SOP高效液相色谱法检验操作规程
高效液相色谱法操作规程
1.目的建立高效液相色谱法检测操作规程。
2.适用范围本规程适用于高效液相色谱法试验。
3.编制依据《药品生产质量管理规范（1998年修订）》国家药品监督管理局（1999）4.责任4.1 QC质检员对本规程的实施负责。
4.2 QC主管对本规程的有效执行承担监督检查责任。
5.正文5.1简述5.1.1高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将具流动相泵入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。
5.1.2检测器5.1.2.1紫外检测器（Ultraviolet detector,UV）紫外检测器是液相色谱中使用最广泛的检测器，几乎所有的液相色谱仪都配此类检测器，是一种选择性检测器。
5.1.2.2优点：灵敏度高、噪声低、线性范围宽、对流速和温度的波动不灵敏，适用于梯度洗脱及制备色谱。
5.1.2.3缺点：只能检测有紫外吸收的物质，流动相的选择有一定限制，流动相的截止波长必须小于检测波长。
5.1.2.4适用范围：大多数有紫外吸收的化合物。
5.2高效液相色谱仪的使用要求5.2.1按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705-90）”的规定进行定期检定，应符合规定。
5.2.2仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连接，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。
5.2.3具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。
5.3操作前的准备5.3.1流动相的制备5.3.1.1用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水。
凡规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节。
SOP高效液相色谱法检验操作规程
SOP高效液相色谱法检验操作规程SOP(S tandard O perating P rocedure)高效液相色谱法检验操作规程应包括以下内容，长度不少于1200字：一、目的和适用范围说明制定此操作规程的目的和适用范围，例如适用于其中一种特定的样品检验。
二、相关参考文件列举与此操作规程相关的参考文件，例如国家标准、行业标准、公司内部文件等。
三、术语和定义定义操作中可能出现的术语和缩写词的含义，以确保操作规程的清晰和一致性。
四、仪器设备确定用于该检验的高效液相色谱仪及其相关设备的说明和规格。
五、试剂和材料列出用于检验的试剂和材料，并提供其质量标准、存储要求和有效期等信息。
六、工作环境和安全要求确定进行检验时所需的工作环境和安全要求，包括所需的实验室设施、通风要求、个人防护措施等。
七、样品准备详细描述样品的获取、保存、处理和制备方法，确保样品的准备符合标准要求。
八、标准曲线制备说明制备标准曲线所需的试剂和材料、操作步骤和相关参数设置，以确保准确测量样品。
九、仪器校准和验证指导操作员如何校准和验证高效液相色谱仪以确保仪器的准确性和可靠性。
十、方法操作步骤详细描述高效液相色谱检验的操作步骤，包括进样器设定、流速设定、柱温设定、检测波长设定等，确保操作的标准化和一致性。
十一、结果记录和数据处理提供一个记录表格，规定操作员如何记录检验结果，包括峰面积、保留时间等数据，并说明如何进行数据处理和解读。
十二、异常处理列举可能出现的异常情况，如仪器故障、色谱图异常等，并给出相应的处理措施和纠正措施。
十三、参考范例和质量控制提供一些操作示例或参考范例，以及质量控制的要求和方法，以确保结果的准确性和可靠性。
十四、操作员培训和授权确定操作员接受培训的要求和方法，表明完成培训后的操作员可以独立进行该检验，并进行检验授权和审批的规定。
十五、附录列举相关的附录，如计算公式、样品制备方法详解、有关仪器的文章等。
以上是SOP高效液相色谱法检验操作规程的基本内容，操作规程的编写应根据具体情况进行调整和修改。
高效液相色谱测定法标准操作规程
标准操作规程1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。
2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。
3责任：QC人员对本SOP实施负责。
4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。
超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2〜8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。
GMP认证全套文件资料37-高效液相色谱法标准操作规程
高效液相色谱法标准操作规程目的：建立高效液相色谱法标准操作规程。
适用范围：高效液相色谱法。
责任：质检员实施本操作规程，检验室主任负责监督本规程正确执行。
程序：高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。
1.对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪。
色谱柱的填充剂和流动相的组分应按各品种项下的规定。
常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶，后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。
离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂用于分子排阻色谱等。
除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。
在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（附录ⅣA）项下对溶剂的要求。
正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。
一般色谱图约于20分钟内记录完毕。
2.系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整。
应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。
(1) 色谱柱的理论板数（n ） 在选定的条件下；注入供试品对仪器或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t R （以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半峰高宽（W h/2），按n=5.54(t R /（W h/2）计算色谱柱的理论板数。
如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改普通色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。
液相色谱质谱联用仪校验SOP
液相色谱质谱联用仪检验作业指导书1.适用范围适用于液相色谱质谱联用仪（LCMS-2020）的期间核查2.校验方法准备1.0ng/μL和100pg/μL的利血平在甲醇中的标准溶液，按液相色谱流动相流速0.8mL/min，ESI+与APCI+模式下流动相：甲醇：水（80:20，体积分数），加入0.1%（体积分数）甲酸；ESI-模式下流动相：甲醇：水（80:20，体积分数），加入0.1%（体积分数）氨水，设置仪器参数，使用全扫描模式（Scan）校准分辨力与质量准确性，使用选择离子模式（SIM）校准信噪比、峰面积重复性、保留时间重复性。
3.计量性能指标校验项目仪器类型电离模式要求分辨力单四级杆ESI+≤1u信噪比单四级杆ESI+≥10:1 ESI-APCI+质量准确性单四级杆ESI+≤0.5u峰面积重复性单四级杆ESI+≤10%保留时间重复性单四级杆ESI+≤1.5%4.校验周期校验项目周期分辨力1年信噪比1年质量准确性1年峰面积重复性1年保留时间重复性1年5.校验项目5.1分辨力待仪器运行稳定后，根据校验方法中推荐条件，在ESI+模式下，选择全扫描模式（Scan），将扫描范围设为m/z=606~612，注入1ng/μL的利血平溶液5μL。
观察质谱图，记录m/z=609质谱峰，并计算其50%峰高处的峰宽，得到W1/2，作为分辨力的结果。
5.2质量准确性在ESI+模式下，选择全扫描模式（Scan ），将扫描范围设为604~614，注入1ng/μL 的利血平标准溶液10μL ，观察质谱图，记录特征离子的实测质量数（有效数字取小数点后两位）。
根据公式（1）计算△M ，以△M 的最大值作为质量准确性的结果。
i 理i 测M -M △M =（1）式中：M i 测——第i 个离子的测量值，u M i 理——第i 个离子的理论值，u ；5.3信噪比根据检验方法中条件设置仪器参数，使用选择离子模式（SIM ），分别在ESI+和APCI+模式下：将检测离子m/z 设为609；在ESI-模式下：将检测离子设为607。
高效液相色谱法标准操作规程
范围：原料、产品职责：检验室对本规程的实施负责正文：1.原理——高效液相色谱法是将具一定性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。
——高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。
2.操作前的准备2.1流动相的制备用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水。
凡规定PH值的流动相、应使用精密PH计进行调节。
配制好流动相应通过适宜的0.45µm滤膜滤过，用前脱气，应配制足量的流动相及时待用。
2.2供试溶液的配制供试品用规定溶剂配制成供试溶液定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。
供试溶液在注入色谱仪前，一般应经适宜的0.45µm滤膜滤过。
必要时在配制供试溶液前，样品需经提取净化。
以免对色谱系统产生污染或对色谱干扰。
3.系统适用性试验——按各品种项下要指法训练对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。
3.1色谱柱理论板数（n）在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半峰高宽（Wh/2），按n=5.54(tR/ Wh/2)2计算色谱柱的理论板数。
如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。
3.2分离度定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。
分离度（R）的计算公式为：2（tR2- tR1）R=W1+W2式中tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间；tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间；W 1及W2为此相邻两峰的峰宽。
液相色谱仪SOP
待压力线平稳30min后，单击批处理开始，批处理表 开始运行。
a.在LC再解析中，点击LC数据分析。挨个进行数据 处理。在最大浓度数据文件中，点击向导，弹出对 话框，点下一步，标准级别数填入5，再点下一步， 输入标准品名称，标准级别浓度，最后点完成。
b.在文件中点击文件另存为，编辑文件名称，连点 两个确定。新的方法文件就建好了。
2.开机 （打开LC-30A和计算机） 3. 打开方法文件 4.排气 5.编辑批处理并运行 6.数据处理 7.系统清洗 8.关机
a、首先打开UPS，然后依次打开DGU-20ASR真空脱气机、 LC-30AD溶液传输单元（泵）、SPD-M20A系统控制器、 所选用的检测器、自动进样器SIL-30AC，CTO-20AC柱 温箱电源打开。（HPLC组件的电源开关大都在仪器的右 下角）
b、双击Lc solution图标。输入用户名Admin，点击OK。 然后点击启动按钮，听到两声蜂鸣声，说明Lc solution 工作站与仪器联机正常。
在文件中调出已有的方法文件，在仪器参数视图里
面，简单设置里面，模式选择，总流速，泵B浓度，
时间，柱温箱温度，时间程序自动弹出。然后选择 下载，看压力线。单击绘图，可以查看基线。
c.在批处理表中选择新的方法文件，输入级别号， 保存。运行批处理文件。
d.打印数据报告
数据采集完毕后，关闭检测器，将流动相 换成水+甲醇（95+5），冲洗20min，后换 成100%甲醇，冲洗20min。
a、冲洗结束后，关闭泵，待压力降为 0.0MPa，关闭工作站，听到蜂鸣声后，关 闭仪器各部分电源按钮。
2.氨水溶液:量取氨水2mL,加水至100mL,混匀。
14.SOP表格-高效液相色谱法测纯度
样品批号
样品浓度
仪器型号
Agilent 1200 HPLC
生产厂家
Agilent
色谱柱型号
TSK-GEL G3000 SWXL
7.8 mm（ID）×300 mm（L）
生产厂家
TOSOHБайду номын сангаас
保护柱型号
TSK-SWXL
6.0 mm（ID）×40 mm(L)
生产厂家
TOSOH
色谱条件
流动相
40mM磷酸盐-0.3M Na2SO4缓冲液含pH7.2
上样量
40μl
流速
0.5 ml/min
检测波长
280 nm
记录时间
40 min
柱温
25℃
—
操作步骤
1．操作步骤
用流动相以0.5ml/min流速平衡色谱柱至基线平衡。取待测样品上柱，上样量应不低于10μg。用流动相以0.5ml/min流速洗脱，同时在紫外检测波长下记录色谱图及有关数据，色谱图记录时间为40min。同时，做空白实验。
2.结果测定
按面积归一化法计算rhIL-12主峰面积占总面积百分比。按DAB法计算rhIL-12主峰理论板数。
检测报告
样品批号
结果
备注
（附检测报告）
检验/记录
复核者
质量管理
日期
日期
日期
附页（检测报告）：
1.原液样品检测报告：
2.缓冲液对照检测：
液相色谱仪(HPLC)校验SOP
液相色谱仪检验作业指导书1.适用范围适用于液相色谱谱仪的期间核查2.校验方法配制100ng/mL 的萘-甲醇的标准溶液，按仪器操作规程进行重复测量6次，用来验证仪器最小检测浓度、定性及定量准确性，配制0.1%~1.0%的丙酮-异丙醇溶液验证仪器线性范围。
3.校验项目及性能要求校验项目要求定量准确性≤3%定性准确性≤1%线性范围优于103最小检测浓度≤5×10-8g/mL4.校验周期校验项目周期定量准确性1年定性准确性1年线性范围两年最小检测浓度1年5.校验项目5.1最小检测浓度使用100%甲醇作为流动相，流速调为1mL/min ，检测波长设定为254nm ，仪器稳定后，使用自动进样器进样20μL 的100ng/mL 的萘-甲醇溶液，连续进样6次。
计算萘出峰保留时间和峰面积算数平均值。
5.1.1最小检测浓度计算公式H20cV N 2C d L（1）式中：C L ——最小检测浓度，g/mL N d ——基线噪声峰高；c——标准溶液浓度，g/mL V——进样体积，μL ；H——标准物质的峰高。
5.1.2定性准确性计算公式定性准确性以萘出峰保留时间测量的相对标准偏差TV 表示，依下式计算：t11-n /t -t TV n1i 2i ⨯=∑=）（）（（2）式中：TV——相对标准偏差n——测量次数t i ——第i 次测量的峰面积t ——n 次进样的峰面积算术平均值i——进样序号5.1.3定量准确性计算公式定量重复性以萘峰面积测量的相对标准偏差CV 表示，依下式计算：x11-n /x -x CV n1i 2i ⨯=∑=）（）（（3）式中CV——相对标准偏差n——测量次数x i ——第i 次测量的峰面积x ——n 次进样的峰面积算术平均值i——进样序号5.2线性范围操作使用100%甲醇作为流动相，流速调为1mL/min ，检测波长设定为254nm ，仪器稳定后，使用自动进样器分别进样20μL 的0.1%，0.2%，0.3%，0.4%，0.5%，0.6%，0.7%，0.8%，0.9%，1.0%丙酮-异丙醇溶液，每个浓度重复测量三次，取算数平均值。
高效液相色谱仪校验规程完整
标准文件1、目的Objective：建立高效液相色谱仪内部校验规程，确保校验工作规范、顺利进行。
2、范围Scope ：本规程适用于本公司使用的高效液相色谱仪（紫外-可见光检测器/二极管阵列检测器）的校验。
3、职责Responsibilities：3.1 培训职责：本文件起草人或审核人或批准人负责对质量管理部全体人员培训。
3.2 QC：负责制定本规程，并对本规程的实施负责。
3.3 QA：负责监督和检查本规程的实施。
4、定义Definition：无。
5、程序Procedures：5.1 依据国家计量校验规程JJG 705-2002液相色谱仪，安捷伦液相说明书，岛津液相说明书。
5.2 备件及材料5.2.1水：HPLC级水。
5.2.2化学试剂：乙腈（HPLC）、丙酮（分析纯）。
5.2.3咖啡因标准品。
5.2.4咖啡因标样。
0.005 mg/ml, 0.010 mg/ml, 0.025 mg/ml,0.050 mg/ml,0.125 mg/ml和0.250 mg/ml 咖啡因水溶液。
5.2.5色谱柱：4.6mm×250mm，C18，5µm。
5.2.6 容量瓶：10ml。
5.2.7玻璃注射器。
5.2.8 限流阻尼管。
5.2.9 分析天平。
5.2.10 秒表。
5.2.11 热电偶5.3 校验项目及技术指标5.3.1泵性能的测试5.3.2柱温箱温度稳定性测试*备注：如药典专论规定的特定柱温，不在以上温度范围之内，则对分析该品种的仪器增加该温度点校验，校验项目和可接受指标相同。
5.3.3 检测器性能测试5.3.4进样器性能测试5.3.5梯度组成的测试*注：*表示该项目的内部校验取决于仪器的配置，有该配置则为必检项目。
5.4 校验方法5.4.1校验通则5.4.1.1 HPLC的内部校验由仪器所属部门经培训的使用者按本规程进行校验，其校验项目依仪器配置和使用范围而定。
5.4.1.2 政府部门每一年对HPLC进行校验，每六个月内部对HPLC进行一次校验；仪器配置的关键部件大修或更换后，可参考本规程对该部件相关的项目进行校验，以对仪器的性能进行确认。
高效液相色谱仪使用sop
LC300高效液相色谱仪使用SOP1. 目的与意义规范LC300高效液相色谱仪的使用操作，保证高效液相色谱仪稳定性。
2. 责任所有使用人员全面负责本SOP的实施。
3. 仪器的组成本系统由高压输液泵、紫外检测器(190～800 nm或190-400nm)、Rheodyne 7725i手动进样阀、EasyChrom色谱工作站、管路接头等组成。
4. 操作步骤4.1 准备4.1.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm或者0.22um滤膜过滤，超声脱气10-15min，装试剂的溶剂瓶一定用泡沫洗涮干净，再用纯净水涮干净，装试剂前用对应的试剂润洗3遍。
4.1.2 根据待分离制备的样品需要更换合适的色谱柱（注意方向）。
4.1.3 配制样品和标准溶液，用合适的0.45μm或0.22μm滤膜过滤。
4.1.4 确保串口线将设备与计算机连接好，电源线链接正常。
4.2 开机接通电源，依次开启泵、检测器开关，打开计算机进入操作系统，双击桌面的EasyChrom色谱工作站(中文版)图标进入工作站。
4.3 排气泡将入液管放入装有流动相的储液瓶中，打开排气阀；用针管等在排气阀处吸出空气，之后打开泵，用大流速冲洗片刻；如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
4.4 创建分析方法可在EasyChrom工作站的配置上直接设置流动相比例、流速、检测波长、时间程序以及检测器开启与关闭等参数，并重命名、保存。
4.5 平衡系统用流动相（梯度系统选用初始梯度平衡柱子）冲洗柱子至基线平稳，一般需要大于15分钟至1小时，使用缓冲盐、离子对试剂的时候可能会更长。
4.6 进样点击基线采集开始平衡柱子20分钟左右，基线完全平衡后在控制面板上点击归零（或在配置页面下可以设置进样后自动归零）；点击“单次运行”，设置好样品信息，点击“运行”按钮，等待进样；用进样针定量吸取样品溶液，在LOAD状态下推针进样，再顺时针转动进样阀手柄至INJECT状态即完成进样操作，谱图采集直接触发。
高效液相的标准操作规程(SOP)
WATERS高效液相的标准操作规程（SOP）1流动相的处理1.1过滤溶剂溶剂在使用前要用过滤器过滤，有机相和纯水相通常可以不过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
同时一些缓冲盐溶液过夜后易生菌，使用前要抽滤或者重新配制。
实验室应有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水相时，要先用1-2ml 水润湿过滤膜，有助于快速抽滤。
1.2保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。
流动相瓶子要保持清洁。
1.3保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。
1.4 故障及解决方法1.4.1 流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。
可试用下列方法解决问题：a、流动相再脱气；b、采用更有效的脱气方法（如抽滤）或两种方法配合使用；c、改系统内混合为系统外预混合。
1.4.2 流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。
应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。
输液管道上装滤头沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。
过滤器阻塞会引起管道和泵腔进气泡，压力不稳。
压力不稳时，如果已经排除流动相混合不均匀的状况，则观察滤头外部是否长毛（一般水相滤头易长毛），去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，是过滤器被微粒所阻塞或长霉。
解决方法：a、换上新的过滤器（滤头）。
b、将滤头拆下，先用纯水超声15min，再换50%甲醇水溶液超声，再换纯甲醇超声，如果是水相的滤头，在安装前还需要用纯水超声。
如果上述还不能解决问题，则使用10%稀硝酸水溶液超声滤头，可起到除去菌类微生物的作用。
1.4.3 检测器和流动相管路被污染由于污染，噪音越来越大，检测器被污染。
SOP高效液相色谱法检验操作规程
4.1 所用的仪器为高效液相色谱仪。仪器应定期检定并符合有关规定
4.2 色谱柱
4.2.1反相色谱系统使用非极性填充剂，常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷相等）也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
4.4.2各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应供试品并达到系统适用性试验的要求。其中，调整流动相组分比例时，以组分比例较低者（小于或等于50%）相对于自身的改变量不超过±30%且相对于总量的改变量不超过±10%为限，如30%相对改变量的数值超过总量的10%时，则改变量以总量的±10%为限。
流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯等容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙腈等可浸出塑料表面的增塑剂，导致流动相受污染。贮存容器一定要盖严，以防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相引起pH值变化，对分离或分析结果带来误差。磷酸盐、醋酸盐缓冲液容易发霉变质，应尽量新鲜配制使用。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。
面积的百分率。
用于杂质检查时，由于峰面积归一化法测定误差大，因此，通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。
5.3注意事项
5.3.1流动相的制备与保存用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外-可见分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；不应为新鲜制备的高纯水，可用超纯水器制得或用重蒸馏水。凡规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节，除另有规定外，偏差一般不超过±0.2pH单位。配制好的流动相应通过适宜的0.45um（或0.22um）滤膜滤过，以除去杂质微粒。流动相用前必须脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作、色谱柱的分离效率、检测器的灵敏度以及基线稳定性等。
2020版《中国药典》高效液相色谱法检验操作规程
一、目的：制订详尽的工作程序，规范检验操作，保证检验数据的准确性。
二、范围：本操作规程适用于高效液相色谱法的检验操作。
三、职责：1、检验员：严格按操作规程操作，认真、及时、准确地填写检验记录；2、化验室负责人：监督检查检验员执行本操作规程。
四、内容：简述：高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1、对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱内径一般为2.1～4.6mm,填充剂粒径为2～10μm。
超高效液相色谱仪是耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
1.1色谱柱1.1.1色谱柱的类型1.1.1.1反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基硅烷键合硅胶等。
1.1.1.2正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。
1.1.1.3离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
1.1.1.4手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
1.1.2色谱柱的内径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
1.1.3温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度。
1.1.4残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在2～8之间。
Waters高效液相的标准操作规程(SOP)
Waters高效液相的标准操作规程（SOP）一、操作前准备1. 流动相准备：流动相所用试剂必须是色谱纯。
必须经过滤，脱气。
2. 检查色谱柱的链接：色谱柱出入口不能颠倒，出口螺帽必须拧紧防漏液。
二、色谱仪的启动、设置和应用操作流程图图1.开机进入breeze系统：依次打开泵以及检测器、柱温箱的电源，等到检测器自检完毕后，打开计算机登录windows，并进入breeze软件。
2.选择系统:在“选择项目和系统”对话框中，选择所需的项目和色谱系统，然后单击“确定”。
（色谱系统2489为紫外检测器；2414为示差折光检测器）3.创建方法:(1):管理→项目→创建项目→defaults→输入自建的项目名称和注释名→确定→项目创建完毕(2):切换系统：在窗口下切换系统→系统名称空白→确定管理→切换系统→系统名称（选择要用的检测器）→确定。
（可通过节点属性来检查和确定目标检测器是否处于在线状态）(3):调用方法组编辑器→新建→单击PCM泵按钮→高压限制:4000→泵模式（等度/梯度）→（设置各流动相流速）（C18反相柱总流速限定在2mL/min以内）单击TCM柱温箱按钮→区域1：设定柱温单击W2489：→设定波长（紫外可见光波长）→模式（单/双波长）→采样速率（1-2）文件→另存为→名称→保存。
新方法组→请选择用使用该方法组的数据有关的仪器方法→自建方法→下一步→完成。
4.灌注、清洗泵、清除系统、平衡系统4.1灌注和清除泵：1.在灌注和清洗泵之前的准备工作•如果泵处于干燥状态，在继续操作前应进行干灌注。
•将泵的参比阀旋钮向右旋转 1/2 圈，确保洗脱液流（绕过泵下游的所有连接组件）引至废液。
2.在“选择项目和系统”对话框中，确认色谱系统已完成配置并在线。
•确保已在“节点属性”中正确配置泵。
•将系统设置为在线。
3.在“运行样品”窗口中，单击“开始流量”图标，然后为泵流量和梯度设置输入适当的值。
提示：要快速灌注和清除以下型号的泵•对于 1525 泵，将流量设置为 4.0 毫升/分，并将梯度设置为 50% A、 50% B。
高效液相色谱仪检验操作规程
⾼效液相⾊谱仪检验操作规程⽂件内容：1、⽬的 (2)2、范围 (2)3、职责 (2)4、正⽂ (2)5、相关⽂件与记录 (5)6、参考⽂献 (5)7、变更记载及原因 (5)发放范围：质保处、质控处⽂件复审：编审批过程：1、⽬的：建⽴⾼效液相⾊谱仪检验操作规程，以保证其检验⼯作完成。
2、范围：LC-20AT⾼效液相⾊谱仪。
3、职责：3.1化验员：负责按本操作规程使⽤该设备进⾏检验。
3.2化验设备员：按时维护设备，保证设备时刻处于完好状态。
3.3质控处处长：负责本规程的审核，及设备按时校验的⼯作。
4、正⽂：4.1泵流量准确度、流量稳定性检验4.1.1⽤纯⽔清洗各溶剂管路，以⽔为流动相，设定流量为0.5ml/min，启动泵。
4.1.2待压⼒稳定后，在流动相出⼝处⽤事先清洗称重的50ml容量瓶收集流动相，同时⽤秒表计时。
4.1.3收集10min后，称重。
同法重复三次。
4.1.4流速分别调⾄1.0ml/min和2.0ml/min，按2-3步骤操作。
4.1.5计算Ss=(Fm-Fs )/Fs*100%S R=（Fmax-Fmin）/Fm*100%Fi=( w2- w1)/（ρ*t）其中式中：Fi=( w2- w1)/（ρ*t）—，流量实测值，mL/minW2—容量瓶+流动相的质量，gW1—容量瓶的质量，gρ—实验室温度下流动相的密度，g/cm3t—收集流动相所⽤的时间，minFm—同⼀组测量的算数平均值，mL/minFs—流量设定值，mL/minFmin—同⼀组测量中流量最⼩值，mL/minFmax—同⼀组测量中流量最⼤值，mL/min标准:Ss≤±2.0% Sc≤±2.0%4.2柱温箱温度设定值误差△T s和控温稳定性T c的检定4.2.1将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择25℃和45℃进⾏检定。
4.2.2按仪器SOP操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录⼀次读数，共计7次，求出平均值。
HPLC系统标准操作规程(SOP)
1. 目的：规范高效液相色谱仪的使用规范色谱柱的使用。
2．范围适用于高效液相色谱仪的维护使用。
3．职责仪器使用者对本规程的实施负责。
4．规程4.1 系统组成：4.2 准备4.2.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向）。
4.2.3 配制样品和标准溶液，用合适的0.45μm滤膜过滤。
4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4.3 开机：打开电脑显示器、主机，打开chromeleon 7工作站，依次开启Ultimate 3000 Pump、Ultimate 3000 Autosampler、Ultimate 3000 RS Column Compartment、Ultimate 3000 Variable Wavelength Detector。
4.4 参数设定4.4.1 波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按键，用数字键输入所需波长值，按键确认。
按[CE]键退出到初始屏幕。
4.4.2 流速设定：在泵显示初始屏幕时，按键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速般不超过1ml/min），按键确认。
按[CE]键退出。
4.5 更换流动相并排气泡4.5.1 将管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；4.5.2 逆时针转动A/B泵的排液阀90-180°，打开排液阀；4.6 平衡系统4.6.1打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下“数据收集”页的[查看基线] 按钮。
4.6.2. 按泵的键，pump指示灯亮。
用检验方法规定的流动相冲洗系统。
4.6.3 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。
4.6.4 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过0.5MPa。
如超过则可初步判断柱管路仍有气泡，按4.5重复操作。
4.6.5 观察基线变化。
如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。
SOP-高效液相色谱仪变色龙色谱系统标准操作规程
高效液相色谱仪操作规程1目的制定高效液相色谱仪的标准操作规程，减少误操作，使其规范化，保证检验电子数据的完整性，可追溯性及安全性。
2适用范围本规程适用于高效液相色谱仪的使用与管理。
3组成3.1Chromeleon数据库基于局域网的色谱类仪器控制和色谱数据处理，提供具有访问控制和审计跟踪功能的安全数据存储，通过对数据文件执行版本控制，可以确保数据的完整性、可追溯性和安全性。
3.2局域网组成1)液相色谱仪：泵、进样器、柱温箱、检测器等组件。
2)ECD服务器：数据的存储与备份，3)PC客户端：人机连接端。
4)控制器：连接服务器、高效液相色谱仪及PC端。
5)Chromeleon:是一款可升级的，功能全面的色谱工作站。
软件分三个部分，左下角为类别栏，包含仪器，数据，固定的工作流程；左上角为导航栏，此处对应显示类别栏选中后的相关信息；右侧为工作区。
上侧为菜单栏。
4程序4.1开机4.1.1开机前准备1)流动相的配制：根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用至少0.45um滤膜过滤；流动相必须充分脱气，流动相配制所用的有机相必须是色谱级的，所用的水必须是双重蒸馏水。
）2)样品的处理：称取或量取适量的对照品或供试品、用适当的溶剂（最好采用流动相或流动相的主成份）进行充分溶解（或超声溶解），根据检测结果再适当调节溶液浓度，样品应过滤（0.45um有机膜或水膜）3)更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）。
4)请确认：清洗泵头密封圈的10%异丙醇或甲醇水溶液是否走空，是否清洁，洗针通道或洗针液瓶没有走空。
5)依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源。
4.1.2Chromeleon登陆与液相连接1)登录PC客户端：输入用户和密码登陆PC客户端。
2)登录Chromeleon：双击变色龙图标，进入Chromeleon7界面，输入账号和密码，登陆Chromeleon工作站。
3)连接控制器：关闭仪器控制，变色龙图标显示为，表示客户端链接断开。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2、定义：
高效液相色谱法：系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
3、职责：QC化验员应熟悉本规程并严格执行本规程。
5.2.4不加校正因子的主成分自身对照法测定杂质含量时，若没有杂质对照品，也可采用不加校正因子的主成分自身对照法。同上述3.3法配制对照溶液并调节检测灵敏度后，取供试品溶液和对照溶液适量，分别进样，前者的记录时间，除另有规定外，应为主成分色谱峰保留时间的2倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积并与对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质含量。
流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯等容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙腈等可浸出塑料表面的增塑剂，导致流动相受污染。贮存容器一定要盖严，以防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相引起pH值变化，对分离或分析结果带来误差。磷酸盐、醋酸盐缓冲液容易发霉变质，应尽量新鲜配制使用。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。
面积的百分率。
用于杂质检查时，由于峰面积归一化法测定误差大，因此，通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。
5.3注意事项
5.3.1流动相的制备与保存用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外-可见分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；不应为新鲜制备的高纯水，可用超纯水器制得或用重蒸馏水。凡规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节，除另有规定外，偏差一般不超过±0.2pH单位。配制好的流动相应通过适宜的0.45um（或0.22um）滤膜滤过，以除去杂质微粒。流动相用前必须脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作、色谱柱的分离效率、检测器的灵敏度以及基线稳定性等。
无论是定性鉴别还是定量分析，均要求待测峰与其他峰、内标峰或特定的杂质对照峰之间有较好的分离度。除另外有规定外，待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于1.5。分离度的计算公式为：
2(tR2－tR1)2(tR2－tR1)
R＝───────或R＝───────────
W1＋W21.70（W1，h/2＋W2,h/2）
4.4.3对于必须用特定牌号的填充剂方能满足分离要求的品种，可在该品种项下注明。
5、步骤
5.1系统适用性试验
5.1.2色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。其中，分离度和重复性是尤为重要。
5.1.3按各品种项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱系统进行适当调整，以符合要求。5.1.4色谱柱的理论板数(n)用于评价色谱柱的分离效能。由于不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量柱效能的指标时，应指明测定物质，一般为待测组分或内标物质的理论板数。
4.4.2各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应供试品并达到系统适用性试验的要求。其中，调整流动相组分比例时，以组分比例较低者（小于或等于50%）相对于自身的改变量不超过±30%且相对于总量的改变量不超过±10%为限，如30%相对改变量的数值超过总量的10%时，则改变量以总量的±10%为限。
式中tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间；
tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间；
W1、W2及W1，h/2、W2,h/2分别为此相邻两峰的峰宽及半高峰宽。
当对测定结果有异议时，色谱柱的理论板数（n）和分离度（R）均以峰宽（W）的计算结果为准。
5.1.6重复性用于评价连续进样中，色谱系统响应值的重复性能。采用外标法时，通常取各品种项下的对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0％；采用内标法时，通常配制相当于80％、100％和120％的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别至少进样2次，计算平均校正因子。其相对标准偏差也应不大于2.0％。
As内／Cs内
式中Ax为供试品（或其杂质）峰面积或峰高；
Cx为供试品（或其杂质）的浓度；
As内为内标物质的峰面积或峰高；Cs内为内标物质的浓度；
f为较正因子。
采用内标法，可避免因样品前处理及进样体积误差对测定结果的影响。
5.2.2外标法 按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量：
在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分峰或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和峰宽（W）或半高峰宽（Wh/2）,按n＝16（tR/w）2或n=5.54(tR/Wh/2)2计算色谱柱的理论板数。
5.1.5分离度(R)用于评价待测组分与相邻共存物或难分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统效能的关键指标。可以通过测定待测物质与已知杂质的分离度，也可以通过测定待测组分与某一添加的指标性成分（内标物质或其他难分离物质）的分离度，或将供试品或对照品用适当的方法降解，通过测定待测组分与某一降解产物的分离度，对色谱系统进行评价与控制。
测定杂质含量时，按各品种项下规定的杂质限度，将供试品溶液稀释成与杂质限度相当的溶液作为对照溶液，进样，调节仪器灵敏度（以噪音水平可接受为限）或进样量（以柱子不过载为限），使对照溶液的主成分色谱峰高约达满量程的10％～25％或其峰面积能准确积分［通常含量低于0.5%的杂质，峰面积的相对标准偏差（RSD）应小于10%；含量在0.5%~2%的杂质，峰面积的RSD应小于2%］。然后，取供试品溶液和对照品溶液适量，分别进样，供试品溶液的记录时间，除另有规定外，应为主成分色谱峰保留时间的2倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积，分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成分的峰面积比较，依法计算各杂质含量。
4.2.4使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。
4.2.5以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40℃，为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不宜超过60℃。
4.2.6流动相的PH值应控制在2~8的。当PH大于8时，可使载体硅胶溶解；当PH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用PH值大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶填充剂、包裹聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶基键合填充剂等；当需使用PH值小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶填充剂、有机-无机杂化填充剂等。
4.3.3紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与供试品溶液的浓度在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与供试品溶液的浓度通常呈指数关系，故进行计算时，一般需经对数转换。
4.3.4不同的检测器，对流动相的要求不同。如采用紫外检测器，所用流动相应符合紫外—可见分光光度法（附录V A）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机相中有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器通常不允许使用含不挥发盐组分的流动相。
含量（cX）=cR(AX/AR)
式中各符号意义同上。
由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中成分或杂质含量时，以定量环或或自动进样器进样为好。
5.2.3加校正因子的主成分自身对照法测定杂质含量时，可采用加校正因子的主成分自身对照法。在建立方法时，按各品种项下的规定，精密称（量）取杂质对照品和待测成分对照品各适量，配制测定杂质校正因子的溶液，进样，记录色谱图，按上述(1)法计算杂质的校正因子。此校正因子可直接载入各品种正文中，用于校正杂质的实测峰面积。这些需作较正计算的杂质，通常以主成分为参照采用相对保留时间定位，其数值一并载入各品种项下。
若供试品所含的部分杂质未与溶剂峰完全分离，则按规定先记录供试品溶液的色谱图Ⅰ，再记录等体积纯溶剂的色谱图Ⅱ。色谱图Ⅰ上杂质峰的总面积（包括溶剂峰），减去色谱图Ⅱ上的溶剂峰面积，即为总杂质峰的校正面积。然后依法计算。
5.2.5面积归一化法按各品种项下的规定，配制供试品溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图。测量各峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰
As／Cs
校正因子（f）＝─────────────
AR／CR
式中As为内标物质的峰面积或峰高；
AR为对照品的峰面积或峰高；
Cs为内标物质的浓度；
CR为对照品的浓度。
再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：
Ax
含量（Cx）＝f×─────────────
4、设备与材料
4.关规定
4.2 色谱柱
4.2.1反相色谱系统使用非极性填充剂，常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷相等）也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
5.1.7拖尾因子（T）用于评价色谱峰的对称性。为保证分离效果和测量精度，应检查待测峰的拖尾因子是否符合各品种项下的规定。拖尾因子计算公式为：
W0.05h