光谱法研究甲苯达唑与牛血清白蛋白的相互作用

收稿日期:2019-12-16 修回日期:2020-05-10
基金项目:国家自然科学基金(N o .41602351
) *通讯作者:顾佳丽,女,副教授,研究方向为分析化学㊂E -m a i l :g u j
i a l i _99@163.c o m 第36卷第6期V o l .36 N o .6
分析科学学报
J O U R N A LO FA N A L Y T I C A LS C I E N C E
2020年12月
D e c .2020
D O I :10.13526/j
.i s s n .1006-6144.2020.06.014光谱法研究甲苯达唑与牛血清白蛋白的相互作用
顾佳丽*,王思宇,杨 丹,黄曦瑶,何 茜,秦洪伟
(渤海大学化学化工学院,辽宁锦州121013
)摘 要:本文采用多种光谱法研究了甲苯达唑(M B Z )与牛血清白蛋白(B S A )之间的相互作用机制㊂荧光猝灭实验及时间分辨荧光实验结果表明:M B Z 对B S A 的荧光猝灭
主要为静态猝灭;温度298K 时二者的结合常数与结合位点数分别为6.52ˑ104
L
㊃m o l -1和1.08;热力学参数ΔH 与ΔS 分别为-117.49k J ㊃m o l -1和-229.24J ㊃m o l
-1
㊃K -1,说明M B Z 与B S A 之间的作用力主要为范德华力和氢键㊂位点竞争实验结果表明M B Z 结合在B S A 亚结构域ⅡA 的S i t e Ⅰ㊂紫外-可见光谱㊁同步荧光光谱㊁红外光谱法以及圆二色光谱实验结果表明,M B Z 诱导B S A 的构象发生变化㊂关键词:甲苯达唑;牛血清白蛋白;相互作用
中图分类号:O 657.3 文献标识码:A 文章编号:1006-6144(2020)06-857-06
苯并咪唑(B M Z s
)是一种合成的抗寄生虫药物,由于其高效性和广谱性,在农业和水产养殖中被广泛用于治疗吸虫和线虫感染[1]
㊂但是不正确的使用会使B M Z s 在食用动植物产品中残留,
并通过食物链在人体中累积,对人体健康构成潜在的危害[2]
㊂动物实验证明,某些B M Z s 具有致畸和致突变的作用[3],因此,B M Z s 被中国㊁美国和欧盟等多个国家和地区列为兽药残留的重要监控对象[4]
,并制定了最大残留限量[
5]
㊂B M Z s 对人体的毒性与血清白蛋白(S A )的储运功能密切相关[6]
㊂S A 作为人和动物血浆中重要的载
体蛋白,可以与多种外源性物质结合,影响其在生物体中的储存㊁分布㊁代谢和毒性[7]
㊂本文以B M Z s 中常
用药物甲苯达唑(M B Z )为例,研究M B Z 与牛血清白蛋白(B S A )
的相互作用机制,对于从分子水平上了解B M Z s 药物在生物体内的分布㊁
吸收及潜在毒性具有一定的参考意义㊂1 材料与方法
1.1 实验仪器与试剂
F l u o r o m a x -4N I R 型荧光分光光度计(法国,堀场);F L S 1000型稳态瞬态荧光光谱仪(
英国,爱丁堡);J a s c o J -810型圆二色光谱仪(日本,分光);U V 2800型紫外-可见分光光度计(上海舜宇恒平);傅里叶变换红外光谱仪(德国,布鲁克)
㊂牛血清白蛋白(B S A ,S i g
m a );甲苯达唑(M B Z )㊁华法林钠㊁布洛芬和8-苯胺-1-萘磺酸(阿拉丁);乙腈(国药试剂)㊂B S A 储备液(1.0ˑ10-4
m o l ㊃L -1)用p H=7.4的T r i s -H C l 缓冲溶液配制,冷藏保存,现用现配;M B Z 储备液(1.0ˑ10-4
m o l ㊃L -1)
用乙腈溶解配制,避光保存;华法林钠与布洛芬储备液用乙醇配制㊂其它试剂均为分析纯㊂1.2 实验方法
1.2.1 荧光光谱的测定 于比色管中加入1.0ˑ10-6
m o l ㊃L -1的B S A 溶液10m L ,
用微量进样器滴加M B Z 溶液(1.0ˑ10-3
m o l ㊃L -1)㊂分别在温度298K ㊁303K 和310K 下记录B S A 及其与M B Z 作用的荧
7
58
第6期
顾佳丽等:光谱法研究甲苯达唑与牛血清白蛋白的相互作用
第36卷
光光谱㊂激发波长280n m ,发射波长290~500n m ,激发狭缝和发射狭缝均为5n m ㊂研究了乙腈对荧光光谱的影响,结果表明在本实验范围内乙腈的影响可以忽略不计㊂记录空白的荧光光谱,以扣除配体和缓冲溶液的荧光影响㊂根据公式:F c o r =F o b s ˑ
e A e x +A e m
2
)[8]对荧光发射强度进行修正以消除内滤光效应㊂同
步荧光光谱设置Δλ分别为15n m 和60n m ,
其它条件同荧光光谱法㊂1.2.2 时间分辨荧光光谱的测定 室温下测定了B S A 及其与M B Z 作用的荧光寿命,激发波长290n m ,
发射波长345n m ,量子点数收集5000,
采用仪器自带软件进行荧光寿命拟合㊂1.2.3 紫外-可见吸收光谱(U V -V i s )的测定 于比色管中加1.0ˑ10-6
m o l ㊃L -1的B S A 溶液3.0m L ,
滴加M B Z 溶液(1.0ˑ10-4
m o l ㊃L -1),分别测定B S A 及其与M B Z 作用的紫外-可见吸收光谱㊂1.2.4 圆二色光谱(C D )的测定 波长范围200~250n m ,扫描速度100n m ㊃m i n
-1
,样品池光径1m m ,分辨率0.1n m ,分别测定B S A 及其与M B Z 作用的C D 光谱㊂
1.2.5 傅里叶红外(F T -I R )光谱的测定 采用衰减全反射法(A T R )记录了B S A 及其与M B Z 作用的
F T -I R 光谱,分辨率为4c m -1,扫描分辨率为128㊂分别收集B S A 溶液和缓冲溶液的光谱,并做差谱得到作用前的B S A 的红外光谱,同样条件下扫描M B Z -B S A 体系和M B Z 的红外光谱,做差谱得到与M B Z 作
用后的B S A 红外光谱㊂
1.2.6 8-苯胺-1-萘磺酸(A N S )荧光光谱的测定 固定A N S 与B S A 的浓度比为5ʒ1,滴加M B Z 溶液,
激发波长380n m ,发射波长400~600n m ,其它条件同荧光光谱法㊂1.2.7 共振散射荧光光谱(R L S )的测定 波长测定范围250~600n m ,Δλ=0n m 时同步扫描B S A 及其与M B Z 作用的R L S 光谱㊂其它参数设定同荧光光谱测定㊂
1.2.8 位点竞争实验 固定B S A 与M B Z 的浓度比为1ʒ5,变化华法林或布洛芬的浓度从5.0ˑ10-7
~
2.5ˑ10-6
m o l ㊃L -1,
测定荧光光谱㊂2 结果与讨论
2.1 M B Z 与B S A
相互作用的荧光光谱
图1 B S A 与M B Z 作用的荧光光谱
F i g .1 F l u o r e s c e n c e o f s p
e c t r a o fB S Aa n dM B Z c B S A =1.0ˑ10-6m o l ㊃L -1,c M B Z
=0,2,4,6,8,10,12(ˑ10-6m o l ㊃L -1).
B S A 与M B Z 作用的荧光光谱见图1㊂B S A 在波长347n m 处有较强吸收峰,随着M B Z 浓度的增大,B S A 的荧光强度降低且蓝移至344n m ㊂这表明M B Z 会猝灭B S A 的荧光强度,并影响氨基酸周围微环境,疏水性增加[
9]
㊂2.2 荧光猝灭机制
荧光猝灭机制主要有动态猝灭和静态猝灭㊂猝灭过
程符合S t e r n -V o l m e r 方程[10]
:F 0/F =1+K q τ0[
Q ]=1+K S V [Q ])㊂以F 0/F 对[Q ]作图,由曲线斜率求出M B Z 对
B S A 的猝灭常数K S V 见表1㊂K S V 随温度的升高而减小,且三个温度下K q 均大于猝灭剂对蛋白质的最大扩散碰撞猝灭速率常数(2.0ˑ1010L ㊃m o l -1㊃s -1
),因此推断M B Z
对B S A 的猝灭主要为静态猝灭㊂
表1 B S A 与M B Z 作用的猝灭常数㊁
结合常数㊁结合位点数及热力学常数T a b l e 1 Q u e n c h i n g c o n s t a n t s ,b i n d i n g c o n s t a n t s a n d t h e r m o d y n a m i c s p a r a m e t e r s o fB S Aa n dM B Z T
/K
K S V /(L ㊃m o l -1)K q /(L ㊃m o l -1㊃s -1)K A /(L ㊃m o l -1
)
n ΔH /(k J ㊃m o l -1)ΔS /(J ㊃m o l -1㊃K -1)ΔG
/(k J ㊃m o l -1)2982.62ˑ10
4
2.62ˑ10
12
6.52ˑ10
4
1.08-49.183031.82ˑ1041.82ˑ10123.56ˑ1041.06-117.49-229.24
-48.03310
1.44ˑ10
4
1.44ˑ10
12
1.06ˑ10
4
0.97
-46.43
2.3 结合常数及结合位点数
M B Z 与B S A 形成复合物,可用双倒数方程:(l o g [(F 0-F )/F ]=l o g K A +n l o g [Q ])[11
],以l o g [(F 0-F )/8
58
第6期
分析科学学报
第36卷
F ]对l o g
[Q ]作图,由曲线的截距和斜率计算M B Z 与B S A 作用的结合常数K A 及结合位点数n (表1)㊂K A 均约为104L ㊃m o l -1
,说明M B Z 和B S A 形成了较为稳定的复合物,B S A 可以携带转运M B Z ㊂n 约为
1,表明M B Z 与B S A 之间存在一个结合位点㊂
2.4 热力学参数及作用力类型
药物和蛋白质之间的作用力主要有疏水作用㊁静电作用力㊁范德华力和氢键㊂根据热力学参数可以用
来判断药物和蛋白质之间的作用力类型㊂热力学常数焓(ΔH )㊁熵(ΔS )和吉布斯自由能(ΔG )
可以通过V a n tH o f f 方程:(l n K A =-ΔH R T +ΔS R
)[12
]及ΔG =ΔH -T ΔS 求得(表1)㊂ΔH 和ΔS 均小于零,
说明M B Z 与B S A 的相互作用主要为范德华力和氢键㊂ΔG 小于零,说明反应是自发进行的㊂2.5 能量转移与结合距离的计算
根据F ör s t e r 非辐射能量转移理论[1
3]
,当供体的荧光发射光谱和受体的吸收光谱之间有充分的重叠,且作用距离小于7n m 时,它们之间很可能发生非辐射能量转移㊂由M B Z 的吸收光谱和B S A 的发射光
谱重叠求得积分J =2.8ˑ10-15c m 3㊃L ㊃m o l -1
,临界距离R 0=1.98n m ,能量转移效率E =18.4%,
作用距离r =3.84n m ,说明M B Z 和B S A 之间发生非辐射能量转移的可能性极高㊂r >R 0,说明M B Z 对B S A 荧
光猝灭主要是由静态猝灭引起的㊂
2.6 时间分辨荧光光谱
对于动态猝灭,猝灭剂会缩短荧光分子激发态寿命,而对于静态猝灭,荧光分子激发态寿命则不会发生
改变㊂将B S A 与M B Z 作用前后的荧光衰减曲线进行双指数拟合,并根据方程:<τ>=(B 1τ1+B 2τ2)/(B 1+
B 2)[14]计算B S A 的荧光寿命为τ1=4.75n s (38.65%),τ2=6.75n s (61.35%),平均寿命5.98n s (χ2
=1
.16)㊂与M B Z 作用后,B S A 的荧光寿命变为τ1=4.26n s (52.95%),τ2=7.12n s (47.05%),平均寿命5.61n s (χ2
=
1.13)㊂M B Z 没有引起B S A 荧光寿命的明显改变,因此推断M B Z 对B S A 的猝灭主要为静态猝灭㊂
2.7 M B Z 对B S A 构象的影响图2 B S A 与M B Z 相互作用的紫外-可见光谱F i g .2 U V -V i s a b s o r b a n c e s p
e c t r a o
f B S Aa n dM B Z c B S A =1.0ˑ10-6m o l ㊃L -1,c M B Z =0,3,6,9,11.9,14.8,17.7(ˑ10-6m o l ㊃L -1).
2.7.1 紫外-可见吸收光谱 图2为B S A 与M B Z 作用的吸收光谱,B S A 分别在波长208n m 和278n m 处有两个吸收峰,208n m 处的较强吸收峰与B S A 分子中肽链构象有关,278n m 处的较弱吸收峰与芳香氨基酸周围微环境的极性有关㊂随着M B Z 浓度的增大,B S A 在208n m 处的吸光度减小且红移至210n m ,278n m 处的吸收峰减
小且略红移(1n m ),这说明M B Z 诱导B S A 二级结构发生
改变,且影响氨基酸残基周围微环境的极性减小[
15]
㊂2.7.2 同步荧光光谱 同步荧光光谱可以提供发色团周
围微环境的特征信息㊂当Δλ=15n m 或Δλ=60n m 时,B S A 的同步荧光光谱只显示酪氨酸或色氨酸的荧光光谱特征㊂由图3(A )可以看出,当Δλ=15n m 时,
同步荧光光谱变化较小;而图3(B )表明,当Δλ=60n m 时,随着M B Z
浓度的增加荧光强度减小且略有蓝移(349~347n m )㊂说明M B Z 主要猝灭的是色氨酸残基,
并使其周围疏水性增加[
16
]㊂2.7.3 圆二色(C D )光谱 B S A 与M B Z 作用的C D 光谱如图4所示㊂B S A 在远紫外区的208n m 和
220n m 处有两个负吸收峰,是典型的α-螺旋结构的特征,能够反映蛋白质主链的构象性质㊂随着M B Z 的
加入,B S A 两个负峰强度改变,α-螺旋结构含量可用公式[17]
:α-H e l i x (%)=-M R E 208-400033000-4000
ˑ100,
M R E =O b s e r v e d C D (m d e g )10ˑn ˑl ˑC p
计算㊂结果表明,M B Z 使B S A 的α-螺旋含量降低(55.4%~51.2%)
,说明M B Z 诱导B S A 的二级结构发生了变化,这一结果与紫外-
可见光谱实验结果是一致的㊂2.7.4 傅里叶变换红外光谱 红外光谱法是研究B S A 二级结构变化的常用方法㊂B S A 的红外光谱主
9
58
第6期
顾佳丽等:光谱法研究甲苯达唑与牛血清白蛋白的相互作用
第36
卷
图3 B S A 与M B Z 作用的同步荧光光谱F i g .3 S y n c h r o n o u s f l u o r e s c e n c e s p
e c t r a o fB S Aw i t h M B Z c B S A =1.0ˑ10-6m o l ㊃L -1,c M B Z =
0,2,4,6,8,10,12(ˑ10-6m o l ㊃L -1).图4 B S A 与M B Z 相互作用的C D 光谱F i g .4 C Ds p
e c t r a o fB S Aa n dM B Z c B S A =1.5ˑ10-6m o l ㊃L -1,c M B Z /C B S A =0ʒ1,10ʒ1,20ʒ1.要分为位于1700~1600c m -1的酰胺Ⅰ带(C=O 的伸缩
振动吸收),以及位于1600~1500c m -1的酰胺Ⅱ带(C -
N 伸缩振动与N-H 面内弯曲振动)
[18
]㊂酰胺Ⅰ带对B S A 的二次结构变化比酰胺Ⅱ带更敏感㊂利用傅里叶去
卷积和二阶导数技术处理红外光谱,将酰胺Ⅰ带分解为多个子峰,并估算子峰的位置和宽度(图5)㊂通过曲线拟合,定
量分析B S A 二级结构各组分的含量为:反平行β-折叠(1
680~1690c m -1)11.0%;β
-转角(1680~1660c m -1)14.1%;α-螺旋(1660~1649c m -1)53.2%;无规则卷曲(1
638~1648c m -1)13.5%;β-折叠(1615~1637c m -1
)8.2%㊂与M B Z 作用后,B S A 的反平行β-折叠含量增加到13.6%,β
-转角含量增加到15.4%,α-螺旋含量减少到43.8%;无规则卷曲含量增加到17.7%,β-折叠增加到9.5%㊂这一结果说明M B Z 使B S A 二级结构发生改变,这一结果与圆二色光谱是一致的
㊂
图5 B S A (A )与M B Z 作用(B )的红外(I R )
光谱F i g .5 I Rs p
e c t r a o fB S A (A )a n dM B Z (B )2.7.5 A N S 荧光光谱 A N S 是一种对于疏水性环境敏感的荧光探针,
常用于研究蛋白质表面疏水性变化㊂B S A -A N S 体系与M B Z 作用的荧光光谱如图6所示㊂A N S 在水中的荧光强度很弱,但与B S A 的疏水性基团结合后荧光强度显著增强㊂随着M B Z 浓度的增大,B S A -A N S 体系的荧光强度降低,
这说明M B Z 使B S A 表面疏水性减少[19]
㊂2.8 共振散射光谱
B S A 与不同浓度M B Z 作用的共振散射光谱见图7所示㊂B S A 的共振散射信号较弱,但随着M B Z 浓
度的增大,体系的共振散射强度显著增强,其原因可能是M B Z 与B S A 形成粒径较大的复合物,
导致共振散射信号增强[20]
㊂0
68
第6期分析科学学报第36
卷
图6M B Z对B S A-A N S体系的荧光猝灭光谱
F i g.6F l u o r e s c e n c e q u e n c h i n g s p e c t r a o f B S A-A N S b y M B Z
a:B S A,c B S A=1.0ˑ10-6m o l㊃L-1.b:A N S,c A N S=1.0ˑ10-5 m o l㊃L-1,c M B Z(c-i)=0,2,4,6,8,10,12(ˑ10-6m o l㊃L-1)
.图7M B Z与B S A作用的共振散射光谱
F i g.7R L S o fM B Za n dB S A
c B S A=1.0ˑ10-6m o l㊃L-1;c MB Z(aңe)=0,4.5,5.7,8.0,
9.1(ˑ10-6m o l㊃L-1).
2.9结合位点
B S A通常有两个结合位点和药物发生结合,一是位于亚结构域ⅡA的色氨酸残基T r p212;二是位于亚结构域ⅢA的色氨酸残基T r p314,分别定义为S i t eⅠ和S i t eⅡ㊂华法林(S i t eⅠ)和布洛芬(S i t eⅡ)是最常用的位点探针㊂位点探针的百分数可用公式(P r o b eD i s p l a c e m e n t(%)=F2/F1ˑ100%)计算[21]㊂结果表明,华法林使得M B Z-B S A体系的P r o b eD i s p l a c e m e n t(%)由92.0%下降至61.5%,布洛芬使得M B Z-B S A体系的P r o b eD i s p l a c e m e n t(%)由95.2%下降至94.0%㊂这说明M B Z和华法林在S i t eⅠ发生了竞争,即M B Z结合在B S A亚结构域ⅡA处的S i t eⅠ㊂
3结论
本文通过多种光谱法研究了M B Z与B S A的相互作用机制㊂实验结果表明,M B Z会与B S A通过范德华力和氢键形成复合物,从而导致B S A荧光猝灭㊂U V-V i s光谱㊁同步荧光光谱㊁F T I R光谱和C D光谱实验结果表明,M B Z诱导B S A二级结构改变,并且影响色氨酸周围微环境㊂位点竞争实验表明,M B Z结合在B S A亚结构域ⅡA处的S i t eⅠ㊂实验结果以期为从分子水平上了解苯并咪唑类药物与蛋白质的作用机制提供参考依据㊂
参考文献:
[1] L IR,Y A N GLQ,L U OYD,e t a l.J o u r n a l o f I n s t r u m e n t a l A n a l y s i s(李蓉,杨璐齐,罗阳丹等.分析测试学报),2018,37
(5):547.
[2] L IT,HU A N G YZ,J I A N G YF,e t a l.T h eF o o d I n d u s t r y(李唐,黄永震,姜艳芬等.食品工业),2019,40(7):260.
[3] Z HA OCQ,L I UZ,X U X Y,e t a l.P h y s i c a lT e s t i n g a n dC h e m i c a lA n a l y s i s(C h e m i c a lA n a l y s i s)(赵超群,刘柱,徐潇颖
等.理化检验-化学分册),2017,53(7):765.
[4] X I A OLZ,Z O U Y,C H E NSM.J o u r n a l o f I n s t r u m e n t a lA n a l y s i s(邵琳智,邹游,陈思敏.分析测试学报),2019,38(8):990.
[5] L I N H D,L I NF,Z HA N G MJ,e t a l.F o o dS c i e n c e(林海丹,林峰,张美金等.食品科学),2011,32(2):231.
[6] K o r k m a zF,E r d o g a nD A,Öz a l p-Y a m a nS.N e wJ o u r n a l o fC h e m i s t r y2015,39(7):5676.
[7] X I O N GSP,C H E NJB.S p e c t r o c s o p y a n dS p e c t r a lA n a l y s i s(熊时鹏,陈建波.光谱学与光谱分析),2018,38(11):175.
[8] L iX,C h e nD,W a n g G.J o u r n a l o fL u m i n e s c e n c e,2014,156:255.
[9] T o p r a k M,A rık M.L u m i n e s c e n c e t h e J o u r n a l o fB i o l o g i c a l a n dC h e m i c a l L u m i n e s c e n c e,2015,29(7):805.
[10]L IH,X U Q,Z H E N G X L,e t a l.S p e c t r o c s o p y a n dS p e c t r a lA n a l y s i s(李红,许茜,郑晓丽等.光谱学与光谱分析),
2018,38(12):3839.
[11]G O N G A Q,J I N D Q,Z HU XS.S p e c t r o c s o p y a n dS p e c t r a lA n a l y s i s(龚爱琴,金党琴,朱霞石.光谱学与光谱分析),
2018,38(1):157.
[12]G O N G H Q,C H E NJB.S p e c t r o c s o p y a n dS p e c t r a lA n a l y s i s(龚含情,陈建波.光谱学与光谱分析),2018,38(6):1869.
[13]WA N G XX,N I EZ H,L I SB,e t a l.S p e c t r o c s o p y a n dS p e c t r a lA n a l y s i s(王晓霞,聂智华,李松波等.光谱学与光谱分
析),2018,38(8):2468.
168
第6期顾佳丽等:光谱法研究甲苯达唑与牛血清白蛋白的相互作用第36卷
[14]X i eX Y,LüWJ,C h e nX G.J o u r n a l o fH a z a r d o u sM a t e r i a l s,2013,347:248.
[15]D u a nST,L i uBS,L iT T,C u iM M.J o u r n a l o fA p p l i e dS p e c t r o s c o p y,2017,84(3):431.
[16]Y uX,L i a oZ,J i a n g B,H uX,L iX.S p e c t r o c h i m i c aA c t aP a r tA:M o l e c u l a r a n dB i o m o l e c u l a rS p e c t r o s c o p y,2015,137:
129.
[17]X I O N GSP,C H E NJB.S p e c t r o c s o p y a n dS p e c t r a lA n a l y s i s(熊时鹏,陈建波.光谱学与光谱分析),2018,38(11):
3489.
[18]M aR,L i ZY,D iXX,G u oDX,J i JB,W a n g SQ.B i o S c i e n c eT r e n d s,2018,12(4):369.
[19]K h o d a r a h m iR,K a r i m i SA,K o o s h kM RA,G h a d a m i SA,G h o b a d i S,A m a n iM.S p e c t r o c h i m i c aA c t a.P a r tA:M o l e c u-
l a r a n dB i o m o l e c u l a r S p e c t r o s c o p y,2012,89(4):177.
[20]S i d d i q u i S,A m e e nF,J a h a n I,N a y e e mS M,T a b i s h M.N e wJ o u r n a l o fC h e m i s t r y,2019,43(10):4137.
[21]X i o n g X,H e J,Y a n g H,T a n g P,T a n g B,S u nQ.R S C A d v a n c e s,2017,7(77):48942.
I n v e s t i g a t i o no fB i n d i n g I n t e r a c t i o n sB e t w e e n M e b e n d a z o l e
w i t hB o v i n e S e r u m A l b u m i nb y M u l t i s p e c t r o s c o p y
G UJ i a l i,WA N GS i y u,Y A N G D a n,HU A N G X i y a o,H E Q i a n,Q I N H o n g w e i
(C o l l e g e o f C h e m i s t r y a n dC h e m i c a lE n g i n e e r i n g,B o h a i U n i v e r s i t y,J i n z h o u121013)
A b s t r a c t:M e b e n d a z o l e(M
B Z)i sv e t e r i n a r y d r u g c o m m o n l y u s e df o ra n t i p a r a s i t i cc o n t r o l i nd o m e s t i c a n i m a l,b u t i t s r e s i d u e s i n e d i b l e a n i m a l s p r o d u c t sm a y p o s e p o t e n t i a l t o x i c t o h u m a nh e a l t h.T h e b i n d i n g m e c h a n i s mb e t w e e n M B Za n db o v i n e s e r u ma l b u m i n(B S A)w a s i n v e s t i g a t e db y m u l t i s p e c t r o s c o p y.T h e r e s u l t so f f l u o r e s c e n c e q u e n c h i n g a n d t i m e-r e s o l v e d f l u o r e s c e n c em e a s u r e m e n t s s h o w e d t h a t q u e n c h i n g o f B S Ab y M B Zw a sm a i n l y s t a t i c q u e n c h i n g.T h e b i n d i n g c o n s t a n t s a n dn u m b e r o f b i n d i n g s i t e sw e r e6.52ˑ104L㊃m o l-1a n d1.08a t298K,r e s p e c t i v e l y.T h et h e r m o d y n a m i c p a r a m e t e r se n t h a l p y a n de n t r o p y w e r e-117.49k J㊃m o l-1a n d-229.24J㊃m o l-1㊃K-1,i n d i c a t i n g t h a t t h e i n t e r a c t i o nb e t w e e nB S Aa n d M B Zw e r e v a nd e rw a a l s f o r c e s a n dh y d r o g e nb o n d.T h e r e s u l t so f s i t em a r k e r c o m p e t i t i v e e x p e r i m e n t s s u g g e s t e d t h a tM B Zc o u l db o u n dB S Ai n t os i t eⅠi ns u b d o m a i nⅡA.T h ec o n f o r m a t i o no fB S A w a s c h a n g e d a f t e r t h e i n t e r a c t i o n w i t h M B Z,w h i c h w e r ev e r i f i e db y t h er e s u l t so fU V-V i ss p e c t r o s c o p y, s y n c h r o n o u sf l u o r e s c e n c es p e c t r o s c o p y,f o u r i e rt r a n s f o r mi n f r a r e ds p e c t r o s c o p y a n dc i r c u l a rd i c h r o i s m s p e c t r o s c o p y.
K e y w o r d s:M e b e n d a z o l e;B o v i n e s e r u ma l b u m i n;I n t e r a c t i o n
268。