高效液相色谱仪使用注意事项[1]
高效液相色谱仪的使用注意事项
高效液相色谱仪的使用注意事项
1.使用前须确定操作者是否具有色谱仪操作资格，如未具有资格，应在专业人士的指导下使用。
2.首次使用前，应检查仪器性能是否正常，适当调整参数，以达到最佳操作状态。
3.使用过程中，应注意仪器的安全，避免过热、过压及调节参数超出正常范围，避免仪器受损。
4.样品质控，应定期使用标准品或有关物质进行质控，确保测试精度。
5.操作时应熟练掌握仪器操作流程，以防误操作。
6.应及时更换仪器液体及耗材，以确保实验准确。
7.使用后，应将仪器关闭，安全放置，勿放在水源附近或潮湿环境中。
- 1 -。
简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
安捷伦高效液相色谱仪（Agilent HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
其操作流程和注意事项如下：
操作流程：
1. 准备样品溶液：根据分析目的选择适当的溶剂，将样品溶解或稀释至所需浓度。
2. 准备色谱柱：根据分析需求选择合适的色谱柱，并按照柱床规定的要求进行预处理，如洗涤、调pH等。
3. 连接系统：将色谱柱安装在仪器上，连接好进样器、泵、检测器和废液收集器等组件，确保连接紧密无漏。
4. 设置方法参数：根据分析需求，设置泵的流速、进样器的进样量、检测器的波长和灵敏度等方法参数。
5. 系统平衡：启动泵和检测器，运行空白试验，确保色谱柱和系统内部达到平衡状态。
6. 样品进样：将样品进样器插入样品瓶中，抽取足够的样品并注入进样器，按下进样按钮进行进样。
7. 进行分离：启动泵，使流动相通过柱床，样品分离过程中不断采集检测器的信号。
8. 数据处理：分析和处理检测器输出的信号，得出对应的峰面积、峰高度等结果，进行数据分析和解释。
注意事项：
- 严格按照使用手册和方法要求操作仪器，遵循操作规程，避免误操作和事故发生。
- 确保色谱柱、进样器及连接部分的密封性良好，防止泄漏和污染。
- 选择适当的溶剂和流动相，避免与柱材和样品相互作用，影响分析结果。
- 定期检查和维护仪器，如泵的排气、封头的更换、泄漏点的处理等，确保仪器正常运行。
- 样品处理过程中，注意避免光线、温度和湿度的影响，尽量保持稳定的分析环境。
- 使用仪器前，需提前熟悉相关方法和仪器操作，做好实验前的准备工作。
高效液相色谱仪操作步骤及注意事项汇总
高效液相色谱仪操作步骤及注意事项汇总1. 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3.打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5. 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10?ml/min。
6. 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7. 设计走样方法。
点击file，选取select?users?and?methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new?method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8. 进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9．填写登记本，由负责人签字。
10．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
11．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
12．所有过柱子的液体均需严格的过滤。
13．压力不能太大，最好不要超过2000 psi。
选择波长要从以下几个方面考虑：1. 检测波长要大于溶剂截止波长。
如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。
高效液相色谱仪使用中应注意的几点问题
高效液相色谱仪使用中应注意的问题：
1. 柱温控制：高效液相色谱仪通常需要在一定的温度下进行分析，因此使用过程中需要确保柱温控制系统稳定，并按照要求设置适当的柱温。
2. 流速控制：在使用高效液相色谱仪时，需要准确控制流速以保证分离效果。
不同的分析条件有不同的最佳流速范围，因此在实验前要进行流速校正并按需调节。
3. 样品准备：样品准备是影响分析结果的重要环节，需要确保样品充分溶解，可以使用适当的溶剂和溶解条件。
同时，在样品准备过程中要注意避免造成杂质的污染。
4. 使用试管的问题：注意试管的洁净问题，如果使用不洁净的试管会影响试验结果的准确性；注意塑料试管的溶解问题，有些有机溶剂可能会对管壁有溶解现象；注意被测样品在试管壁上的吸附问题，有些药物可能会吸附在玻璃试管的管壁上。
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项高效液相色谱仪（HPLC）是一种常见的分析仪器，用于分离、检测和定量化合物。
在使用和维护HPLC时，需要注意以下几点：1. 样品处理在样品处理过程中，必须避免样品受到污染，否则会影响分析的准确性。
因此，在样品的制备和处理过程中应该使用高质量的试剂和纯水，并避免使用有机溶剂和其他可能对分析产生干扰的物质。
2. 色谱柱选择选择合适的色谱柱是非常重要的，因为不同的色谱柱会对分析结果产生影响。
在选择色谱柱时，应该考虑要分析的样品和分离的目标化合物，以及柱的反相、离子交换、凝胶过滤等不同类型。
3. 溶液配制HPLC中的溶液应该严格按照配方进行配制，以确保分析结果的准确性。
溶液中可能存在的离子、杂质或气泡都会对流速、峰形和灵敏度产生影响。
4. 色谱条件在进行分析时，需要根据样品和柱的特性，选择适当的流速、洗脱剂和温度等条件。
这些条件对分析结果的准确性和分离效率都有很大的影响。
5. 维护和保养为了保证仪器的长期稳定和良好工作状态，需要定期进行维护和保养。
维护包括冷却系统、压力检测、检测器等组件的检查和清洗。
保养包括柱的定期调整和更换、溶液的更换等。
在使用和维护HPLC时，需要严格按照实验室规程操作，注意安全和环保，并做好记录和统计分析工作。
只有保证仪器操作正确、保养到位，才能获得准确、可重复的分析结果。
6. 检测器选择HPLC检测器的选择对分析结果的准确性和可重复性起着至关重要的作用。
常用的检测器包括紫外线（UV）检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
根据需要分析的化合物的性质进行选择。
7. 校正和标定在使用HPLC进行分析之前，必须进行校正和标定，以确保分析结果的准确性。
校正过程中通常涉及标准曲线的制备、内标物的选择和添加等。
8. 数据照实记录HPLC分析结果的准确性需要依赖于实验数据的准确记录。
在使用过程中应保持谨慎和可重复性，制定实验方案，不断记录实验数据，并评估结果的准确性。
实验室高效液相色谱安全使用及注意事项
实验室高效液相色谱安全使用及注意事项高效液相色谱是一种非常常用的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
在实验室中使用高效液相色谱需要注意一些安全问题，本文将介绍高效液相色谱的使用方法以及注意事项，以帮助实验室工作者更好地使用高效液相色谱。
一、高效液相色谱的使用方法1. 实验前准备在进行高效液相色谱实验前，需要进行一些准备工作。
首先，要检查设备是否正常工作，包括系统的泵、检测器、进样器、柱等是否工作正常。
其次，要检查试剂的浓度和纯度是否符合要求。
最后，要准备好实验所需的溶液和样品，并按照实验要求进行处理和标记。
2. 操作步骤高效液相色谱的操作步骤包括：样品进样、柱温控制、流动相控制、检测器设置等。
具体步骤如下：（1）样品进样将样品注入进样器中，注意不要超出进样器的容积范围。
（2）柱温控制根据实验要求设置柱温，通常情况下柱温为室温或略高于室温。
（3）流动相控制设置合适的流动相组合和流速，以达到最佳分离效果。
（4）检测器设置根据实验要求选择合适的检测器，比如紫外检测器、荧光检测器等，并设置检测器的参数，如波长、灵敏度等。
3. 实验后处理实验结束后，需要对设备和试剂进行清洗和储存。
首先，要将进样器和柱进行清洗，以避免残留样品和流动相对下一次实验的影响。
其次，要将检测器进行清洗和维护，以保证检测器的正常工作。
最后，要妥善储存试剂和设备，以便下一次实验使用。
二、高效液相色谱的注意事项1. 实验室安全在使用高效液相色谱时，需要注意实验室的安全问题。
首先，要穿戴好实验室所需的防护设备，如实验服、手套、护目镜等。
其次，要保持实验室的整洁和干净，避免化学品的混合和交叉污染。
最后，要遵守实验室的规定和操作程序，以确保实验室的安全。
2. 操作注意事项在进行高效液相色谱实验时，需要注意以下几个方面：（1）样品的选择和准备在选择样品时，要注意样品的性质和纯度，以避免对实验结果的影响。
同时，要进行适当的样品处理和标记，以确保样品的准确性和可靠性。
高效液相色谱仪操作注意事项
随着药品检验设备的不断增加，各个地方药品检验所都配备了上海睿析科学仪器生产的高效液相色谱仪。
这也要求药品检验人员不断地提高对高效液相色谱仪的操作技术，高效液相色谱仪的寿命和合理正确的使用是分不开的，所以本人就实际工作中使用高效液相色谱仪时容易忽略的地方，总结几点建议供大家参考。
第一、流动相使用前必
须经脱气和过滤处理。
第二、避免流动相组成
及极性的剧烈变化。
当流动
相中含有缓冲溶液(酸，盐，
碱)，应该先用无缓冲流动相
(即把缓冲液换成水)冲洗
20～30min后,再更换强溶剂，
更换流动相时，流速应不超过0.5ml/min。
如果突然切换到高浓度有机溶剂，可能会使HPLC流动体系中的缓冲液沉淀，这样会导致更大的问题如柱头堵塞、管道堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。
第三、如需要更换色谱柱，须对使用的色谱柱进行冲洗(如应用的流动相含有酸或无机盐，应当用20倍柱体积纯净水冲洗干净)、平衡后，保存在有机溶剂中。
第四、除特殊情况外，一般都应使用预保护柱。
如没有配置的在
取下色谱柱时，应立即将两端接头封口。
第五、样品在分析测试完毕后，须用90%水-10%有机溶剂混合液冲洗至少40min后，再用有机溶剂冲洗30min左右，最后将色谱柱保存在有机溶剂中。
第六、吸滤头每周用5%硝酸水溶液超声清洗1次。
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项
一、高效液相色谱仪的使用注意事项
1、使用人在使用前一定要确认当前系统是处于哪种色谱状态；
2、要对流动相系统、进样器等进行排气操作，避免有气泡干扰；正式进样前，要将流动相、色谱柱、检测器等设置好，并进行预平衡，待仪器处于稳定的初始条件下，再开始进样检测；
3、待检测的样品根据仪器的要求一定要保证澄清透明，可选择高速离心或者过滤膜等方式进行净化；
4、进样的顺序建议按照试剂空白、标准系列溶液、试剂空白、样品空白、质控样品、待测样品、试剂空白的顺序进行，以便确认仪器中是否存在干扰待测成分的物质、质控效果等，若待测样品较多，建议在待测样品中间插入质控样品，以确保检测质量；
5、采用梯度洗脱条件检测时，一个样品检测完成之后，一定要确保柱压等条件恢复到初始状态再进行下一个样品的检测；
6、所有检测工作完成后，要对液相系统进行溶剂替换，反相系统建议用甲醇或乙腈保存，包括进样器和液相管路部分，如果使用缓冲盐作为流动相，要用大比例水相将盐冲出，再用纯有机相替换。
高效液相注意事项
高效液相色谱仪使用注意事项1、使用流速一般为1.0ml/min，最高不超过3.0ml/min（制备），压力一般不超过25MPa，最高不超过30MPa。
2、使用温度一般不高于50℃，最高不高于60℃（特殊要求的除外）。
3、试剂瓶上应注明试剂名称，配制人员以及配制日期，同时写好仪器使用记录。
4、开机后，先用色谱乙腈或甲醇（使用前要超声，脱气）冲洗约30分钟，流动相中若含磷酸盐缓冲液，用5%乙腈或8％甲醇溶液（配制后超声，脱气）冲洗约30分钟再换流动相；若不含磷酸盐缓冲液，可直接换流动相；若不含有机溶剂,用注射用水冲洗约30分钟再换流动相。
更换时注意停泵！5、分析完毕，用5%乙腈或8％甲醇溶液冲洗约30分钟再换乙腈或甲醇冲洗约30分钟。
6、流动相使用前用有机滤膜过滤，超声波脱气约2分钟，使用时间一般不超过2天，且每次使用前都要重新抽滤。
7、注射用水、5%乙腈或8％甲醇溶液使用前用0.45微米有机滤膜过滤（若过滤速度太慢可用少量乙腈冲洗滤膜），超声波脱气约2分钟，当天配制，当天使用。
8、冲洗用乙腈和甲醇用0.45微米有机滤膜过滤，以后每3天用0.45微米有机滤膜过滤1次。
9、使用微孔滤膜时应注意水系和有机系，水系滤膜不能用于抽滤含有有机溶剂的溶液，过滤装置目前实验室只有一套，请大家一定倍加珍惜，过滤时，实验人员必须守在旁边。
10、所用水均为超纯水或市售哇哈哈用水（限当天使用），乙腈、甲醇均为色谱纯。
11、样品进样前，必须用色谱级溶剂溶解，再经有机滤头过滤，方可进样。
12、使用过程中，注意压力变化，若压力过低或者过高，及时查明原因。
注：以上注意事项以C18柱为例，若为其它特殊色谱柱，要根据要求相应调整。
13、戴安液相分析和制备时需更换定量环及检测池，请根据需要更换，若有疑问，请咨询负责人。
特殊柱子的使用：1、阳离子柱：不能接触有机溶剂，一般保存在水中，使用时注意管路中的有机溶剂。
2、硅胶柱：反相：使用时同C18柱；正相：注意溶剂的混溶，正己烷、正庚烷与甲醇、水、乙腈不互溶，可用异丙醇过渡。
(完整版)高效液相色谱仪使用注意事项[1]全解
![(完整版)高效液相色谱仪使用注意事项[1]全解](https://img.taocdn.com/s3/m/80cbe1510c22590103029d58.png)
岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
高效液相色谱仪操作注意事项
高效液相色谱仪操作注意事项
流动相：
1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和有机系膜的使用范围，并进行超声除气处理。
2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质。
样品：
1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；
2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；
泵：
1、泵在使用过程中不能把气泡泵进入仪器。
2、泵自清洗液体应该应经常更换（一般为一周）。
3、仪器在长期不使用时应把泵、流动相过滤器及管路保存在有机相溶剂条件下。
进样阀：
1、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针针，洗针液一般选择与样品液一
致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；
2、手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的2倍以上；
色谱柱：
1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；
2、使用符合要求的流动相；
3、使用保护柱；
4、如所用流动相为含盐流动相，必须先用水与有机相相同比例流动相冲洗20分钟以上再换上含盐流动相反相色谱柱使用后，使用后，先用水与有机相相同比例的流动相冲洗，再用纯有机相冲洗。
5、色谱柱在不使用时，应用有机相冲洗，取下后紧密封闭两端保存；
6、不要高压冲洗柱子；
7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；
8、使用过程中注意轻拿轻放。
高效液相色谱仪使用注意事项
高效液相色谱仪使用注意事项1、使用者上机前首先须经过管理老师的同意，须认真履行仪器使用登记制度，出现问题应及时向老师报告。
2、须自备分析柱和流动相溶剂。
3、流动相：须使用色谱纯级溶剂，样品溶液和流动相需用0.45µm 滤膜过滤。
若是使用V ARIAN色谱仪，流动相须首先赶气40～60分钟。
4、进样：一定要使用平头微量进样针进样。
对一般样品而言，进样体积需大于定量环的2.5倍～4 倍则更加保险。
5、请正确开关机，顺序如下：打开计算机（Agilent 1100还须先运行Bootp Server程序）→打开HPLC 各模块电源→待各模块自检完成后，打开化学工作站→打开Purge阀，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止→关上Purge阀→进行数据分析方法编辑和数据采集方法编辑→用流动相冲洗和平衡系统和分析柱（更换溶剂后应以较长时间平衡系统）→关机时，先关闭化学工作站，再关HPLC 各模块电源和计算机。
6、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相。
7、请在每次分析时检查并记录压力是否在正常范围；每次使用完毕后请清洗系统：先以适当比例水和ACN 或MeOH混合溶液清洗20～30分钟，再以100％ACN 或MeOH 清洗10～20分钟，最后应将有机溶剂保留在系统中。
当流动相中使用了无机盐、酸等缓冲盐物质，在分析结束后，应先用纯水“purge”脱气机管路冲洗5分钟，再用95％水和5％ACN 或MeOH清洗色谱柱30～40分钟后，再以100％ACN 或MeOH 清洗10～20分钟，最后应将有机溶剂保留在系统中。
冲洗过程中关闭D灯、W灯。
8、为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。
通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。
液相色谱仪操作注意事项
液相色谱仪操作注意事项1.实验前准备：-检查液相色谱仪的仪器和设备是否正常运行，并及时维护和保养。
-确保所使用的溶剂和试剂是纯净的，避免杂质对实验结果的干扰。
-根据实验需要准备样品，并对样品进行适当的预处理。
2.样品注射：-在注射样品之前，应使用适当的过滤器或离心管对样品进行净化和处理，以去除固体颗粒和未溶解的物质。
-控制样品的浓度，并确保注射量合适，避免样品浓度过高或过低。
-注意避免在采样时引入气泡，以免影响分析的准确性。
3.溶剂系统和柱箱：-检查溶剂系统的压力是否稳定，并确保溶剂的流动速度和比例准确。
-定期检查柱箱的温度控制系统，以确保温度控制的准确性和稳定性。
-避免溶剂泄漏和混合，定期清洁和更换系统中的管路和连接件。
4.柱子选择：-根据样品的性质和要求选择适当的柱子材料和分离模式（正相、反相等）。
-注重柱子的使用寿命和保养，定期进行柱子的清洗和再生。
5.检测器设置：-根据样品的性质和测定要求选择适当的检测器（紫外可见、荧光、电化学等）。
-根据检测器的灵敏度和响应范围调整检测器的参数，以获得最佳的测定结果。
6.数据处理：-定期校准仪器，包括检测器的灵敏度和漂移。
-使用适当的软件进行数据采集和分析，确保数据的准确和可靠。
-定期备份所得到的数据，以防止数据丢失和损坏。
7.安全操作：-液相色谱仪使用大量的有机溶剂和化学试剂，应注意防止溶剂的泄漏、挥发和接触皮肤和眼睛。
-在操作前佩戴个人防护装备，包括实验手套、护目镜和实验衣。
-控制溶剂的使用量和浓度，避免使用过多的溶剂，同时避免溶剂的浓度过高。
以上是使用液相色谱仪时需要注意的一些操作事项，通过正确的操作和维护，可以获得准确、可靠的分析结果，并确保实验的安全性。
L-2000高效液相色谱仪操作使用方法和注意事项
L-2000高效液相色谱仪操作使用方法和注意事项Liquid Chromatograph型号L-2000厂商日本HITACHI公司性能特点液相色谱仪配有紫外检测器，波长范围190～900nm，波长带宽6nm。
仪器配备四元泵，可使流动相进行高压混合梯度洗脱。
基本功能对一般的中性及弱酸、弱碱性有机物进行分离分析。
应用范围有机合成、药物分析、环境样品、化工厂品纯度分析、天然有机化合物的分析等。
操作规程：1.检查1～4号瓶，准备好预先经过滤并超声脱气20min以上的所用流动相，并保证实验过程中各液体足用。
2.打开稳压电源开关→待电压稳定后打开组织器后总开关→检测器开关→泵开关→检查仪器自检情况。
3.设定检测器的波长：按输入波长数值4.泵的准备：逆时针旋转旁通阀→按将%B、%C、%D设为0排A通道气至回液管内无气泡关泵）5.同上操作分别将B、C、D通道内的气体排空→关闭旁通阀（顺时针关到底）。
6.设定工作方式及条件→打开计算机→工作站7.开泵始工作→待基线稳定后进样→搬动六通阀→进样→等出峰完全后，停止采集保存色谱图，再将六通阀手柄转回到“LOA D”，拔出注射器。
8.实验结束后，根据色谱柱类型用相应的流动相清洗柱30分钟，若使用过缓冲液，还要用经过滤并超声脱气的水清洗管道泵头，以防堵塞。
9.退出色谱工作站→关闭各模块电源开关→清洁实验工作面。
10.关闭仪器总电源开关，经由负责人验收，并在使用记录本上登记签字后方可离开。
注意事项：1.使用仪器前必须仔细阅读仪器使用说明书。
2.必须在熟悉仪器使用人员的指导下操作仪器。
3.按仪器使用要求准备测试样品，不得测试不符合要求的样品。
4.小心操作，防止样品污染和腐蚀仪器。
5.仪器要保持干燥、清洁，每次使用完毕应盖上防尘罩。
高效液相色谱法操作注意事项
高效液相色谱法操作注意事项（草案）1 实验前准备事项1.1 对照品的配制1.1.1 配制方法取干燥情况下的对照品（注意是否吸潮），每次称取量不得少于5mg，置一定容量量瓶中，加入少量溶剂，超声溶解冷却后再定容、混匀（高浓度）。
再用移液管吸取1~2ml至先配制成高浓度的对照品，一定容量量瓶中，加入溶剂定容、混匀，即得（低浓度）。
配置后的对照品均需用封口膜封好。
1.1.2 配制浓度严格按照标准配制对照品浓度（低浓度），不可超过或低于一倍。
1.1.3所需玻璃仪器和容器所需玻璃仪器和容器，尽量选用棕色容量瓶进行配制。
每次临用前需要用纯水清洗干净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后方可使用。
1.1.4标签配制好的对照品标签上应注明：品名、批号、取样量、稀释倍数（浓度）、配制日期。
1.1.5 干燥器干燥器中的干燥剂每月至少处理一次。
1.2 供试品的制备1.2.1 取样方法成品：取10袋装量差异项下的样品，按照相关品种标准含量测定项下有关要求，精密称取两份，进行平行实验。
药材：取样袋中药材全部打粉至规定目数（一般为3～4号筛），按照05年版中国药典相关品种含量测定项下有关要求，精密称取两份，进行平行实验。
1.2.2称样要求用万分之一天平称取，使用中注意天平稳定。
1.2.3量取要求均用移液管量取或刻度量管。
1.2.4 所需玻璃仪器和容器所需玻璃仪器和容器，每次临用前需要用纯水清洗干净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后方可使用。
2 实验中注意事项2.1 实验仪器的准备2.1.1 仪器安装后是否存在漏液现象？压力是否稳定？柱子是否安反？2.1.2 检查完毕后，打开电脑、N2000工作站电源开关后，再打开泵电源开关、控制面板上泵开关。
先用色谱甲醇冲洗柱子，等待机器平稳后，再打开检测器电源开关、控制面板上检测器开关。
30分钟后方可进针做实验。
2.1.3 打开电脑桌面上的N2000在线工作站，选择通道，设定保存路径、波长（注意控制面板上同样需要设置）等实验信息。
高效液相色谱仪使用注意事项 液相色谱如何操作
高效液相色谱仪使用注意事项液相色谱如何操作液相色谱仪在高效使用中需注意以下几个问题：1、色谱柱中的流动相是否会会排干的问题：不少做色谱分别试验的人碰到过这样的情形：不慎未适时补充流动相，泵将溶剂液相色谱仪在高效使用中需注意以下几个问题：1、色谱柱中的流动相是否会会排干的问题：不少做色谱分别试验的人碰到过这样的情形：不慎未适时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。
如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中全部流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，假如泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。
即使泵中充分了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。
由于泵只能输送液体，而不能输送空气。
2、色谱柱变干的问题：另一个更可能发生的情况是忘掉盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。
同样，整个色谱柱干枯的情况不太简单发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉全部溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。
即使色谱柱真的变干了，也不愿定就不可救药了。
可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。
较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应当能够溶解并去除滞留在填料中的气体。
色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。
3、使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意以下问题：假如常常需要更改流路或更换不同品牌的色谱柱，使用PEEK材料制成的管路和接头会特别便利。
PEEK管路简单连接；PEEK接头不仅无需工具，手拧即可固定，而且简单调整锥箍之外的管路长度，便利与不同品牌或规格的色谱柱相连接。
使用此类材料的管路需要注意的是：PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。
虽然未察看到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象，但PEEK碰到上述溶剂会变脆。
另一个西药考虑的因素是压力限。
FL2200高效液相色谱仪
-5-
FL2200 高效液相色谱仪高压输液泵
第三章
1.溶 剂 瓶 （淋 洗 液 ）
不锈钢过滤头
色谱柱夹 4.液 相 色 谱 柱
波 长 :2 5 4 nm A bs:0.0001 s=10000 r=20000 D2
测量波长 2 5 4n m 响应时间 1s
5.紫 外 检 测 器
基 线
0调 零 1 波 长 2 量 程 3 响 应 时 间
FL2200 高效液相色谱仪高压输液泵
第一章
第一章 仪器安装使用注意事项
1.1
对安装场地的要求
1.1.1 高效液相色谱仪所使用的溶剂大多是易燃且有毒的，因此安装仪器的房 间应通风良好，否则会引起中毒或不良刺激，也可能引起火灾。 1.1.2 高效液相色谱仪使用大量的易燃有机溶剂，因而严禁在仪器附近吸烟， 使用明火或其他火源。安装本仪器的房间内禁止再安装其他任何发射或可能发射 火花的设备。因为火花可能引发火灾。另外，房间内应配备灭火装置或设备，以 备紧急时防止火灾的发生。 1.1.3 安装仪器的房间内应配备自来水龙头或其他的冲洗设备。如果溶剂进入 眼睛或者有毒的溶剂溅到皮肤上，应立即用清洁的水冲洗，配备的冲洗设备离本 仪器越近越好。 1.1.4 安装本仪器的实验台或其他台面应是水平的，稳固的，并且足以支撑本 仪器的重量，尺寸至少要有 60CM 宽度，否则仪器可能会翻倒或掉到实验台下面。 1.1.5 避免在有腐蚀性气体或大量粉尘的地方安装本仪器，否则会影响仪器的 正常运转，并缩短仪器的使用寿命。 1.1.6 实验室温度需控制在 20℃左右，建议安装空调。
-3-
FL2200 高效液相色谱仪高压输液泵
第二章
第二章
仪器的主要技术性能
表 2.1
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项一，高效液相色谱仪操作过程：1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。
2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。
冲洗过程中关闭D灯、W灯；7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关；8、使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。
（续）1、操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。
当出现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。
高效液相色谱法注意事项
1.虽然泵能耐压6000PSI的压力，但不要使泵处于4000PSI以上的压力为宜。
2.安装及拆卸色谱柱时应注意柱的连接方向，千万不能接反。
否则可能导致柱效降低，甚至损坏色谱柱。
3.严禁开空泵。
在无流动相通过时不要扳动进样阀的操作杆，使用时要注意尽可能少扳动，以免磨损内部的密封垫圈。
4.为了延长检测器灯源的使用寿命，在色谱泵稳定后再打开检测器电源开关，分析结束后立即关闭检测器。
5.应使用高纯度、高质量的溶剂和试剂。
6.避免pH值超限，pH值应控制在2.2～7.5之间。
pH值偏低或偏高都会腐蚀液相系统的不锈钢材料；破坏色谱柱填料的结构，使填料失活。
7.色谱柱温不能超过规定要求，柱温过高会加速色谱柱填料老化，破坏其结构。
8.使用所有溶剂必须是互溶的。
这对于缓冲流动相来说是非常重要的，盐类的析出会很快损坏要维护的部件。
9.流动相首选甲醇-水系统，如经试用不适合时，再选用其他溶剂。
为保护仪器，应尽可能少用含有缓冲液的流动相。
如果流动相中含有缓冲剂，每日使用后应用不含缓冲剂的流动相或新鲜纯化水将仪器管路、泵、进样阀、色谱柱及检测池等充分冲洗干净。
10.如果液相系统使用未过滤的洗脱液、注入未过滤的样品、系统中滞留缓冲洗脱液都能堵塞系统或划伤泵柱塞。
所以流动相、样品使用前必须用0.45μm微孔滤膜过滤；流动相并先经脱气处理后使用。
停泵后决不允许缓冲洗脱液滞留在系统中，须用经过滤后的新鲜纯化水进行清洗，并保证将缓冲剂冲洗干净。
11.如果泵闭置在2天以上，应将甲醇注满液相系统，以避免水溶剂系统中可能存在微生物的繁殖。
12.色谱柱保存时应使填充剂处在润湿状态，两端密塞。
反相柱（如十八烷基硅烷键合硅胶柱）可在甲醇中保存；正相柱（如硅胶柱）可在正己烷中保存等。
13.决不能使用盐酸溶液。
一般来说，任何浓度的卤化物都会腐蚀未经钝化的不锈钢材料。
14.尽量避免使用在电化学过程中引起腐蚀的金属离子。
应避免的典型金属离子有锰、铬、锌、铜、镍、钼、铁。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
流动相的配制液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择：因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。
对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。
对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml ／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。
当选用最佳流速时，分析时间可能延长。
可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：a．由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。
b．对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相，没有提纯的己烷不得使用。
用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。
c．含水流动相最好在临实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。
最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。
d．流动相要求使用0.45 µm滤膜过滤，除去微粒杂质。
e．使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能常见故障的断定及解决方法诊状可能的原因及解决方法(一)保留时间变化1.柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够用》25mmol/L的缓冲液4.柱污染每天冲洗柱5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命采用保护柱(二)保留时间缩短1.流速增加检查泵,重新设定流速2.样品超载降低样品量3.键合相流失流动相pH值保持在3~7.5，检查柱的方向4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加柱恒温(三)保留时间延长1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱质钝化柱3.键合相流失同前(二)34.流动相组成变化同前(二)45.温度降低同前(二)5(四) 出现肩峰或分叉1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏更换进样器转子(五)鬼峰1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物处理样品3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(六) 基线噪声1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱质钝化柱，增加缓冲液或盐的浓度，降低流动相pH值，钝化样品4.同前(四)4 同前(四)45.同前(四)3 5.同前(四)36.死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽1.进样体积过大同(四)12.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载进小浓度小体积样品液相色谱仪使用操作规程液相色谱仪使用操作规程总流程：超纯水冲洗柱——流动相分离样品——超纯水冲洗柱——纯乙睛保存柱1．电源准备打开稳压器电源开关，须待电压指示至220V 后，才能开启其他有关设备。
2． HP1100 高效液相色谱仪的准备试剂：三氟乙酸乙腈(Fisher 公司产品色谱纯)超纯水(Millipore 超纯水)冰乙酸溶液配置：贮液瓶与流动相的准备A 液 0.1%三氟乙酸（三氟乙酸 1ml，超纯水 999ml）室温保存B 液 60%乙腈（乙腈 600ml，超纯水 400ml）室温保存样品液 0.01%乙酸（冰乙酸0.01ml，超纯水 100ml）室温保存泵头冲洗液：精滤后超纯水或者是 1%色谱纯甲醇室温保存注：贮液瓶应用超纯水清洗干净，备用。
流动相溶剂用洁净硼砂漏斗精滤除去微小颗粒。
操作者必须清楚并注明 A、B 贮液瓶盛装为何种溶剂。
冲洗泵头：用注射管于软塑料管末端抽吸至有水流出，调节流速开关控制流速为20-30drop/min.。
①流动相管道排气如果管道中气泡较多，可通过弹击管道，排除气泡，并逆时针旋转脱气泵活塞使其松动，用注射管于流动相出口的塑料管末端抽吸至管道内气泡排除完全。
操作时，我们通常已经打开了脱气机（气泡严重影响分离效果，所以观察管道中液体是否有气泡非常重要。
）②开机③进入 HP1100 操作系统a.双击WIN-95 操作界面中左下角Instrument 1 online 图标，进入HP1100 工作站软件操作界面。
单击工作站操作界面上方 Run control 菜单，在下拉菜单中找到 Sample Info 子菜单，单击。
在 Sample Info 信息框内定义操作者、样品前缀及编号、保存路径等参数。
在保存路径项下，将可定义子目录分别输入操作者拼音缩写，以方便检索时互不干扰。
b.等待工作站操作界面中泵、柱温箱、检测器各指示图标由灰色转变为绿色后，单击泵、检测器各图标可从其各自弹出的菜单中设定流动相各溶剂比例、流速等。
（1）流速通常为 1ml/min。
检测波长通常为 280，或者 254nm。
（2）A 液设置为100%，运行15-30 分钟（目的是色谱柱的预平衡），观察基线走势，基线应为直线，通过单击“Balance”键可将基线调至零点。
待基线平稳后可进样。
（3）调整 A 液为 0，B 液为 100%再运行 60 分钟（此时乙腈实际浓度为 60%）（4）在 A 液冲洗同时进行进样环的冲洗：用 500μl 的针样注射器，在 load 状态，注入超纯水 500μl。
（反复三次，若是 20μl 进样环，则加入 20μl 以上，多余的水可废液管流出。
通常同一样品上样 30 次后应冲洗进样环，如果不同样品，最好，每次上样前均进行冲洗。
）（5）吸取一定量可直接进样的样品溶液（上样液最好用滤器滤过），将进样阀逆时针旋至Load 档，将进样针从进样孔处水平推入，按进样器活塞将样品溶液注射入进样环后，立即将进样阀顺时针方向旋至 Inject 档，与此同时，数据开始自动收集。
（6）此时样品分析已经完成。
在HP1100 主操作界面的检测器图标，关闭检测器，然后关闭色谱仪主机检测器开关（目的是延长检测器寿命）。
将B 通道调为0，A 通道调为100%，即A 液冲洗色谱柱约10-30min。
用A 液续冲洗色谱柱约10-30m（目的是冲出柱内残留的杂质）（7）A 通道换为C 通道（100%乙腈）续冲洗色柱约10-30min。
（目的主要为保护柱）④数据记录的终止与保存电脑将自动收集并保存数据，终止运行后，将自动弹出数据框，或者可通过 DATA ANALYSIS菜单，调出资料。
3．图谱处理4．关机1） HP1100 的关闭在 HP1100 的主操作界面上分别单击关闭泵、检测器图标，或通过菜单关闭。
然后，单击HP1100 的主操作界面右上方“X”，退出 Instrument 1 online 程序，返回至WIN-95 操作界面。
单击左下角“Start”菜单，单击“Shut down”,等待关机，待出现“Restart”提示后，按电脑主机电源键，关闭电脑主机及显示器。