穿心莲八氢番茄红素脱氢酶ApPDS的基因克隆及功能鉴定

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ＴｈｅｅＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｃｏｎｓｉｓｔｓｏｆ２２２４ｂｐｗｉｔｈａｎｉｎｔａｃｔＯＲＦｏｆｌ７５２ｂｐ（ＧｅｎｅＢａｎｋ：ＫＰ９８２８９２），ｅｎｃｏｄｉｎｇａｐｌｏｙｐｅｐｔｉｄｅｏｆ５８４ａｍｉ —
２０１５年１０月ｒ第４Ｏ卷第１９期
凰曼蠡蠹
பைடு நூலகம்
Ｖｏ１．４０，Ｎｏ１９『Ｏｃｔｏｂｅｒ，２０１５
穿心莲八氢番茄红素脱氢酶ＡｐＰＤＳ的基因克隆及功能鉴定
谌琴琴，李丽霞，战鹏林，王强
莲内酯类二萜生物合成基因的功能奠定了基础。［关键词］穿心莲；ＲＡＣＥ；八氢番茄红素脱氢酶；ＶＩＧＳ；反向遗传学
Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｐｈｙｔｏｅｎｅｄｅｓａｔｕｒａｓｅｉｎ
（Ｈ）一ｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎ。利用半定量ＲＴ — ＰＣＲ技术进行组织表达模式分析，发现ＰＤＳ基因在穿心莲的根、茎、叶、花中均有表达，
表达量为叶＞花＞茎＞根。用病毒诱导基因沉默（ＶＩＧＳ）的方法在穿心功莲体内鉴定ＡｐＰＤＳ的功能，构建ＶＩＧＳ载体ｐＴＲＶ２．
ＰＤＳ，经农杆菌浸染穿心莲叶片，植物表型观察、定量ＲＴ — ＰＣＲ检测ＡｐＰＤＳ基因的表达，结果观察到叶片轻微变黄和明显的基因下调，鉴定了ＡｐＰＤＳ在体内的功能。该研究首次克隆并鉴定了穿心莲ＰＤＳ基因，为进一步研究穿心莲中新基因尤其是穿心
Ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓｐａｎｉｃｕｌａｔａ
ＳＨＥＮＱｉｎ — ｑｉｎ。，ＬＩＬｉ — ｘｉａ，ＺＨＡＮＰｅｎｇ一１ｉｎ，ＷＡＮＧＱｉａｎｇ ‘
（１．ＣｏｌｌｅｇｅＡｇｒｏｎｏｍｙ，ＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１１１３０，Ｃｈｉｎａ；
ｎ０ａｃｉｄｓ．ＨｏｍｏｌｏｇｙａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｄｅｄｕｃｅｄｐｒｏｔｅｉｎｈａｓｅｘｔｅｎｓｉｖｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓｔｏＰＤＳｆｒｏｍｏｔｈｅｒｐｌａｎｔｓａｎｄｃｏｎｔａｉｎｓ
（１．四川农业大学农学院，四川成都６１１１３０；２．四川农业大学动物医学院，四川成都６１１１３０）
［摘要］采用ＲＴ — ＰＣＲ和ＲＡＣＥ技术从穿心莲植株中克隆得到了八氢番茄红素脱氢酶（ＰＤＳ）的全长ｃＤＮＡ，预测有一个１７５２ｂｐ的完整开放阅读框（序列已登录ＧｅｎＢａｎｋ，登录号ＫＰ９８２８９２），编码５８４个氨基酸。序列同源性分析，穿心莲ＰＤＳ编码的氨基酸序列与芝麻、广藿香、黄芩等其他植物的ＰＤＳ有很高的同源性，该蛋向包含一个共有的氨基酸脱氢酶的辅酶结构域ＮＡＤ
２．ＣｏｌｌｅｇｅＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１１１３０
，
Ｃｈｉｎａ）
ｌＡｂｓｔｒａｃｔ］Ａｆｕｌｌ — ｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｏｆｐｈｙｔｏｅｎｅｄｅｓａｔｕｒａｓｅ（ＰＤＳ）ｇｅｎｅｆｒｏｍＡｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓｐａｎｉｃｕｌａｔａｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｔｈｒｏｕｇｈＲＡＣＥ — ＰＣＲ．
，
ａｃｏｎｓｅｒｖｅｄＮＡＤ（Ｈ）一ｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎｏｆｐｌａｎｔｄｅｈｙｄｒａｓｅｃｏｆａｃｔｏｒｂｉｎｄｉｎｇ — ｄｏｍａｉｎｉｎＮ— ｔｅｒｍｉｎａ１．ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔＡｐＰＤＳｗａｓｍｏｒｅｒｅｌａｔｅｄｔｏＰＤＳｏ厂ＳｅｓａｍｕｍｎｄｉｃｕｍａｎｄＰｏｇｏｓｔｅｍｏｎｃａｂｌｉｎ．Ｔｈｅｓｅｍｉ — ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＲＴ — ＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔ