测方法作比较。
本试验常用鸡胚或组织培养细胞作为样本鉴定禽流感病毒。
中和试验是具有高度的灵敏性和特异性的血清学方法，抗体只和病毒上表面抗原相对应，特别是已吸附的宿主细胞上的病毒颗粒表面的抗原相对应。
所以，在某种特定血清型的中和实验中，抗体只和组内的其他病原发生有限的交叉反应。
琼脂扩散试验琼脂扩散试验检测禽流感时，以具有血凝素活性的鸡胚尿囊液作为样品，采用已知的阳性血清和未知抗原进行病毒抗原型的特异性鉴定。
禽流感实验室检测技术方案
禽流感实验室检测技术方案禽流感，这个让无数人闻之色变的词汇，已经成为我们生活中无法回避的一部分。
如何快速、准确地检测出禽流感病毒，成为了当务之急。
今天，就让我来为大家详细介绍一下禽流感实验室检测技术方案。
我们需要明确检测的目标。
禽流感病毒有多种亚型，我们要检测的是哪些亚型，需要根据实际情况来确定。
一般来说，H5和H7亚型的禽流感病毒对我国养殖业和公共卫生安全威胁较大，因此，我们将重点检测这两种亚型。
我们要选择合适的检测方法。
目前，实验室检测禽流感病毒的主要方法有病毒分离、血清学检测和分子生物学检测。
病毒分离是传统的检测方法，准确性较高，但操作复杂，耗时较长。
血清学检测通过检测抗体来判断病毒感染情况，速度快，但准确性相对较低。
分子生物学检测，尤其是实时荧光定量PCR技术，具有高灵敏度、高特异性、快速简便等优点，成为近年来禽流感病毒检测的主流方法。
下面，我将详细介绍实时荧光定量PCR技术在禽流感实验室检测中的应用。
一、实验材料1.样本：采集疑似感染禽流感的家禽咽喉拭子、泄殖腔拭子等。
2.试剂：实时荧光定量PCR试剂盒、病毒提取试剂盒等。
3.仪器：实时荧光定量PCR仪、离心机、恒温箱等。
二、实验步骤1.样本处理：将采集的拭子样本放入病毒提取试剂盒中，按照说明书操作，提取病毒RNA。
2.模板制备：将提取的病毒RNA与实时荧光定量PCR试剂盒中的缓冲液、酶混合，进行模板制备。
4.结果分析：观察实时荧光定量PCR仪上的扩增曲线和溶解曲线，判断样本是否为阳性。
三、注意事项1.实验过程中要严格遵循无菌操作原则，防止样本污染。
2.实验室人员要具备一定的分子生物学实验技能，确保实验顺利进行。
3.实验结果要及时记录，并与临床诊断相结合，为疫情防控提供有力支持。
通过实时荧光定量PCR技术，我们可以快速、准确地检测出禽流感病毒，为我国养殖业和公共卫生安全保驾护航。
当然，实验室检测只是禽流感防控工作的一部分，我们还需要加强疫情监测、疫苗接种、生物安全等措施，共同抵御禽流感病毒的侵袭。
禽流感病毒检测方法研究进展
收 稿 日期 ：０ ６— ０ ２０ ４— １ １
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・ 论 综述 ・ 专
禽 流 感 病 毒 检 测方 法 研 究 进 展
韩春 华 ， 马鸣潇 金 明兰 ， （＿ １ 内蒙 古呼伦 贝尔市莫旗 动物防疫监 督检验所 ， 内蒙古 呼伦 贝尔 １２５ １． ６ ８ ０２锦州 医学 院 畜牧 兽医学 院， 宁 辽 锦 州 １ １０ ；． ２ ０ １３通化 市畜牧兽 医总站 ， 吉林
传统 Ａ Ｖ检 测方法主要 有病毒分离培养 和血 Ｉ 清学 诊断（ 如琼脂扩 散实验、 酶联免疫吸 附实验 、 问 接 血凝抑制实验及 病毒 中和实验 等） 传统 的 Ａ Ｖ ， Ｉ 检测 方法不足之 处在于操作繁琐 、 断时 间长 、 诊 结 果 重复性不好等 。特 别是 Ａ Ｖ血清 型众 多，且新 Ｉ 的变 异株不断 出现 ， 而制备血清型特异性单克隆抗 体 相对 困难 ， 近来研 究发现 ， 用鸡胚分离和 培养 的 流感病毒常 出现宿主介导变 异 ， 所有这些都 限制 了 传 统方法在 实际 中的应 用 。但是 由于传统检 测方 法， 对实验条件要求不高 ， 无须特殊 实验仪器设 备， 易于在基层兽 医检测部 门推广 ，特别 是一些 新 的 Ａ Ｖ检测方法建 立都要 以传 统的 Ａ Ｖ检测 方法为 Ｉ Ｉ 标准进行 比较验 证， 为此 国内外 学者对 传统 的Ａ Ｖ Ｉ 检 测方法也进行 了积 极探索和 改进 。
禽流感病毒的分离与鉴定技术
禽流感病毒的分离与鉴定技术孙建宏,刘景利,张从禄①（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，黑龙江哈尔滨150001）①摘要：禽流感病毒的诊断一般是通过鸡胚分离病毒，检测其血凝活性，并应用琼脂扩散试验或其他试验确定其是否为禽流感病毒，再进一步进行亚型鉴定、致病力测定。
如果是H5或H7亚型，还应采用PCR等方法对血凝素裂解位点的氨基酸序列进行测定。
①关键词:流感病毒;分离;鉴定①禽流感（Avianinfluenza，AI）由正黏病毒科A型流感病毒属的流感病毒引起。
该病毒的血清型分为15个HA亚型和9个NA亚型。
禽流感病毒可感染各种家禽和野禽，但多数呈亚临床感染。
一些H5和H7亚型可引起高致病性禽流感，可使鸡群100%死亡。
高致病性禽流感因其传播快、危害大，有的血清型可感染人，世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类动物疾病，我国将其列为一类动物疫病。
①禽流感病毒的诊断可以根据临床症状、剖检变化做出初步诊断，进一步确诊需进行实验室检测。
目前一般是通过病毒分离和血清学试验检测病毒或是检测感染鸡的抗体进行鉴定。
近年来，随着分子生物学技术的发展，RT-PCR方法日臻成熟，也逐渐成为一种常用的诊断技术。
文章对这些禽流感的诊断技术分别做一些介绍。
①1禽流感病毒的分离①样本可采集死禽样本或活禽样本。
死禽样本一般采集肠内容物或泄殖腔拭子、鼻拭子、咽喉拭子以及内脏组织（气管、肺、气囊、肠、脾脏、肾、脑、肝脏和心脏等）；活禽样本可采集气管拭子、泄殖腔拭子。
由于采集棉拭子时幼禽容易受伤，所以还可取粪便。
①采集的拭子放入1.0mLPBS（pH7.0～7.4，含抗生素）的离心管中，静止作用30min。
对于泄殖腔拭子和粪便，用过滤器过滤除菌，上清液作为样本。
内脏样本应无菌取样，放于灭菌的玻璃研磨器，用PBS配成100g/L的悬液，加入1/10体积的抗生素，将处理过的样本移至离心管内，3000r/min离心10min，取上清液接种。
①采集或处理的样本在2℃～8℃条件下保存应不超过24h；如果需长期保存，需放置-70℃条件，但应避免反复冻融（最多冻融3次）。
禽流感病毒的监测及诊断
禽流感病毒的监测及诊断禽流感是家禽中易感性极高的病害之一，由禽流感病毒引起，具有高度致死性和传染性。
禽流感病毒由禽类呼吸道分泌物和粪便等直接或间接传播，易在家禽养殖场内蔓延，造成重大经济损失和公共卫生问题。
因此，及时、准确地监测及诊断禽流感病毒的存在和传播情况，对于防控禽流感具有重要意义。
一、禽流感病毒的监测禽流感病毒的监测主要包括三个方面，分别是采样、检测和数据分析。
1.采样禽流感病毒的采样包括环境、家禽和野禽样本的采集。
一般采样地点有禽类养殖场、市场和自然湖泊等。
环境样本主要包括禽类排泄物、地面沉积物和空气等；家禽样本包括禽类的食管、喉咙、鼻腔、肠道、粪便和血液等；野禽样本主要是采集禽类的翅膀、鼻腔和粪便等。
在采样前应先消毒工具和手部，避免污染样本。
2. 检测目前常用的检测方法包括病毒分离、实时荧光定量PCR技术和血清学检测等。
（1）病毒分离病毒分离是检测禽流感病毒的传统方法，其基本步骤为：首先从采集的样本中提取病毒RNA，然后以细胞培养的形式增殖禽流感病毒，最后进行毒株鉴定和病毒抗原鉴定等。
病毒分离的优点是准确性高，但其操作时间长、施行条件苛刻，同时还存在毒株异质性等问题。
（2）实时荧光定量PCR技术实时荧光定量PCR技术是现行检测禽流感病毒的主要方法之一。
该技术可以应用于禽类、环境和野生鸟类等多种样本类型。
其操作流程包括提取RNA，合成cDNA，筛选引物和探针并进行PCR扩增。
该方法具有灵敏性高、特异性强、快速方便等优点，能够快速检测样本中是否存在禽流感病毒。
（3）血清学检测血清学检测是通过检测鸡或其他禽类机体内的抗体水平来判断是否感染禽流感病毒的一种方法。
血清学方法主要有酶联免疫吸附测定（ELISA）和补体结合试验等。
血清学检测具有操作简单、成本低、易于推广的特点，但是其检测灵敏性较低，不能直接检测病毒。
3. 数据分析禽流感病毒的监测得到的数据需要进行分析，从而发现该病毒的分布规律、病毒株间的遗传关系等。
禽流感病毒三种病原学检测方法的比较研究
禽流感病毒（AIV ）为正粘病毒科甲型流感病毒属，单股负链RNA 病毒。
依据其外膜血凝素（H ）和神经氨酸酶（N ）蛋白可分为H 亚型和N 亚型，目前已发现18个HA 和11个NA 亚型［1］。
已报道能感染人类的禽流感病毒有H5［2］、H7［3］、H9［4］等亚型。
其中H5、H7为高致病性亚型，潜伏期短，大多无临床症状而突然死亡，发病率和致死率极高［5-6］；H9为中低致病性亚型，几乎所有的养禽场均存在［7］，各型禽流感还可与其他病原混合感染，导致禽病复杂化。
禽流感不仅危害养禽业，也严重威胁人类健康，影响国际贸易。
因此，研发、筛选和使用快速准确的临床检测方法对于禽流感的防控具有重要意义［8］。
目前，禽流感诊断方法较多，国标方法有鸡胚培养分离法、血凝和血凝抑制试验、琼脂凝胶免疫扩散试验、酶联免疫吸附试验、RT-PCR 、荧光定量RT-PCR ，以及农业农村部推荐的免疫酶渗滤（Dot-ELISA ）法和胶体金免疫层析试纸条法［9］，这些方法各有优缺点和适用范围。
本试验主要选用了目前已商品化的禽流感病原高敏快速荧光免疫法、胶体金免疫层析纸条法和实时荧光RT-PCR 法进行研究，对比这三种方法在临床快速诊断中的实用性，为禽流感病毒检测提供指导。
1材料与方法1.1材料1.1.1禽流感病毒H5、H7和H9亚型血凝抑制试验抗原，均购自哈尔滨兽医研究所。
1.1.2试剂禽流感病毒高敏快速荧光免疫检测试剂盒由成都微瑞生物科技有限公司提供；禽流感病毒荧光RT-PCR 检测试剂盒（通用型）购自哈尔滨国生生物科技股份有限公司；国产禽流感病毒抗原检测卡购自国内某生物股份有限公陈弟诗1，陈斌1，章健2，邱明双1，邓飞1，王泽洲1（1.四川省动物疫病预防控制中心，四川成都610041；2.成都微瑞生物科技有限公司，四川郫都611731）中图分类号：S854.43文献标识码：B文章编号：1001-8964（2019）04-0027-04收稿日期：2018-12-18作者简介：陈弟诗（1981-），男，四川雅安市人，预防兽医博士，高级兽医师，主要从事动物疫病防控工作以及动物传染病病原分子生物学研究。
禽流感病毒检测方法研究进展
禽流感检测方法研究进展郑胜男本硕21摘要:禽流感是一种可以感染多种禽类和人的烈性传染病,其病毒亚型众多,宿主范围广，容易发生变异和重组，由于各亚型之间无交叉反应性,使得禽流感病毒的检测工作较为困难。
目前，该病毒的检测方法主要有病毒分离鉴定、血清学方法和分子生物学方法，同时,人们也正致力于用一些新兴检测方法来检测禽流感病毒。
现就禽流感病毒的检测方法做一综述。
关键词:禽流感病毒;检测方法;AIV；血清;诊断；分子生物；禽流感是由正黏病毒科、A型流感病毒属中的不同亚型引起的禽类的一种急性高度接触性传染病。
目前已知禽流感病毒的血凝素包括16种亚型，[1]神经氨酸酶包括9种亚型。
其中H5和H7亚型常为高致病性的禽流感病毒。
1.病原学检测方法1 .1病毒分离与鉴定病毒的分离鉴定是禽流感的经典诊断方法，最常用的为细胞接种和鸡胚接种法，以细胞发生病变，鸡胚死亡或培养物尿囊液具有凝集红细胞特性作为判定依据作初步鉴定，也可用针对NP的单抗,用免疫荧光染色作病毒的初步鉴定。
[2]确诊还需其它辅助检测手段。
其检测结果准确可靠，灵敏，极少量病毒也可检出。
但其操作程序繁杂，费用高，实验室要求高，耗时费力，周期长，检测时间需1～3 周，大面积应用推广受到较大限制。
1 .2电镜检测技术用电镜技术或免疫电镜技术诊断禽流感病毒，可以在电子显微镜下清楚观察到粒子形态，确定病毒的有无。
[3]、[4]电镜技术快速、准确，但检验结果与样品制备技术、取病材料的部位和时间有关，且本方法不能用于亚型及致病性的测定。
2.免疫学检测2 .1血凝(HA )和血凝抑制(HI)试验HA 和HI 简单、快速、特异性好，但是操作繁琐费时，不能用已知HA亚型的抗血清检出禽流感新的HA亚型。
HI试验是WHO进行全球流感监测所采用的普及方法。
[5]一般先将可疑病料接种适龄鸡胚或细胞进行病毒分离，然后用HA试验检测出培养物是否具血凝素活性，再用已知阳性血清进行HI试验来验证。
禽流感病毒的检测方法
Ｉ 血细胞 凝集抑制试验 （Ｉ Ｈ）鉴定病毒或血 的 ＡＶ诊 断技 术包括病毒分离鉴 定试验
清抗体 的亚 型 ，以及神经氯酸酶 抑制试 周期长 的缺点 ， ＡＶ 期快速诊 断提供 为 Ｉ早 验 （Ｉ Ｎ） 鉴定病毒或血清抗体亚型等 ． 这些 了敏感 ， 快速、实用的方法 ， 而且研究试 检测方法步骤繁琐 ．但特异性好 。 验发现 Ｒ — Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ的灵敏度高于 Ｅ Ｉ Ｌ Ａ，可 Ｓ
起 的禽 类全 身性或 呼吸 器官性传 染病 ， 结合 ， 来特异的定性 、 定量 的检测病毒 的 ＯＥ把该病定为 Ａ类烈性传染病 。 Ｉ 禽流感 存 在 。 于 标 记酶 酶 促 反 应 的 放 大 作 用 ， 由
病毒 （ －ｖ ｎ ｉ ｌ ｎａｖｒｓＡＶ）隶属 其 灵敏 度 比常 规 血清 学 检 测 要 灵 敏 的 多 ， Ａ ｉ ｎ ｕ ｚ ｉ ． Ｉ ａ ｆｅ ｕ
有 无和 滴度变化 。如琼脂 凝胶扩散试验 如 果检测 出了相 应的扩增带 ，则 判为阳 无扩增带则 为阴性反应 。 （Ｇ） Ａ Ｐ 和血细胞凝集抑制试验 （Ｉ。Ａ Ｐ 性 反应。反之 ． Ｈ） Ｇ
试 验鉴 定病毒或检测 特异性的血清 抗体 Ｒ － Ｃ 分 子诊断技术 ， Ｔ ＰＲ 可从基 因水平检 Ｉ 具有高度 的敏感性和特异性 ， 并 或基 质蛋白 ＭＰｍａｒ ｒｔｉ） （ ｔｘ ｐｏｅｎ ．检测特 测 ＡＶ． ｉ 异 性核 蛋白 Ｎ 。血细胞凝集试验 （Ａ） Ｐ Ｈ 和 可大大缩短 ＡＶ Ｉ的检 出时 间 ， 克服 了传统
动物保 健 ’ ０ ２ ６年第 ３期 ０＿ Ｊ３ ０ 总第 ｏ 斯
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猪 免疫 抑 制 病 的 危 害 与 防制
已 发 现 有 １ 种 ， 经 氯酸 酶 有 １ 种 ．其 印迹 免 疫 测 定 法 可 以 显 示 病 禽 不 同 部 位 ６ 神 ０
引起禽类疾病的病原微生物及诊断方法
引起禽类疾病的病原微生物及诊断方法禽类疾病是指由各种病原体引起的禽类健康问题，它们会影响禽类的健康和生产能力，甚至会导致禽类的死亡。
禽类疾病给禽类养殖业带来了很大的经济损失。
因此，了解引起禽类疾病的病原微生物及诊断方法十分重要。
常见的引起禽类疾病的病原微生物1. 病毒病毒是引起禽类疾病的主要病原微生物之一。
以下是一些常见的禽类病毒疾病：•禽流感病毒：该病毒是由禽流感病毒（IAV）引起的，是禽类疾病中最为严重的一种。
禽流感病毒会引起鸟类呼吸系统疾病，导致禽类死亡率较高。
•新城疫病毒：该病毒是由新城疫病毒引起的，可影响禽类的神经系统功能，严重时会导致禽类死亡。
•禽传染性喉气管炎病毒：该病毒是由传染性支气管炎病毒引起的，它会影响禽类的呼吸系统，导致禽类的生产性能下降。
2. 细菌细菌是另一个导致禽类疾病的病原微生物。
以下是一些常见的禽类细菌疾病：•亿胞菌病：由亿胞菌引起，可导致禽类肺炎，严重时会导致禽类死亡。
•沙门氏菌病（盘尾病）：由沙门氏菌引起，会导致禽类腹泻和腹部肿胀。
•大肠杆菌毒素病：由大肠杆菌引起，会出现禽类腹泻、腹痛和衰竭等症状。
3. 真菌真菌也会引起禽类疾病。
以下是一些常见的禽类真菌疾病：•鸟瞳宁霉病：由鸟瞳宁霉引起，会影响禽类的眼睛和呼吸系统。
•鸟脚菌病：由皮肤寄生菌引起，可以导致病鸡的脚趾变形和易于感染其他疾病。
诊断方法为了确诊禽类疾病和寻找病原体，需要进行以下诊断方法：1. 细菌培养细菌培养是一种诊断禽类细菌疾病的方法。
将采集到的病禽组织样本、排泄物或分泌物在适当的培养基上进行培养，寻找可疑细菌的形态和芽胞等特征，进而诊断疾病类型。
2. 血清学检测血清学检测可以用于检测禽类感染病毒的血清学反应。
通过这种方法，可以检测感染禽流感、新城疫、传染性支气管炎等禽类病毒疾病的抗体水平。
3. 分子生物学检测分子生物学检测是一种新兴的禽流感、新城疫等禽类病毒疾病的诊断技术。
利用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术对禽病样本进行分子检测，能够迅速并具有高灵敏度地检测到禽类病毒的存在。
禽流感病毒基因组及检测方法概述
Ｕ Ｃ Ｕ Ｃ一 Ｕ Ｇ Ｃ ５。研究发现 ， 和 ３末端序列部分互补， ５ 形成锅柄状结构 ， 该结构对于病毒 Ｒ Ａ聚合酶的结 Ｎ
合 是必 需 的 。 １ ２ １ 血 凝素蛋 白（ ｅ ｇｌｔ ｉ ， Ａ） 迄今 为止 ， ．． Ｈ ｍａｇ ｉ ｎ Ｈ ｕｎ 已经 发现 的 Ｈ Ａ亚 型有 １ （ 一Ｈ１ ） 。Ｈ ６种 Ｈ１ ６ Ａ是
作者简 介： 刘志杰 （９ ６一 ） 男 ， １８ ， 安徽合肥人 ， 硕士研究生 。研究方向 ： 动物传染病及病原分子生物学 。
＋ 通讯 作者 ： 曾智勇 ， 博士 ， 副教授 ， 硕士生导师。研究方向： 动物传染病及病 原分子生物学。Ｅｍ ｉ ａ ｚ ｅｇ ｚ．ｄ ．Ｆ － ａ ； ． ｚ ＠ｇ ｅｕ Ｃ ｌ ｓｙ ｎ ｕ Ｉ
第 ３期
刘 志杰 ， ： 流感 病毒 基 因组 及检 测方 法概 述 等 禽
２９ ５
单 股 负链 Ｒ Ａ构成 ， Ｎ 每个 Ｒ Ａ节段 的两端都 有 相对保 守 的非编码 序 列 ， ５端存 在 ｌ 核苷 酸 ， 序列 Ｎ 如 ３个 其 为 ： ｐｐ ｕ Ｇ Ａ Ｃ Ａ Ｇ一 ３端 也 有 ｌ 高度 保守 的核 苷酸 ， Ｃ Ｇ Ｕ Ｕ Ｇ Ｕ一 且 ５端 ５ 一Ａ ｐＣ Ａ Ａ Ａ Ａ Ｇ ３ ， ２个 ５ 一Ｃ Ｕ Ｃ Ｕ Ｕ Ｃ ３ ， 与 ３端反 向互 补 ， 成锅 柄状 结构 。这些 结 构参 与病 毒 Ｒ Ａ 的复制 和 ｍＲ Ａ 的转 录 ， Ｒ Ａ聚合 酶结合 形 Ｎ Ｎ 在 Ｎ 活性 、 动 子 活 性 以及 激 活核 酸 内切 酶活 性 中具 有重 要 作用 ， 流 感 病 毒复 制 、 录 、 启 是 转 包装 的重要 调 控 成
起形成新的毒粒。此外 ， Ａ蛋白分子上个别关键氨基酸位点 的突变 ， Ｈ 尤其是受体结合部位 的氨基酸发生 替换 ， 就有可能造成毒粒致病性和传播能力 的改变。这一方面是 因为 Ｒ Ａ聚合酶缺乏校正功能 ， Ｎ 病毒基
禽流感病毒诊断技术研究进展
禽流感病毒诊断技术研究进展一、引言禽流感是一种高致病性病毒性疾病，目前已在世界范围内造成大量的家禽死亡和经济损失。
禽流感病毒的快速检测和准确诊断对于疫情的防控和阻断至关重要。
该文将介绍目前禽流感病毒诊断技术的研究进展。
二、免疫学诊断技术1. 细胞培养法细胞培养法是禽流感病毒的最早诊断方法之一，通过将感染样品接种细胞培养物中，观察是否有细胞损伤和病毒分离情况。
但由于该方法需要特定实验室条件，并且需要较长时间，因此已渐被其他更先进的诊断技术所取代。
2. 补体结合反应（CFT）CFT是一种免疫学诊断方法，它通过观察血清中禽流感特异性抗体和禽流感病毒抗原之间的补体结合情况来诊断病毒。
但是，由于该方法对试剂质量和操作技巧要求较高，且存在假阴性和假阳性等问题，因此不常用于临床检测。
3. 酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA是一种快速、准确和经济的诊断方法。
该方法利用特异性抗体与抗原之间的特异性结合，通过酶标记活性物质，使结合物可定量检测。
目前，ELISA已被广泛应用于疫情监测和疫苗效果评估等方面。
4. 荧光素酶联免疫吸附试验（F-ELISA）F-ELISA是一种对传统ELISA方法的改进，它利用荧光素作为标记物，从而提高了灵敏度和特异性。
F-ELISA操作简单、快速、可靠，已被广泛用于临床检测和疫情监测。
三、分子诊断技术1. 聚合酶链反应（PCR）PCR是一种高度敏感和特异的分子诊断技术，它能够从样品中扩增病毒DNA或RNA片段，从而进行病毒诊断。
PCR具有快速、准确、可靠的优点，因此已成为禽流感病毒诊断的首选方法之一。
2. 实时荧光定量PCR（RT-qPCR）RT-qPCR将常规PCR与荧光标记技术相结合，能够快速、准确地扩增、检测禽流感病毒。
该方法可用于样品的快速筛选和诊断。
此外，RT-qPCR还可用于研究禽流感病毒的毒株差异和基因变异。
3. 巢式PCR巢式PCR是将PCR的灵敏度和特异性提高到更高水平的方法。
禽流感病毒和新城疫病毒的检测方案
禽流感病毒和新城疫病毒的检测方案实验目的对实验室送检样品进行禽流感病毒（AIV）、新城疫病毒（NDV）的检测及鉴定。
实验原理（1）AIV和NDV均能凝集鸡红细胞，可先使用血清学实验进行初步鉴定，即用已知标准抗体即可检测未知的病毒抗原.（2）通过分子生物学实验技术（RT-PCR）做进一步的检测鉴定，AIV 和NDV均为单股副链RNA病毒，故提取得到的病毒核酸需先进行反转录再PCR扩增。
（一）样品处理及病毒分离1.1 实验试剂100,000 IU的双抗（青霉素和链霉素）。
1.2 试验设备及材料设备：低温离心机，冰箱，孵化培养箱，超净台，照蛋器。
材料：移液枪，灭菌吸管，9～11日龄非免疫鸡胚（最好使用SPF鸡胚），1 mL注射器，石蜡，铅笔，打孔器，酒精灯，酒精棉，镊子。
1.3 操作步骤（1）样品的处理：向样品中加入双抗使终浓度为10000 IU～20000 IU，4℃冰箱作用至少2 h，4℃ 8000～10000 rpm离心15 min。
（2）接胚：取上清液接种9～11日龄非免疫鸡胚，采用尿囊腔接种，0.2～0.3mL/胚，每个样品接种2～3枚鸡胚。
弃去24h内死亡的鸡胚，48 h内死亡的鸡胚及时置于4℃冰箱至少4 h，于超净台内收胚测血凝（若同一份样品的两个鸡胚均无血凝，可将两个鸡胚尿囊液收为1管）。
（3）将第一次收取的鸡胚尿囊液同样的方法继续接胚，直至第三代，若均无血凝，则结果可判为禽流感和新城疫感染阴性；若有血凝，则继续做HI试验，可初步鉴定为禽流感或者新城疫感染。
1.4 注意事项：接胚及收胚过程中避免污染。
（二）血凝抑制试验（HI）2.1 试验设备及材料器材：离心机、记号笔、酒精灯、100P量程的移液枪、200uL枪头、排枪、排枪枪头、96孔V形血凝反应板。
试剂：pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）、1%鸡红细胞悬液、新城疫病毒抗原。
2.2 操作步骤（1）取96孔V形微量反应板，用排枪1至12孔每孔加0.025 mL PBS；（3）吸取0.025 mL 病毒悬液加入第一孔中，吹打8次至10次充分混匀；（3）从第一孔中取0.025 mL 混匀后的病毒液加到第2孔，混匀后吸取0.025 mL加入到第3孔，依次进行系列倍比稀释到第11孔，最后从第11孔吸取0.025 mL弃之，设第12孔为PBS对照；（4）每孔加入0.025 mL的1%的鸡红细胞悬液；（5）震荡混匀反应混合液，室温下静置15 min后观察结果，PBS对照孔的红细胞成明显的纽扣状沉到孔底时判定结果。
鸡新城疫的流行病学临床症状检测方法与防控措施
鸡新城疫的流行病学临床症状检测方法与防控措施鸡新城疫，又称为禽流感，是由禽流感病毒引起的一种急性传染性疾病。
这种疾病在鸡群中传播迅速，严重危害了鸡的健康和养殖业的发展。
鉴于其高传染性和致命性，了解鸡新城疫的流行病学、临床症状、检测方法以及防控措施显得尤为重要。
让我们来了解一下鸡新城疫的流行病学。
鸡新城疫通常是由禽流感病毒引起的，这种病毒在鸡群中极易传播，尤其是在密集饲养的情况下更易蔓延。
鸡新城疫病毒经呼吸道或消化道进入鸡体，然后迅速在鸡体内进行复制，并破坏鸡的呼吸道和消化道组织，导致鸡出现一系列临床症状。
鸡新城疫病毒还能通过粪便、鼻涕等途径排入环境中，从而形成传播途径。
鸡新城疫的临床症状。
鸡新城疫的潜伏期一般为3-7天，然后出现急性发病，主要临床症状包括呼吸道症状、神经系统症状和消化系统症状。
呼吸道症状表现为呼吸急促、喘鸣、鼻梁迅速憋气和咳嗽等；神经系统症状则表现为丧失平衡，翅膀下垂，肌肉麻痹和颈部瘫痪等；消化系统症状则主要为食欲不振，腹泻，以及肠道出血等。
接着，我们来了解一下鸡新城疫的检测方法。
目前，常用的鸡新城检测方法主要包括病毒分离鉴定法、血清学检测法和分子生物学检测法。
病毒分离鉴定法主要是通过采集患有临床症状的鸡体液样本，如血液、鼻涕或者粪便样本等，然后进行禽流感病毒的分离培养，最终通过病毒形态、抗原特性和分布区域等来鉴定病毒。
血清学检测法主要是通过采集鸡的血清样本，然后使用不同的血清学试剂盒进行抗体检测，从而诊断出鸡是否感染了禽流感病毒。
分子生物学检测法则是通过采集鸡组织样本，提取病毒RNA或DNA，然后使用PCR技术进行检测，从而得出鸡是否感染了禽流感病毒的结果。
我们来了解一下鸡新城疫的防控措施。
目前，主要的鸡新城疫防控措施主要包括生物安全防范措施、免疫防控措施和环境卫生防控措施。
对于养殖场来说应该加强生物安全措施，包括限制人员进出和交通车辆的消毒，对进鸡进行隔离检疫，确保养殖场的封闭性。
禽流感病毒H5、H7、H9亚型多重荧光RT-PCR检测方法的建立
禽流感（avian influenza ，AI ）是由正粘病毒科、流感病毒属A 型流感病毒引起的禽类（家禽或野禽，以及部分哺乳动物）传染病[1]。
禽流感病毒血清亚型众多，抗原变异性强，宿主范围广泛，亚型间无交叉保护性，使得禽流感频繁暴发，成为养禽业的一大毁灭性疫病。
尤其是高致病性禽流感，是OIE 规定的法定报告A 类动物疫病[2]。
禽流感病毒在流行的过程中不断变异，跨越宿主屏障，H5N1亚型禽流感病毒和H7N9亚型禽流感病毒屡次暴发疫情，给养禽业和人类的生命安全带来巨大的威胁。
H9亚型禽流感病毒并未被规定为高致病性禽流感，往往被人们所忽视，从而造成了以H9亚型为主的低致病性禽流感的大范围流行和对养禽业产生持续危害。
此外，有研究显示H9N2亚型禽流感病毒在全世界范围内广泛传播的同时也以重配的方式产生新型禽流感病毒[3,4]。
目前国内外检测禽流感病毒最常用和经典的方法是鸡胚病毒分离，并且是国际贸易中指定的检测方法，但该方法技术要求高、耗费时间长，在疫情暴发时不利于病原的快速诊断和疫情控制。
以分子生物学技术为基础的荧光PCR 方法已成为病原核酸检测的主要方法，目前市场的禽流感病毒检测手段多以单重RT-PCR 为主，不能区分具体亚型，但在平时疫情检测和实施扑灭措施时对这些病毒亚型进行快速检测和定型非常重要。
本研究基于Taq-Man-MGB 荧光RT-PCR 技术建立一种禽流感病毒H5、H7、H9亚型多重荧光RT-PCR 检测方法，能够在一次反应中对样本中的病毒进行快速定型，满足准确、快速的检测需求。
1材料与方法1.1质粒样品携带禽流感病毒H5亚型、H7亚型、H9亚型HA2靶基因序列片段重组质粒pUC57-AIV-H579，浓度为104copies/μL 。
1.2禽流感病毒核酸样品禽流感病毒H5亚型核酸样品15份、禽流感病毒H7亚型核酸样品15份、禽流感病毒H9亚型核酸样品15份，禽流感病毒阴性核酸样本30份，由扬州大学禽流感病毒专业实验室分离、鉴定、保存和提供。
野生动物禽流感标准以及监测方法
野生动物禽流感标准以及监测方法
野生动物禽流感是一种由禽流感病毒感染引起的传染病，
对野生动物和家禽都具有较高的致病性。
为了及时监测和控制野生动物禽流感的传播，制定相关的标准和监测方法是非常重要的。
一、野生动物禽流感标准
1. 病原学检测标准：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、
聚合酶链式反应（PCR）等方法，检测野生动物体内是否含有禽流感病毒的核酸或抗体。
2. 病理学诊断标准：通过野生动物的组织病理学检查，观
察是否存在禽流感病毒引起的病变，如肺部炎症、充血、出血等。
3. 流行病学调查标准：采集野生动物和其周围环境的样本，并结合病毒遗传学分析，确定野生动物禽流感的传播途径和传播范围。
二、野生动物禽流感监测方法
1. 采集样本：野生动物监测主要采集野生动物的血液、粪便、鼻腔和咽喉等样本，通过核酸提取和孵化等技术，检测样本中是否含有禽流感病毒。
2. 感染病毒检测：常用的检测方法包括ELISA、PCR和序
列比对等技术，通过检测野生动物样本中的禽流感病毒核酸或禽流感病毒特异性抗体，确诊野生动物是否感染禽流感病毒。
3. 病理学检查：对于有禽流感病变症状的野生动物，进行
病理学检查，观察组织病变情况和禽流感病毒的存在与否。
4. 流行病学调查：结合监测样本的采集地点、时间和野生动物的传播行为等信息，进行流行病学调查，追溯病毒的来源和传播链路。
以上是关于野生动物禽流感标准以及监测方法的描述。
准确的标准和监测方法可以帮助科研人员和防控部门及时了解野生动物禽流感的流行状况，在有效控制疫情扩散和保护野生动物和家禽健康方面起到重要作用。
禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法
禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法1、范围禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测的操作方法，适用于活禽及其产品中禽流感病毒的检测。
2、缩略语缩略语:荧光RT-PCR，荧光反转录-聚合酶链反应。
Ct值，每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。
RNA，核糖核酸。
DEPC，焦碳酸乙二酯。
PBs，磷酸盐缓冲盐水。
Taq酶，TaqDNA聚合酶。
3、原理禽流感病毒各亚型均属A型流感病毒，根据A型流感病毒共有基因特定的序列，合成一对特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针。
该探针与禽流感病毒特有的共同基因特异性结合，结合部位位于引物结合区域内。
探针的5’端和3’端分别标记不同的荧光素，如5’端标记FAM荧光素，它发出的荧光能够被检测仪器接收，称为报告荧光基团(用R表示)，3’端一般标记TAMRA荧光素，它在近距离内能吸收5’端报告荧光基团发出的荧光信号，称为淬灭荧光基团(用Q表示)。
当PCR反应在退火阶段时，一对引物和一条探针同时与目的基因片段结合，此时探针上R基团发出的荧光信号被Q 基团所吸收，仪器检测不到R所发出的荧光信号;当PCR反应进行到延伸阶段时，Taq酶在引物的引导下，以四种核苷酸为底物，根据碱基配对的原则，沿着模板链合成新链;当链的延伸进行到探面结合部位时，受到探针的阻碍而无法继续，此时的Taq酶发挥它的5’→3’外切核酸酶的功能，将探针水解成单核苷酸，消除阻碍，与此同时标记在探针上的R基团游离出来，所发出的荧光再不为Q所吸收而被检测仪所接收;在Taq酶的作用下继续延伸过程合成完整的新链，R和Q 基团均游离于溶液中，仪器可继续检测到R所发出的荧光信号。
4材料与试剂4.1仪器与器材荧光RT-PCR检测仪高速台式冷冻离心机(离心速度12000r/min以上)台式离心机(离心速度3000r/min)混匀器冰箱(2℃~8℃和-20℃两种)微量可调移液器(10L、100uL、1000uL)及配套带滤芯吸头Eppendorf管(1.5mL)4.2试剂除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯，所有试剂均用无RNA酶污染的容器(用DEPC水处理后高压灭菌)分装。
禽流感病毒检测方法论文
关于禽流感病毒检测方法的分析与讨论【中图分类号】r446【文献标识码】a【文章编号】1672－3783(2011)08－0270－01【摘要】禽流感病毒的检测方法主要分为血清学检测和分子生物学检测两大类。
血清学检测方法包括琼脂凝胶扩散试验(agp)、血凝抑制试验(hi)、酶联免疫吸附试验( elisa)、神经氨酸酶抑制试验(nit)和病毒中和试验(vn)。
分子生物学检测方法包括rt-pcr、多重rt-pcr、多种改进的rt-pcr和基因探针技术。
【关键词】禽流感病毒;检测;血清学;分子生物学禽流感病毒(aiv)属于正黏病毒科(orthomy xoviridae)流感病毒属,是一种a型流感病毒。
a型流感病毒感染人、猪、马、海豹、水貂、鲸及所有禽类。
在正黏病毒科中a型流感病毒是唯一感染禽类的病毒型。
禽流感病毒呈世界性分布,绝大多数禽流感病毒为隐性感染,感染动物不表现任何临床症状,只有少数禽流感病毒具有迅速传播和高致死性的特性,称之为高致病性禽流感病毒(hpaiv)。
1 血清学检测目前世界上普遍接受的检测禽流感病毒及抗体的标准方法有血清学诊断方法,如琼脂凝胶扩散试验(agp)可鉴定病毒或检测型特异性的血清抗体或基质蛋白(matrix protein，mp);红细胞凝集试验(ha)和红细胞凝集抑制试验(hi)可鉴定病毒或血清抗体的亚型;神经氨酸酶抑制试验(nit)可鉴定病毒或血清抗体亚型等。
采用鸡胚中和试验鉴定病毒或血清抗体的亚型也是一种可以接受的方法,但相对于hi繁琐。
2 分子生物学检测技术2.1 rt-pcr 该方法的基本原理是将从病料或鸡胚尿囊液中抽提出的禽流感病毒rna作为模板,以所设计的上游引物为引物,加入反转录酶和dntp于适合的缓冲液和温度下合成cdna(即反转录的过程)。
再以该cdna为模板,加入根据目的片段设计的上、下游引物,在dna聚合酶作用下利用dntp在pcr仪上合成新的dna链,扩增过程以变性、退火和延伸为一个循环,经25个左右的循环,dna的拷贝数理论上可达295个以上,即3355万倍,扩增产物的量已足够用琼脂糖凝胶电泳检测出来。
鸡禽流感h5、h7和h9抗体水平合格率检测
畜 牧 兽 医2020年第11期新农民鸡禽流感H5、H7和H9抗体水平合格率检测熊 鑫（安徽省宁国市农业农村局，安徽 宁国 242300）摘要：本试验为了检测宁国市某养殖场屠宰环节中经疫苗免疫后的鸡祖代及父母代禽流感H5、H7和H9抗体水平合格率。
通过血凝试验分别对H5、H7和H9抗原进行倍比稀释，测得四倍抗原，根据稀释倍数制备抗原稀释液。
通过血凝抑制试通过验将血清从第1孔倍比稀释到第5孔，第6孔倍比稀释到第10孔，其中每排第11孔为阳性对照，第12孔为阴性对照。
先加入抗原稀释液振荡混匀后置于在37℃充分反应，再加入1%红细胞悬液振荡混匀后置于在37℃充分反应，进行读数。
关键词：禽流感；抗体水平；血凝试验；血凝抑制试验1 试验方法1.1 样本制备①于屠宰环节随机选取某养殖场鸡祖代（80周龄）及父母代（48周龄）各50只；②通过翅静脉采集血液，于37℃放置2h；③取上清液在1800r/min条件下离心2～3min，用移液器吸取上层清液（即为血清）于新的离心管中；④进行编号标记后于-20℃保存。
1.2 制备1%鸡红细胞悬液①注射器吸取适量阿氏液，通过翅静脉采集健康公鸡血液；②于1500r/min条件下离心8～10分钟，用移液器尽可能吸净上层清液弃去；③加入生理盐水通过称量配平后，用移液器重复吹打使悬液充分混匀；④重复②③步骤3～5次；⑤离心后将上层清液弃掉，用生理盐水配成1%红细胞悬液，置于4℃保存备用。
1.3 HA试验①取1块96孔V型微量反应板水平放置于实验台，进行标记；②分别选取6排，其中每2排为重复操作，第1～12孔分别加入25μL生理盐水；③分别于相应标记的第1孔加入H5、H7和H9抗原25μL，倍比稀释至第11孔，弃去枪头内液体；④6排的每孔加入25μL生理盐水；⑤6排的每孔加入配制好的25μL 1%红细胞悬液，振荡混匀后于37℃恒温箱内反应15～20分钟；⑥观察结果，获得抗原血凝效价，制备抗原稀释液。
禽流感实验室检测方法
禽流感实验室检测方法一、标本的采集与处理(一)标本的采集1、病毒分离标本的采集病毒分离成功与否很大程度上取决于采集标本的质量，及其保存、运输等环节。
多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物，有时也采用肺活检材料等。
标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存，常用的采样液为：普通肉汤，pH7.4-7.6的Hank's、Eagle's或水解乳蛋白液。
为防止细菌和真菌生长，在采样液中需加入抗菌素，以往抗菌素多用青、链霉素，近来发现不少种类细菌对它们具有耐药性，故近来多用庆大霉素（其终浓度为每ml采样液中加入0.1 ml的10mg/ml）和抗真菌药物（终浓度为每毫升采样液中加入0.008 ml的250ug/ ml）。
主要的采集方法有以下几种：1)鼻拭子：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。
以同一拭子拭两侧鼻孔。
将棉签浸入4-5 ml采样液中，尾部弃去。
2)咽拭子：用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将棉签头浸入4-5 ml 采样液中，尾部弃去。
注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作量。
3)鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器（国外有售）从鼻咽部抽取粘液。
先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。
收集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器3次。
由于该收集器国内难买到，也可采用国内一种设计装置（见郭元吉、程小雯著，流行性感冒病毒及其实验技术。
中国三峡出版社P186，1997）。
4)鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将1-1.5ml洗液注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。
然后让患者低头使洗液流出，用平皿或烧杯收集洗液。
重复此过程数次。
洗两侧鼻孔最多可用10-15 ml洗液。
5)漱口液：用10 ml洗液漱口。
漱时让患者头部微后仰，发“噢声”，让洗液在咽部转动。
然后，用平皿或烧杯收集洗液。
注：取鼻洗液和漱口液时，需预先了解患者是否对抗菌素有过敏史，如有则洗液和含漱液中不应含有抗菌素。
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饲料博览 ，０ １ （ ） １—Ｏ ２ ０ ，９ ｌ９ ． ２
［ ２ 任睿 玲 ， 振均 ， 经元＋ ２］ 孙 宋 药物饲料 添加剂对 环境影响 的研究 进展 ［ 饲料工业 ２ ０ ，６ 。３３ ． 刀． ０ ６ （ ） ３—６ ［ ３ 马明颖 ， 沐森 。 ２３ 李 吴
家禽和野禽的病毒性传染病 。该 病于 １７ ８８年在 意 术 的飞速 发展 ， 流 感 病毒 分 子 生 物学 检 测 方 法不 禽 大利鸡群中首次暴发 ， 现已遍布世 界许 多国家 。世 断 取得新 的进展 。
界 各地 的高致病 性 禽 流感 主要 由 Ｈ５和 Ｈ７亚 型 禽
收 稿 日期 ：０ ６０ —０ ２ ０ —８１
［２ 王玉堂． １３ 开发 中草药饲料添加剂大有可为［ 中国禽业 导刊 ， 刀．
２０ ，２ ５ ｔ３３ ０ ５２ （） ３ —．
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物疾 病 ， 国将 其 列为 一类 动 物疫病 ［ 我 １ ］
禽流感 的诊 断包括 临 床诊 断 和实 验室诊 断 。由
于流感病毒的亚型众多， 毒力差别很大， 所以临床症 状也千差万别 ， 难以与其他有类 似症状的传染病 区 分。而且流感的临床症状和病理变化因感染动物的
重视 ， 文章 就禽 流 感 病毒 分 子 生物 学检 测 方
兽 医药研究进展 ， ０ ３ （ ） １ １１２ ２ ０ ，８ 。３— ３． ［ ９ 马美蓉 ， 淑琴 ． 饲料安全 谈 中草药饲料 添加剂 的开发利 １］ 竺 从 用 ［］ 饲料研究 ，０ ４ （ ） ８１． Ｊ． ２ ０ ，２ 。１Ｌ９
［Ｏ 张君涛 ， ２］ 王建 华 ， 常文环． 中草药饲料添加剂开发与应用［ 刀．
（ 南 省兽 药监 察所 ， 南 郑 州 ４０ ０ ） 河 河 ５ ０ ８
中圈 分 类 号 ：８ ２ ６９ ５ ￥ ５ ． ５ ．
文 献 标 识 码 ： Ｂ
文 章 编 号 ；０ ７５ ３ （０ ６１—１ ８０ １ ０—０ ８ ２ ０ ） １ ０ —４ ０
其不 摘 要 ： 流感是 由流 感 病毒 引起 的 一种人 流感病 毒 引起 ， 仅 给养 禽业 带来 了毁灭 性 打击 ， 禽
作者简介 ： 京燕（９ ５ ， ， 黄 １ ５ 一） 女 河南郑州人 ， 医师， 兽 主要从事疲病监控和兽 药检 验工作
甘 辛鬻杀鬻谱黼 黼 ｝ 鬻诺书谱书毒木靠皋 诺皓禾杀毒罐弗靠杂靠木 书 雌 咔索靠啦靠书矗皋难啦弗睾靠带’ 畚畦书谁嵛卉书靠 皓÷ 靠 ＊
书 雌 豢带 带 谁 带 索 鬻 靠 带谁 书 奉举 靠 ＊ 辩 ÷ 辟
和 动物 的 高 度 传 染 性 疾 病 。 由 于 其 危 害 严 还严重影响了人类健康 。高致病性禽流感因其传播
危 被 Ｏ Ｅ 列为 Ａ 类动 重 ， 速 、 确 的诊 断技 术 对 于 禽 流 感 的 防 控 快 、 害 大 ， 世界 动 物卫 生组 织 （ Ｉ ） 快 准
显得非常 重要 。除 常规 的 临床 诊 断 、 毒 分 病 离鉴定、 血清 学检测 外 ， 分子 生物 学检 测方 法 由于具有 更加 快速 、 准确 的特 点愈 来愈 受到
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动物 医学进 展 ．０ ６ ２ （ １ ：０ —１ ２ ０ ，７ １ ） １ ８１ １
Ｐｒ ｇ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎ ｒ ｅ ｉｉ ｏ ｒ ｓ ｎ Ｖｅ ｅ ｉ ａ ｙ Ｍ ｄ ｃｎｅ
禽流 感病毒分子生物学检测方 法
黄 京 燕 ， 红 霞 ， 富娜 ， 周 邱 韩 立
［４ 徐 １］
岩ｔ 刁新平． 从饲料安全 的角度看 中草药饲料添加剂［ 刀．
中国动物保健 ，０ ６ （） ４ —７ ２０ ，１ 。 ４． ５
斌． 中草药 饲料添加剂 的应用研究进 展
［５ 庾莉萍． １］ 发展 中 草药 饲料 添加 剂 任重 道远 ［］ 湖南 饲料 ， Ｊ．
２ ０ ，（ ） ３ — ３ ０ ６ ３ 。１３．
法研 究进展 做 一 综述 ， 以期 为有 效地 控 制禽 种类 、 年龄、 病程长短 、 并发感 染情况及感染毒株毒 流感的流行和暴发提供有 力技 术支撑 。 力等不同而有所不 同， 可能缺 乏特征性症状和剖检 关键词 ： 禽流 感病毒 ； 分子生物学 ； 研究进展
Ａ 型 流感 病毒属 中的禽 流感病 毒 引起 的发 生于 各种 变化 ， 给 流感 的 诊 断 和 防控 带 来 极 大 的 困难 。因 这 诊 流感 的惟一 有 效 途 径 ， 尤其 是 随着 分 子 生 物 学技 禽 流感 （ ｉ ｆ ｅｚ ， ） 由 正 黏 病 毒 科 此 ， 靠 临床 诊 断 常 常难 以确 诊 。实验 室 诊 断是 确 Ａｖ ｎｉ ｌ ｎｅ ＡＩ是 ａ ｎｕ 单
［ Ｏ 祝耀德 ， 庆平 ， 兴 隆． １３ 胡 刘 中草药 饲 料 添加剂 的作用 与开 发
［ 中国兽药 杂志 ，０ ５ ３ （ ０ 。８３ ． 刀． ２ ０ ，９ １ ） ２添加 扪介 绍［ 广西 ｉ３ 刀．
畜 牧兽 医 ，９ ９ １ （） ｔＯ４ ． １９ ，５ ４ ４ 一２
［ ］ 孝 子石 。 ９ 金晓红 ， 宋振清 ， 中草 药饲料 添加剂在 养鸡业 中的 等．
应用现状 ［ 现代 畜牧兽 医，０ ６ （ ） ６８ 刀． ２ ０ ， ５ 。—．
富 ，０ ５ （ ） ５ ２ ０ ， ５ 。。 ［ ８ 侯俊峰 ， 玉俊 ． 研究中草药饲料 添加剂 的初步设想［］ 中 １］ 徐 对 Ｊ．