ERα基因敲除小鼠的繁育及子代小鼠基因型的鉴定
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ＷＡ Ｇ Ｑ ａ ｇ ， Ｉ Ｎ Ｗｅ —ｉ Ｎ ｉｎ Ｑ Ａ ｎ ｙ ，ＬＵ Ｊ ｇｌ ， Ｈ ｉ ， ＨＥ Ｇ Ｊ Ｉ ｉ － ｎ ｉ Ｚ Ｕ Ｑ ｎ Ｃ Ｎ ｉ ｅ
Ｗ ＡＮＧ ， ＤＩ Ｙｕ ＮＧ ｉｘａ ，ＸＩ Ｈａ — ｉ ＡＯ ｎ Ｈａ ｇ ．
２１ ０ １年 ４月
中 国实 验动 物 学 报
ＡＣＴ Ｌ Ａ ＡＢＯＲＡＴ ０ＲＩ ＵＭ ＡＮＩ ＭＡＬＩ Ｃ ＥＮＴ Ａ Ｓ ＮＩ Ａ ＳＳ Ｉ Ｉ Ｉ Ｃ
Ａｐ ｉ， ０１ ｒｌ ２ １ Ｖｏ ＿ ９ Ｎｏ ２ Ｉ１ ．
第１ ９卷
第 ２期
ｅ
研 究 报 告
石
Ｅ ａ基 因敲 除小 鼠的繁 育及 子代 Ｒ 小 鼠基 因型 的鉴 定
ｍ ｔｏ ｓｃｎ ｂ ｓｄ ｔ ｉｅ ｔ ｔｅｇｎ ｔ ｅｏ ｅＥ ａ ｅ ｄ ａ ｅ ｕｅ ｎｉ ｈ ｅ ｏ ｐ ｆ ｈ Ｒ ｈ ｏｄ ￣ ｙ ｔ
ｍ ｃ ｒ ｉ ｌ． ｉ ｐｅ ｓ ｙ ｅ ｃｅ
【 ｙｗ ｒ ｓ Ｅ ｔ ｇｎｒｃｐｏ Ｇ ｎ ｎｃｏ ｔ ｃ Ｇ ｎｔｐ Ｋｅ ｏｄ 】 ｓｏｅ ｅｅ ｔ ａ； ｅｅｋ ｏｋｕ ｅ； ｅｏｙｅ ｒ ｒ ｍｉ
ｅ ｔ ｅ ｉｌ ｎ ｏ ｔｉｌｔｓｕｅ ｕ ｎ ｒ ｄ ｃ ｄ ｓｚ ． Ｔｈ ｖ ｒｅ ｈ ｗｅ ｍｏ ｒ ｇｃ ｆｌｉｌ ｓ ｐｉｈ ｌａ ，ａ ｄ ｍｙ ｍｅ ｒａ ｉｓ ｓｂ ｔｉ ｅ ｕ ｅ ｉｅ ｅ ｏ ａ ｉｓｓ ｏ ｄ ｈｅ ｒｈａ ｉ ｏｌｃｅ ，ｂｕ ｏ ｃ ｒ ｏｒ ｕ ｅ ｒ ｔｎ ｏ ｐ ａ ｌ ｔａ ｗｅｅ ｏ ｓｒｅ ｂ ｅｖ ｄ． Ｃｏｎｃｕｓｏ Ｉ ｓ ｆａ ｉｌ ｏ ｂ ｅ ｄ ＥＲａ ｋｎ ｃ ｏ ｔ ｈ ｍｏ ｙ ｏ ｅ ｍｉ ｅ ｂｙ ｉ ｂ ｅ ｄ ｎ ｆ ｔｅ ｈ ｔｒ ｚ ｇ ｔ ｓ ＰＣＲ ｌ ｉ ｎｓ ｔｉ ｅ ｓｂｅ ｔ ｒ ｅ ｏ ｋ ｕ ｏ ｚ ｇ ｔ ｃ ｎ ｒ ｅ ｉ ｇ ｏ ｈ ｅ ｅｏ ｙ ｏ ｅ ．
【 摘要 】 目的
探讨雌激素受体 ｄ（ Ｒ ｔ基因敲除小 鼠的优化繁育方法及 Ｅ ａ基 因敲除小 鼠子代 鼠的鉴 定 Ｅ ｃ ） Ｒ
用 ４种不 同 的 交 配 方 式 观 察
方 法 ， 立 Ｅ ａ基 因敲 除 小 鼠模 型 ， 进 一 步 研 究 Ｅ ａ蛋 白 的 功 能 奠定 基 础 。 方 法 建 Ｒ 为 Ｒ
ｅ ｐｅｉ ｎｔｌｍｏ ｅ ｏ ｆ ｒｈ ｒ ｓｕｄ ｈｅ ｍ ｐ ｒａ ｔ ｒ ｌ ｏ ｘ ｒｍｅ ａ ｄ ｌｔ ｕ ｔ ｅ ｔ ｙ ｔ ｉ ｏ ｔｎ ｏｅ ｆＥＲａ． Ｍ ｅ ｈｏ ＥＲａ ｏ ｋ ｕ ｃｅ ｗｅｅ ｐ ｒ ｄ ｉ ｄ ｆｅｅ ｔ ｄｓ ｋｎ ｃ ｏ ｔ ｍｉ ｒ ａｉｅ ｎ ｉ ｒ ｎｔ ｗａ ｓ Ｇｅ ｍｉ ｙ． ｎｏ ｃ ＤＮＡ ｓｉｏａ ｅ ｒｍ ａ ｌ ｎ ｎａｙ ｅ ｙ ＰＣＲ． Ｒｅ ｕｌｓ Ｔ ａ ｉ ｏ ｈ ｆｓ ｒｎ ｅ ｏ ｙ ｅ ｔ ｈ ｗａ ｓ ｌｔ ｄ ｆｏ ｔｉｓ ａ ｄ ａ ｌ ｚ ｄ ｂ ｓ ｔ ｈｅ ｒ ｔｏ ｆｔ ｅ ｏｆｐ ｉ ｇ ｇ ｎ ｔ ｐ ｓ ｆ ｓ ｔ ｅ ｉ
（ ．Ｄ ｐ ｒ ｎ ｏ Ｔ ｘ ｏｏｙ Ｓ ｈ ｏ ｏ ｕ ｌ ｅ ｌ ， ａ ｊ ｇ Ｍ ｄｃ ｌ ｎｖ ｒ ｔ ，Ｎ ｎｉｇ ２ ０ ２ Ｃ ｉａ １ ｅ ａ ｍｅ ｔ ｆ ｏ ｉ ｌ ， ｃ ｏ ｌ ｆ ｂｉ Ｈ ａ ｈ Ｎ ｎｉ ｅ ｉ ｉ ｓ ｙ ａ ｊ ， １ ０ ９， ｈｎ ； ｔ ｃ ｇ Ｐ ｃ ｔ ｎ ａＵ ｅｉ ｎ
ｏ ｇ ｎ ｚ ｄ ｓ ｍｉ ｉｅ ｏ ｓ ｅ ｉｈ ｌｕｍ ｔ ｅ ｓ ｒ ｔｇ ｎ ｃ ｃ ｌｓ Ｈ ｉｔ ｌｇｃ ｌｅ ａ ｉ ｔｏ ｈ ｗｅ ｈｅ ｐｒｓ ｎ ｅ ｏ ｔｏ ｌ ｒ ａ ｉｅ ｅ ｎｆ ｒ ｕ ｐｔ ｅ ｉ ｗｉｈ ｆｗ ｐｅ ｍａｏ ｅ ｉ ｅｌ ． ｓｏｏ ｉａ ｘ ｍ ｎａｉｎ ｓ ｏ ｄ ｔ ｅ ｅ ｃ ｆｓｒ ｍａ ，
ＷＴ、 ＥＲａ“ 一
、
Ｅ ａ 一 表 型 小 鼠互 交 繁 殖 结 果 基 本 符 合 孟 德 尔遗 传 规 律 ， 雌 、 性 Ｅ ａ 一 鼠无 繁 殖 能 力 。 Ｒ 各 且 雄 Ｒ 小
与 ｗＴ比 较 ， 性 Ｅ ａ 一 鼠 睾 丸 脏 器 系 数 降 低 ， 丸病 理 变 化 表 现 为 生 精 小 管 管 腔 膨 胀 ， 精 细 胞 层 变 薄 ， 排 雄 Ｒ 小 睾 生 且 列 不 规 则 ； 性 Ｅ ａ 一 鼠子 宫脏 器 系 数 降 低 ， 宫 和 卵 巢病 变 明 显 ， 现 为 ： 宫 浆 膜 、 层 、 膜 层 细 胞 排 列 不 雌 Ｒ 小 子 表 子 肌 内 规则 ， 巢有囊性病 变、 血 ， 黄体。结论 卵 充 无 雌 、 性 Ｅ ａ 一 鼠 交 配 是 繁 育 Ｅ ａ一 小 鼠 的较 好 方 法 ； 验 所 用 雄 Ｒ 小 Ｒ 实 Ｐ Ｒ 方 法 能 够 精 确 鉴 定 Ｅ ａ 一 鼠 ，Ｒ 一 鼠 的获 得 为 Ｅ ａ蛋 白功 能 的 实验 研 究 提供 了较 理想 的 动 物模 型 。 Ｃ Ｒ 小 Ｅａ 小 Ｒ
雌激 素受 体 （ Ｒ） 于 核受 体超 家族 的成 员 ， Ｅ 属 与 雌激 素结 合后 ， 生变 构形 成二 聚 体 ， 后与 雌激 素 发 然
受 体反 应元 件 （ｅｔ ｇｎｒｓｏ ｓ ｌｍ ｎ，Ｅ Ｅ） ｓ ｏ ｅ ｅｐ ｎｅｅ ｅ ｔ Ｒ 结 ｒ ｅ 合 ， 控靶基 因的转 录 ， 而调节 雌激 素促 进 细胞增 调 从
王 强 钱 文 溢 刘 景 丽 ， 勤 ， 洁 ， 宇 ， 海 霞 ， ， ， 朱 程 王 丁 肖杭
（ ．南 京 医科 大学 公 共 卫 生 学 院 神 经 毒 理 研 究 室 ， 京 １ 南 ２ ０ ２ ；．江 苏 省 医药 动 物 实 验 基 地 ， 京 １０ ９ ２ 南 ２０２ ） １０ ９
ｒｅ ｒ ｉｎｉ ｃ ｎ ｌ ｆｅ ｅ ｔｂ ｔ ｅ ｉ ｓｗｅ ｅ ｓｇ ｆ ａ ｔｙ ｄｉｆｒ ｎ ｅｗｅ ｎ ＥＲａ一 ｉ 一 ａ ｌ —ｙ ｃ ． Ｔｈ ｅ ｔｓ ａ ｄ ｕ ｅｕｓ ｗｅｇ ｓ ｏ ｎｄ ｗｉｄ ｔｐｅ ｍｉ ｅ ｅ ｔｓｉ ｎ ｔ ｒ ｉｈｔ ｆＥＲａ 一 一 ｍｉ ｅ ｗｅｅ ｃ ｒ
ＣＴＧ ＣＡＧ ＧＡＣ Ｇ一 ， ｏ Ｒ ： － ３ Ｎｅ ２－ ５ ＣＡＣ ＧＧＧ ＴＡＧ ＣＣＡ
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Ａ Ｇ Ｃ Ａ Ｔ Ｔ Ｃ３ ， Ｃ Ｔ Ｇ 一 目的基 因 片 段 长度 为 ５ ０ｂ ， ０ ｐ
Ｗ Ｔ— ５ － Ｆ： ＣＧＧ ＴＣＴ ＡＣＧ ＧＣＣ ＡＧＴ ＣＧＧ ＧＣＡ ＴＣ－ 。 ３
中国实验动物学报 ２１ ０ １年 ４月 第 １ 第 ２期 ９卷
Ａ ｔ ＬｂＡ ｉ ｃ Ｓｎ， ｒ ，０ １ Ｖ １１． ｏ ２ ｃ ａ ｎｔ Ｓｉ ｉ Ａｐｉ ２ １ ， ｏ．９ Ｎ ． ａ ａ ｌ
１ ０１
生 、 化 和 维 持 正 常 的 生 理 功 能 。雌 激 素 受 体 分 （ Ｒｘ 是 被发 现 的第 一 种雌 激 素受 体 ， Ｅ ｃ ） 在生 物 体 内 广 泛 分 布 ， 有 重 要 的 生 理 和 病 理 意 义 ¨ 。采 用 具
２ Ｊａ ｇ ｕＡｎｍａ ｘ ｅｉ ｎａ ｎｅ ｏ ｄｃｌａ ｄ Ｐ ａｍａ ｅ ｔ ａ ｓａｃ ． ｉｎ ｓ ｉ ｌＥ ｐ ｒｍｅ ｔｌ Ｃｅ ｔｒｆｒＭｅ ｉａ ｎ ｈ ｒ ｃ ｕｉ ｌＲｅｅ ｒｈ，Ｎａｊｎ ２ ０ ２ ｃ ｎｉｇ， ０ ９） １
【 ｂｔａ ｔ ０ｂｅｔ ｅ Ｔ ｒｅ ｎ ｅｔｙｅｔ ｇｎｒｃｐｏ （ Ｒ ）ｋ ｏｋｕ ｉ ｎ ｓ ｂｉ ｎａｉ ｌ Ａ ｓｒｃ】 ｊｃｉ ｏｂｅｄａｄｉ ｎｉ ｓ ｏｅ ｅｅ ｔ ｖ ｄ ｆ ｒ ｒ Ｅ ａ ｎｃｏ ｔ ｃ ａｄｔ ｅｔ ｌｈａ ｎｍａ ｍ ｅ ｏ ａ ｓ
Ｂｒ ｅ ｎ ｆＥＲＩ ｅ ｎｏ ｋ ｕ ｉ ｅ ａ ｅ ｔ ｐ ｅ ｄｉ ｇ ｏ ）ｇ ｎｅ ｋ ｃ ｏ ｔ ｍ ｃ ｎｄ ｇ ｎｏ ｙ ｅ ｃ
ｉ ｅ ｉ ｃ ｔｏ ｏ ｈｅ ｒ ｆｌａ ｅ ｒ ｔｏ ｄ ｎｔｆ ａ ｉ ｎ ｆｔ ｉ ｉ ｌｇ ｎｅ ａ ｉ ｎ ｉ ｉ
Ｅ ｏ基 因 敲除小 鼠来研 究 Ｅ 仅的结构 、 能及相 关 ＲＬ Ｒ 功 疾病 较其 他研 究方 法 能 排 除 内源 性 基 因的 干扰 ， 而 且 实 验结果 直 观 ， 靠 。 因此 我们 从 美 国杰 克 逊 实 可
验 室 （ ａｋｏ ａ ｏａ ｒ） 功引 入 了 Ｅ 基 因敲 除 Ｊｃ ｓｎＬ ｂ ｒ ｏｙ 成 ｔ Ｒ
ｓｇ ｉｉａ ｔｙ ｌ ｗｅ ｈ ｎ ｔ ａ ｆｗｉｄ ｔ ｐ ｃ ｉ ｎｆｃ ｎ ｌ ｏ ｒｔ ａ ｈ ｔｏ ｌ ・ｙ ｅ ｍｉｅ．Ｓｏ ｅ ｎｆ ｒ ｕ ｕ ｕ ｅ ａ ｉａｅ ｕ ｎ ａ ｈｎ ｌｎｉｇ ｌｙ ｒｏ ｓ ｍｅ ｓ ｍｉ ｉｅ ｏ ｓｔ ｂ ｌ ｓｈ ｄ ａ ｄ ｌｔｄ ｌ ｍｅ ｎｄ ａｔ ｉ ｉ ｎ ａ ｅ ｆｄｉ—
［ 金 项 目】 家 自然 科 学 基 金 项 目（ ０７ ８ １８０ ２ ２ ） 基 国 ３７ １３ ，１ ７３ ９ ；江 苏 省 高 校 自然 科 学 研 究 项 目 （９ Ｊ３ ００ ； 苏 省 普 通 高 校 研 究 生 科 研 ０ Ｋ Ｂ １０５） 江 创 新 计 划 项 目。 ［ 者 简 介 】 强 （９ ３一） 男 ， 士研 究生 ， 究 方 向 ： 激 素受 体 的功 能 机 制 研 究 。Ｅ ａｌ ｈｎｑａ ｇ ａｇ ｉ ．ｎ 作 王 １８ ， 博 研 雌 ｍｉ ：ｃｉａｉｎｗ ｎ ＠ｌ ｅ ｅ ｖ 【 通讯 作 者 】 肖杭 （９ ８一） 男 ， 授 ， 究 方 向 ： 验 动 物 模 型和 应 用 开 发 研 究 ， ｍ ｉ：ｈｉ ＠ ｎｍ ．ｄ ．ｎ １５ ， 教 研 实 Ｅ ａｌ ｘ ｏ ｊｕ ｅｕ ｃ ａ
Ｍ ｎ ｅ ’ ｗ ．Ｔ ｅｍ ｌ ａ ｄｆｍ ｌ Ｅ ａ ｋ ｏｋ ｕ ｈ ｍ ｚｇ ｔ Ｅ ａ 一 ｉ ｒ ｉｆ ｉ ． ｈ ｓ ｓ ｕｅｉ ｎ ｖ — ｅ ｄ ｌ Ｓ ａ ｓ ｈ ａｅ ｎ ａｅ Ｒ ｎ ｃ ｏ ｔ ｏ ｏｙ ｏｅ（ Ｒ ）ｍ ｃ ａｅ ｎｅ ｌ Ｔ ｅｔ ｔ ， ｔ ｄｏ ａ ｌ ｅ ｅ ｒｅ ｔ ｅｅ ｒａ
【 关键词 】 雌激 素受体 ； 因敲 除小 鼠 ； 因型 基 基
【 中图分 类号】Ｑ ５３ ， ３９ ６ ９ —３ Ｒ ４ ．
【 文献标识码 】Ａ
【 文章 编号】１０ －８ ７ ２ １ ）２０ ０ －３ ０５４ ４ （０ １ ０ —１００
Ｄ ｉ １ ． ９ ９ ｊ ｉｓ ． ０ ５ ８ ７ ２ ． ２ ０ ｏ ：０ ３ ６ ／ ．ｓｎ １０ － ４ ． ０１ ０ ． ３ ４ １
子 代 鼠 的各 表 型 比 率及 雌 、 性 Ｅ ａ基 因 突 变 纯 合 子 小 鼠的 繁 殖 能 力 ； 子 鼠 鼠尾 中 提 取 基 因 组 Ｄ Ａ， Ｐ Ｒ 方 雄 Ｒ 从 Ｎ 用 Ｃ 法 扩 增 Ｅ ａ基 因 片段 ， 脂 糖 凝 胶 电泳 后 观 察 结 果 。Ｈ Ｒ 琼 Ｅ染 色 观 察 雌 、 性 Ｅ ａ 一 鼠生 殖 系 统 表 型 变 化 。 结 果 雄 Ｒ 小
Ｗ ＡＮＧ ， ＤＩ Ｙｕ ＮＧ ｉｘａ ，ＸＩ Ｈａ — ｉ ＡＯ ｎ Ｈａ ｇ ．
２１ ０ １年 ４月
中 国实 验动 物 学 报
ＡＣＴ Ｌ Ａ ＡＢＯＲＡＴ ０ＲＩ ＵＭ ＡＮＩ ＭＡＬＩ Ｃ ＥＮＴ Ａ Ｓ ＮＩ Ａ ＳＳ Ｉ Ｉ Ｉ Ｃ
Ａｐ ｉ， ０１ ｒｌ ２ １ Ｖｏ ＿ ９ Ｎｏ ２ Ｉ１ ．
第１ ９卷
第 ２期
ｅ
研 究 报 告
石
Ｅ ａ基 因敲 除小 鼠的繁 育及 子代 Ｒ 小 鼠基 因型 的鉴 定
ｍ ｔｏ ｓｃｎ ｂ ｓｄ ｔ ｉｅ ｔ ｔｅｇｎ ｔ ｅｏ ｅＥ ａ ｅ ｄ ａ ｅ ｕｅ ｎｉ ｈ ｅ ｏ ｐ ｆ ｈ Ｒ ｈ ｏｄ ￣ ｙ ｔ
ｍ ｃ ｒ ｉ ｌ． ｉ ｐｅ ｓ ｙ ｅ ｃｅ
【 ｙｗ ｒ ｓ Ｅ ｔ ｇｎｒｃｐｏ Ｇ ｎ ｎｃｏ ｔ ｃ Ｇ ｎｔｐ Ｋｅ ｏｄ 】 ｓｏｅ ｅｅ ｔ ａ； ｅｅｋ ｏｋｕ ｅ； ｅｏｙｅ ｒ ｒ ｍｉ
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【 摘要 】 目的
探讨雌激素受体 ｄ（ Ｒ ｔ基因敲除小 鼠的优化繁育方法及 Ｅ ａ基 因敲除小 鼠子代 鼠的鉴 定 Ｅ ｃ ） Ｒ
用 ４种不 同 的 交 配 方 式 观 察
方 法 ， 立 Ｅ ａ基 因敲 除 小 鼠模 型 ， 进 一 步 研 究 Ｅ ａ蛋 白 的 功 能 奠定 基 础 。 方 法 建 Ｒ 为 Ｒ
ｅ ｐｅｉ ｎｔｌｍｏ ｅ ｏ ｆ ｒｈ ｒ ｓｕｄ ｈｅ ｍ ｐ ｒａ ｔ ｒ ｌ ｏ ｘ ｒｍｅ ａ ｄ ｌｔ ｕ ｔ ｅ ｔ ｙ ｔ ｉ ｏ ｔｎ ｏｅ ｆＥＲａ． Ｍ ｅ ｈｏ ＥＲａ ｏ ｋ ｕ ｃｅ ｗｅｅ ｐ ｒ ｄ ｉ ｄ ｆｅｅ ｔ ｄｓ ｋｎ ｃ ｏ ｔ ｍｉ ｒ ａｉｅ ｎ ｉ ｒ ｎｔ ｗａ ｓ Ｇｅ ｍｉ ｙ． ｎｏ ｃ ＤＮＡ ｓｉｏａ ｅ ｒｍ ａ ｌ ｎ ｎａｙ ｅ ｙ ＰＣＲ． Ｒｅ ｕｌｓ Ｔ ａ ｉ ｏ ｈ ｆｓ ｒｎ ｅ ｏ ｙ ｅ ｔ ｈ ｗａ ｓ ｌｔ ｄ ｆｏ ｔｉｓ ａ ｄ ａ ｌ ｚ ｄ ｂ ｓ ｔ ｈｅ ｒ ｔｏ ｆｔ ｅ ｏｆｐ ｉ ｇ ｇ ｎ ｔ ｐ ｓ ｆ ｓ ｔ ｅ ｉ
（ ．Ｄ ｐ ｒ ｎ ｏ Ｔ ｘ ｏｏｙ Ｓ ｈ ｏ ｏ ｕ ｌ ｅ ｌ ， ａ ｊ ｇ Ｍ ｄｃ ｌ ｎｖ ｒ ｔ ，Ｎ ｎｉｇ ２ ０ ２ Ｃ ｉａ １ ｅ ａ ｍｅ ｔ ｆ ｏ ｉ ｌ ， ｃ ｏ ｌ ｆ ｂｉ Ｈ ａ ｈ Ｎ ｎｉ ｅ ｉ ｉ ｓ ｙ ａ ｊ ， １ ０ ９， ｈｎ ； ｔ ｃ ｇ Ｐ ｃ ｔ ｎ ａＵ ｅｉ ｎ
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ＷＴ、 ＥＲａ“ 一
、
Ｅ ａ 一 表 型 小 鼠互 交 繁 殖 结 果 基 本 符 合 孟 德 尔遗 传 规 律 ， 雌 、 性 Ｅ ａ 一 鼠无 繁 殖 能 力 。 Ｒ 各 且 雄 Ｒ 小
与 ｗＴ比 较 ， 性 Ｅ ａ 一 鼠 睾 丸 脏 器 系 数 降 低 ， 丸病 理 变 化 表 现 为 生 精 小 管 管 腔 膨 胀 ， 精 细 胞 层 变 薄 ， 排 雄 Ｒ 小 睾 生 且 列 不 规 则 ； 性 Ｅ ａ 一 鼠子 宫脏 器 系 数 降 低 ， 宫 和 卵 巢病 变 明 显 ， 现 为 ： 宫 浆 膜 、 层 、 膜 层 细 胞 排 列 不 雌 Ｒ 小 子 表 子 肌 内 规则 ， 巢有囊性病 变、 血 ， 黄体。结论 卵 充 无 雌 、 性 Ｅ ａ 一 鼠 交 配 是 繁 育 Ｅ ａ一 小 鼠 的较 好 方 法 ； 验 所 用 雄 Ｒ 小 Ｒ 实 Ｐ Ｒ 方 法 能 够 精 确 鉴 定 Ｅ ａ 一 鼠 ，Ｒ 一 鼠 的获 得 为 Ｅ ａ蛋 白功 能 的 实验 研 究 提供 了较 理想 的 动 物模 型 。 Ｃ Ｒ 小 Ｅａ 小 Ｒ
雌激 素受 体 （ Ｒ） 于 核受 体超 家族 的成 员 ， Ｅ 属 与 雌激 素结 合后 ， 生变 构形 成二 聚 体 ， 后与 雌激 素 发 然
受 体反 应元 件 （ｅｔ ｇｎｒｓｏ ｓ ｌｍ ｎ，Ｅ Ｅ） ｓ ｏ ｅ ｅｐ ｎｅｅ ｅ ｔ Ｒ 结 ｒ ｅ 合 ， 控靶基 因的转 录 ， 而调节 雌激 素促 进 细胞增 调 从
王 强 钱 文 溢 刘 景 丽 ， 勤 ， 洁 ， 宇 ， 海 霞 ， ， ， 朱 程 王 丁 肖杭
（ ．南 京 医科 大学 公 共 卫 生 学 院 神 经 毒 理 研 究 室 ， 京 １ 南 ２ ０ ２ ；．江 苏 省 医药 动 物 实 验 基 地 ， 京 １０ ９ ２ 南 ２０２ ） １０ ９
ｒｅ ｒ ｉｎｉ ｃ ｎ ｌ ｆｅ ｅ ｔｂ ｔ ｅ ｉ ｓｗｅ ｅ ｓｇ ｆ ａ ｔｙ ｄｉｆｒ ｎ ｅｗｅ ｎ ＥＲａ一 ｉ 一 ａ ｌ —ｙ ｃ ． Ｔｈ ｅ ｔｓ ａ ｄ ｕ ｅｕｓ ｗｅｇ ｓ ｏ ｎｄ ｗｉｄ ｔｐｅ ｍｉ ｅ ｅ ｔｓｉ ｎ ｔ ｒ ｉｈｔ ｆＥＲａ 一 一 ｍｉ ｅ ｗｅｅ ｃ ｒ
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Ａ Ｇ Ｃ Ａ Ｔ Ｔ Ｃ３ ， Ｃ Ｔ Ｇ 一 目的基 因 片 段 长度 为 ５ ０ｂ ， ０ ｐ
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中国实验动物学报 ２１ ０ １年 ４月 第 １ 第 ２期 ９卷
Ａ ｔ ＬｂＡ ｉ ｃ Ｓｎ， ｒ ，０ １ Ｖ １１． ｏ ２ ｃ ａ ｎｔ Ｓｉ ｉ Ａｐｉ ２ １ ， ｏ．９ Ｎ ． ａ ａ ｌ
１ ０１
生 、 化 和 维 持 正 常 的 生 理 功 能 。雌 激 素 受 体 分 （ Ｒｘ 是 被发 现 的第 一 种雌 激 素受 体 ， Ｅ ｃ ） 在生 物 体 内 广 泛 分 布 ， 有 重 要 的 生 理 和 病 理 意 义 ¨ 。采 用 具
２ Ｊａ ｇ ｕＡｎｍａ ｘ ｅｉ ｎａ ｎｅ ｏ ｄｃｌａ ｄ Ｐ ａｍａ ｅ ｔ ａ ｓａｃ ． ｉｎ ｓ ｉ ｌＥ ｐ ｒｍｅ ｔｌ Ｃｅ ｔｒｆｒＭｅ ｉａ ｎ ｈ ｒ ｃ ｕｉ ｌＲｅｅ ｒｈ，Ｎａｊｎ ２ ０ ２ ｃ ｎｉｇ， ０ ９） １
【 ｂｔａ ｔ ０ｂｅｔ ｅ Ｔ ｒｅ ｎ ｅｔｙｅｔ ｇｎｒｃｐｏ （ Ｒ ）ｋ ｏｋｕ ｉ ｎ ｓ ｂｉ ｎａｉ ｌ Ａ ｓｒｃ】 ｊｃｉ ｏｂｅｄａｄｉ ｎｉ ｓ ｏｅ ｅｅ ｔ ｖ ｄ ｆ ｒ ｒ Ｅ ａ ｎｃｏ ｔ ｃ ａｄｔ ｅｔ ｌｈａ ｎｍａ ｍ ｅ ｏ ａ ｓ
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Ｅ ｏ基 因 敲除小 鼠来研 究 Ｅ 仅的结构 、 能及相 关 ＲＬ Ｒ 功 疾病 较其 他研 究方 法 能 排 除 内源 性 基 因的 干扰 ， 而 且 实 验结果 直 观 ， 靠 。 因此 我们 从 美 国杰 克 逊 实 可
验 室 （ ａｋｏ ａ ｏａ ｒ） 功引 入 了 Ｅ 基 因敲 除 Ｊｃ ｓｎＬ ｂ ｒ ｏｙ 成 ｔ Ｒ
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［ 金 项 目】 家 自然 科 学 基 金 项 目（ ０７ ８ １８０ ２ ２ ） 基 国 ３７ １３ ，１ ７３ ９ ；江 苏 省 高 校 自然 科 学 研 究 项 目 （９ Ｊ３ ００ ； 苏 省 普 通 高 校 研 究 生 科 研 ０ Ｋ Ｂ １０５） 江 创 新 计 划 项 目。 ［ 者 简 介 】 强 （９ ３一） 男 ， 士研 究生 ， 究 方 向 ： 激 素受 体 的功 能 机 制 研 究 。Ｅ ａｌ ｈｎｑａ ｇ ａｇ ｉ ．ｎ 作 王 １８ ， 博 研 雌 ｍｉ ：ｃｉａｉｎｗ ｎ ＠ｌ ｅ ｅ ｖ 【 通讯 作 者 】 肖杭 （９ ８一） 男 ， 授 ， 究 方 向 ： 验 动 物 模 型和 应 用 开 发 研 究 ， ｍ ｉ：ｈｉ ＠ ｎｍ ．ｄ ．ｎ １５ ， 教 研 实 Ｅ ａｌ ｘ ｏ ｊｕ ｅｕ ｃ ａ
Ｍ ｎ ｅ ’ ｗ ．Ｔ ｅｍ ｌ ａ ｄｆｍ ｌ Ｅ ａ ｋ ｏｋ ｕ ｈ ｍ ｚｇ ｔ Ｅ ａ 一 ｉ ｒ ｉｆ ｉ ． ｈ ｓ ｓ ｕｅｉ ｎ ｖ — ｅ ｄ ｌ Ｓ ａ ｓ ｈ ａｅ ｎ ａｅ Ｒ ｎ ｃ ｏ ｔ ｏ ｏｙ ｏｅ（ Ｒ ）ｍ ｃ ａｅ ｎｅ ｌ Ｔ ｅｔ ｔ ， ｔ ｄｏ ａ ｌ ｅ ｅ ｒｅ ｔ ｅｅ ｒａ
【 关键词 】 雌激 素受体 ； 因敲 除小 鼠 ； 因型 基 基
【 中图分 类号】Ｑ ５３ ， ３９ ６ ９ —３ Ｒ ４ ．
【 文献标识码 】Ａ
【 文章 编号】１０ －８ ７ ２ １ ）２０ ０ －３ ０５４ ４ （０ １ ０ —１００
Ｄ ｉ １ ． ９ ９ ｊ ｉｓ ． ０ ５ ８ ７ ２ ． ２ ０ ｏ ：０ ３ ６ ／ ．ｓｎ １０ － ４ ． ０１ ０ ． ３ ４ １
子 代 鼠 的各 表 型 比 率及 雌 、 性 Ｅ ａ基 因 突 变 纯 合 子 小 鼠的 繁 殖 能 力 ； 子 鼠 鼠尾 中 提 取 基 因 组 Ｄ Ａ， Ｐ Ｒ 方 雄 Ｒ 从 Ｎ 用 Ｃ 法 扩 增 Ｅ ａ基 因 片段 ， 脂 糖 凝 胶 电泳 后 观 察 结 果 。Ｈ Ｒ 琼 Ｅ染 色 观 察 雌 、 性 Ｅ ａ 一 鼠生 殖 系 统 表 型 变 化 。 结 果 雄 Ｒ 小