5、动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法-高效液相色谱法
畜禽肉中磺胺类药物残留的检验方法
畜禽肉中磺胺类药物残留的检验方法食品安全检验手册108本方法可以检验畜禽肉、鸡蛋中磺胺嘧啶（SD），磺胺间甲氧嘧啶（SMM），磺胺二甲氧嘧啶（SDM），磺胺二甲嘧啶（SM2），磺胺甲噁唑（SMZ）和磺胺喹噁啉（SQ）的残留。
1. 原理样品中磺胺类药物经乙腈+三氯甲烷（10V+1V）提取后，又经过液—液分配转入水层进行净化后，用具紫外检测器的高效液相色谱仪检测，外标法定量。
2. 试剂和材料以下所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯试剂，水为重蒸水。
(1) 乙腈（优级纯，作流动相用）。
(2) 甲醇（优级纯）。
(3) 正己烷。
(4) 三氯甲烷。
(5) 乙腈+三氯甲烷（10V+1V）。
(6) 乙腈+三氯甲烷（2V+1V）。
(7) 硫酸钠。
(8) 硫酸钠溶液：2%水溶液（m/V）。
(9) 标准溶液①标准储备液：准确称取磺胺嘧啶（SD），磺胺间甲氧嘧啶（SMM），磺胺二甲氧嘧啶（SDM），磺胺二甲嘧啶（SM2），磺胺甲噁唑（SMZ）和磺胺喹噁啉（SQ）各10.0mg，分别用乙腈溶解，并用乙腈定容至10.0mL。
摇匀。
即得各1.0mg/mL的标准溶液。
②混合标准工作液：分别吸取上述溶液各1.0mL于100mL容量瓶中，并用流动相稀释，摇匀。
然后吸取此液0，0.05，0.10，0.25，0.50，1.0mL各放入10mL容量瓶中，各加流动相至刻度，摇匀，即得含6种磺胺的标准系列溶液。
3. 仪器和设备(1) 高效液相色谱仪，具紫外检测器。
(2) 超声波发生器。
(3) 涡流混匀器。
(4) 离心机。
(5) 旋转蒸发仪。
4. 测定步骤(1)试样处理：称取5.0g绞碎后的试样，置于塑料管中，加入约1g硫酸钠，乙腈+三氯甲烷（10V+1V）20mL，超声提取15min，2500r/min离心3min，过滤取滤液于蒸发瓶中，残渣再加乙腈+三氯甲烷（10V+1V）20mL，超声提取15min，2500r/min离心3min，过滤合并滤液于蒸发瓶中，于<40℃水浴旋转蒸发仪上蒸发至干（如果量大，可分两次蒸）。
210988842_超高效液相色谱-质谱法测定动物源性食品中23种磺胺类药物残留
超高效液相色谱-质谱法测定动物源性食品中23种磺胺类药物残留傅雅丽（黄石市食品药品检验检测中心，湖北黄石 435000）摘 要：目的：建立一种超高效液相色谱-质谱法同时检测动物中23种磺胺类药物残留的方法。
方法：将样品进行酸化提取，经Oasis PRiME HLB富集净化。
用C18柱分离，以0.1%甲酸溶液-甲醇系统为流动相，经超高效液相色谱分离，电喷雾串联四极杆质谱进行检测。
结果：23种磺胺药物在13 min内可有效分离，检出限均为2 μg·kg-1。
在5～100 ng·mL-1，线性相关系数≥0.995 0，平均回收率在75.6%～101.5%，相对标准偏差为2.0%～11.8%。
结论：本方法简单高效、灵敏度高，可以满足动物中相关磺胺药物残留的检测。
关键词：超高效液相色谱-质谱法；磺胺类药物残留；动物源性食品Determination of 23 Sulfonamides Residues in Foodstuffs of Animal Origin Using UPLC-MS/MS MethodFU Yali（Huangshi Institutes for Food and Drug Control, Huangshi 435000, China）Abstract: Objective: To establish a method for simultaneous determination of 23 sulfonamides residues in animals by ultra performance liquid phase mass spectrometry. Method: The samples were acidified and purified by Oasis PRiME HLB. C18 column was used for separation, and 0.1% formic acid-methanol system was used as mobile phase. The results were separated by ultra-high performance liquid chromatography and detected by electrospray tandem quadrupole mass spectrometry. Result: 23 sulfonamide drugs were separated effectively within 13 min, and the detection limit was 2 μg·kg-1. In the range of 5～100 ng·mL-1, the linear correlation coefficients were≥0.995 0, the average recoveries were 75.6%～101.5%, and the average relative standard deviations were 2.0%～11.8%. Conclusion: This method is simple, efficient and sensitive, and can satisfy the detection of related sulfonamide residues in animals.Keywords: ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; sulfonamides residues; foodstuffs of animal origin磺胺类药物是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物[1]。
固相萃取-高效液相色谱法测定饲料中5种磺胺类药物的研究
和治疗细 菌感染 性疾病 。
动 物组织 、 血液 、 、 、 蛋 奶 蜂蜜 中磺胺类 药 物 的检
测 方 法 已见 诸 报 道 ， 主要 有 薄层 色 谱 法 、 酶联 免 疫 法Ｉｊ高效 液 相 色谱 法［ 高 效 液相 色 谱 柱前 或柱 ｌ、 Ｉ ２ １ 或
围在 ０２ ２ ０ ｇ ｍＬ之 间 ， － ０ ／ 线性 相 关 系数 高 于 ０９ ９ 。 该 方 法 用 于 鸡 配合 饲料 、 配合 饲 料 和 浓 缩 饲 料 中磺 胺 ． ６将 ９ 猪
类药物残 留的测定 ， 同添加浓度的 回收率均 高于 ８ ％， 不 ０ 相对标准偏差 ≤１ ％， ０ 能够 满足 实际样品 的分析要求。 关键词 ： 固相 萃取 ； 高效液相 色谱 法 ； 磺胺 类药物
（ 中国农 业科 学院农业质 量标 准与检 测技 术研 究所 ， 京 １０ ８ ） 北 ０ ０ １
摘 要 ：建立 了固相 萃取 一高效液相 色谱（ Ｐ — Ｌ 测定饲料 中磺胺 嘧啶 、 Ｓ Ｅ ＨＰ Ｃ） 磺胺 间甲氧嘧啶 、 磺胺二 甲基嘧啶 、
磺胺 甲恶唑、 磺胺喹 恶啉 ５种磺胺类 药物 的方 法。考察 了碱 性氧化铝 小柱 的最大饱 和容量及洗脱条件 ， 优化 了色
混 合 饲料 样 品 ２ｇ 置 于 具塞 锥形 瓶 中 ， 入 ５ Ｌ ， 加 ０ｍ 的乙腈 于振荡器 振荡提 取 ３ ｎ 过滤 ， ０ｍｉ， 滤液备用 。 １ ． 净化 ．２ ４ 准确吸取 试液（ ４ １： ２．，）配合饲料 １ ０～ ２ Ｌ 浓缩 饲 料 、 ０ｍ ； 添加 剂 预 混 合饲 料 ２ｍ ， 人 用 Ｌ移
05 磺胺类药物残留量检测方法(完)
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城肉食品加工有限公司化验室
作业指导书
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标题：磺胺类药物残留量检测方法ELISA方法
5.9聚四氟乙烯离心管:50ml
5.10单道移液枪:20~200μL,100~1000μL
5.11多道移液枪：250μL
LC/CEC-05
版本/修订
A/0
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共4页第2页
标题：磺胺类药物残留量检测方法ELISA方法
4.5抗体工作液
4.6底物A液
4.7底物B液
4.8终止液
4.9 20*浓缩洗涤液
4.10 20*浓缩提取液
4.11洗涤工作液的配制：用去离子水将20*浓缩洗涤液按1：19体积比进行稀释用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。
用于分析。
7.2测定前须知
7.2.1使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20~25℃）。
7.2.2使用之后立即将所有试剂放回2~8℃.
7.3测定
7.3.1编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做两孔平行，并记录标准孔和样品孔所在的位置。
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4试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为蒸馏水。
4.1 96孔酶标板（包被有偶连抗原）
4.2标准液6瓶：0ppb,2ppb,4ppb,8ppb,16ppb,32ppb
4.3高浓度标准品：1 ppm
4.4酶标二抗
动物源食品中磺胺类药物残留检测方法
动物源食品中磺胺类药物残留检测方法摘要众所周知，磺胺类药物不仅价格实惠，而且能够有效对抗很多种微生物、致病因子或疾病，因此深受兽医青睐，与此同时，食品安全问题也越来越受广大群众的关注。
人们想要对食品样品复杂体系的分离分析要求更上一层楼，就需要开发能提高检测效率、准确可靠、灵敏度高的检测分析方法。
本文重点论述了分析方法和几种常见的磺胺类药物残留的检测方法，总结了食品中磺胺类药物残留的前处理方法和检测方法，为食品中磺胺类药物的残留检测提供有力的技术支持和文献参考。
关键词：动物源食品；磺胺类药物；药物残留；检测技术1分析方法1.1处理样品的方法液相萃取法是样品处理方法中最经典的。
由于磺胺类药物在非极性有机溶剂中不易溶解，而在极性有机溶剂中易溶解，通常工作人员采用CH2Cl2、C3H6O、甲基氰以及醋酸乙酯等作为萃取液。
由于某些有机溶剂能够让样品蛋白丧失活性，因此，大力发展固相萃取法势在必行，有利于更快速、顺利地萃取与蛋白结合的磺胺类药物残留。
固相萃取法优势很多，比如可操作性强、装置简单、适用范围较为广泛等。
其中阳离子交换树脂以及C18等是最常见固相萃取装置。
基质固体分散技术和超过滤方法是近年来比较流行的萃取方法。
超过滤法能够有效解决共萃取干扰、乳胶产生等很多液相萃取技术问题，同时简化检测步骤，提升检测结果的准确性，减少分析费用。
MSPD的制备工艺为：将样品与C18柱填料混合，装柱，之后利用正己烷清洗柱子，及时去掉脂质化合物，最后利用二氯甲烷清理掉被吸附的组分，保留高极性杂质。
相对于传统样品处理方法，MSPD具有如下优势：样品处理方法效率较高，而且操作简单；有效抑制和消除了乳化作用；溶剂消耗较少。
此外，超临界流体萃取（SFE）也可用于从样品中提取磺胺类药物。
1.2样品净化方法在进行色谱分析之前，需要净化和浓缩样品，以防止样品基质中的复杂成分严重破坏色谱仪器和干扰目标分析物。
其中薄层色谱、柱色谱以及固相萃取等都是常见方法。
农质发(2014)5号文件 磺胺类药物
农质发〔2014〕5号文件附件8磺胺类药物在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法1 范围本标准规定了动物组织中五种磺胺类药物（磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺二甲氧嘧啶和磺胺喹噁啉）残留检测的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于猪肉中五种磺胺类药物残留量的测定。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法３原理样品经乙腈提取后，在上清液中加入正己烷进行液液分配，取下层溶液浓缩，残留物用95%乙腈溶解，过碱性氧化铝小柱, 以70%乙腈溶液洗脱，加入正丙醇浓缩后，残留物用流动相溶解，高效液相色谱仪进行检测，外标法定量。
４试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的二级水。
4.1 磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺二甲基嘧啶（SM2）、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺二甲氧嘧啶（SDM）、磺胺喹噁啉（SQ）对照品：含量均不得少于98.0%4.2 乙腈色谱纯4.3 甲醇色谱纯4.4 正已烷4.5 冰乙酸4.6 正丙醇4.7 无水硫酸钠4.8 95 %乙腈溶液取乙腈95 mL加水至100 mL，混匀。
4.9 70 %乙腈溶液取乙腈70 mL加水至100 mL，混匀。
4.10 磺胺类药物标准储备液（1mg/mL）：分别准确称取适量上述五种磺胺类药物对照品，置同一棕色容量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为1mg/mL的标准储备液。
-20℃以下冰箱中保存，有效期6个月。
4.2.10 磺胺类药物标准工作液（10µg/mL）：精密移取磺胺类药物标准储备液1.0 mL，置100 mL棕色容量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
磺胺类药物检测(高效液相色谱法)
高效液相色谱法Байду номын сангаас
兽药残留检测
原理
样品经乙腈提取，混合型分散固相萃取净化，分步溶 剂洗脱，最后用HPLC法进行分析。
试剂
本实验用水均为去离子水，试剂为分析纯度或优级纯。 1．磺胺嘧啶（SD）对照品 纯度≥98.0%。 2．磺胺二甲嘧啶（SM2）对照品 纯度≥98.0%。 3. 磺胺间甲氧嘧啶（SMM）对照品 纯度≥98.0%。 4．磺胺甲恶唑（SMZ）对照品 纯度≥98.0%。 5．磺胺喹恶啉（SQ）对照品 纯度≥98.0%。 6．乙腈：色谱纯。
测定步骤
3．色谱条件
色谱柱：C18（4.6×250mm，5μm）； 流动相：磷酸三乙胺溶液-乙腈（25:75）； 进样量：20mL； 柱温：30℃； 检测波长：270nm；
测定步骤
4．定量测定
取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图， 按外标法以峰面积进行计算。
测定步骤
5．结果计算
按照下式计算试样中各种药物残留的含量：
试剂
15．标准贮备液（1mg/mL）：准备称取SD、SM2、SMM、SMZ、SQ对照品各 100mg，用乙腈溶解并稀释至100mL容量瓶中，必要时超声。贮存于0℃8℃冰箱中，有效期90d。 16．标准工作液：取上述标准贮备液，用流动相稀释，得到磺胺类药物 0.02μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL的标准混 合溶液。贮存于0℃-8℃冰箱中，有效期7d。
测定步骤
2．试样提取净化
称取（6±0.05g）均质动物组织样品于50mL离心管中，依次加入14mL氯仿乙 腈溶液、1.0ml 10%硫酸钠溶液，振荡提取15min，以5000r/min离心5min。准确吸 取10mL提取液，氮吹或浓缩至近干，用4mL氯仿乙腈溶液溶解后，分别加入C18粉、 中性氧化铝粉各100mg，涡旋混2min，8000r/min离心3min。准确移取1.0mL上清液 于另一10mL离心管中，氮气吹干，加入1.0mL流动相，涡混溶解残渣，过0.45μm 滤膜。待HPLC测定。
高效液相色谱法测定动物性食品中磺胺类药物多残留
高效液相色谱法测定动物性食品中磺胺类药物多残留 刘丽 北京市西城区食品药品监督管理局我国食品安全在四个方面存在风险，其中兽药滥用是当前食品安全源头污染的主要来源，我国兽药应用依然处于无序状态。
磺胺类药物是一种广谱抗菌药，其性质稳定、产量大、品种多、价格低、使用简便、供应充足等优点，在兽医临床和畜牧养殖业中作为饲料添加剂或动物疾病治疗药物广泛应用。
但是磺胺类药物会引起人过敏性反应，并有“三致”作用。
随着社会的发展，磺胺类药物的不合理使用，使其在动物性食品中残留引起食品安全问题已备受关注，成为食品安全监管领域的重点工作之一，而各类检测方法也随之应运而生。
本实验旨在建立一种高效液相色谱法测定动物性食品中磺胺类药物多残留的测定方法。
该方法操作简单、快速、稳定、精密度高，适用于基层食品安全检测部门实验室应用。
实验部分主要仪器与装置。
高效液相色谱仪紫外检测器Alliance 2695-TUV（美国Waters 公司）；MS105分析天平感量0.000001g，ME802E天平感量0.01g（瑞士Xcjkzxer Toledo 公司）；涡旋振荡器MS1 MiniShaker（德国IKA公司）；离心机Multifuge X1R（美国Thermo公司）；均质机Scientz-11L（宁波新芝生物科技股份有限公司）；旋转蒸发仪N-1200BV-WD（日本理化器械株式会社）；氮吹仪N-EVAP（美国Organomation公司）；固相萃取装置20POS（美国Waters公司）。
主要试剂与材料。
磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺二甲氧哒嗪对照品：Dr.Ehrenstorfer GmbH。
含量均≥99.0％；乙酸乙酯（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、甲酸（色谱纯）：Thermo；盐酸（分析纯）、正己烷（分析纯）：北京化工厂；超纯水：默克Mlix Essential5+Milli-Q Reference纯水和超纯水联用系统。
高效液相色谱法测定牛奶中磺胺类药物残留
高效液相色谱法测定牛奶中磺胺类药物残留曹雪琴;陈俊宇;张永权;董丹丹【摘要】建立了高效液相色谱法同时测定牛奶中十种磺胺类药物残留量。
样品用5%高氯酸溶液进行沉淀蛋白,经HC-C18柱(250 mm ×4.6 mm,5μm)分离,甲醇-2%乙酸流动相体系梯度洗脱,用紫外检测器进行检测,检测波长为270 nm,外标法定量。
结果表明：10种化合物在0.10~2.0μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数为0.9921~0.9999。
添加水平为0.20,0.40,1.0μg/mL时,平均回收率为81.6%~105%。
方法预处理简单,适用于牛奶中磺胺类抗生素药物快速筛查。
%A novel method for determination of sulfonamides residues in milk using high performance liquid chromatographic method was established. The samples were simply pretreated by protein precipitation using 5% perchloric acid, and then analyzed on a HC-C18 column. The mobile phase consisted of methanol-2% glacial acetic acid, at a flow-rate of 1. 0 mL/min. The sulfonamide residues were measured by HPLC-UV at 270 nm. In the range of 0. 10~2. 0μg/mL, the target analytes showed good linearity with correlation coefficient ( r ) ranging from 0. 9921 to 0. 9999. At the spike levels of 0. 20, 0. 40, 1. 0 μg/mL, satisfactory recoveries ra nged from 81. 6% to 105%. The method is simple, rapid, robust and is proved to be suitable for detecting the sulfonamide residues in milk.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2015(000)021【总页数】3页(P122-123,166)【关键词】高效液相色谱法;牛奶;磺胺类药物【作者】曹雪琴;陈俊宇;张永权;董丹丹【作者单位】新疆维吾尔自治区分析测试研究院，新疆乌鲁木齐 830011;新疆维吾尔自治区分析测试研究院，新疆乌鲁木齐 830011;新疆维吾尔自治区分析测试研究院，新疆乌鲁木齐 830011;新疆维吾尔自治区分析测试研究院，新疆乌鲁木齐 830011【正文语种】中文【中图分类】O657磺胺类兽药是畜禽抗感染治疗中的普遍使用药物，是畜牧养殖业中应用最广泛的药物之一[1]。
高效液相色谱法影响猪肉中磺胺类药物残留回收率的相关因素
高效液相色谱法影响猪肉中磺胺类药物残留回收率的相关因素高效液相色谱法（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析技术，用于检测猪肉中磺胺类药物残留的浓度。
影响猪肉中磺胺类药物残留回收率的相关因素包括以下几个方面：1. 样品前处理方法：样品前处理方法的选择与操作技术直接影响了磺胺类药物残留的回收率。
常见的前处理方法包括提取、净化和浓缩等步骤。
合适的前处理方法能够提高磺胺类药物的提取效率和净化效果，从而提高回收率。
2. 色谱柱选择：色谱柱的选择对回收率影响较大。
不同的色谱柱具有不同的性能特点，如分离能力、保留特性、选择性等。
合适的色谱柱能够提高样品中目标物的分离效果和检测灵敏度，从而提高回收率。
3. 流动相组成：流动相的组成也是影响回收率的重要因素之一。
流动相的选择应考虑到磺胺类药物的溶解性、保留时间以及色谱柱的兼容性。
适当调整流动相的pH值、有机溶剂比例等参数可以改善分离效果，提高回收率。
4. 样品基质干扰：猪肉中存在着各种复杂的基质成分，如脂肪、蛋白质等。
这些基质成分可能对磺胺类药物的提取、净化和分离产生干扰，降低回收率。
因此，在样品前处理和分析过程中需要采取适当的措施来消除或最小化这些基质的影响。
5. 检测方法验证：对于高效液相色谱法的应用，准确性和可靠性是关键。
应进行有效的方法验证，包括方法的线性范围、灵敏度、准确度、重复性等指标。
这些指标的验证结果直接影响磺胺类药物残留回收率的准确性。
总的来说，磺胺类药物残留回收率受到样品前处理方法、色谱柱选择、流动相组成、样品基质干扰以及检测方法验证等多个因素的共同影响。
在实际应用中，需要综合考虑这些因素，并采取相应的措施，以保证磺胺类药物残留回收率的准确性和可靠性。
磺胺类药物在畜产品中残留的原因及检测方法
磺胺类药物在畜产品中残留的原因及检测方法磺胺类药物是一类广谱抗菌药物，被广泛应用于动物养殖业中，用于预防和治疗畜禽的感染疾病。
然而，磺胺类药物在畜产品中残留是一个有害的问题，可能对人类健康产生负面影响。
本文将探讨磺胺类药物在畜产品中残留的原因，并介绍一些常用的检测方法。
1.动物滥用药物：一些生产者为了快速促进动物生长和预防疾病，可能会滥用磺胺类药物。
使用不当剂量或长期连续使用磺胺类药物可能导致药物在动物体内残留较高水平。
2.药物代谢不完全：磺胺类药物在动物体内经过代谢产生的代谢产物有时可能仍有残留，这可能是因为动物的代谢能力不同。
3.药物不当使用：动物饲养员在使用磺胺类药物时可能没有按照指定的使用方法和剂量进行使用，这可能导致药物在动物体内积累过多。
4.药物排泄时间：不同类型的畜禽动物在接受磺胺类药物治疗后，药物的排泄时间也不相同。
有些动物可能需要更长的时间才能将药物完全排出体外，这会导致药物残留。
为了解决磺胺类药物在畜产品中残留的问题，需要对畜产品进行检测。
常用的检测方法包括以下几种：1.ELISA法：酶联免疫吸附分析法是一种常用的检测方法。
该方法基于磺胺类药物与特定抗体之间的免疫反应，通过检测免疫反应的强度来确定畜产品中的磺胺类药物残留水平。
2.高效液相色谱法：高效液相色谱法(HPLC)是一种常用的分离和检测磺胺类药物的方法。
该方法通过样品的分离和检测，确定样品中磺胺类药物的含量。
3.质谱法：质谱法是一种常用的分析技术，可以精确测定磺胺类药物的结构和含量。
质谱法可以通过分析药物的质荷比来确定样品中的磺胺类药物残留。
4.快速检测试纸：快速检测试纸是一种便捷快速的检测方法，通过对样品中的磺胺类药物进行化学反应来确定样品中的残留水平。
这种方法操作简单，不需要复杂的设备，适用于现场检测。
总之，磺胺类药物在畜产品中残留的原因包括动物滥用药物、药物代谢不完全、药物不当使用和药物排泄时间等。
为了确保畜产品的质量和安全性，需要使用合适的检测方法来监测磺胺类药物的残留水平。
动物源性食品中5种磺胺类药物的检测
参考标准 1、GB 29694-2013 食品安全国家标准 动物性食品中 13 种磺胺类药物多残留的 测定 高效液相色谱法 2、农业部 1025 号公告-23-2008 动物源食品中磺胺类药物残留检测液相色谱－ 串联质谱法
（100μg/mL，甲醇），磺胺甲氧嘧啶（100μg/mL，甲醇），磺胺甲恶唑 （100μg/mL，甲醇），磺胺喹恶啉（100μg/mL，甲醇）；
磺胺类药物标准工作液：用 Minilab 按图 1 方法配制得到浓度为 5μg/mL 的 标准工作液。
图 1 混标配制方法
2 实验过程 2.1 样品预处理
收集瓶中加 0.1mol/L 盐酸溶液 4mL，于 40℃下氮吹浓缩至少于 3mL，转至 10mL 离心管中。用 0.1mol/L 盐酸溶液 2mL 洗收集瓶，转至同一离心管中。再 用正己烷 3mL 洗收集瓶，将正己烷转至同一离心管中，涡旋混合 30s，
3000r/min 离心 5min，弃正己烷。再次用正己烷 3mL 洗收集瓶，转至同一离心 管中，涡旋混合 30s，3000r/min 离心 5min，弃正已烷，取下层液备用。 2.3 SPE 富集及浓缩
按照图 2 所示方法进行 Sepline-S4 方法编辑，加载并运行方法，Sepline-S4 完成 2.2 中加标样品的 SPE 萃取。
样品收集到收集瓶中，在 40℃，5psi 条件下进行氮吹浓缩，当收集液浓缩 到近干时，加入流动相定容至 1mL，涡旋混匀，0.22μm 滤膜过滤，待检测。
磺胺类药物在畜产品中残留的原因及检测方法
磺胺类药物在畜产品中残留的原因及检测方法磺胺类药物是一类广泛应用于畜牧业的抗生素药物，主要用于预防和治疗畜禽的感染病。
然而，由于不正确使用或滥用磺胺类药物，导致在畜产品中出现残留物。
磺胺类药物残留不仅会危害消费者的健康，还会对环境产生负面影响。
因此，了解磺胺类药物在畜产品中残留的原因以及检测方法非常重要。
1.不正确使用剂量：磺胺类药物的使用剂量应严格按照药品说明书中的指导进行，但由于兽医人员对用药剂量的错误理解或其他原因，在实际应用中往往会发生剂量过大或过小的情况，导致药物在动物体内残留过高或者药效不彻底。
2.使用过期药品：使用过期或质量不佳的磺胺类药物会增加残留物的风险。
过期药品的活性成分可能降解或丧失，导致药物在动物体内残留不易被代谢和排泄。
3.药物滥用或滥用期药品：磺胺类药物滥用可能会导致药物在动物体内残留过高，一些农民常常将磺胺类药物添加到饲料中以促进动物生长，而不顾药物使用的时间限制，这样会导致药物残留超过合理范围。
为了确保畜产品的安全性，需要对磺胺类药物的残留进行检测。
目前常见的磺胺类药物残留检测方法有以下几种：1.高效液相色谱法（HPLC）：高效液相色谱法是目前应用最广泛的磺胺类药物检测方法之一、这种方法通过将样品中的残留物分离并通过检测器进行定量来测定磺胺类药物的残留水平。
2.气相色谱法（GC）：气相色谱法也可以用于磺胺类药物的残留检测。
该方法利用气相色谱技术将样品中的残留物分离并通过检测器来定量。
3.酶联免疫吸附试验（ELISA）：酶联免疫吸附试验是一种快速、灵敏和经济的磺胺类药物残留检测方法。
该方法通过检测样品中的特定抗原与特定抗体之间的亲和力来定量磺胺类药物的残留水平。
4.购买合格产品：为了降低磺胺类药物残留的风险，消费者应选择来自正规渠道、生产日期合法，并且符合食品安全标准的畜产品。
总之，了解磺胺类药物在畜产品中残留的原因和检测方法，有助于保障畜产品的质量和消费者的健康。
农牧发[2001]38号 动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法-高效液相色谱法
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农牧发[2001]38号动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法-高效液相色谱法动物性食品中磺胺类药物残留的检测方法----高效液相色谱法1 范围本标准规定了动物性食品中磺胺嘧啶（SD）、磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺地索辛（SDM）、磺胺二甲嘧啶（SM）、磺胺甲氧嗪（SMP）、磺胺甲恶唑（SMZ）、2磺胺喹恶啉（SQ）单个或混合物残留量检验的制样和高效液相色谱测定方法。
本标准适用于各种动物性食品（鸡肌肉和鸡肝脏）中磺胺嘧啶（SD）、磺胺）、磺胺甲氧嗪间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺地索辛（SDM）、磺胺二甲嘧啶（SM2（SMP）、磺胺甲恶唑（SMZ）、磺胺喹恶啉（SQ）单个或混合物残留量检验。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励本标准达成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。
凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 1.1-20001 标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则(ISO/IEC Directives, Part 3, 1997, Rules for the structure and drafting of International Standards, NEQ)GB/T 2000 1.4-88 标准编写规则第4部分：化学分析方法 (ISO 78-2, Chemistry-Layout for standards-Part2: Methods of chemical analysis, MOD) GB/T 8170-87 数值修约规则GB/T 6682-1992 分析实验室用水规则和试验方法3 制样3.1 样品的制备将组织样品解冻，剪碎，置于组织匀浆机中高速匀浆。
3.2 样品的保存- 20℃冰箱中贮存备用。
4 测定方法4.1方法提要组织样品经乙腈提取，正己烷分配，再经碱性氧化铝SPE柱净化后，用反相高效液相色谱-紫外检测法在270nm处检测。
高效液相色谱在食品农兽药残留中的检测应用
13 Oct. 2021 CHINA FOOD SAFETY Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
颁布的《动物性食品中兽药最高残留限量》已经明文规定食
品动物中不得检出氯霉素。朱虹通过 HPLC 法对猪肉产品
进行抗生素检测，发现 HPLC 法可同时检测氯霉素、土霉素、
甲砜霉素、阿莫西林、四环素和氟苯尼考 6 种抗生素，且不
同抗生素的线性关系良好，最低检出限为 8 μg/kg，定量限
最高可达 30 μg/kg，多次检测的 RSD 值最高为 4.3%，表明
食ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ管理
高效液相色谱在食品农兽药残留中的检测应用
郑碧秋
（茂名市食品药品检验所，广东茂名 525000）
摘 要：随着健康饮食习惯的普及，越来越多的消费者重视植物性或动物性食品中农药、兽药残留问题，希望建立一 种快速、灵敏、精准的检查方法来保证食品安全。本文介绍了高效液相色谱法在食品中有机磷农药、氨基甲酸酯类农药和 烟碱类农药的检测应用，分析了高效液相色谱法在氯霉素、四环素类、磺胺类和喹诺酮类兽药的检测应用，以期为食品中 农药、兽药的高效高通量检测提供参考。
类农药的检出限为 0.1 ～ 1.0 μg/kg，定量限为 0.3 ～ 2.0 μg/kg，
6 种农药的 RSD 值为 1.3% ～ 14.3%，表明 HPLC 方法快速，
分析简单，可以适用于大批量蜂蜜农药残留的检测。
2 食品中兽药残留的检测 2.1 氯霉素
高效液相色谱-质谱_质谱法测定猪肉中11种磺胺类药物残留
高效液相色谱-质谱/质谱法测定猪肉中11种磺胺类药物残留发布时间：2022-08-01T08:38:02.400Z 来源：《科学与技术》2022年第6期作者：许计元刘淑梅李梦平[导读] 利用高效液相色谱-质谱/质谱仪建立猪肉中11种磺胺类药物残留的检测方法。
许计元,刘淑梅,李梦平安徽创佳安全环境科技有限公司利用高效液相色谱-质谱/质谱仪建立猪肉中11种磺胺类药物残留的检测方法。
本方法用乙腈作为提取溶剂，正己烷去除油脂，液相初始流动相定容，0.1%甲酸水与纯乙腈作为流动相，使用的色谱柱为安捷伦InfinityLab Poroshell 120 EC C18(3.0mm×150mm,2.7μm)，多重反应监测（MRM）模式下采集数据，基质配标法定量。
11种磺胺类药物在1ug/kg-10ug/kg范围内线性良好，在4ug/kg加标水平下，回收率在86.9%-103.6之间，相对标准偏差在1.35%-3.28%之间。
本方法前处理简单，回收率、精密度与准确度均可以满足使用要求。
关键词：液相色谱；质谱；猪肉；磺胺Determination of 11 sulfonamides residues in pork by high performance liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometryXu Ji-Yuan,Liu Shu-Mei,Li Meng-Ping（Anhui Chuangjia Safety environment Technology Co., LTD）A method for the determination of 11 sulfonamides residues in pork was established by high performance liquid chromatography-mass spectrometry. The chromatographic column was agilent InfinityLab Poroshell 120 EC C18(3.0mm×150mm,2.7μm), using acetonitrile as the extraction solvent, n-hexane for oil removal, and 0.1% formic acid water as the mobile phase. Data were collected in multiple response monitoring (MRM) mode and quantified by matrix coordination method. The linearity of 11 sulfonamides was good in the range of 1ug/kg-10ug/kg. At the spiked level of4ug/kg, the recoveries were 86.9%-103.6, and the relative standard deviations (RSDS) were 1.35%-3.28%. The method is simple in pretreatment, and the recovery, precision and accuracy can meet the application requirements.Key words: liquid chromatography; Mass spectrometry; Pork; Conditions磺胺类药物（SAs）是指具有对氨基苯磺酰胺结构药物的总称，为人工合成的抗菌药，该类药物具有抗菌谱广、抗菌效果明显、性质稳定、价格便宜等优点, 目前大量用于防治畜禽细菌性感染疾病。
高效液相法测定畜产品中磺胺类药物残留量的研究
相 色谱 仪 ， ｔｒ２ ８ Ｗａ ｓ４ ７紫 外检 测 ｅ 器 ，２ ｂ ｓ Ｔ ５ ａｉ 浆 机 ， Ａ 公 司 ｃ匀 Ｉ Ｋ
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计鞠 归方程和相关系数。
２３ 回收 率测定 ．
衰 １ 猪 肉中礁胺类的批 内回收奉 ｃ＝ ） ｎ ３
在 猪 肉、 肝 猪
容 为 混 合 标 准 液 。将 混 合标 准
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氮 吹仪 。 １ ． 药品 与 试 剂 ２ 磺 胺 嘧 啶 对 照 品 ： 度 ≥９ ％ ， 号 ６ １ ３ 纯 ９ 批 ０２ ； 磺 胺 间 甲氧 嘧 啶 对 照 品 ： 度 ≥ 纯 ９％ ， ９ 批号 ６ ７ １ 磺 胺 ５甲氧 嘧 ０３ ：
磺 胺 类 药 物 是 一 类 广 谱 抗 茵药 ， 临床 上主 要 用于 预 防和 治 疗细 菌 感染 性疾 病 ， 常作 为 饲 还 料添 加 剂 在 动 物 生 产 中 长 期 应
用 。然 而 ， 胺 药 会 引起 人过 敏 磺
天 地 公 司 ；乙 酸 色 ，色 谱 纯 ，
Ｔ Ｃ４６ ２ ０ｍｍ ｌ ｍｎ， ｍ Ｍ ． ｘ ５ Ｃｏｕ ５ ｏ ｝
磺胺类药物在畜产品中残留的原因及检测方法
将拭子插入待检测样品中，20min 后去除，放 入有枯草芽孢杆菌的培养基中，经过 18~24h 的培养后，如果 拭子周围有 2mm 以上的抑菌圈，则说明该组织中有抗菌药物 的存在。这一方法是美国农业部规定使用的方法，但该方法时 间成本较高，且容易发生交叉反应，不能进行定量检测。 4小结
使用磺胺类药物后应当经过一 段时间的休药后方可屠宰，但有时养殖场的管理人员因畜禽 已经达到出栏体重，继续饲养会增加成本，没有按照休药期 休药，而直接屠宰，造成了畜产品中有磺胺类药物的残留。 2危害
作者简介：杨磊（1970～），河北平泉人，高级兽医师，本科，主 要从事农畜产品质量安全检测方面骨 髓造血功能障碍，从而引发溶血性贫血和再生障碍性贫血 等。怀孕动物使用磺胺类药物后会造成胎儿黄疸、核黄疸，严 重的还会引起胎儿畸形。成年动物长时间使用磺胺类药物还 会引起消化系统、神经系统、泌尿系统等多系统多器官的紊 乱，最终表现为少尿、无尿或血尿，贫血、白细胞减少等症状。
指导养殖场管理人员合理使用兽药、提高其养殖技术水 平，是保障畜产品质量安全的重要措施，屠宰环节作为畜产 品进入市场前的最后环节，应当严格进行把控，积极进行各 项药物残留的检测，降低畜产品中药物残留的风险。
参考文献 [1] 蔡文金，等.动物源性食品中磺胺类药物残留检测技术研究进展
[J].畜禽业，2015(5):64-67. [2] 刘庆堂，等.磺胺类药物在饲料和畜产品中的残留、危害与检测
[J].饲料工业，2007，28(17):33-35.
202 2021 年第 04 期
畜牧兽医科技信息
农质发(2014)5号文件 磺胺类药物
农质发〔2014〕5号文件附件8磺胺类药物在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法1 范围本标准规定了动物组织中五种磺胺类药物（磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺二甲氧嘧啶和磺胺喹噁啉）残留检测的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于猪肉中五种磺胺类药物残留量的测定。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法３原理样品经乙腈提取后,在上清液中加入正己烷进行液液分配，取下层溶液浓缩,残留物用95％乙腈溶解，过碱性氧化铝小柱，以70％乙腈溶液洗脱,加入正丙醇浓缩后，残留物用流动相溶解，高效液相色谱仪进行检测，外标法定量。
４试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的二级水。
4.1 磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺二甲基嘧啶（SM2)、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺二甲氧嘧啶（SDM）、磺胺喹噁啉（SQ)对照品：含量均不得少于98.0%4。
2 乙腈色谱纯4.3 甲醇色谱纯4。
4 正已烷4.5 冰乙酸4。
6 正丙醇4。
7 无水硫酸钠4.8 95 %乙腈溶液取乙腈95 mL加水至100 mL，混匀。
4。
9 70 %乙腈溶液取乙腈70 mL加水至100 mL，混匀。
4。
10 磺胺类药物标准储备液（1mg/mL）：分别准确称取适量上述五种磺胺类药物对照品,置同一棕色容量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀,配制成浓度为1mg/mL的标准储备液。
—20℃以下冰箱中保存，有效期6个月。
4.2.10 磺胺类药物标准工作液（10µg/mL)：精密移取磺胺类药物标准储备液1。
0 mL，置100 mL棕色容量瓶，用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
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5农牧发[2001]38号动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法-高效液相色谱法
动物性食品中磺胺类药物残留的检测方法
----高效液相色谱法
1 范围
本标准规定了动物性食品中磺胺嘧啶（SD）、磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺地索辛（SDM）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、磺胺甲氧嗪（SMP）、磺胺甲恶唑（SMZ）、磺胺喹恶啉（SQ）单个或混合物残留量检验的制样和高效液相色谱测定方法。
本标准适用于各种动物性食品（鸡肌肉和鸡肝脏）中磺胺嘧啶（SD）、磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺地索辛（SDM）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、磺胺甲氧嗪（SMP）、磺胺甲恶唑（SMZ）、磺胺喹恶啉（SQ）单个或混合物残留量检验。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励本标准达成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。
凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 1.1-20001 标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则(ISO/IEC Directives, Part 3, 1997, Rules for the structure and drafting of International Standards, NEQ)
GB/T 2000 1.4-88 标准编写规则第4部分：化学分析方法 (ISO 78-2, Chemistry-Layout for standards-Part2: Methods of chemical analysis, MOD) GB/T 8170-87 数值修约规则
GB/T 6682-1992 分析实验室用水规则和试验方法
3 制样
3.1 样品的制备
将组织样品解冻，剪碎，置于组织匀浆机中高速匀浆。
3.2 样品的保存
- 20℃冰箱中贮存备用。
4 测定方法
4.1方法提要
组织样品经乙腈提取，正己烷分配，再经碱性氧化铝SPE柱净化后，用反相高效液相色谱-紫外检测法在270nm处检测。
4.2 试剂和材料
除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T 6682二级用水的规定。
4.2.1 甲醇：色谱纯。
4.2.1乙腈：色谱纯。
4.2.2正已烷：分析纯，经重蒸馏。
4.2.3正丙醇：分析纯，经重蒸馏。
4.2.4磷酸：分析纯。
4.2.5无水硫酸钠：分析纯。
4.2.6碱性氧化铝SPE柱。
4.2.7磺胺类药物标准品（SD、SMM、SDM、SM2、SMP、SMZ和SQ）：纯度≥99%。
4.2.8磺胺类药物标准液：用甲醇溶解各个磺胺药为标准原液，再用流动相稀释0.1--0.2µg/mL的标准溶液。
4.3 仪器和设备
4.3.1实验室常用仪器、设备。
4.3.2高效液相色谱仪，配紫外检测器。
4.3.3涡动混合器。
4.3.4离心机。
4.3.5电子天平：感量0.01mg。
4.3.6旋转蒸发仪。
4.3.7振荡器
4.3.8组织匀浆机
4.4 测定步骤
4.4.1提取
准确称取5.0g组织样品匀浆物，置于50ml聚丙烯离心管中，加无水硫酸钠4g 和乙腈25ml，涡动混合15秒，中速振荡20min，2500rpm离心5min。
上清液移至分液漏斗中，加入30ml正己烷，振摇2min后，静止5min，分离乙腈层。
用25ml乙腈将沉淀物重复提取1次，乙腈层经同一份正己烷分配，合并乙腈层于100ml鸡心瓶中，加入正丙醇5mL，50℃减压浓缩至近干。
用3ml乙腈-水（95＋5,v/v）溶解残留物。
4.4.2净化
将上述样品液通过碱性氧化铝SPE柱，不收集，用乙腈-水（95＋5,v/v）5ml 洗涤鸡心瓶，并过SPE柱，吹去柱内滞留的液体。
用5ml 乙腈-水（75＋25,v/v）洗脱待测物至10ml容量瓶中，用0.017 mol／L 磷酸定容至10mL，过0.45µm微孔滤膜后，进HPLC测定。
4.4.3 测定
a) 液相色谱条件：
色谱柱：反相C18柱：250 ×4.6mm，5µm；
流动相：0.017 mol／L 磷酸-乙腈（80＋20，v/v）；
流速：1ml／min；
检测波长：270nm；
进样体积：50µl。
b) 液相色谱测定：
分别取适量试样溶液和相应浓度的标准工作液，作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。
标准工作液及试样液中磺胺类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内，试样液测定过程中应参插注入标准工作液，以便准确定量。
标准品液相色谱图件附录A中图A1。
4.4.4空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。
4.5 结果计算和表述
组织中磺胺类药物的残留量按下式计算：
X =
M V
C
式中：X—试样中磺胺类药物的残留量(µg/g);
C—试样液中对应的磺胺类药物的浓度(µg/ml);
V—试样总体积(ml)。
M––组组织样品重量(g)。
注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后2位。
5 检测方法灵敏度、准确度、精密度
5.1灵敏度
本方法在鸡肌肉和肝脏组织中的最低检测限为10-20µg/kg。
5.2 准确度
本方法在以下三个添加浓度水平上的回收率范围如下：
添加浓度mg/kg 回收率 %
0.02 80.9-96.0
0.1 82.3-93.4
0.5 85.2-100.4
5.3 精密度
本方法的室内变异系数CV为10.2%，室间变异系数CV为18.5%。