火鸡禽流感新城疫免疫试验

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鸡新城疫的实验室诊断及鉴别

禽流感病鸡胰腺存在出血现象，新城疫病鸡胰腺无。禽流感病鸡卵泡萎缩同时存在出血现象，不断液化，最终形成筋膜。卵泡上可见黄色纤维素性渗出物，输卵管可见脓性或者凝蛋清样的分泌物，新城疫病鸡输卵管内部存在分泌物。禽流感病鸡肠道黏膜存在脱落现象，新城疫病鸡无。禽流感病鸡十二指肠以及回肠淋巴滤泡暴露，但是新城疫病鸡十二指肠、回肠以及卵黄蒂下端部位淋巴滤泡存在肿大现象以及出血症状，如果病情较为严重，还会出现呈纽扣状的坏死灶。禽流感病鸡颈部皮下、食道黏膜以及食道乳头均存在出血现象，新城疫病鸡无。禽流感病鸡腺胃乳头存在肿大出血现象，同时其腺胃黏膜存在出血现象，新城疫病鸡腺胃乳头、腺胃以及肌胃交界处、腺胃以及食道交界处均存在出血以及溃疡。新城疫病鸡气管上部以及气管黏膜存在出血现象，同时可见粘液，禽流感病鸡器官不存在明显变化，禽流感病鸡头部皮下可见胶样或者干酪样的渗出物，新城疫病鸡无。禽流感病鸡喉头部位不存在明显变化，新城疫病鸡喉头水肿并出血。 2.1.4 实验室诊断禽流感病毒可以对马、山羊以及绵羊红细胞进行凝集，新城疫病毒不能。
进行二次免疫，所以在养殖过程中，防
养禽
鸡新城疫的实验室诊断及鉴别
郭敏
（河南省济源市动物卫生监督所，河南济源 454650)
关键词：鸡新城疫；实验室诊断；鉴别 DOI:10援3969/J.ISSN援1671-6027援2020援05.152
鸡新城疫是养鸡业发病率较高的传染病，一旦发生会造成较为严重的损失。鸡新城疫的症状与禽流感、鸡霍乱较为相似，只有对这几种疾病进行有效区分和治疗，才能降低经济损失，保证养殖户安全。 1 实验室诊断
如果抗鸡新城疫血清能够对可疑病毒产生的红细胞凝集作用进行有效抑制，则该病毒判为鸡新城疫病毒。反过来也可用鸡新城疫病毒判断病愈鸡血清内是否存在抗体，进而诊断病鸡是否感染新城疫。如果可疑病鸡血清能对新城疫病毒的血红细胞的凝集作用进行有效抑制，即可确定该鸡曾经患有新城疫。通常情况下，对急性病鸡，其死亡前的血液中不存在抗体，如果病程达 5~6d，病鸡血液中存在血凝抑制抗体；如果病程超过 10d，其抗体效价可达 1：1280。

鸡新城疫抗体检测实验报告(一)

鸡新城疫抗体检测实验报告(一)背景介绍•鸡新城疫是一种常见的家禽传染病，严重影响鸡类养殖业。

•抗体检测可以有效判断鸡群是否感染鸡新城疫。

实验目的•确定一种高效准确的鸡新城疫抗体检测方法。

•提供可靠的数据支持，用于预防和控制鸡新城疫的传播。

实验设计•选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。

•分为实验组和对照组，实验组注射疫苗，对照组不注射。

•定期进行血液检测，测量抗体水平。

实验步骤1.收集血样。

2.提取血清。

3.使用特定抗体试剂盒进行检测。

4.测量光密度值，判断鸡新城疫抗体水平。

5.记录实验结果。

实验结果•实验组鸡群的抗体水平明显高于对照组。

•实验组的鸡只无明显临床症状，对疫情具有稳定抵抗力。

•对照组鸡群出现多例感染病例，病死率较高。

结论与建议•鸡新城疫抗体检测方法可准确判断鸡群感染情况，为预防和控制疫情提供重要依据。

•注射疫苗可以提高鸡只的免疫力，减少感染风险。

•鼓励养殖场加强抗体检测工作，及时发现病例并采取相应措施。

致所有鸡农：鸡新城疫是一项严重威胁家禽行业的疾病。

本实验通过抗体检测方法，证明了注射疫苗可以提高鸡群的免疫能力，减少感染的风险。

希望您能严格按照抗体检测规程，提高鸡只的免疫力，保障养殖业的稳定发展。

感谢您的关注与支持！注意：本报告仅为实验结果总结，并非具体实验报告。

具体实验细节和数据可根据实际情况进行增删和修改。

实验方法•选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。

•将实验组的鸡只注射鸡新城疫疫苗。

•对照组的鸡只不注射疫苗。

•按照一定周期，定期采集血液样本。

数据分析•对实验组和对照组的血液样本进行抗体检测。

•实验组的鸡只抗体水平明显升高，且持续稳定。

•对照组的鸡只抗体水平较低，易受感染。

结果讨论•实验结果证明，注射鸡新城疫疫苗可以有效提高鸡只的免疫力。

•抗体检测是一种可靠的方法，可以快速判断鸡群的感染情况。

•实验结果也表明，饲养场的防疫管理和养殖环境对感染鸡新城疫的影响较大。

结论•鸡新城疫抗体检测方法在预防和控制鸡新城疫方面具有重要意义。

鸡新城疫抗体检测实验报告

鸡新城疫抗体检测实验报告引言本实验旨在对鸡新城疫进行抗体检测，以评估鸡群对该病毒的感染情况。

通过收集血清样本并使用特定检测方法，我们能够确定鸡群中抗体的存在与水平。

这对于制定控制措施、监测疫情以及预防疾病的传播至关重要。

实验设计1. 样本采集我们在鸡群中随机选择了100只鸡进行样本采集，确保样本的代表性。

采集的方法包括抽取少量鸡脉血或者采集鸡羽毛根部进行检测。

2. 抗体检测方法我们采用了酶联免疫吸附试验（ELISA）方法进行抗体检测。

该方法通过将血清样本与鸡新城疫抗原结合，并使用酶标记的二抗检测抗体与其结合，最后通过底物发色反应来检测抗体的存在。

3. 阳性对照与阴性对照为了验证实验结果的准确性，我们使用了阳性对照和阴性对照。

阳性对照为已知感染鸡新城疫的鸡样本，而阴性对照为未感染的鸡样本。

实验结果我们对100个样本进行了抗体检测，并将结果进行统计和分析。

以下是实验结果的详细报告：1. 鸡新城疫抗体检测结果我们将鸡新城疫抗体检测结果分为三类：•强阳性：抗体水平高于阈值的样本。

•弱阳性：抗体水平介于阈值和阴性之间的样本。

•阴性：抗体水平低于阈值的样本。

2. 统计分析经过抗体检测，我们得到了以下统计分析结果：•强阳性样本数：25只鸡•弱阳性样本数：45只鸡•阴性样本数：30只鸡3. 结果解读我们的实验结果表明，在100只鸡样本中，25只鸡的抗体水平高于阈值，可以确认为感染了鸡新城疫。

另外，45只鸡的抗体水平介于阈值和阴性之间，可能存在早期感染的迹象。

剩余的30只鸡样本抗体水平低于阈值，说明它们未感染鸡新城疫。

结论与讨论本次实验通过鸡新城疫抗体检测方法对100只鸡样本进行了检测，并得出了实验结果。

结果表明鸡新城疫在该鸡群中流行的程度较高，25%的样本具有强阳性抗体水平。

我们认为，对鸡新城疫进行抗体检测有助于早期发现感染情况，及时采取控制措施以避免疫情的进一步传播。

此外，对鸡新城疫的抗体检测也可以作为鸡群健康监测的重要指标，帮助决策者制定防控策略和掌握疫情动态。

汾阳市某规模鸡场新城疫与禽流感的免疫效果调查

弘霄计字２１ＵＩ．
汾阳布规鸡崭锨虚禽汔的角虚数果调童
费强
（西省汾阳市动物疫病预防控制中心山
０２０）３２０
中图分类号：８１１￥５．３３
文献标识码：Ｂ
文章编号：６３１８（０１０ — ０００１７ — ０５２１）９０４ — ２
１１１新城疫标准抗原与阳性血清．购自农业部．．动物检疫所；禽流感Ｈ亚型Ｒ一ｅ５株、ｅ４株标Ｒ一
准抗原与阳性血清，购自青岛易邦生物工程有限公司，在有效期内使用。均
２０份。６
表ｌ鸡场新城疫的免疫程序
经济损失。禽流感传播速度快、死亡率高，而且给
人民身体健康带来严重威胁。目前预防鸡新城疫和禽流感的爆发还是采用接种疫苗的方式。并取得了良好的保护效果，但是免疫保护作用的产生及维持时间受到多方面因素的影响，免疫失败的情况仍时有发生。笔者对汾阳市某规模场进行鸡新城疫与禽流感的免疫效果调查．来评价疫苗接种的效果，制定合理的免疫程序提供参考依据。为
１１２９．．６孔Ｖ型微量板、微量移液器、ＢＰＳ液、０９．％灭菌生理盐水、氏液。阿

新城疫与禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活苗免疫效力试验

到保护。
关键词：新城疫；禽流感；油乳荆灭活苗；；疫保护力ＨＩ免
ＥｘｅｉｅｔｌＴｅｔｆＥｆｃｅｃｆａｉｅｕｓｏｎｒｃｉｅｏｐｒｍｎａｓｓｏｆｉｎｙｏｎｏｌｍｌｉｎＢｉａｙＶａｃｎｆｉ
ｔｅｅｎ１ｅｋｆｒｉｏｕｍｅＴｅｋａｅｈｉｍｆＨ１ｅｅｒａｈｄｏｅ１ｇｌｒａｓｏｈｅｔＴｅｉｒｄｉｗｅａｔｎｃｌｄｔｅｗｏｗｅｓｌｔｒｔｅｔｅｏｗｒｅｃｅｖｒ６ｏ２ａｌｉｌｔｅｔｓ．ｈｔｔｆ由ｓｆＨＩｅｃｅｔｅｒｅｋ３ｅｋａｔｒｎｃｌｔｄｎｍａｎａｎｄｖｒ４ｄｙ．Ｔｅｅｕｓｓｏｄｔａｈｒｏｒａｈｄｈｉｐａｓｗｅｓｆｉｏｕａａｄｅｅｉｔｉｅｏｅ５ａｓｈｒｓｈｈｗｅｈｔｔｅｐｏｅｔｎｒｔｏｈｎｖｅｔｎｉａｙａｃｎｅｅａｌ０％．Ｗｈｎｔｅｃｉｋｎｗｅｅｃａｅｇｄ６ｄｙｆｒｒｔｃｏａｅｆｔｅｍｏｏｏｎａｄｂｎｒｖｃｉｅｗｒｌｉｌ１０ｅｈｈｃｅｒｈｌｎｅ５ａｓａｅｌｔ
ｖｃｉｅｅｅａｃｎｗｒｍａｅｅｓｅｔｅｙｄｒｐｃｉｌｖＴｅｈ７一ａ — ｌｎｎｉｄｙｏｄｏ —ｍｍｕｉｅｃｉｋｎｎｚｄｈｃｅｗｅｌｉｏｕａｅａｄｔｅｒｎｃｌｔｄｎｈＨＩｎｉｏｙｗｅｅ￣Ａｔｄｒｂ

鸡新城疫实验报告

鸡新城疫实验报告鸡新城疫实验报告引言：近年来，鸡新城疫成为了农业领域的一大难题。

鸡新城疫是由新城疫病毒引起的一种高度传染性疾病，对家禽养殖业造成了严重的经济损失。

为了更好地了解鸡新城疫的传播机制和防控措施，我们进行了一系列的实验研究。

实验一：病毒传播途径的探究我们选取了一批健康的鸡只，并将其分为多个实验组。

首先，我们在实验组A中注射了新城疫病毒，并将其与实验组B中的鸡只隔离。

结果显示，实验组A中的鸡只出现了明显的疾病症状，而实验组B中的鸡只则保持了健康状态。

这表明，鸡新城疫主要通过直接接触传播。

接着，我们进行了进一步的实验，将实验组A中的鸡只与实验组C中的鸡只共同放置在同一笼子中。

结果显示，实验组C中的鸡只也出现了鸡新城疫的症状。

这表明，鸡新城疫也可以通过空气传播。

实验二：病毒的抗体检测为了进一步研究鸡新城疫的传播机制，我们对实验组A中的鸡只进行了抗体检测。

实验结果显示，实验组A中的鸡只体内出现了新城疫病毒的抗体。

这表明，鸡新城疫病毒可以在感染后引起鸡只产生免疫反应，从而形成抗体。

实验三：疫苗的防控效果评估为了评估疫苗的防控效果，我们选取了一批健康的鸡只，并将其分为两组。

实验组A中的鸡只接种了新城疫疫苗，而对照组B中的鸡只则未接种疫苗。

随后，我们将实验组A和对照组B中的鸡只分别与感染新城疫病毒的鸡只接触。

结果显示，实验组A中的鸡只未出现明显的疾病症状，而对照组B中的鸡只则出现了鸡新城疫的症状。

这表明，新城疫疫苗对鸡新城疫具有一定的防控效果。

实验四：环境因素对病毒传播的影响为了研究环境因素对鸡新城疫的传播影响，我们进行了一系列的实验。

首先，我们在实验室中设置了不同温度和湿度的环境，并将感染新城疫病毒的鸡只放置在其中。

结果显示，高温和低湿度环境下，鸡新城疫的传播速度更快。

这表明，环境因素对鸡新城疫的传播起到了一定的影响。

结论：通过一系列的实验研究，我们对鸡新城疫的传播机制和防控措施有了更深入的了解。

青年鸡新城疫、高致病性禽流感免疫抗体检测

9青年鸡新城疫、高致病性禽流感免疫抗体检测谢梅，刘广喜，田亚娜（衡水市冀州区农业农村局053200）2016年以来，衡水市冀州区某青年鸡养殖场根据疫苗厂家的建议结合本场经验，自拟免疫程序进行鸡新城疫、高致病性禽流感等主要疫病免疫，未发生过新城疫、高致病性禽流感。

为摸清该场青年鸡免疫抗体水平，给免疫工作提供科学依据，我们于2019年7月30日对该场52日龄青年鸡随机抽取30只鸡血清进行了鸡新城疫、H5亚型禽流感(Re-11株,Re-12株)和H7亚型禽流感（H7Re-2株）免疫抗体检测。

通过检测，鸡新城疫血凝抑制抗体效价平均为9.1log2,H5亚型禽流感(Re-11株)血凝抑制抗体效价平均为9.8log2,H5亚型禽流感(Re-12株)血凝抑制抗体效价平均为9.2log2,H7亚型禽流感（H7Re-2株）血凝抑制抗体效价平均为10log2，免疫抗体效价高而整齐，现将该场鸡免疫方案及免疫抗体检测结果报告如下，供兽医同行和养鸡工作者参考。

1鸡饲养管理和免疫情况1.1饲养管理情况该青年鸡养殖场位于村东南角，距村500m ，养殖场周围为杨树林。

育雏舍为全封闭鸡舍，自动控温、自动通风、人工光照。

育雏笼为阶梯式育雏笼，自动饮水、自动喂料、自动清粪，自己出饲料配方让某饲料厂配制混合饲料。

采取全进全出饲养管理方法，每批饲养35000~40000只，鸡饲养周期55~60d 。

1.2免疫情况1.2.11日龄在孵化场喷雾免疫鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗（默沙东Ma5+Co30）1头份。

1.2.27日龄用肇庆大华农生物药品有限公司生产的鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗点眼1.2头份，同时肌肉注射肇庆大华农生物药品有限公司生产的鸡新城疫、H9亚型禽流感二联灭活疫苗0.3mL 。

1.2.314日龄翅根刺种杨凌绿方生物工程有限公司生产的传染性喉气管炎、鸡痘二联活疫苗1.5头份，同时肌肉注射青岛易邦生物工程有限公司生产的重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N1Re-11株+Re-12株，H7N9H7-Re2株）0.3mL 。

两个厂家新城疫疫苗免疫效果试验

畜牧兽医Xu m u s h o u yi本试验选用未免疫过鸡新城疫疫苗的7日龄蛋雏鸡，分为A 、B 组，每组500只。

A 组免疫鸡新城疫活疫苗（Clone30株）；B 组免疫鸡新城疫活疫苗（VG/GA 株）；免疫后每隔半个月采集血样一次，用HI 的方法进行样品抗体的实验室检测。

结论如下：A 厂家生产的鸡新城疫活疫苗（Clone30株）与B 厂家生产的鸡新城疫活疫苗（VG/GA 株）相比，能产生更高的免疫抗体滴度且免疫抗体产生更快、持续时间更长。

鸡新城疫是一种具有高度传染性的病毒性疾病，发病率和死亡率在90%以上。

合理的选择ND 疫苗将有利于减少和防止免疫失败的发生，进而提高ND 疫苗免疫效果。

1材料与方法1.1试验材料1.1.1.试验地点及试验动物筛选大兴区某鸡场试验鸡舍。

大兴区某鸡场孵化的一周龄海兰蛋鸡1000只。

鸡只临床检查健康，均未免疫过鸡新城疫疫苗。

1.1.2试验疫苗试验用两种疫苗均由大兴区某鸡场提供。

鸡新城疫活疫苗（Clone30株），生产厂家：A 厂家；规格：500羽份/瓶。

鸡新城疫活疫苗（VG/GA 株），生产厂家：B 厂家；规格：1000羽份/瓶。

1.1.3试验材料及试剂配制仪器：高压灭菌器、离心机、96孔V 型微量凝集试验板、微量吸液器等。

试剂：(1)标准抗原；(2)稀释液：高压灭菌生理盐水；(3)1％红细胞液；(4)红细胞保存液；(5)待检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内，在室温中静置或离心，待血清析出后使用。

1.2试验方法1.2.1试验分组试验鸡随机分为A 、B 组，每组500只；分别在相对隔离、条件相同的环境下饲养，直到试验结束。

A 组：免疫A 厂家鸡新城疫活疫苗（Clone30株），首次免疫日期为4月7日（试验鸡根据免疫程序免疫，7日龄时首免，21日龄进行第二次免疫，免疫方式为滴鼻点眼）。

B 组：免疫B 厂家鸡新城疫活疫苗（VG/GA 株），首次免疫日期为4月7日（试验鸡免疫程序同A 组）。

鸡接种禽流感、新城疫重组二联活疫苗的免疫效果实验

今日畜牧兽医
鸡接种禽流感、新城疫重组二联活疫苗的免疫效果实验
谷玉静．张信
（河北省平山县动物疫病预防控制中心，河北平山０５０４００）
摘要：禽流行性感冒ｆＢｉｒｄＦ】ｕ或ＡｖｉａｎＩｎｌｆｕｅｎｚａ）简称禽流
９皮肤给药法
皮肤给药法将药物涂擦、喷洒于皮肤表面。此法多用于杀灭体外寄生虫或治疗皮肤疾患如用２０％速灭杀丁（杀灭菊酯）１：２５０倍稀释液全身喷雾．可治疗猪疥癣及一切其他体外寄生虫
与新城疫相比，禽流感的发病几率较低，属于散发、点状、区域性疾病．而新城疫的发病范围大，且经常发生。但新城疫的危害不如禽流感严重．因为对于新城疫已有疫苗能够控制．且这种
后，拔出针头．局部再进行消毒处理。６气管注射给药法气管注射适用于慢性呼吸道疾病．如猪喘气病的治疗。要先将猪仰卧保定．可在气管的上三分之一与中三分之一交界处局部消毒．左手拇指和中指固定住气管．右手持针．自二个软骨环之间刺人。刺人气管后，感到毫无阻力．抽活塞大量回气，即缓慢注入药液，需要注意的是．一头猪的注射总量不超过１０毫升．注完后拔出针头．刺点消毒。需保持仰卧位置１～２分钟

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活疫苗免疫效力试验

鸡新城疫、禽流感〔H9 亚型〕二联油乳剂灭活疫苗免疫效力
试验
白军;刘淑红;焦铁军;王运宏;黄建斌;李河林;马建玲;赵希斌;于三科作者机
构：西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100 来源：动物医学进展
ISSN ：1007-5038 年：2021 卷：034 期：003
页码：58-61
页数：4
中图分类：S852.659.5
正文语种：chi
关键词：新城疫;禽流感;灭活疫苗;免疫效力
摘要：为评价鸡新城疫和禽流感〔H9亚型,SY株〕二联灭活疫苗〔以下简称“二联苗〞〕XSPF鸡的免疫保护效力，进行了血清学效力检验与靶动物免疫攻毒保护相关性的研究及免疫持续期试验•不同抗体水平的SPF鸡攻毒试验结果说明，当NDV HI > 5.0log2,AIV HI > 6时0分别攻击NDV、AIV,试验鸡的保护率均
到达100 ％；免疫期试验结果说明,二联苗以0.3 mL 和0.5mL 的剂量分别免疫
SPF鸡，免疫接种后各试验组鸡均产生较高的HI抗体,其免疫期分别能持续18 周和36 周.说明二联苗对试验鸡有较好的保护效果.。

禽流感-新城疫重组二联活疫苗口服免疫试验

２ＣｏｌｇＪｅｅｉａｙＭｅｃｎＪＧａｎｕＡｇｉｕｔｒｌＵｎｖｒｉｙ，Ｌａｈｕ，ｎｕ，０７Ｃｈｎ．ｌｅｅｏＶｔｒｎｒｄｉｉｅｏｓｒｃｌｕａｉｅｓｔｎｚｏＧａｓ７３００，ｉａ；
３ＩｓｉｔｏａｔｒｇｎｅｅｉａｙＭｅｉｉｅＣｉｅｅｃｄｍｆＡｇｉｕｔｒｌｃｅｃｓａｚｏ，ａｓ７０５，ｈｎ）．ｎｔｕｅＪＰｓａｅｄＶｔｒｎｒｄｃｎ，ｈｎｓＡａｅｙｏｔｕａｒｃｌａｉｎｅ，ＬｎｈｕＧｎｕ，３００ＣｉａｕＳ
体均值分别为７５ｌｇ．ｏ２和５５ｌｇ。．ｏ２
关键词：黄腹角雉；禽流感一城疫重组二联活疫苗；新口服免疫
中图分类号：８２６９５￥５．５．文献标识码：Ａ文章编号：０７５３（０８０ —０９０１０ — ０８２０）２００ — ３
会感染人类，胁到人类的健康和安全。目前禽流威感免疫方法主要通过肌肉注射禽流感灭活疫苗，这对于家禽和笼养的野生禽类是可行的Ｌ］２。但对于活动空间较大的放养的野生鸟类，行肌肉注射免实
收稿日期：０７１—０２０—０３基金项目：南省科技厅资助项目（０６３３）湖２０ＮＫ１２作者简介：开明（９４）男，南长沙人，朱１６一．湖高级工程师．主要从事野生动物研究。＊通讯作者

不同佐剂制备鸡新城疫、禽流感二联灭活苗免疫效果评价试验

务有限公司青岛分公司山东青岛）
摘要基于对市场现有佐剂产品的了解取不同佐剂产品作比较，以禽类疫苗为例。选取鸡新城疫、禽流感（Ｈ９亚型）二联灭活（Ｌａｓｏｔａ株＋ＷＤ株）灭活后抗原液，按不同佐剖的配苗比例分别配制灭活苗，验证其免疫效果。将添加不同佐剂配制的灭活苗分别免疫７日龄商品肉鸡，分６组，每．￣ｇ３０Ｚ，其中１～５组分别免疫５种不同佐剂配制的禽流感灭活疫苗，６组为空白对照，各免疫０．３ｍｌ／只。分别于免疫后１４、２１、２８、３５ｄ采血。离心后取血清，利用血凝抑制方法分别检测鸡新城疫和Ｈ９亚型禽流感血清抗体。计算抗体平均滴度。试验结果显示，ＭＦ５９、ＧＥＬ０２和ＩＳＡ７０ＶＧ等新型佐刺较传统佐剂均能产生较高的抗体水平且能使机体在短期内快速产生免疫应答反应并能很好的维持其抗体水平。
规方法养铕。
１．１．２试验灭活抗原鸡新城疫病毒（Ｌａｓｏｔａ株）、Ｈ９亚型禽流感病毒（ｗｏ株）二联灭活抗原液：青岛蔚蓝生物制品
有限公司，产。
１．１．３检测试剂鸡新城疫ＨＩ实验标准抗原和阳性血清
均购自中国兽医药品监察所？Ｈ９亚型禽流感ＨＩ标准抗原
关键词灭活苗佐剂免疫效果
中图分类号：￥８５１．３文献标识码：Ａ文章编号：１００７—１７３３（２０１９）０１—０００８—０３
鸡新城疫Ｄ）是由新城疫病毒ＤＶ）引起的一种急性高度接触性传染病，其发病率和死ｒ＿率极高Ｄｌ。禽流感
表１实验分组情况

实验五鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价

弃50
结果观察
++++ ++++ ++++
++++
++++ ++++
++++
+++
+
+
-
-
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位
【结果判定】
置于振荡器上振荡1分钟，静置后30 min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。
2、HI试验：病毒的红细胞凝集现象，可以被特异性免疫血清所抑制，称HI试验。
1、鸡新城疫的血凝试验(HA)
【材料】
新城疫病毒鸡胚接种尿囊液 1份
0.6％鸡红细胞悬液
1管
生理盐水或PBS
1瓶
96孔微量血凝板
1块
微量加样器
1支
【病毒血凝试验的操作方法】
单位： L
孔号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
取鸡免疫血清或者取高免卵黄抗体。
【病毒血凝抑制试验的操作方法】
单位： L
弃50
以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI效价。
【结果判定】
以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI 效价。凡被已知新城疫阳性血清抑制血凝者，该病毒为新城疫病毒。

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗的安全性和免疫效力试验

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗的安全性和免疫效力试验刘淑红;焦铁军;李河林;白军;王运宏;黄建斌;张娟娟;渠淑华【摘要】将鸡新城疫、禽流感(H9亚型,SY株)二联灭活疫苗分别以肌肉注射和皮下注射的方式单剂量、单剂量重复、超剂量分别接种28日龄SPF鸡和6月龄产蛋鸡进行安全性试验.同时,将不同剂量疫苗分别接种30日龄SPF鸡,接种后定期采血,分离血清测定HI抗体水平,并于免疫后1、2周从每组试验鸡中抽取10只攻击AIV SY株病毒.结果显示,疫苗以不同剂量接种试验鸡后未见任何不良反应,对产蛋鸡的生产性能基本无影响；试验鸡在免疫后2周即可产生较高水平的HI抗体,其中ND HI抗体几何平均值不低于1∶128,AI HI抗体几何平均值不低于1∶74,攻击AIV SY株病毒后病毒分离率为0,在免疫后20周其HI抗体仍在保护水平以上.表明鸡新城疫、禽流感(H9亚型,SY株)二联灭活疫苗安全性良好,免疫效果确实.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2013(047)002【总页数】4页(P14-17)【关键词】新城疫;H9亚型禽流感;灭活疫苗;安全性;免疫效力【作者】刘淑红;焦铁军;李河林;白军;王运宏;黄建斌;张娟娟;渠淑华【作者单位】杨凌绿方生物工程有限公司,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】S859.797禽流感(Avian influenza，AI)和新城疫(Newcastle disease，ND)均可引起多种家禽及鸟类发病，被世界动物卫生组织列为A类传染病。

目前我国AI的流行以低致病性H9亚型为主，该亚型病毒虽然很少引起发病和死亡［1］，但在继发或并发感染ND病毒等病原的情况下，仍可引起禽类的高发病率和高死亡率;H9亚型AI病毒与ND病毒还可以跨越种属屏障直接感染人［2－4］，因此对这两种疾病的研究，具有重要的经济和公共卫生意义。

目前，一般采用疫苗接种来预防这两种传染病，为有效控制这两种疾病的发生与流行，本试验以从患病鸡中分离到的H9亚型AI病毒 SY株和ND病毒La Sota株为种毒研制了二联灭活疫苗，现将该疫苗的安全性和免疫效力试验结果报告于下。

禽流感、新城疫重组二联活疫苗效力检验

禽流感、新城疫重组二联活疫苗效力检测一、新城疫部分：鸡胚检测法：1.试验材料：疫苗乳化瓶、标签、1.5ml一次性注射器、扎孔器、蜡块、10日龄SPF鸡胚、37°孵化器2.试验试剂：试验用疫苗、无菌生理盐水3.试验方法：a.将制作好的试验用疫苗按瓶分装，标签写明羽份b.将疫苗用无菌生理盐水稀释至一羽份/ml，在进行10倍系列稀释，取三个适宜稀释度分别尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚5枚，每枚0.1ml，接种后置于37°继续孵育120小时。

c.期间弃去所有死亡鸡胚不计。

至120小时，取出所有活胚，逐枚收获鸡胚液，分别测定红细胞凝集价。

d.凝集价不低于1:160（微量法1:128）者为感染，计算EID50。

每羽份病毒含量应≥106.0EID50。

鸡检测法：1.试验材料：针管、10日龄SPF鸡2.试验试剂：试验用疫苗3.试验方法：a.用10日龄SPF鸡10只，各滴鼻接种疫苗0.01羽份，另外3只作对照。

b.接种后14日，连同对照鸡各肌肉注射鸡新城疫病毒强度105.0EID50，连续观察14日。

对照鸡应全部发病死亡，免疫鸡应至少保护9只。

二、禽类流感（H5亚型）部分：血清学方法：1.实验材料：2ml一次性注射器、96孔板、10日龄SPF鸡10只2.试验试剂：试验用疫苗3.试验方法：a.用10日龄SPF鸡10只，每只滴鼻接种疫苗0.05ml（含1/10羽份），接种后3周，连同对照鸡5只，分别采血，分离血清，用禽流感病毒H5亚型抗原测定血凝抑制（HI）抗体。

b.对照鸡HI抗体抗体全部阴性（HI不高于1:2），免疫鸡HI抗体几何平均滴度（GMT）不低于1:16，且至少7只鸡HI抗体滴度大于1:16.免疫攻毒方法：1.实验材料：2ml一次性注射器、10日龄SPF鸡10只2.试验试剂：试验用疫苗3.试验方法：a.用10日龄SPF鸡10只，每只滴鼻接种疫苗0.05ml（含1/10羽份），接种3周后，连同对照鸡，分别鼻腔接种强毒0.1ml，连续观察14日，对照鸡应全部发病死亡，免疫鸡应全部健活。

鸡新城疫的免疫检测程序

教学实习内容一．鸡新城疫的免疫检测目的：系统掌握鸡新城疫的抗体检测技术。

实验材料：新城疫疫苗、待测鸡蛋、生理盐水、5%柠檬酸钠、1%鸡红细胞悬液、胶头滴管、注射器、锥形瓶、15ml离心管、试管、96孔V型板、离心机等1.1%鸡红细胞悬液的制备（1）每组采取3ml左右健康鸡静脉血，迅速注入装有约0.3-0.4ml抗凝剂的离心管内，轻轻颠倒混匀；（2）加入适量生理盐水，混匀，3000rpm*10min，吸弃上清液和红细胞沉淀上层的白细胞层（3）加入适量生理盐水，重悬红细胞，3000rpm*10min，吸弃上清液。

如此，重复3次。

（4）量取红细胞沉淀的体积，用生理盐水配成1%的红细胞悬液，待用。

2.HA试验1%红细胞根据所用NDV液的凝集价，配制4单位病毒液。

3.HI试验（1）待测卵黄样品的制备：用镊子敲破鸡蛋小头，将蛋清倒去，留蛋黄在蛋壳内；吸取0.5ml 生理盐水，放入小试管内；去掉部分蛋壳，用1ml注射器（不带针头）吸取蛋黄0.5ml，加到有生理盐水的试管内，混匀（避免其很多泡）待检。

（2）按照检测血清抗体的方法检测卵黄中的抗体。

被检鸡蛋卵黄1%红细胞（3）判定和记录所检测鸡蛋的卵黄抗体效价。

结果与分析对所测得的结果进行分析，确定该鸡群目前的免疫状态，并对生产提出合理建议或给出科学指导。

分析并指出影响本实验结果的主要因素。

二．传染病的分子生物学检测——PCR检测（以PCV2为例）1.DNA提取：将猪肝脏称重后，按照1:3（W:V）的比例加入PBS，用组织研磨器研磨成组织悬液，反复冻融3次后8000 rpm离心5 min，取上清300 μL提取DNA。

取冻融、离心后的组织悬液/血清300μL，加入300 μL细胞裂解缓冲液和5 μL的蛋白酶K(20 mg/mL)，混匀，置50 ℃消化2 h，每隔30 min，剧烈震荡一次；加入等体积的Tris饱和酚，充分振荡混匀，4 ℃ 12000 rpm 离心10 min；取上层水相转入一新的l.5 mL eppendorf管中，加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）混匀后，4 ℃ 12000 rpm 离心10 min；用酚：氯仿：异戊醇（25:24: l）重复抽提一次；取上层水相转入一新的l.5 mL eppendorf管中，加入2倍体积冰预冷的无水乙醇和1/10体积的3 mol/L醋酸钠（pH 5.2），室温放置30 min 以沉淀基因组DNA；4 ℃ 12000 rpm离心15 min，弃上清；用75%乙醇1 mL 洗涤沉淀，4 ℃ 12 000 rpm 离心10 min后，弃去上清，自然晾干。

鸡新城疫的现场检疫和实验室检验

鸡新城疫又称为“伪鸡瘟”“亚洲鸡瘟”，其病原体为副黏病毒，其主要临诊特征为神经紊乱、呼吸困难、腹泻、黏膜或浆膜出血。

现场检疫包括流行病学调查、活体检疫、肉尸检疫。

鸡新城疫检疫的常见检验方法有病毒分离鉴定、血凝抑制试验。

前者用于新城疫的诊断；后者用于新城疫的免疫抗体测定和免疫监测。

1现场检疫（1）流行病学。

鸡对本病易感性最高，各种品种、年龄的鸡均有易感性，幼雏和中雏的易感性比成年鸡更高。

近年来国内已有鹌鹑、鸽及观赏鸟发病的报道。

本病的主要传染源是病鸡以及流行间歇期的带毒鸟类，经呼吸道和消化道向外大量排出病毒而传播。

本病一年四季均可发生，但以冬春两季较多。

免疫鸡群也可能发生新城疫，出现非典型症状，但雏鸡和成年鸡的发病率和病死率不高。

（2）活体检疫。

①最急性型：发病突然，无显著症状而快速死亡。

②急性型和慢性型：病鸡表现为明显的咳嗽，流涕，呼吸困难，张口呼吸，并发出“咯咯”的叫声。

口中有黏液，常见摇头和吞咽动作，企图将黏液甩出。

嗉囊有液态黏稠物，倒提即从口内流出。

粪便常呈黄绿或黄白色，偶见带血的粪便。

病程稍长的病鸡出现脚、翅麻痹、歪头扭颈、站立不稳等神经症状。

③非典型新城疫：主要发生于免疫鸡群，由于免疫水平偏低或免疫力不整齐，幼鸡和育成鸡出现轻微的呼吸道症状。

成年鸡产蛋量下降，持续性的零星死亡。

（3）肉尸检疫。

主要病变是淋巴系统肿胀、出血或坏死，全身黏膜和/或浆膜有出血点、出血斑。

典型病变：①腺胃黏膜乳头及其周围出血、溃疡或坏死，肌胃角质层下也常见有出血点或出血带；②盲肠、扁桃体肿大、出血或坏死。

肠黏膜有大小不等的出血点以及纤维素性渗出物。

病程较长者有的形成假膜，假膜脱落后即成“枣核状”溃疡。

气管黏膜增生，并有渗出物。

若鸡群已进行了免疫处理，则发生新城疫时仅见黏膜呈卡他性炎症，直肠黏膜和盲肠扁桃体出血，病变相对较轻，其他病变不典型。

2实验室检验（1）病毒分离鉴定。

①样品采集及处理：取病死禽的脑或心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、气囊等组织，用生理盐水研成1 5乳液，加入青霉素（至终浓度为100IU·mL-1）、链霉素（使终浓度为1000μg·mL-1）。