淀粉酶的制备及活力测定共24页
淀粉酶活力测定实验报告
淀粉酶活力测定实验报告一、实验目的1、学习和掌握淀粉酶活力测定的原理和方法。
2、了解淀粉酶的作用特点及其在生物体内的重要性。
3、培养实验操作技能和数据处理能力。
二、实验原理淀粉酶是能够水解淀粉分子中α-1,4 糖苷键的一类酶的总称，包括α淀粉酶和β淀粉酶。
α淀粉酶可以随机地作用于淀粉分子内部的α-1,4 糖苷键，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
β淀粉酶则从淀粉分子的非还原性末端依次水解相隔的α-1,4 糖苷键，生成麦芽糖。
在本次实验中，利用淀粉酶水解淀粉生成还原糖，还原糖能与 3,5-二硝基水杨酸试剂反应，生成棕红色的 3-氨基-5-硝基水杨酸。
颜色的深浅与还原糖的量成正比，通过比色法测定吸光度，并与标准曲线对比，即可计算出淀粉酶的活力。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜淀粉酶提取液1%淀粉溶液（称取 1g 可溶性淀粉，加入少量蒸馏水调匀，然后缓缓倾入沸水中并不断搅拌，最后定容至 100ml）pH 69 的磷酸缓冲液3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS 试剂）麦芽糖标准溶液（1mg/ml）2、实验仪器分光光度计恒温水浴锅移液器离心机试管、刻度吸管、容量瓶等四、实验步骤1、标准曲线的绘制取 7 支干净的具塞刻度试管，编号，按下表加入试剂：｜管号｜麦芽糖标准液（ml）｜蒸馏水（ml）｜ DNS 试剂（ml）｜麦芽糖含量（mg）｜｜｜｜｜｜｜｜ 0 ｜ 0 ｜ 20 ｜ 20 ｜ 0 ｜｜ 1 ｜ 02 ｜ 18 ｜ 20 ｜ 02 ｜｜ 2 ｜ 04 ｜ 16 ｜ 20 ｜ 04 ｜｜ 3 ｜ 06 ｜ 14 ｜ 20 ｜ 06 ｜｜ 4 ｜ 08 ｜ 12 ｜ 20 ｜ 08 ｜｜ 5 ｜ 10 ｜ 10 ｜ 20 ｜ 10 ｜｜ 6 ｜ 12 ｜ 08 ｜ 20 ｜ 12 ｜摇匀后，在沸水浴中加热 5 分钟，取出后立即用冷水冷却至室温，再向每管中加入蒸馏水 20ml，摇匀。
以 0 号管为空白对照，在 540nm 波长下测定各管的吸光度值。
淀粉酶活力的测定方法
淀粉酶活力的测定方法淀粉酶是一类能够催化淀粉水解的酶，在生物体内和工业生产中都具有重要的作用。
准确测定淀粉酶的活力对于研究酶的性质、生物体的代谢过程以及相关工业应用都具有重要意义。
下面将介绍几种常见的淀粉酶活力测定方法。
一、碘淀粉比色法碘淀粉比色法是一种较为经典且常用的测定方法。
其原理是淀粉经淀粉酶水解后，剩余的淀粉与碘液反应生成蓝色复合物，颜色的深浅与剩余淀粉的量成正比。
通过比色法测定反应后溶液的吸光度，即可计算出淀粉酶的活力。
具体操作步骤如下：首先，准备一系列含有不同浓度淀粉溶液的试管，并向其中加入适量的淀粉酶溶液，在一定的温度和 pH 条件下反应一段时间。
然后，迅速向各试管中加入碘液，使反应终止。
最后，使用分光光度计在特定波长下测定各试管溶液的吸光度。
根据事先绘制的标准曲线，将吸光度值转换为剩余淀粉的浓度，从而计算出淀粉酶水解淀粉的量，进而得出淀粉酶的活力。
这种方法的优点是操作相对简单、成本较低，但缺点是灵敏度相对较低，对于低活力的淀粉酶测定可能不够准确。
二、DNS 法（3,5-二硝基水杨酸法）DNS 法是另一种常用的测定淀粉酶活力的方法。
其原理是淀粉在淀粉酶的作用下水解为还原糖，还原糖能与 3,5-二硝基水杨酸在碱性条件下共热，被还原成棕红色的氨基化合物。
在一定范围内，还原糖的生成量与淀粉酶的活力成正比，通过比色测定棕红色物质的吸光度，即可计算出淀粉酶的活力。
操作过程如下：将淀粉溶液与淀粉酶溶液在适宜条件下反应一定时间后，取出适量反应液，加入DNS 试剂，在沸水浴中加热一段时间，使反应充分进行。
冷却后，使用分光光度计测定溶液在特定波长下的吸光度。
与碘淀粉比色法相比，DNS 法的灵敏度较高，能够更准确地测定低活力的淀粉酶，但操作过程相对复杂一些。
三、斐林试剂法斐林试剂法也是基于淀粉水解产生还原糖的原理。
斐林试剂由硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液组成，还原糖能将斐林试剂中的二价铜离子还原为一价铜离子，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
淀粉酶活力的测定
00淀粉酶活力的测定一、目的学习和掌握测定淀粉酶（包括α-淀粉酶和β-淀粉酶）活力的原理和方法。
二、原理淀粉是植物最主要的贮藏多糖，也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料。
淀粉经淀粉酶作用后生成葡萄糖、麦芽糖等小分子物质而被机体利用。
淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种。
α-淀粉酶可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，每次水解下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶。
淀粉酶催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，其反应如下：淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。
用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。
两种淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化。
β-淀粉酶不耐热，在70℃15min钝化。
根据它们的这种特性，在测定活力时钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。
本实验采用加热的方法钝化β-淀粉酶，测出α-淀粉酶的活力。
在非钝化条件下测定淀粉酶总活力（α-淀粉酶活力+β-淀粉酶活力），再减去α-淀粉酶的活力，就可求出β-淀粉酶的活力。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料萌发的小麦种子（芽长约1cm）2．仪器（1）离心机（2）离心管（3）研钵（4）电炉（5）容量瓶：50mL×1, 100mL ×1 （6）恒温水浴（7）20mL具塞刻度试管×13 （8）试管架（9）刻度吸管：2mL×3, 1mL×2, 10mL×1 （10）分光光度计3．试剂（均为分析纯）（1）标准麦芽糖溶液（1mg/mL）：精确称取100mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至100mL。
淀粉酶的制备及活力测定
（ 4 ） 1 ％ 淀 粉 溶 液 ： 称 取 1 g 淀 粉 溶 于
100mL0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液中。
（ 5 ）
0.4M NaOH
实训步骤
1 、称取 1g 萌发 3 天的小麦种子，置于
研钵中。 2. 加入少量的石英砂和 2mL 的蒸馏水， 研磨匀浆。 3. 将匀浆倒入离心管中，用 6mL 蒸馏 水分次将残渣洗入离心管。提取液在 室温下放置提取 15 至 20 分钟。每隔数 分钟搅动一次，使其充分提取。
[3] 何国庆 , 丁立孝 . 食品酶学 . 北京 : 化学工业出版社 2009 [4] 周晓云编著.酶技术.北京:石油工业出版社，1995 [5] 罗贵民.酶工程.北京:化学工业出版社，2003 [6] /question/266186296.htm l
实训原理：
淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。用标准浓度 的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀 粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成 的麦芽糖的量表示酶活力。
淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子， 淀粉酶活力最强，其中主要是α- 淀粉酶和β- 淀粉酶。两种 淀粉酶特性不同，α - 淀粉酶不耐酸，在pH3.6 以下迅速钝化。 β-淀粉酶不耐热，在70℃15min钝化。
（ 3 ）如果条件允许，各实验小组可采用不同材料，
参考文献：
[1] Gardner H W.Recent investigations into the lip oxygenase pathway of plants.Biochem Biophysical Ac ta.1991 [2] 莎娜,赵立超,陈永泉.α-淀粉酶对甘薯果脯废糖液澄 清效果的研究
实验一α-淀粉酶活力的测定
结果处理与计算
数据处理
根据实验数据，我们计算了酶活力、 反应速率等参数。
图表绘制
我们使用图表展示了实验结果，以便 更直观地分析数据。
结果分析
酶活力比较
通过比较不同浓度酶液的酶活力，我们可以得出酶活力与酶浓度 之间的关系。
反应速率分析
通过分析反应速率，我们可以了解酶促反应的动力学特征。
结论总结
综合以上分析，我们可以得出实验一α-淀粉酶活力测定的结论， 并为其应用提供依据。
用紫外可见分光光度计在540nm波长处测定各管 的吸光度值。
数据记录与处理
01
记录实验数据，计算α-淀粉酶活力。
02
根据实验数据绘制标准曲线和酶 活性曲线。
04
结果分析
数据记录
实验数据
在实验过程中，我们记录了不同浓度 酶液处理后的反应时间、温度、pH值 等数据。
实验误差
在实验过程中，我们尽量减小误差， 如使用精确的测量工具、多次测量取 平均值等。
05
实验总结与讨论
实验总结
01
实验原理
本实验通过测定α-淀粉酶催化淀粉水解生成可溶性糖的速率，从而确定
酶活力的大小。
02 03
实验步骤
准确称取适量淀粉和底物溶液，加入试管中，加入适量酶液，在适宜温 度下恒温水浴一定时间，然后加入碘液和氢氧化钠溶液终止反应，最后 用斐林试剂进行滴定。
实验结果
通过滴定结果计算出α-淀粉酶活力的大小。
DNS溶液
称取3，5-二硝基水杨酸6.3g，溶解于50mL蒸馏水中，加入2mol/L氢氧化钠溶液 16.8mL，再加入20%酒石酸钾钠溶液10mL和2mol/L硫酸溶液20mL，混合均匀后 加热至80℃，不断搅拌，直至溶液呈透明。冷却后用蒸馏水定容至100mL，避光保 存。
测定淀粉酶活性实验报告
一、实验目的1. 了解淀粉酶的生物学特性及其在生物体内的作用。
2. 掌握淀粉酶活性的测定方法。
3. 分析淀粉酶活性受温度、pH值等因素的影响。
二、实验原理淀粉酶是一种水解淀粉的酶，可以将淀粉分解为麦芽糖和葡萄糖。
淀粉酶活性是指单位时间内淀粉酶催化淀粉分解的速率。
本实验采用DNS法测定淀粉酶活性，DNS 法是一种灵敏、准确、精确度高的测定方法，适用于测定小样品淀粉酶活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：淀粉酶、淀粉、DNS试剂、标准葡萄糖溶液、pH缓冲液、蒸馏水、试管、恒温水浴锅、移液器、量筒、滴定管等。
2. 实验仪器：pH计、电子天平、电子显微镜、分光光度计等。
四、实验步骤1. 配制淀粉酶溶液：称取适量淀粉酶，用蒸馏水溶解，配制成一定浓度的淀粉酶溶液。
2. 配制淀粉溶液：称取适量淀粉，用蒸馏水溶解，配制成一定浓度的淀粉溶液。
3. 测定淀粉酶活性：取一定量的淀粉溶液于试管中，加入适量淀粉酶溶液，置于恒温水浴锅中，在一定温度下反应一定时间。
4. 测定DNS反应液：取一定量的反应液，加入DNS试剂，置于沸水浴中反应一定时间。
5. 比色：用分光光度计在特定波长下测定DNS反应液的吸光度。
6. 计算淀粉酶活性：根据标准葡萄糖溶液的吸光度值，绘制标准曲线，计算反应液中葡萄糖的浓度，进而计算淀粉酶活性。
五、结果与分析1. 淀粉酶活性随温度升高而增加，在一定温度范围内达到最大值，之后随温度升高而降低。
2. 淀粉酶活性随pH值升高而增加，在一定pH范围内达到最大值，之后随pH值升高而降低。
3. 淀粉酶活性受激活剂和抑制剂的影响，其中激活剂可以增强淀粉酶活性，抑制剂可以抑制淀粉酶活性。
六、实验结论1. 淀粉酶是一种水解淀粉的酶，在生物体内具有重要作用。
2. DNS法是一种灵敏、准确、精确度高的测定淀粉酶活性的方法。
3. 淀粉酶活性受温度、pH值、激活剂和抑制剂等因素的影响。
七、实验讨论1. 实验过程中，淀粉酶溶液和淀粉溶液的浓度对实验结果有较大影响，需要严格控制浓度。
淀粉酶活性测定实验报告
一、实验目的1. 了解淀粉酶的生物学特性及其在生物体内的重要作用；2. 掌握淀粉酶活性测定的原理和方法；3. 通过实验，探究温度、pH值等因素对淀粉酶活性的影响。
二、实验原理淀粉酶是一种能够水解淀粉的酶，其活性高低可以反映酶的催化能力。
本实验采用DNS 法测定淀粉酶活性，DNS 法是利用淀粉酶催化淀粉水解生成还原糖，还原糖与DNS 试剂发生反应，产生黄色化合物，通过比色法测定还原糖的浓度，从而间接反映淀粉酶的活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 淀粉酶（市售）- 淀粉溶液- DNS 试剂- 碘液- 酚酞指示剂- 蒸馏水- pH 试纸- 温度计2. 实验仪器：- 721分光光度计- 磁力搅拌器- 电子天平- 试管- 移液器四、实验步骤1. 配制淀粉酶溶液：将市售淀粉酶按照说明书配制一定浓度的淀粉酶溶液。
2. 设置实验组：- 温度实验组：分别设置30℃、40℃、50℃、60℃、70℃ 的温度梯度，每组加入相同量的淀粉酶溶液和淀粉溶液，搅拌反应 10 分钟。
- pH 值实验组：分别设置 pH 3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0 的 pH 值梯度，每组加入相同量的淀粉酶溶液和淀粉溶液，搅拌反应 10 分钟。
3. DNS 反应：- 取反应后的溶液，加入 DNS 试剂，沸水浴加热 5 分钟。
- 取出后，加入 1 滴酚酞指示剂，继续沸水浴加热 5 分钟。
4. 比色：- 使用 721 分光光度计在 540 nm 波长下测定溶液的吸光度值。
5. 数据处理：- 根据标准曲线，计算各组反应生成的还原糖浓度。
- 比较各组实验结果，分析温度、pH 值等因素对淀粉酶活性的影响。
五、实验结果与分析1. 温度对淀粉酶活性的影响：- 从实验结果可以看出，淀粉酶活性随着温度的升高而增加，在60℃ 时达到峰值，之后随着温度的继续升高，淀粉酶活性逐渐降低。
2. pH 值对淀粉酶活性的影响：- 从实验结果可以看出，淀粉酶活性在 pH 6.0 时达到峰值，之后随着 pH 值的继续升高或降低，淀粉酶活性逐渐降低。
淀粉酶活性测定实验报告
班级：植物092 姓名：徐炜佳学号：0901080223淀粉酶活性的测定一、研究背景及目的酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白，几乎所有的生化反应都离不开酶的催化，所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的研究有着非常重要的意义。
酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。
酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称，按照其水解淀粉的作用方式，可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。
α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种，存在于禾谷类的种子中。
β-淀粉酶存在于休眠的种子中，而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。
α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之则易穗发芽。
目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种,活力单位的定义也各不相同,国内外测定α-淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、3,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法。
这3种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉酶活性应该分别是延迟(内源)α-淀粉酶、萌动种子α-淀粉酶和后熟面粉的α-淀粉酶活性。
本实验的目的在于掌握α-淀粉酶和β-淀粉酶的提取和测定方法。
二、实验原理萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶，β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6下则发生钝化。
本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性，在高温下（70℃）下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。
酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的，淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定，由于麦芽糖能将后者还原生成硝基氨基水杨酸的显色基团，将其颜色的深浅与糖的含量成正比，故可求出麦芽糖的含量。
常用单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。
淀粉酶活性测定实验报告
班级：植物092 姓名：徐炜佳学号：0901080223淀粉酶活性的测定一、研究背景及目的酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白，几乎所有的生化反应都离不开酶的催化，所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的研究有着非常重要的意义。
酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。
酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称，按照其水解淀粉的作用方式，可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。
α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种，存在于禾谷类的种子中。
β-淀粉酶存在于休眠的种子中，而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。
α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之则易穗发芽。
目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种,活力单位的定义也各不相同,国内外测定α-淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、3 ,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法。
这3 种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉酶活性应该分别是延二、实验原理萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶，β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6下则发生钝化。
本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性，在高温下（70℃）下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。
酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的，淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定，由于麦芽糖能将后者还原生成硝基氨基水杨酸的显色基团，将其颜色的深浅与糖的含量成正比，故可求出麦芽糖的含量。
常用单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。
然后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性。
实验中为了消除非酶促反应引起的麦芽糖的生成带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。
淀粉酶活力测定实验报告
淀粉酶活力测定实验报告1. 引言淀粉酶是一种在生物体内起着重要作用的酶类。
它能够催化淀粉的水解，将淀粉分解成葡萄糖等可溶性糖分子。
淀粉酶活力的测定对于研究酶的功能和特性具有重要意义。
本实验旨在通过测定淀粉酶活力的方法，探究酶的催化作用及其影响因素。
2. 实验目的本实验的目的是通过测定淀粉酶活力，了解酶的催化作用和影响因素，并掌握测定酶活力的方法。
3. 实验原理淀粉酶是一种催化淀粉水解的酶，其催化作用可以用以下反应表示：淀粉 + 淀粉酶→ 可溶性糖本实验使用淀粉作为底物，通过观察淀粉水解的速度来测定淀粉酶的活力。
实验中，我们将淀粉酶和淀粉溶液一起加入反应体系中，随着反应的进行，淀粉逐渐被水解，产生可溶性糖。
我们可以通过检测可溶性糖的浓度变化来确定淀粉酶的活力。
4. 实验步骤4.1 准备实验材料和仪器•淀粉酶溶液•淀粉溶液•恒温水浴•试管•移液器•酶活性检测试剂盒4.2 实验操作步骤1.取一支试管，标记为“试验组”。
2.使用移液器向“试验组”试管中加入10 mL淀粉溶液。
3.使用移液器向“试验组”试管中加入适量的淀粉酶溶液。
4.快速将试管放入恒温水浴中，并固定温度为37摄氏度。
5.开始计时。
6.反应进行1分钟后，使用试管夹取出试管，立即加入酶活性检测试剂盒中。
7.轻轻摇动试管混合，使试剂充分反应。
8.等待适当的时间，观察试剂颜色的变化。
9.使用比色计或其他测量设备，测定试剂颜色的光密度。
10.记录测得的光密度值。
4.3 实验对照组操作步骤为了验证实验结果的准确性，我们设置了一个对照组，即不加淀粉酶的淀粉水解反应。
对照组操作步骤与实验组相同，唯一的区别是在第3步中不加入淀粉酶溶液。
5. 实验结果分析通过测定实验组和对照组的光密度值，我们可以得到淀粉酶的活力。
实验组的光密度值反映了淀粉酶催化淀粉水解的程度，而对照组的光密度值反映了没有淀粉酶催化的淀粉水解程度。
通过比较两者的差异，我们可以得出淀粉酶的活力。
淀粉酶的制备及活力测定
(三）α-淀粉酶活力测定： ① 取试管3支 ② 于每管中各加入酶液1mL，在70℃±0.5℃恒温 水浴中准确加热15min，钝化β-淀粉酶。取出 后迅速用流水冷却。 ③ 在对照管中加入4mL0.4mol/L氢氧化钠。 ④ 在4支试管中各加入1mLpH5.6柠檬酸缓冲液。 ⑤ 将4支试管置于恒温水浴中，40℃±0.5℃保温 15min，再向各管分别加入40℃下预热的1%淀 粉液2mL，摇匀，立即放入40℃恒温水浴准确计 时保温5min。取出后向测定管迅速加入 4mL0.4mol/L氢氧化钠，终止酶活动，准备测糖。
项目二
淀粉酶的制备及应用
班级 姓名 学号 小组
一、淀粉酶
淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，通 常通过淀粉酶催化水解织物上的淀粉浆料， 由于淀粉酶的高效性及专一性，酶退浆的 退浆率高，退浆快，污染少，产品比酸法、 碱法更柔软，且不损伤纤维。淀粉酶的种 类很多，根据织物不同，设备组合不同， 工艺流程也不同，目前所用的退浆方法有 浸渍法、堆置法、卷染法、连续洗等，由 于淀粉酶退浆机械作用小，水的用量少， 可以在低温条件下达到退浆效果，具有鲜 明的环保特色。
四、实验步骤
1. 将萌发好的稻谷种子去壳，注意别把芽去掉， 称取1g，置于研钵中。 2. 加入少量的石英砂和2mL的蒸馏水，研磨匀浆。 3. 将匀浆倒入离心管中，用6mL蒸馏水分次将残 渣洗入离心管。提取液在室温下放置提取15至20 分钟。每隔数分钟搅动一次，使其充分提取。 4. 然后在3000转/分转速下离心10分钟。 5. 将上清液过滤，倒入100mL容量瓶中，加蒸馏 水定容至刻度，摇匀，即制得α-淀粉酶原液。 装入试剂瓶中，贴标签，保存于低温冰箱中，为 以后的实验使用。
0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液： A液（0.1mol/L 柠檬酸）：称取C6H8O7.H2O 21.01g，用蒸馏水溶解并定容至1L； B液（0.1mol/L 柠檬酸钠）：称取 Na3C6H5O7.2H2O 29.41g，用蒸馏水溶解并 定容至1L。 取A液13.7mL与B液26.3mL混匀，即为 0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液； 1％淀粉溶液：称取1g淀粉溶于 100mL0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液中。
淀粉酶的制备及活力测定方案
1
2
3
2、加蒸馏水1ml
加NaOH1ml
加HCl1ml
1
2
3
3、各加可溶性淀粉溶液2ml
1
2
3
4、放入60º C热水中
5、加斐林试剂2ml
1
2
3
60º C热水
60º C热水 温度条件保持5min
60º C热水
6、煮沸1min
1 2 3
实验器材
• 1.菌种：枯草芽孢杆菌JD-32生产法 • 2.仪器：培养皿、试管、发酵罐、灭菌 锅、振荡培养箱、高速冷冻离心机
工艺流程
保藏菌种
斜面活化
摇瓶种子 培养
厚层通风 发酵
种子罐扩 大培养
粗制品 沉淀 收集滤液 过滤
烘干 抽提 麸曲
离心洗涤沉淀ຫໍສະໝຸດ 风干粉碎精制品
实验步骤
1.培养基 的制备 与灭菌
三、实验步骤
• （一）麦芽糖标准曲线的制作：取7支干净的具塞刻度试管，编号，按表（详 教材）加入试剂。摇匀，置沸水浴中煮沸5min。取出后流水冷却，加蒸馏水 定容至20ml。以1号管作为空白调零点，在540nm波长下比色测定。以麦芽 糖含量为横座标，吸光度值为纵座标，绘制标准曲线.（二）酶液制备：称取 1g萌发3天的小麦种子（芽长约1cm），置于研钵中，加少量石英砂和2ml蒸 馏水，研磨成匀浆。将匀浆倒入离心管中，用6ml蒸馏水分次将残渣洗入离心 管。提取液在室温下放置提取15～20min，每隔数min搅动1次，使其充分提 取。然后在3000rpm下离心10min，将上清液倒入100ml容量瓶中，加蒸馏水 定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液10ml，放入50ml 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶稀释液。（三）酶活力 的测定：取6支干净的具塞刻度试管，编号，按表（详教材）进行操作。（四） 结果计算：淀粉酶活力=C×VT/(W×Vs×T)(mg/g/min)。式中，C为从标准曲 线上查得的麦芽糖含量（mg）；VT为淀粉酶原液总体积（ml）；Vs为反应 所用淀粉酶原液体积（ml）；W为样品重量（g）；t为反应时间（min）。
淀粉酶活力的测定
00淀粉酶活力的测定一、目的学习和掌握测定淀粉酶（包括α-淀粉酶和β-淀粉酶）活力的原理和方法。
二、原理淀粉是植物最主要的贮藏多糖，也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料。
淀粉经淀粉酶作用后生成葡萄糖、麦芽糖等小分子物质而被机体利用。
淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种。
α-淀粉酶可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，每次水解下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶。
淀粉酶催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，其反应如下：淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。
用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。
两种淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化。
β-淀粉酶不耐热，在70℃15min钝化。
根据它们的这种特性，在测定活力时钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。
本实验采用加热的方法钝化β-淀粉酶，测出α-淀粉酶的活力。
在非钝化条件下测定淀粉酶总活力（α-淀粉酶活力+β-淀粉酶活力），再减去α-淀粉酶的活力，就可求出β-淀粉酶的活力。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料萌发的小麦种子（芽长约1cm）2．仪器（1）离心机（2）离心管（3）研钵（4）电炉（5）容量瓶：50mL×1, 100mL ×1 （6）恒温水浴（7）20mL具塞刻度试管×13 （8）试管架（9）刻度吸管：2mL×3, 1mL×2, 10mL×1 （10）分光光度计3．试剂（均为分析纯）（1）标准麦芽糖溶液（1mg/mL）：精确称取100mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至100mL。
淀粉酶活力的测定
淀粉酶活力的测定摘要：本实验以萌发的种子为材料，以麦芽糖为辅助材料，测定其中α-淀粉酶和β-淀粉酶活性及其之间的差异；了解722分光光度计的应用领域。
熟识缓冲溶液的布局；通过对两种淀粉酶的测量得出结论α-淀粉酶的活力为1.368；（α+β）淀粉酶的活力为17.415，r2=关键词：α-淀粉酶；b-淀粉酶；麦芽糖标准曲线；淀粉酶几乎所有的植物种子中都所含淀粉酶，特别就是萌生的禾谷类种子，其淀粉酶的活力最强大。
淀粉酶主要分成a-淀粉酶和b-淀粉酶。
种子萌生时，淀粉酶的活性可以随着萌生时间的流逝而快速减少，其促进作用就是将淀粉水解为小分子糖类，可供幼苗生长。
a-淀粉酶随机水解a-1-4糖苷键，做为淀粉水解的初始酶而起至主要促进作用，其水解产物为麦芽糖、麦芽三糖、糊精等；b-淀粉酶水解非还原成端的第二个a-1-4糖苷键，水解产物为麦芽糖。
原理：这两种淀粉酶有不同的理化性质，a-淀粉酶不耐酸，在ph3.6以下迅速钝化；b-淀粉酶在70℃下15min被钝化。
据此。
可以在钝化其中之一，来测定另一个酶的活力。
该试验通过先钝化b-淀粉酶来测定a-淀粉酶的活力，在与非钝化条件下测的的总淀粉酶活力比较，从而求出b-淀粉酶的活力。
淀粉的水解产物麦芽糖及其他还原糖能与3，5-二硝基水杨酸试剂反映，使其还原生成红色3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，其颜色深浅与淀粉水解产物的浓度成正比，可用麦芽糖或者葡萄糖浓度表示，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内分解成的麦芽糖的量表示酶活力。
实验仪器及试剂722分光光度计；离心机；恒温水浴器；研钵；具有刻度试管25ml13两支；刻度液体1ml、2ml、5ml各1两支；容量瓶50ml2两支(1)麦芽糖标准液（1mg/ml）；(2)dns试剂；（4）0.1mol/lph5.6柠檬酸缓冲液(3)1%淀粉溶液1、试剂的配置（1）称取100mg麦芽糖，用蒸馏水熔化并定容至100ml（2）称取3，5-二硝基水杨,1g，溶20ml12mol/lnaoh溶液中，加入50ml蒸馏水，在加入30g酒石酸钠，待溶解后用蒸馏水定容至100ml。
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糖所需要的酶量。
1 U=1 mg 还原糖/min·mL 酶
三. 实验材料及设备
1、材料 淀粉酶液（粗酶液、盐析液、脱盐液） 2、仪器 分光光度计 恒温水浴 沸水浴 3、器材
刻度试管： 25 mL×17 移 液 管： 1 mL×3（取稀释后的酶液） 烧 杯： 250 mL×1 滴 管： 2 洗 耳 球： 2 洗瓶、试管架、移液管架、玻棒：各1 移 液 器：专取NaOH 注 射 器：专取蛋白样品
试管排列顺序
室温
装约20 mL淀粉溶液， 标记，转至37℃水浴
锅中
37 ℃
粗酶液
1
空白
淀粉
盐析
2
脱盐
3
B1
B2
B3
B1
B2
B3
F1
F2
F3
F1
F2 F3
因淀粉中含有少量还原糖， 某些溶液有色素、杂质，需
查看酶不水解淀粉的情况
0 时刻
5 min时刻
实验编号
粗酶液 (1)
盐析液 (2)
脱盐液 (3)
操作
0号管 0时刻 5min时刻 0时刻 5min时刻 0时刻 5min时刻 B1 B1’ F1 F1’ B2 B2’ F2 F2’ B3 B3’ F3 F3’
淀粉酶液 (ml)
0.3
0.2
0.5
其催化能H力2O的大(小m用l酶) 的活力来3表.5示。
其注催p射化H器能：力6专.的8取大缓蛋小冲白用样酶液品的活力来表示。
八、分析
1.三种酶活力大小顺序是怎样，为什么是这样？ 2.酶液的稀释倍数是否要改变。 3.计算酶液的总活力、回收率。