专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
➢实验目的 从土壤中分离分解尿素的细菌并计数
培养基中以尿素为唯一氮源，只有能合成脲酶的微生
➢实验原理 物才能分解尿素，缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿
素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所 以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
➢实验材料 小铁铲、培养皿、试管、移液管、锥形瓶等
（二）制备培养基 实验组：制备选择培养基 （尿素为唯一氮源的培养基）
筛选出能够分解尿 素的细菌
对照组：制备完全培养基 （牛肉膏蛋白胨培养基）
与选择培养基做对照， 检测选择培养基是否具 有选择作用
➢实验步骤——【3】样品稀释与涂布
判断选择培养基是否 具有筛选作用
选择培养基 完全培养基
➢实验步骤——【3】样品稀释与涂布
（3）测真菌数：一般用102、103、104稀释液
第一次做该实验时，可以将稀释的范围放宽一点，如可 以将103 ~ 107分别涂布到平板上培养。保证获得菌落数 在30～300之间、适于计数的平板
➢4】微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
➢实验步骤 实验结果
实验流程：
土壤取样 制备培养基 样品稀释涂布平板 微生物的培养与观察
菌落计数
（一）土壤取样 从富含有机物、潮湿、酸碱度适中的土壤中取样。铲 去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的
信封中。 铁铲和信封都要灭菌
“微生物的天然培养基”
数量最大、种类最多
大约70%—90%是细菌 细菌适宜在富含有机质，酸碱度接近中性的潮湿土壤 中生长，绝大多数分布在约3~8cm的土壤层。
专题2：课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
实验方案有两种
一种方案： 可以由其他同学用与A同学一样的土样进 行实验，如果结果与A同学一致，则证明A无 误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失 误或培养基的配制有问题。 另一种方案： 将A同学配制的培养基在不加土样的情况 下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。通过这个事例可以看出，实验结 果要有说服力，对照的设置是必不可少的。
许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻 止其他种类微生物生长的培养基。
【统计菌落数目】
常用方法：稀释涂布平板法、显微镜直接计数法，
1、稀释涂布平板法（也叫活菌计数法）
原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表
面生长的一个菌落，来源于样品稀释
液中的一个活菌，通过统计平板上的 菌落数，就能推测出样品中大约含有 多少活菌。
计算公式：
每克样品中的菌落数=（某一稀释度下平板上生长的平均菌落 数／涂布平板所用稀释液体积）×稀释倍数
1.想一想，如何从平板上的菌落数推测出 每克样品中的菌落数？ 答：统计某一稀释度下平板上的菌落数， 最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平 均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。
2、显微镜直接计数法 （1）原理：此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品 中微生物数量。
专题2 微生物的培养与应用
【课题目标】
研究培养基对微生物的选择作用，进行微 生物数量的测定。
【研究对象】
土壤中能分解尿素的细菌
【达到目的】
（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这 样的细菌
【研究思路】
（一）筛选菌株
原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、
血球计数板构造：
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数知识梳理1.选择培养基：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时其他种类微生物生长的培养基。
（依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好、抗性而设计，从众多微生物中分离所需的微生物。
）★利用选择培养基分离微生物通过控制培养基的，使营养缺陷型微生物不能正常生长：培养基可以分离自生固氮微生物；作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物；筛选尿素分解菌时使用以为唯一氮源的培养基进行培养。
在完全培养基中加入加入可以分离出酵母菌和霉菌等真菌，同时抑制细菌的生长；加入高浓度的可以选择培养金黄色葡萄球菌。
改变微生物的。
在环境中培养可以得到耐高温的微生物；将培养基调至较低水平可以得到耐酸的微生物等。
鉴别培养基：依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计。
用于鉴别不同种类的微生物。
___________培养基可以鉴别大肠杆菌2.统计菌落数目： (1)常用方法：。
①原理：当样品的___________足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个_________。
通过统计平板上的___________来推测样品中大约含有的活菌数。
②实验计数要求：为了保证结果准确，一般选择菌落数在____________的平板进行计数。
③公式：每克样品中的菌株数= C：某稀释度下平板上生长的_________；V：涂布平板时所用的稀释液的_______(mL)； M：__________。
④误差：统计的菌落数比活菌的实际数目。
原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是。
(2)显微镜直接计数法①原理：利用或，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。
②误差：统计的菌落数比活菌的实际数目。
（不能区分细胞死活）3.实验流程：土壤取样→→微生物的培养与观察→细菌的计数(1)土壤取样：①取样原因：土壤有“微生物的___________”之称，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量_____，种类_____。
专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
3．重复组的结果是否一致 如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该 接近 。 _____ 四、操作提示 1．无菌操作 灭菌 。 (1)取土样的用具在使用前都需要_____ (2)应在火焰旁称取土壤，并在火焰附近将土样倒 入烧瓶中，塞好棉塞。 稀释 土壤溶液的过程中，每一步都要在 (3)在_______ 火焰 旁操作。 _____
2．实验室中目的菌株的筛选 (1)理论依据 目的菌株 人为提供有利于 ____________ 生长的条件 ( 包括营
养、温度、 pH等 ) ，同时抑制或阻止其他微生物生
长。
(2)选择培养基
特定种类的微生物生长， 指在微生物学中，允许_____
抑制 或阻止其他种类微生物生长的培养基。 同时_____
解析：选D。在设计实验时，一定要涂布至少3
个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力
与准确性，所以A、B两项不正确。C项虽涂布
了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与
另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现
了错误，因此，不能简单地用 3 个平板的计数
值求平均值。
知能过关演练
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2．做好标记 平板 和试管比较多，为避免混 本实验使用的 ______ 淆，最好在使用前就做好标记。 3．规划时间 对于耗时较长的生物实验，要事先规划时间， 以便提高工作效率，在操作时更加有条不紊。 五、课题延伸 细菌合成的_____ 脲酶 将尿素分解成氨，使培养基 的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中 红， 加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变___ 可确定该种细菌能够分解尿素。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课标领航 1 ．举例说明什么是选择培养基，并研究培 养基对微生物的选择作用。 2 ．设置重复组和对照组，对土壤中分解尿 素的细菌进行分离和计数。 【重点】 选择培养基的作用。 【难点】 菌落数目的统计。
专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（选修1）来源：拇指教育作者：小茹1．(2011年松原高二检测)土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种() A．尿素酶B．脲酶C．蛋白酶D．肽酶解析：选B。
能够分解利用尿素的细菌，其细胞内含有脲酶，可以把尿素分解成氨，然后进一步利用。
2．在培养基中加入尿素(惟一氮源)，以分离出能分解尿素的细菌，这种加入尿素的培养基在功能上属于()A．选择培养基B．固体培养基C．液体培养基D．半固体培养基解析：选A。
选择培养基是从功能上对培养基进行分类的，B、C、D三项所述的培养基是根据培养基的物理状态进行分类的。
题述培养基能分离出以尿素为惟一氮源的细菌，故是一种选择培养基。
3．实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触)，将平板置于37 ℃条件下恒温培养3天，结果如图所示。
从实验结果分析，以下叙述不正确的是()[来源:21世纪教育网]A．链霉素能阻止结核菌的生长B．链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C．链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效D．链霉素可以用于治疗伤寒病人解析：选D。
从图中可以看出，这是含有链霉素的选择培养基，接种的三种细菌中，霍乱菌和结核菌都可以被杀灭，并且链霉素对结核菌杀灭的有效程度大于霍乱菌，而伤寒菌照常生长不受影响，所以选项D错。
4．测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是()A．细菌个体小，真菌个体大B．细菌易稀释，真菌不易稀释C．细菌在土壤中数量比真菌多D．随机的，没有原因解析：选C，土壤中的微生物大约70%～90%是细菌，真菌的数量要比细菌少。
样品的稀释度越高，在平板上生成的菌落数目就越少。
在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300之间，适于平板计数，所以细菌的稀释倍数要高于真菌的稀释倍数。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
【土壤中分解尿素的细菌的分离和计数】一、研究思路1．筛选菌株尿素是一种重要的肥，农作物不能直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为和CO2，才能被植物利用，土壤中的这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成。
可以利用这一特点，将其从土壤中筛选出来。
(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于_____ _生长的条件(包括营养、、pH等)，同时____ _或其他微生物生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
2．统计菌落数目(1)常用来统计样品中数目的方法是__________ _______。
即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中。
通过统计平板上的，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。
例如每克样品中的菌株数= ,C代表 ,V代表 ,M代表。
通常统计出的菌落数比活菌的实际数目。
这是因为。
因此，统计结果一般用而不是活菌数来表示。
(2) 也是测定微生物数量的常用方法。
(3)细菌的数目还可以通过法来测定。
例如，测定饮水中大肠杆菌的数量，可将的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现色，可以根据培养基上的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。
在该实验中至少应取___个水样。
3．设置对照(1)设置对照的主要目的是排除实验组中___________对实验结果的影响，提高实验结果的。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需用______________________________ 作为空白对照。
(2)对照实验是指除了的条件外，其他条件都的实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起相应的结果。
二、实验设计实验设计包括对实验方案，所需仪器、材料，用具和药品，具体的以及时间安排等的综合考虑和安排。
关于土壤中某样品细菌的分离与计数的实验操作步骤如下：1．土壤取样土壤微生物约70%～80%为，主要分布在距地表的近性土壤中。
2-2课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数研究思路（一）筛选菌株1、尿素是一种重要的氮肥，农作物（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为，这是因为细菌能合成。
2、PCR技术中使用的耐高温的酶是，它是从中分离出来的。
科学家能从中把筛选出来是因为，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是_ 。
点评：生物适应一定环境，环境对生物具有作用。
所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。
〖本课题使用的培养基——见旁栏资料〗〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是，提供氮源的的是，琼脂的作用是。
〖思考2〗该培养基对微生物（具有，不具有）选择作用。
如果具有，其选择机制是。
3、选择培养基是指特定种类的微生物生长，同时其他种类微生物生长的培养基（二）统计菌落数目1、在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是。
除此之外，也是测定微生物数量的常用方法。
【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。
公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量2、统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度足够时，_ 。
通过统计，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
因此，恰当的是成功地统计菌落数目的关键。
3、．为保证统计结果准确，通常将都涂布在平板上，培养后再选择的平板进行计数。
4、在设计实验时，一定要涂布至少个平板作为重复组，才能增强实验的说服力和准确性。
在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果，结果，意味着操作有误，需要重新实验。
〖思考3〗统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是_ 〖思考4〗第位同学的结果接近真实值。
你认为这两位同学的实验需要改进的操作是第一位同学需；第二位同学_ 。
5、统计的菌落数比活菌的实际数目。
因为当两个或多个细胞时，平板上观察到的只是菌落。
因此，统计结果一般用来表示。
专题二 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
()
A．3 号试管中的菌落稀释倍数为 103 倍 B．4 号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数可能是 5
号的 10 倍 C．5 号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为 1.7×109 个 D．该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高
2.结果分析与评价
内容
结论分析
①空白对照组培养基上无菌落生长→未被杂菌
是否有杂菌污 污染；②空白对照组培养基上有菌落生长→被
染
杂菌污染；③实验组选择培养基上菌落形态多
样，菌落数偏高→培养基上可能混入其他氮源
选择培养基是 牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显多于选
否具有筛选作 择培养基上的菌落数目→选择培养基具有筛选
时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 一个 活菌 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中
大约含有多少活菌。 (2)测定微生物数量的常用方法还有 显微镜直接计数法 。 3．设置对照：排除实验组中 非测试因素 对实验结果的影响，
提高实验结果的 可信度 。
二、实验设计
土壤取样 → 样品的稀释 → 微生物的培养与观察
3．制定计划：对于耗时较长的生物实验，要事先 规划时间 ， 以便提高工作效率。
四、菌种鉴定 1．原理：分解尿素的细菌合成的 脲酶 将尿素分解成氨，使培
养基的碱性 增强 。 2．方法：在以 尿素 为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培
养细菌，若指示剂变 红 ，可确定该种细菌能够分解尿素。
[核心语句识记] 1．实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长
养时间 。 (2)观察：每隔 24 h 统计一次 菌落数目，最后选取菌落数目
稳定 时的记录作为结果。 三、操作提示 1．无菌操作：取土样用的小铁铲和盛土样的信封都要进行灭
第1部分 专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1．为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？当第一 次测定时为什么要将稀释的范围放宽一些？
提示：这是因为土壤中各类微生物的数量 (单位：株/kg) 是不同的；为确保能从中选择出菌落数在 30～300 之间的平 板进行计数。
2．为什么要选取菌落数目稳定时的记录作为结果？
提示：防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
每毫升原液含菌株数＝
平均菌落数 计算公式 400×1 0000× 每 小 格 所用涂布液的体积mL 平均菌株数×稀释倍数 ×稀释倍数
实验设计及操作提示
实验设计及操作提示
1．实验设计
2．操作提示 (1)无菌操作： ①取土样的用具在使用前都需要 灭菌。 ②应在 火焰 旁称取土壤， 并在火焰附近将称好的土样倒 入锥形瓶中，塞好 棉塞。 ③在稀释土壤溶液的过程中， 每一步都要在 火焰旁操作。 (2)做好标记：本实验使用的平板和试管比较多。为避免 混淆，最好使用前就做好 标记 。
(1)在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的是______， 提供氮源的是________。 (2)绝大多数微生物都能利用________，但是，只有能合成 脲酶的微生物才能分解________。 (3)分析该培养基的配方，该培养基对微生物是否具有选择 作用？如果具有，又是如何进行选择的？
[思路点拨]
2．显微镜直接计数法 (1)原理：此法利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微 镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。 (2)方法：用计数板计数。计数板是一块特制的载玻片，上 面有一个特定的面积为 1 mm2 和高为 0.1 mm 的计数室，在 1 mm2 的面积里又被划分成 25 个(或 16 个)中格，每个中格进一 步划分成 16 个(或 25 个)小格，但计数室都是由 400 个小格组 成的。如下图所示。
人教版高中生物选修一专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学案含解析
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
2．统计菌落数目(1)活菌计数法：常用稀释涂布平板法。
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②计算公式：每克样品中的菌株数＝(C ÷V )×M 。
C ：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。
V ：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)。
M ：代表稀释倍数。
③统计方法：为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取其平均值。
.1.实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)同时抑制或阻止其他微生物的生长。
2．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
3．测定微生物数量的常用方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。
稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌的实际数目低。
4．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作为唯一氮源的选择培养基分离能分解尿素的细菌。
5．鉴定分解尿素细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，依据是否变红进行判断。
(2)显微镜直接计数法：在显微镜下直接观察和计数微生物的数量。
3．设置对照(1)对照实验：指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。
(2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
二、实验设计1．土壤取样从富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤取样。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数核心知识要点1．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。
(2)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。
2．实验流程(1)土壤取样→富含有机质的土壤表层土(2)样品的稀释→通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板(3)接种→用稀释涂布平板法接种(4)培养⎩⎪⎨⎪⎧细菌：30～37 ℃培养1～2天放线菌：25～28 ℃培养5～7天霉菌：25～28 ℃培养3～4天(5)观察→根据菌落的特征区分微生物 (6)计数→统计菌落的数目(7)计算→根据公式“每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M[C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M 代表稀释倍数]”进行计算【重难详解】1．选择培养基四种常见制备方法或实例 方法一 加入某些特定物质2．两种计数方法的比较【解析误区】1．“选择菌落数在30～300的平板”的两个提醒用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在30～300的平板进行计数。
解题时易出现以下误解： (1)只得到1个菌落数在30～300的平板是错误的。
错误的原因是不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响。
(2)得到3个或3个以上菌落数在30～300的平板，也不一定正确，这可能有两种情况：①不同平板间差异较大，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30～300”，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太大，应重新实验找出原因。
②不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。
可见，并不是只要得到3个“菌落数在30～300的平板”即可，而应该是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在30～300之间”且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。
专题2 课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(38ppt)
(3)稀释倍数：
①测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液
进行平板培养。
103、104和105 倍稀释。 ②测定放线菌的数量，一般选用_____________ 102、103和104 倍稀释。 ③测定真菌的数量，一般选用_____________
3.微生物的培养与观察：
温度 和培 (1)培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养_____
液，进行观察计数。
(1)在实验中，某同学的部分实验操作过程是这样的：①从静 置试管中吸取酵母菌培养液加入计数板进行计数，并记录数据； ②把酵母菌培养液放置在冰箱中；③第七天再取样计数，记录 数据，统计分析绘成曲线。 请纠正该同学实验操作中的3处错误：
Ⅰ.________________________________________________。
课题2 土壤中分解尿素的细菌 的分离与计数
一、筛选菌株的思路
1.自然界中目的菌株的筛选：
生存环境 的要求，到相应的环境中去寻找。 (1)依据：根据它对_________ Taq DNA聚合酶 ，就 (2)实例：PCR技术过程中用到的耐高温的______________ 是从热泉中筛选出来的Taq细菌中分离出来的。
微生物才能生长。
答案：(1)葡萄糖 尿素 (2)葡萄糖 尿素
(3)该培养基对微生物具有选择作用。以尿素作为唯一氮源的 培养基可以分离出能产生脲酶的微生物。
【变式训练】用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要 设置的对照是( ) A.未接种的选择培养基
B.未接种的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基
C.接种的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基 D.接种的选择培养基 【解析】选C。将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养 基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，
专题2-课题2-土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
漏菌落的数目。
微生物的培养与观察P24 菌落的形状、大小、隆起程度和颜色
四、课题成果与评价 ①培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落; ②对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污 染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培 养基已筛选出一些菌落
（三）设置对照
①目的: 主要是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果 的可信度
②判断培养基中是否有杂菌污染？答：将未接种的培养基同时进行培养
③判断选择培养基是否具有筛选作用? 完全培养基（营养成分齐全）接种后培养观察菌落数目
三.实验设计 (一)土壤取样
（二）制备培养基
（三）样品的稀释
芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌， 某些真菌和放线菌也能分解尿素。
①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 4、课题目的
②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
5.研究思路 一.筛选菌株 二.统计菌落数目 三.设置对照
一.筛选菌株
(一)、实例： PCR技术 DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大 量复制(PCR)的技术，此项技术要求使用耐高温 （930C）的DNA聚合酶。（在哪里找这种酶？）
②如果得到了至少2个菌落数目在30—300的平板，则说明稀释操作比较成 功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相 差较大，表明试验不精确，需要重新实验。
(五).微生物的培养与观察
①培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌： 30～37℃ 培养1～2d 放线菌： 25～28℃ 培养5～7d 霉菌： 25～28℃ 的温度下培养3～4d。