山羊肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒说明书题库
RD TNF-α ELISA试剂盒说明书
RD TNF-αELISA检测试剂盒说明书（MTA00B）技术提示1.当混合或冲悬蛋白质溶液时，避免产生气泡。
2.为了避免交叉污染，每个标准品，样品以及相关试剂加完后要更换枪头。
此外，每种试剂要有单独的储液槽。
3.为了达到最佳效果，将试剂和样品等滴加到每个孔的中心位置。
4.为了保证准确的结果，在孵育步骤中，有必要对酶标板进行适当地密封。
5.底物溶液在加入到酶标板之前应为无色。
要保持底物溶液避光。
底物溶液应由无色渐渐变为蓝色。
6.终止液应与底物溶液相同的加样顺序加到酶标板孔里。
加入终止液后，酶标孔中的颜色应由蓝色变为黄色。
其他配套物品1.酶标仪能够在450 nm处测量吸光度，校正波长设为540 nm或570 nm。
2.移液枪和移液器3.去离子水4.试剂瓶5.用于稀释标准品的EP管注意事项1.终止液为酸性溶液，注意防护。
2.本试剂盒中的某些成分含有防腐剂，可能会引起皮肤过敏反应。
避免吸入。
3.显色剂B可能引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激。
避免吸入。
4.佩戴好口罩和手套，实验服。
实验完成后要仔细洗手。
5.关于样本，细胞培养上清收集后存放在-20℃以下。
避免反复冻融。
试剂准备：1.使用前将所有试剂放于室温。
2.小鼠TNF-αControl：使用1mL去离子水冲悬对照，充分混匀。
3.洗涤液：如果浓缩液中已形成晶体，加热至室温，轻轻搅拌，直到晶体完全溶解。
可配制满足一个酶标板的洗涤液。
如：将20毫升洗涤液浓缩液加到480毫升去离子水或蒸馏水中，配制500毫升洗涤液。
4.底物溶液：底物显色试剂A和B应在使用15分钟内按等体积混合。
避光放置。
每个酶标孔需要100 μL混匀后的AB混合物。
5.小鼠TNF-α标准品：参照瓶上的冲悬体积进行冲悬。
用去离子水或蒸馏水冲悬小鼠TNF-α标准。
原液浓度为7000 pg/mL。
轻轻混匀，室温放置至少5分钟，然后再进行稀释。
先在1号管中加入900ul Calibrator稀释液（RD5K），2-7号加入200ul Calibrator稀释液。
TNF-a说明书
人(human)肿瘤坏死因子a(TNF-a)说明书本试剂盒仅供研究使用标本：血清或者血浆一、试剂组成精密度微孔板96孔 (Microtitration Strips) 1块 2～8℃干燥保存酶标偶合液 (Conjugate ) 1瓶 12.0毫升 2～8℃冷藏保存标准品 (Standard) 5瓶各1.0毫升 2～8℃冷藏保存呈色剂A (Substrate A) 1瓶 6.0毫升 2～8℃避光冷藏保存呈色剂B (Substrate B) 1瓶 6.0毫升 2～8℃避光冷藏保存终止液 (Stopping Solution) 1瓶 6.0毫升室温保存20倍浓缩洗涤液 (Rinsing Buffer x 20) 1瓶 60.0毫升 2～8℃冷藏保存5倍浓缩样品稀释液 (Diluent x 5) 1瓶 15.0ml 2～8℃冷藏保存英文说明书，中文说明书各一份室温保存二、注意事项1. 此试剂为体外检测试剂，效期内使用，试剂应视为传染物，不同总批号的试剂不能混用。
2．使用前应将盒内各试剂取出。
室温放置至少30分钟，3．浓缩洗涤液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟。
4．浓缩样品稀释液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟5．若24小时内进行实验，标本可存放于2～8℃。
不需及时实验，标本-20℃保存，避免反复冻融。
6．在反复清洗微孔板，并扣干微孔中的残余液体，否则将降低精确度，造成吸光度偏离的假像。
7．加样完毕后，应注意轻微摇动微孔反应条，以便使孔中的液体充分混匀。
8．试剂盒保存于2～8℃，请勿冷冻，有效期请见盒内标示。
三、实验前准备1．使用前应将盒内各试剂取出，室温放置至少30分钟。
2．准备各种实验仪器及材料，如微量移液器，吸头，医用蒸馏水等3．浓缩洗液与医用蒸馏水1︰19倍稀释后成为应用洗涤液4．浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1︰4倍稀释成应用样品稀释液5．用应用样品稀释液来稀释样品，按照1：100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中，充分混匀待用。
肿瘤坏死因子α
肿瘤坏死因子α
肿瘤坏死因子α介绍：
肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor，TNF)可分为TNF α和TNF
β两种，前者来自单核巨噬细胞，后者由活化T细胞产生，是具有重要
生物活性的细胞因子。
存在于细胞上的TNF 受体主要有两种：TNFRⅠ
和TNFRⅡ，血清中存在的是可溶性的TNFR(s TNFRⅠ, s TNFRⅡ)。
肿瘤坏死因子α正常值：
放射免疫法：为0.74～1.54纳克/毫升。
肿瘤坏死因子α临床意义：
异常结果：肿瘤坏死因子α基因的报告质粒的荧光素酶基因由肿
瘤坏死因子α基因启动子及3’端非翻译序列驱动，荧光素酶基因的表
达水平即反映了肿瘤坏死因子α基因的表达水平。
肿瘤坏死因子α基
因的报告质粒用于检测化合物对肿瘤坏死因子α基因表达水平的影响。
需要检查的人群：有肝脏炎症，组织炎症以及血糖异常的患者。
肿瘤坏死因子α注意事项：
不合宜人群：无
检查前禁忌：患者应该避免接近各种放射源
检查时要求：标本均与确诊时取静脉血3ml，及时分离血清，-40℃冻存集中测定。
肿瘤坏死因子α检查过程：
用双抗体夹心酶免疫分析法。
将TNF α单克隆抗体包被于PVC板上，样品种的TNF α和单抗体结合后再与辣根过氧化物酶标记免抗TNF α
多克隆抗体结合，过氧化物酶与TMB反应终止后用酶标仪测定450nm的
光密度，结果与标准曲线比较确定TNF α的含量。
肿瘤坏死因子TNFα
人肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，细胞上清及相关液体样本中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。
用纯化的人肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α，再与HRP标记的肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子α呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：450pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
碧云天Mouse TNF-α ELISA Kit (小鼠TNF-α酶联免疫吸附检测试剂盒)说明书
Mouse TNF-α ELISA Kit产品编号 产品名称包装 PT512Mouse TNF-α ELISA Kit96次产品简介：碧云天的Mouse TNF-α ELISA Kit (Mouse Tumor Necrosis Factor-α Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠肿瘤坏死因子-α酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆、细胞或组织裂解液、或细胞培养上清液中的TNF-α的试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。
多次重复检测结果表明，最小检出量为30.8pg/ml ，与人TNF-α、sTNF RIs 、TNF RII 等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
TNF-α，即TNF 、TNF α或TNFalpha ，也称cachectin 、cachexin 或TNFSF1A 。
TNF-α由巨噬细胞、上皮细胞等多种细胞在细菌感染、内毒素刺激、病毒或寄生虫感染时产生。
肿瘤坏死因子超家族(Tumor necrosis factor superfamily)共约19个成员，包含由巨噬细胞等产生的TNF-α和T 淋巴细胞产生的TNF-β(也称Lymphotoxin-alpha)，以及FASL 、TRAIL 、CD40L 、CD27L 、CD30L 等。
TNF-α与TNF-β在结构上有一定的相似性，并且在氨基酸水平有28%的同源性，它们拥有共同的受体TNFR1和TNFR2。
由于TNF-α的生物学活性占TNF 总活性的70%~95%，因此目前常说的TNF 多指TNF-α。
TNF (Tumor Necrosis Factor)因为能诱导细胞死亡而得名，实际上其很多时候诱导的细胞死亡为细胞凋亡。
人TNF-α有两种形式，一种是由233个氨基酸组成的跨膜蛋白同源三聚体(homotrimers)，另外一种是该跨膜蛋白在TNF-α转化酶TACE(TNF-α converting enzyme)的作用下切除信号肽，形成成熟的157个氨基酸的可溶性TNF-α单体(分子量为17KDa)的同源三聚体。
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)生物学活性测定
响。因为 TNF-β 细胞毒生物学作用等很多生物学效应均与 TNF-α 相似。
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种主要由单核-吞噬细胞产生的单核因子，不仅具有选择性 地杀伤某些肿瘤细胞，而且有多种免疫调节作用。其检测方法主要包括生物学活性测定和免 疫学检测方法。其中细胞毒生物学检测方法敏感性较高，最为常用；免疫学检测方法包括酶 联免疫吸附试验(ELISA)和放射免疫测定法。
(一) 原理: TNF-α 受体广泛地分布于多种肿瘤细胞和血细胞，根据 TNF-α 与相应靶细胞结合后引 起不同的生物学效应，建立了多种检测 TNF-α 生物学活性方法。某些肿瘤细胞膜表面的 TNF-α 受体与 TNF-α 结合后，可导致这些肿瘤细胞的死亡，可通过检测对肿瘤细胞的杀伤 能力，来反映 TNF-α 的生物学活性。若这种肿瘤细胞先用 3H-TdR 标记，则被杀伤后３H-TdR 释放至细胞外，牽 I 通过测定肿瘤细胞释放３H-TdR 的量来反映 TNF-α 的杀伤活性。 (二) 操作步骤:
用 DYQ-Ⅱ型多头细胞收集器收集样品于 "9999"型玻璃纤维滤纸上
↓ 烤干后，进行 β 计数
结果判定:
1. TNF-α 作用 24h 后，在倒置显微镜下判定 50％L929 细胞杀伤的稀释度即为１个
TNF-α 活性单位。
2. 根据测得的 cpm 值按下列公式计数活性单位:
TNF-α 活性单位(U／ml)
对照组 cpm 值。
3. 胰蛋白酶和 DNA 酶浓度和消化时间要严格控制，犆?批酶均要摸索最适浓度和时间。
否则，消化时间过长或过短者会影响实验结果。
4. 为了增强检测系统的敏感性，在测定系统中加入放线菌素 D，但浓度不宜过大，一
般最终浓度为 0.5～1μg／ml。
TNF-a说明书
人(human)肿瘤坏死因子a(TNF-a)说明书本试剂盒仅供研究使用标本：血清或者血浆一、试剂组成精密度微孔板96孔 (Microtitration Strips) 1块 2～8℃干燥保存酶标偶合液 (Conjugate ) 1瓶 12.0毫升 2～8℃冷藏保存标准品 (Standard) 5瓶各1.0毫升 2～8℃冷藏保存呈色剂A (Substrate A) 1瓶 6.0毫升 2～8℃避光冷藏保存呈色剂B (Substrate B) 1瓶 6.0毫升 2～8℃避光冷藏保存终止液 (Stopping Solution) 1瓶 6.0毫升室温保存20倍浓缩洗涤液 (Rinsing Buffer x 20) 1瓶 60.0毫升 2～8℃冷藏保存5倍浓缩样品稀释液 (Diluent x 5) 1瓶 15.0ml 2～8℃冷藏保存英文说明书，中文说明书各一份室温保存二、注意事项1. 此试剂为体外检测试剂，效期内使用，试剂应视为传染物，不同总批号的试剂不能混用。
2．使用前应将盒内各试剂取出。
室温放置至少30分钟，3．浓缩洗涤液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟。
4．浓缩样品稀释液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟5．若24小时内进行实验，标本可存放于2～8℃。
不需及时实验，标本-20℃保存，避免反复冻融。
6．在反复清洗微孔板，并扣干微孔中的残余液体，否则将降低精确度，造成吸光度偏离的假像。
7．加样完毕后，应注意轻微摇动微孔反应条，以便使孔中的液体充分混匀。
8．试剂盒保存于2～8℃，请勿冷冻，有效期请见盒内标示。
三、实验前准备1．使用前应将盒内各试剂取出，室温放置至少30分钟。
2．准备各种实验仪器及材料，如微量移液器，吸头，医用蒸馏水等3．浓缩洗液与医用蒸馏水1︰19倍稀释后成为应用洗涤液4．浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1︰4倍稀释成应用样品稀释液5．用应用样品稀释液来稀释样品，按照1：100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中，充分混匀待用。
4abio mouse TNF-α ELISA 试剂盒使用说明书
REV20190712仅供研究，不用于临床诊断。
客服热线: 400-7060-959﹡技术支持邮箱:公司官网: 目录简介 ........................................................................................................................................................... - 3 -检测原理 ................................................................................................................................................... - 3 -试剂盒组分 ............................................................................................................................................... - 4 -储存条件 ................................................................................................................................................... - 5 -其他实验材料(不提供，但可协助购买) : ............................................................................................. - 5 -注意事项 ................................................................................................................................................... - 5 -样本收集处理及保存方法 ....................................................................................................................... - 6 -试剂准备 ................................................................................................................................................... - 6 -操作步骤 ................................................................................................................................................... - 8 -操作流程图 ............................................................................................................................................... - 8 -操作要点提示 ........................................................................................................................................... - 9 -结果判断 ................................................................................................................................................... - 9 -结果重复性 ............................................................................................................................................. - 10 -灵敏度 ..................................................................................................................................................... - 10 -特异性 ..................................................................................................................................................... - 10 -参考文献 ................................................................................................................................................. - 11 -该产品由北京四正柏生物科技有限公司研制。
人肿瘤坏死因子α(TNF-α)说明书
人肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，细胞上清及相关液体样本中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。
用纯化的人肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α，再与HRP标记的肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子α呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：450pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
ELISA法检测人血清血浆样本中肿瘤坏死因子α TNF-α的浓度
双抗体夹心ELISA法检测样本中TNF-α的浓度TNF-α简介：肿瘤坏死因子（TNF-α）是由单核细胞和巨噬细胞产生的多肽类细胞因子，在炎症反应、免疫系统的发展、细胞程序性死亡和脂代谢中起重要的作用。
其功能主要是在免疫反应中是一个多功能的调节器甚至作为一个强烈的热原性物质刺激中性粒细胞，改变血管内皮细胞的特性，调节其它组织的代谢活性。
TNF-α也可通过抑制脂蛋白脂肪酶的活性而导致恶液病。
爱泼斯坦病毒引起的细胞活化也可被TNF-α所抑制。
巨噬细胞表面的淋巴因子和肉毒素也可介导包括上皮细胞、内皮细胞和肿瘤细胞等产生TNF-α。
据报道干扰素能显著提高TNF-α的分泌量。
TNF-α在关节炎和其它组织的炎症的发病机理中起重要作用。
TNF-α也参与了包括哮喘、克罗恩氏病、类风湿性关节炎、神经性疼痛、肥胖症、 型糖尿病、自身免疫病和肿瘤等疾病的发生检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中TNF-α的浓度。
TNF-α捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的TNF-α会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
当加入生物素化的抗人TNF-α抗体后，抗人TNF-α抗体与TNF-α接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。
生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
最后加入显色剂，若样本中存在TNF-α将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。
通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，TNF-α浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中TNF-α浓度。
实验过程需自备的材料：1.不同规格的加样枪及相应的枪头；2.酶标仪；3．自动洗板机； 4．去离子水或双蒸水；标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作：A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；D. 若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。
TNF-α_重组人TNF-α_肿瘤坏死因子使用说明书
GMP级重组人肿瘤坏死因子α（冻干粉）Recombinant Human TNF-α（rhTNF-α）作用机理：TNF-α是一个同源三聚体，每个亚基的分子量为 17kDa，它在生长调节、分化、炎性反应、病毒复制、肿瘤发生、自身免疫性疾病以及病毒、细菌、真菌和寄生虫感染中都起到重要的作用。
除了诱导肿瘤的出血性坏死外，TNFα还和肿瘤发生、肿瘤转移、病毒复制、败血性休克、发热、发炎和罗恩氏病、风湿性关节炎、器官移植排斥等自身免疫性疾病发生有关。
TNF-α是一种在多种肿瘤细胞和其他特定靶细胞中具有细胞毒素效应的强效淋巴因子。
规格参数：货号：TL-303 规格：100ug产品信息：表达宿主：HEK293细胞效价：≥1×107 IU/mg纯度：>95%内毒素：<0.01EU/ug纯化方式：层析纯化性状：白色疏松体保存温度：2-8℃有效期：24 个月生产厂家：同立海源生物使用说明：推荐使用浓度为 1000IU/ml。
如需分装，可用注射用水、生理盐水、培养基或 PBS 稀释，稀释后浓度保持在 100ug/mL 以上。
稀释后置于-20℃保存期 6 个月，-80℃保存期 12 个月。
适用范围：用于 DC 细胞体外培养，适用于直肠癌、乳腺癌、肺癌、肾癌、淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、恶性黑色素瘤、卵巢癌等多种肿瘤的细胞免疫治疗临床研究。
相关产品推荐：Human IL-2、Human IL-15、Human IL-12、Human IL-6、Human IL-18、Human IL-21、Human IFN-γNK细胞培养试剂盒、Human GM-CSF、Human EGF等。
Human TNF-α 预包被 ELISA kit说明书
产品信息和操作指南Human TNF-α预包被 ELISA kit Cat# : DKW12-1720-048 / DKW12-1720-096本试剂盒专用于科研，而非用于诊断Human TNF-αDKW12-1720目录产品简介 (1)知识背景 (1)试剂盒提供的试剂 (2)需要实验者自行准备的试剂与仪器 (2)注意事项 (3)试剂的配制 (5)操作过程 (7)结果分析 (9)试剂盒的保存 (9)操作步骤一览表 (10)参考文献 (11)ELISA测定中可能会出现的问题及解决方法 (12)预包被ELISA 试剂盒系列产品 (15)1、产品简介：达优®人TNF-α ELISA试剂盒是通过酶联免疫吸附技术，体外定量检测人血清、血浆、缓冲液或细胞培养液中的TNF-α，可同时检测天然的和重组的TNF-α。
本试剂盒为预包被板，“夹心一步”完成，整个过程孵育时间不超过4小时，洗涤6次，操作时间大大减少。
本试剂盒专用于科研，而非用于诊断。
使用前请仔细阅读说明书并检查试剂盒组分，若有任何疑问请与达科为生物工程有限公司联系，E-mail：*************.检测范围：800-25 pg/mL灵敏度：8 pg/mL重复性：板内、板间变异系数均＜10％。
2、知识背景：肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factorα,TNF-α）亦称为恶质素，由活化的巨噬细胞和其它类型的细胞分泌，包括T细胞、B 细胞、NK细胞、LAK细胞、星形胶质细胞、内皮细胞、平滑肌细胞和一些肿瘤细胞（1-4），在正常宿主对抗感染和恶性肿瘤的生长过程中起重要的作用。
其过量表达跟一系列的病理状态有关，包括恶病质、败血性休克和自身免疫失调。
3、试剂盒提供的试剂：试剂规格配制Cytokine standard 2/1瓶* 干粉状，按瓶上说明操作Biotinylated antibody 2/1瓶* 1：50用Dilution buffer R（1×）稀释Streptavidin-HRP 2/1瓶* 1：100用Dilution buffer R（1×）稀释Dilution buffer R（1×） 3/2瓶* 即用型Washing buffer（50×）1瓶 150∶用蒸馏水稀释TMB 1瓶即用型Stop solution 1瓶即用型Precoated ELISA plate 8×12或8×6*即用型封板膜 2/1张* 即用型说明书1份*：96/48 Tests4、需要实验者自行准备的试剂与仪器：1．酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）2．微量加液器及吸头：P10，P50，P100，P200，P1000 3．蒸馏水或去离子水4．全新滤纸5．旋涡振荡器和磁力搅拌器5、注意事项：1.试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡20-30分钟。
人肿瘤坏死因子α（TNF-α）英文说明书
Human TNF-αFOR RESEARCH USE ONLYAssay range：：：：20 ng/L -400 ng/L 96determinationsPurposeThis kit allows for the determination of TNF-α concentrations in Human serum, cell culture supernates and other biological fluidsPrinciple of the assayThe kit assay Human TNF-α level in the sample, use Purified Human TNF-α antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add TNF-α to wells, Combined TNF-α antibody which With HRP labeled, become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution, TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of Human TNF-α in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Materials provided with the kit1 wash solution 20ml×1bottle 7 Stop Solution 6ml×1 bottle2 HRP-Conjugate reagent 6ml×1 bottle 8 Standard（800ng/L）0.5ml×1 bottle3 Microelisa stripplate 12well×8strips 9 Standard diluent 1.5ml×1bottle4 Sample diluent 6ml×1 bottle 10 Instruction 15 Chromogen Solution A 6ml×1 bottle 11 Closure plate membrane26 Chromogen Solution B 6ml×1 bottle 12 Sealed bags 1Specimen requirements1. extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t,specimen can be kept in -20 ℃to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.2. Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.Assay procedure1. Dilute and add sample:Dilute Original density Standard as follow table:400 ng/L 5 Standard 150µl Original density Standard+150µl Standard diluent200 ng/L 4 Standard 150µl 5 Standard+150µl Standard diluent100 ng/L 3 Standard 150µl 4 Standard+150µl Standard diluent50 ng/L 2 Standard 150µl 3 Standard +150µl Standard diluent25 ng/L 1 Standard 150µl 2 Standard +150µl Standard diluent2.add sample: Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample andHRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40µl to testing sample well, then add testing sample 10µl (sample final dilution is5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold(or 20-fold) wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.5.Washing: Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6. Add enzyme: Add HRP-Conjugate reagent 50µl to each well, except blank well.7. Incubate: Operation with 3.8. Washing: Operation with 5.9.Color: Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50µl to each well, Stop the reaction(the blue colorchange to yellow color).11. Assay:take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution andwithin 15min.。
ELISA法检测肿瘤坏死因子
ELISA法检测肿瘤坏死因子ELISA法检测肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子(TNF)是由激活的单核细胞巨噬细胞受内毒素刺激后产生的一种分子量为17 000的蛋白质。
其中，由巨噬细胞产生的称TNF-α，是巨噬细胞介导细胞毒效应的细胞因子；由淋巴细胞产生的称TNF-β。
TNF在体内具有广泛的生物学活性：可作为免疫应答中的一种中间介质，既有抗病效应，又有致病效应；可引起肿瘤的出血坏死；可刺激成纤维细胞增殖；可增加HLA-A、HLA-B、HLA-C抗原的表达；可激活中性粒细胞及杀伤细胞；可促进B细胞增殖及分化、增加IL-2受体表达。
肝脏是TNF的主要发源地，同时也是TNF清除的主要部位。
目前，以TNF-α在临床的意义较大，是内毒素引起肝损害的重要介质。
TNF-α只有通过与靶细胞表面的膜型受体(mTNF-aR)特异结合才能发挥毒性效应，这一结合过程又受血清中可溶性TNF-α受体(sTNF-aR)的调节和制约，而sTNF-aR可与mTNF-aR竞争结合TNF-。
临床上常以检测TNF-α为主。
[检测方法] ELISA法[方法学原理] 在微孔反应板上包被抗人TNF-α单克隆抗体，待测标本和标准品中的TNF-a会与单克隆抗体结合，游离的成分被洗去，同时加入生物素化的抗人TNF-α抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。
生物素与亲和素特异结合，抗人TNF抗体与结合在单克隆抗体上的人TNF-α结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。
加入显色剂，若反应孔中有TNF-α，HRP会使无色的显色剂呈现蓝色，加终止液变黄色。
在波长450nm处测吸光度，TNF浓度与吸光度成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中的TNF-α浓度。
[标本准备] 静脉血2ml，不抗凝。
[试剂]1．预包被微孔反应板2．浓缩酶结合物3．酶结合物稀释液4．标准品和标本稀释液5．浓缩生物素化抗体6．IFN标准晶7．浓缩洗涤液8．显色剂A、B9．终止液[仪器] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
人肿瘤坏死因子α转化酶(TACE)ELISA检测试剂盒说明书
人肿瘤坏死因子α转化酶（TACE）ELISA检测试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆樊克生物专业供应：使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本肿瘤坏死因子α转化酶（TACE）含量。
试验原理：TACE试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知TACE浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将TACE和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中TACE的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗TACE抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)生物学活性测定
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)生物学活性测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种主要由单核-吞噬细胞产生的单核因子，不仅具有选择性地杀伤某些肿瘤细胞，而且有多种免疫调节作用。
其检测方法主要包括生物学活性测定和免疫学检测方法。
其中细胞毒生物学检测方法敏感性较高，最为常用；免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELI…肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种主要由单核-吞噬细胞产生的单核因子，不仅具有选择性地杀伤某些肿瘤细胞，而且有多种免疫调节作用。
其检测方法主要包括生物学活性测定和免疫学检测方法。
其中细胞毒生物学检测方法敏感性较高，最为常用；免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)和放射免疫测定法。
(一)原理:TNF-α受体广泛地分布于多种肿瘤细胞和血细胞，根据TNF-α与相应靶细胞结合后引起不同的生物学效应，建立了多种检测TNF-α生物学活性方法。
某些肿瘤细胞膜表面的TNF-α受体与TNF-α结合后，可导致这些肿瘤细胞的死亡，可通过检测对肿瘤细胞的杀伤能力，来反映TNF-α的生物学活性。
若这种肿瘤细胞先用3H-TdR标记，则被杀伤后３H-TdR 释放至细胞外，牽I通过测定肿瘤细胞释放３H-TdR的量来反映TNF-α的杀伤活性。
(二)操作步骤:0.25％胰蛋白酶消化处于对数生长期的L929细胞↓用RPMI1640洗涤细胞后，调整细胞浓度至2×10６／ml↓加入３H-TdR，20μci／ml↓置37℃，5％CO 培养箱中2～3h，摇动1次／30min↓用RPMI1640洗涤2次，800rpm×5min／次↓调整细胞浓度至2～3×10５／ml后，加入96孔培养板中，100μl／孔↓加入不同稀释度的待测样本(设三个重复孔)↓加入放线菌素D，使放线菌素D最终浓度至1μg／ml用时设放线菌素、完全培基阴性对照和rTNF-α标准品阳性对照↓37℃, 5％CO 培养中24h加入3％胰蛋白酶和0.25％DNA酶各10μl／孔↓37℃，30min用DYQ-Ⅱ型多头细胞收集器收集样品于"9999"型玻璃纤维滤纸上↓烤干后，进行β计数结果判定:1.TNF-α作用24h后，在倒置显微镜下判定50％L929细胞杀伤的稀释度即为１个TNF-α活性单位。
小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA 实验说明书
小鼠肿瘤坏死因子α (TNF-α)酶联免疫试剂盒使用说明书【预期应用】ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养物上清、组织裂解液中TNF-α含量。
【产品性能指标】1、检测范围：15.6 pg/ml-1000 pg/ml2、灵敏度：3.9 pg/ml3、精密度：批内差CV%<8%，批间差CV%<10%4、特异性：本试剂盒特异性检测小鼠TNF-α，且与其他相关蛋白无交叉反应。
【实验原理】用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗TNF-α抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗TNF-α抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样本中的TNF-α呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样本浓度。
【试剂盒组成成分】组份96T酶标板(Assay plate) 12条×8孔标准品(Standard) 2瓶(冻干品)生物素标记抗体(Biotin-antibody) 1 x 120 μl/瓶(100×)辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin) 1 x 120 μl/瓶(100×)生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent) 1 x 15 ml/瓶辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent) 1 x 15 ml/瓶样本稀释液(Sample Diluent) 1 x 50 ml/瓶浓洗涤液(Wash Buffer) 1 x 20 ml/瓶(25×)底物溶液(TMB Substrate) 1 x 10 ml/瓶终止液(Stop Solution) 1 x 10 ml/瓶板贴 4【存储条件及有效期】未开封试剂盒试剂盒避光保存于2-8℃。
有效期为六个月。
请在试剂盒标注的有效日期内使用。
大鼠(Rat)肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒说明书
大鼠（Rat）肿瘤坏死因子α（TNF—α）ELISA检测试剂盒说明书大鼠（Rat）肿瘤坏死因子α（TNFα）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被肿瘤坏死因子α（TNFα）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。
颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α（TNFα）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。
试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。
严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。
全部液体组分使用前充分摇匀。
试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
小鼠肿瘤组织中tnfa含量
小鼠肿瘤组织中tnfa含量摘要：本研究旨在探讨小鼠肿瘤组织中TNF-α（肿瘤坏死因子-α）的含量，并分析其与肿瘤发生发展的关系。
通过使用ELISA（酶联免疫吸附试验）方法，我们检测了小鼠肿瘤组织中TNF-α的含量。
实验结果显示，小鼠肿瘤组织中TNF-α含量显著高于正常组织。
这一结果提示，TNF-α可能在小鼠肿瘤发生发展中发挥重要作用。
一、引言肿瘤坏死因子-α（TNF-α）是一种具有广泛生物活性的细胞因子，参与免疫应答、炎症反应等多种生理过程。
近年来研究表明，TNF-α在肿瘤发生发展中也发挥重要作用。
然而，关于小鼠肿瘤组织中TNF-α含量的研究尚不多见。
因此，本研究旨在通过实验方法检测小鼠肿瘤组织中TNF-α的含量，并探讨其与肿瘤发生发展的关系。
二、材料与方法1.实验动物与肿瘤模型2.选取健康成年小鼠作为实验对象，建立小鼠肿瘤模型。
将实验小鼠随机分为两组：对照组（未接种肿瘤细胞）和实验组（接种肿瘤细胞）。
3.样本采集与处理4.采集实验小鼠肿瘤组织及对应正常组织样本，处理后保存待测。
5.TNF-α含量检测6.采用ELISA方法检测小鼠肿瘤组织中TNF-α的含量。
按照试剂盒说明书操作，测量各样本的吸光度值，计算TNF-α浓度。
7.数据分析8.使用统计软件对实验数据进行处理和分析，比较两组间TNF-α含量的差异，分析其与肿瘤发生发展的相关性。
三、结果实验数据显示，实验组小鼠肿瘤组织中TNF-α含量明显高于对照组正常组织（P<0.05）。
具体数据如表1所示：表1：小鼠肿瘤组织与正常组织中TNF-α含量比较为实验组平均TNF-α含量；Y1为对照组平均TNF-α含量。
图1：小鼠肿瘤组织与正常组织中TNF-α含量柱状图【请在此处插入柱状图】四、讨论本研究结果表明，小鼠肿瘤组织中TNF-α含量显著高于正常组织，提示TNF-α可能参与了肿瘤的发生发展过程。
这与其他相关研究的结果一致，表明TNF-α在肿瘤发展中的重要作用。
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山羊肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA检测试剂盒说明书Goat tumor necrosis factor alpha (TNF- alpha) ELISA test kitspecification本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆远慕生物专业供应：试验原理：TNF-α试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知TNF-α浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将TNF-α和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中TNF-α的浓度呈比例关系。
TNF-αkit is an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), which is known to bethe standard sample of TNF-αconcentration and the unknown concentration ofthe sample. At the same time, the TNF-αand biotin labeled antibodies wereincubated at the same time. After washing, add the HRP labeled with affinity. After warming and washing, the removal of non binding enzyme binding, and then join the substrate A, B, and enzyme binding at the same time. Produce color. The depth ofcolor and the concentration of TNF-αin the sample is proportional to the relationship.试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48山羊份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗TNF-α抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法1、血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。
1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液－－-1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、组织匀浆－－－－-将组织加入适量生理盐水捣碎。
1000×g离心10分钟，取上清液5、保存－－－－－－如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。
尽可能的不要使用溶血或高血脂血。
如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。
不要在37℃或更高的温度加热解冻。
应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备1．标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。
稀释前将标准品振荡混匀。
稀释比例按下表中进行：80 ng/ml （6号标准原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
品）40 ng/ml （5号标准100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液品）20 ng/ml （4号标准100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液品）10 ng/ml （3号标准100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液品）5.0 ng/ml （2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液2.5 ng/ml （1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0 ng/ml （空白对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。
2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
操作步骤1．使用前，将所有试剂充分混匀。
不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。
每个标准品和空白孔建议做复孔。
每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。
立即加入50ul的生物素标记的抗体。
盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。
重复此操作3次。
如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。
重复此操作3次。
如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。
避免光照。
8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9．在450nm波长处测定各孔的OD值。
建议使用的实验方案标准品浓度（ng/ml）A 80 80 样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品B 40 40 样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品C 20 20 样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品D 10 10 样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品E 5.0 5.0 样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品F 2.5 2.5 样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品G 0 0 样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品H 样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA试剂盒性能1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。
稀释度的线性。
样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
结果判断与分析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的TNF-α标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的TNF-α含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围：0-80ng/ml4、敏感度：0.1 ng/mlThe performance of kit:1 sensitivity: minimum detection concentration is less than 1 standard. Linearity of dilution. Sample linear regression and the expected concentration correlation coefficient R value is 0.990.2: no specific reaction with other cytokines.3 repeatability: plate, plate between the coefficients of variation were less than 10%.Human type III procollagen amino terminal peptide ELISA kit steps:1 before use, all reagents and mixing. Do not allow liquid to produce a large number of bubbles, so as to avoid adding a large number of bubbles, resulting in the addition of the error.2 according to determine the number of sample number plus standard strip number. Each standard and blank hole is recommended to do the hole. Each sample can be made according to its own quantity, and can be used as a hole in the hole.3 diluted after standard 50ul in reaction hole, added to the sample 50 UL in reaction hole to be measured. Immediately joined the 50 UL antibody biotin. Cover the membrane plate, gently oscillating mixing, 37 degrees Celsius for 45 minutes.4 left hole liquid, each hole filled with washing liquid, oscillating 30 seconds off the washing liquid, pat dry with absorbent paper. Repeat this operation 4 times. If the washing machine with washing, washing times increased once.5 per hole adding chain affinity enzyme -HRP 100ul, gently oscillating mixing, 37 degrees 30 minutes incubation.6 left hole liquid, each hole filled with washing liquid, oscillating 30 seconds off the washing liquid, pat dry with absorbent paper. Repeat this operation 4 times. If the washing machine with washing, washing times increased once.7 per hole adding substrate A, B 50ul, gently oscillating mixing, 37 degrees 5 minutes incubation. Avoid light.8 remove ELISA plate, quickly add 50ul terminated liquid, adding the stop solution immediately after the determination results.9 od determination of each hole at the wavelength of 450nm.The result of judgment and analysis:1, instrument value: Yu Bo 450nm ELISA od read the hole on the instrument2, to the OD value as a vertical coordinate (y), corresponding ot standard concentrations as a horizontal coordinate (x), do have corresponding curve, sample ot content can be according to the OD value by standard curve conversion out corresponding concentration, multiplied by the dilution multiple; or with the standard concentration and the OD value calculated the regression equation of the standard curve, the sample OD value in the equation to calculate the sample concentration, multiplied by the dilution factor is the actual concentration of the sample.3, detection range: 0-100ng/ml4, sensitivity: 0.39ng/ml。