HPLC(仪器图)解读
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高效液相色谱-HPLCppt课件.ppt
色谱法的分类
按固定相的形态分:
平面色谱 o 纸色谱
o 薄层色谱
柱色谱
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
色谱法的分类示意图
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
▪ 高压梯度洗脱（高压混合，高压进柱，2个 泵。）
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
▪安捷伦泵：小视频 ▪色谱学堂：泵
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
色谱法原理及分类
什么是色谱法 色谱法溯源 Tswett（茨维特)的实验 色谱法原理 色谱法的分类
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
什么是色谱法
色谱法是一种现代的分离分析方法 1906年正式命名(见诸文献) 20世纪30年代开始广泛研究和应用 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代
1. 紫外—可见光度检测器：
①固定波长：254nm ， 低压汞 灯。
② 可 调 波 长 ： 190 ～ 800mm ， 钨灯，氘灯。
UV
③光电二极管矩阵检测器： 190～700nm。
接色谱柱 石英窗 光电倍增管
废液
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高效液相色谱HPLC基本原理ppt课件
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3）示差折光检测器
原理：利用两束相同角度的光照射溶剂相和样 品+溶剂相，利用二者对光的折射率不同，其中一束 （通常是通过样品+溶剂相）光因为发生偏转造成两 束光的强度差发生变化，将此差示信号放大并记录， 该信号代表样品的浓度。
为通用型检测器，灵敏度为10-7g/mL。但对温 度变化敏感，且不适于梯度淋洗。
当采用粘度较大的试剂，如CC4，CH3OH, 丙酮，二氧杂环已烷、THF 等。 填充方法：
填充时，按上述方法制作匀浆液，用流动相充满色谱柱及其延长管中， 然后将匀浆液倒入匀浆填充器，在较高压力下迅速将其注入色谱柱内。要 求填充速度快(防凝聚、沉降或结块)、且无空气进入(影响填充均匀性)。
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3. 色谱柱
1）对色谱柱的要求：内壁光滑的优质不锈钢柱，柱接头的死体积尽可能小。 柱长多为15~30cm，内径为4~5mm(尺寸排阻色谱柱常大于5mm，制备色谱 柱内径更大)； 2）柱的填充：主要采用匀浆法。根据使用匀浆试剂的性质不同可分为： 平衡密度法：
即使溶剂密度和填充颗粒密度相近，此时颗粒沉降速度趋于0。常用的 匀浆试剂有四氯乙烯、四溴乙烷和二碘甲烷等； 非平衡密度法：
Deuterium lamp
Lens
Lens system Holmium filter Detector cell
Optical slit
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Diode Array
Grating 33
Time msec
LIGH T
PHOTODIOD E
Wavelength nm
高效液相色谱分析法(仪器+组成+分离类型+流动相选择)
1、流 程
2、主 要 部 件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：30MPa以上。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（ <10μm），液体的流动相高速通过时，将产生 很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱 的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、 流量稳定可调、耐腐蚀等特性
(2)梯度淋洗装置
3.离子交换色谱分离固定相
结构类别： （1）薄壳型离子交换树脂
薄壳玻璃珠为担体，表 面涂约1%的离子交换树脂； （2）离子交换键合固定相
薄壳键合型；微粒硅胶 键合型（键合离子交换基团）
树脂类别： （1） 阳离子交换树脂（强酸 性、弱酸性） （2） 阴离子交换树脂（强碱 性、弱碱性）
4. 空间排阻分离固定相
liquid-solid adsorption chromatography 固定相：固体吸附剂如硅胶、氧化铝等，较
常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；
流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：利用溶质分子占据固定相表面吸 附活性中心能力的差异；适用于分离相对分子 质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合 物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
GC：H = A + B / u + C • u （填充柱）
A = 2λ • dp
A ∝ λ • dp
B = 2γ • Dm = 2γ • Dg B ∝ t R ，B ∝ Dg
Dg
∝
T η
或Dg
∝
T M
B = 2γ • Dm
Dm
∝
T η
柱温T ↓低，流动相η ↑大 ⇒B相忽略
在高效液相色谱中, 液体的扩散系数
(4) 高效分离柱
2、主 要 部 件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：30MPa以上。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（ <10μm），液体的流动相高速通过时，将产生 很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱 的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、 流量稳定可调、耐腐蚀等特性
(2)梯度淋洗装置
3.离子交换色谱分离固定相
结构类别： （1）薄壳型离子交换树脂
薄壳玻璃珠为担体，表 面涂约1%的离子交换树脂； （2）离子交换键合固定相
薄壳键合型；微粒硅胶 键合型（键合离子交换基团）
树脂类别： （1） 阳离子交换树脂（强酸 性、弱酸性） （2） 阴离子交换树脂（强碱 性、弱碱性）
4. 空间排阻分离固定相
liquid-solid adsorption chromatography 固定相：固体吸附剂如硅胶、氧化铝等，较
常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；
流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：利用溶质分子占据固定相表面吸 附活性中心能力的差异；适用于分离相对分子 质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合 物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
GC：H = A + B / u + C • u （填充柱）
A = 2λ • dp
A ∝ λ • dp
B = 2γ • Dm = 2γ • Dg B ∝ t R ，B ∝ Dg
Dg
∝
T η
或Dg
∝
T M
B = 2γ • Dm
Dm
∝
T η
柱温T ↓低，流动相η ↑大 ⇒B相忽略
在高效液相色谱中, 液体的扩散系数
(4) 高效分离柱
高效液相色谱仪Agilent 1100仪器结构和操作
Agilent 1100 型高效液相色谱仪[美国Agilent公司]一．仪器原理及结构高效液相色谱（简称HPLC）是色谱法中最重要的一个分支。
与气相色谱相比，HPLC 的分离模式更为多样化，适用样品范围更广。
它不仅能分离高沸点、强极性和热不稳定的化合物，而且适合于离子性、大分子及具有生物活性的化合物的分离。
据估计，自然界20%的已知化合物能用气相色谱直接分析，而70%以上都可用HPLC分析。
另外，经HPLC分离后的样品组分很容易收集，故能用于制备分离。
HPLC有多种分离模式，但其仪器结构都基本相同，仪器流程如下：流动相置于储液瓶，由四元泵输入系统，样品用自动进样器从进样阀引入，经色谱柱分离后进入检测器进流动池，吸光度信号经放大后由记录仪记录。
检测器则主要有UV-VIS、二极管阵列、示差折光、荧光、电化学及质谱等。
图3-4为Agilent 1100 HPLC仪器的结构示意图，它主要由下面几部分组成：（1）真空脱气机：高性能脱气，避免了烦琐的操作，可提高仪器的稳定性。
（2）四元输液泵：Agilent 1100泵是采用新的单向结构的活塞泵。
流量设定范围从0.2至10mL·min-1，精度0.1mL·min-1。
该泵可自动监测压缩性补偿值，保持高压条件下的流量准确度。
其压力上限可在0-4×104kPa(0-6000psi)的范围内调节。
（3）自动进样器：样品盘容量100×2mL，样品进样体积为0.1-1500µL。
具有操作简便，准确度高，重现性好的特点。
（4）柱温箱：控温范围：低于室温10℃-80℃，可容纳30cm长的色谱柱，样品在此分离。
根据样品类型和分离模式，可选用各种不同的液相色谱柱。
1. 溶剂柜2. 真空脱气机3. 排液阀4. 四元泵5.自动进样器6. 柱温箱7. 检测器图3-4 Agilent 1100 HPLC仪器结构示意图（5）DAD检测器：波长范围190-950nm，可变狭缝，可进行自动峰检索，利用紫外谱图进行峰确认。
高压液相色谱(HPLC)基本概念和理论
高压液相色谱(HPLC)基本概念和理论一、基本概念和术语1.色谱图和峰参数色谱图(chromatogram)--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)。
基线(base line)--经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。
一般应平行于时间轴。
噪音(noise)--基线信号的波动。
通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
漂移(drift)--基线随时间的缓缓变化。
主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
色谱峰(peak)--组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。
流出曲线上的突起部分。
正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。
不对称色谱峰有两种：前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。
前者少见。
拖尾因子(tailing factor，T)，用以衡量色谱峰的对称性。
也称为对称因子(symmetry factor)或不对称因子(asymmetry factor)。
《中国药典》规定T应为0.95~1.05。
T＜0.95为前延峰，T＞1.05为拖尾峰。
峰底-基线上峰的起点至终点的距离。
峰高(peak height，h)-峰的最高点至峰底的距离。
峰宽（peak width，W)-峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。
W＝4σ半峰宽（peak width at half-height，Wh/2)-峰高一半处的峰宽。
Wh/2＝2.355σ标准偏差（standard deviation，σ)-正态分布曲线x ＝±1时（拐点）的峰宽之半。
正常峰的拐点在峰高的0.607倍处。
标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。
σ小，分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。
二仪器2-HPLC-PPT精品
2×10－10 不敏感 低
2×10－7 不敏感 10－4
10－11
不敏感 低
电化学 电活性
不行 106 10处理和色谱工作站
• 早期的色谱仪采用记录仪，通常是一种电子 电位差计来记录色谱图。由色谱图量取两个 最重要的色谱参数：保留值和峰面积。 由于色谱分析的特殊性和电子技术的迅速发 展，目前色谱分析普遍使用色谱数据处理机 获得色谱信息。大多数色谱数据处理装置是 由数字电子积分仪和微处理机系统组成。通 过ADC转换器, 把模拟信号转换成数字信号, 然后再把峰持续时间内的数值贮存起来进行 计算, 最后打印出分析报告。
2020/6/4
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示差折射检测器
• 示差折射检测器是通过连续监测参比 池和测量池中溶液的折射率之差来测 定溶质浓度。由于折射率是物质的通 用性质，示差折射检测器是一种通用 型的整体性质检测器
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平面镜
样品
透镜
遮光板
光源
参比
光学零
光电转换 调零
采用安培检测器时，流动相 必须含有电解质，且呈化学隋性。 它最适于与反相色谱匹配。但此 检测器只能检测具有电活性的物 质。
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液相色谱常用检测器的一般性质
检测器 选择性
梯度 洗脱
紫外 示差
紫外吸收 通用型
可以 不行
荧光 发荧光物质 可以
线性 范围
105 104 103
检测限
敏感性
(g/ml) 对流速 对温度
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柱规格
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淋洗液
死体积
显色剂 加压
排放
进样阀 泵
第1节 HPLC概述
有机物的20%； HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性
和热稳定性的限制。用途广泛，占有机物的80%。 2. 操作条件
GC：柱温 HPLC：流动相的极性
2019/12/5
3．流动相差别
1）GC：流动相为气体 组分与流动相无作用力，只与固定相作用 2）HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、
第一节 概 述
高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC）： 在经典液相柱色谱基础上引入气相色谱的理论和技术，采用高压泵、高效固 定相、高灵敏度检测器发展而成的一种分离分析方法。
2019/12/5
一、HPLC 与经典 LC 区别
1．经典LC：仅做为一种分离手段 柱内径1~3cm，固定相粒径 >100μm 且不均匀 常压输送流动相 柱效低（H↑，n↓） 分析周期长 无法在线检测
改善 R 增加了因素，对分离起很大作用； 流动相种类较多，选择余地广； 流动相极性和 pH 值的选择也对分离起到重要作用；
选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相，可以增加 分离选择性。
2019/12/5
三、HPLC 的特点和应用
“三高” “一快” “一广” 高柱效 高灵敏度 高选择性 分析速度快 应用范围广泛（可分析80%有机化合物）
2．HPLC：分离和分析 柱内径 2~6mm，固定相粒径<10μm 高压输送流动相 柱效高（H↓，n↑） 分析时间大大缩短 可以在线检测
2019/12/5
二、HPLC 与 GC 差别
相同：兼具分离和分析功能，在线检测 差别：分析对象、操作条件、流动相
1．分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，
和热稳定性的限制。用途广泛，占有机物的80%。 2. 操作条件
GC：柱温 HPLC：流动相的极性
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3．流动相差别
1）GC：流动相为气体 组分与流动相无作用力，只与固定相作用 2）HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、
第一节 概 述
高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC）： 在经典液相柱色谱基础上引入气相色谱的理论和技术，采用高压泵、高效固 定相、高灵敏度检测器发展而成的一种分离分析方法。
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一、HPLC 与经典 LC 区别
1．经典LC：仅做为一种分离手段 柱内径1~3cm，固定相粒径 >100μm 且不均匀 常压输送流动相 柱效低（H↑，n↓） 分析周期长 无法在线检测
改善 R 增加了因素，对分离起很大作用； 流动相种类较多，选择余地广； 流动相极性和 pH 值的选择也对分离起到重要作用；
选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相，可以增加 分离选择性。
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三、HPLC 的特点和应用
“三高” “一快” “一广” 高柱效 高灵敏度 高选择性 分析速度快 应用范围广泛（可分析80%有机化合物）
2．HPLC：分离和分析 柱内径 2~6mm，固定相粒径<10μm 高压输送流动相 柱效高（H↓，n↑） 分析时间大大缩短 可以在线检测
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二、HPLC 与 GC 差别
相同：兼具分离和分析功能，在线检测 差别：分析对象、操作条件、流动相
1．分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，
HPLC的介绍ppt课件
帮浦在运作时，要注意移动相的存量，如果移动相被用完那这样就会吸到空气， 空转帮浦也是会造成伤害；注意这些小地方可以使帮浦的寿命延长。
;.
10
样品注射装置
主要是让样品进入HPLC中进行分析的重要装置，目前分为手动注射与自动注 射两种。自动注射越来越多人使用，是因为淘汰旧式管路的传送方式以减少样 品损失、准确的注射量、确保注射针干净、编排样品程序、操作简单等，而提 升使用者的效率。
;.
12
管柱的注意事项
需避免压力和温度的突然改变与震动。 调整移动相比例时，应避免有机溶液与水之比例调整过大，需慢慢改变。 禁止管柱逆相冲提。 选择适当移动相，以免破坏管柱内的固定相。 避免将复杂之样品直接注入HPLC进行分析，以免管柱卡死。 经常使用溶解度较大的溶液清洗管柱，以清除管柱内的杂质。 不使用HPLC时，需选择适当溶液来保护管柱。
;.
6
除气泡装置
HPLC所使用的溶剂通常会溶解氧气与氮气，所以要把气泡去除才不会影响系统， 气泡会影响帮浦的运作、管柱的分离效率、检测器的灵敏度、基线稳定性，还 有可能会影响溶剂的pH值造成分析结果的误差。
;.
7
除气泡方法
真空、超音波震荡、加热煮沸、吹氦气等。最常被大家所使用的方法，抽真空 与超音波震荡。
;.
3
在正相层析法中，最低极性的成分最先流析出来，相对的在动相中最能溶解； 动相极性增加有减少流析时间的效应。在逆相层析法中最高极性的成分最早 出现，且动相极性增加就会增加流析时间。表1-1所示为正相与逆相两种层 析之特性比较，由于液相层析牵涉到待测成份、固定相、移动相三者间互相 作用，因此如何强化固定相与移动相间化学作用特性差异，是决定待测成份 滞留有高度选择性的重要关键。
;.
10
样品注射装置
主要是让样品进入HPLC中进行分析的重要装置，目前分为手动注射与自动注 射两种。自动注射越来越多人使用，是因为淘汰旧式管路的传送方式以减少样 品损失、准确的注射量、确保注射针干净、编排样品程序、操作简单等，而提 升使用者的效率。
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12
管柱的注意事项
需避免压力和温度的突然改变与震动。 调整移动相比例时，应避免有机溶液与水之比例调整过大，需慢慢改变。 禁止管柱逆相冲提。 选择适当移动相，以免破坏管柱内的固定相。 避免将复杂之样品直接注入HPLC进行分析，以免管柱卡死。 经常使用溶解度较大的溶液清洗管柱，以清除管柱内的杂质。 不使用HPLC时，需选择适当溶液来保护管柱。
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6
除气泡装置
HPLC所使用的溶剂通常会溶解氧气与氮气，所以要把气泡去除才不会影响系统， 气泡会影响帮浦的运作、管柱的分离效率、检测器的灵敏度、基线稳定性，还 有可能会影响溶剂的pH值造成分析结果的误差。
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7
除气泡方法
真空、超音波震荡、加热煮沸、吹氦气等。最常被大家所使用的方法，抽真空 与超音波震荡。
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3
在正相层析法中，最低极性的成分最先流析出来，相对的在动相中最能溶解； 动相极性增加有减少流析时间的效应。在逆相层析法中最高极性的成分最早 出现，且动相极性增加就会增加流析时间。表1-1所示为正相与逆相两种层 析之特性比较，由于液相层析牵涉到待测成份、固定相、移动相三者间互相 作用，因此如何强化固定相与移动相间化学作用特性差异，是决定待测成份 滞留有高度选择性的重要关键。
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第三节
高效液相色谱仪
2019/2/26
2019/2/26
2019/2/26
• Agilent 1200液相色谱系统
2019/2/26
2019/2/26
高效液相色谱仪的仪器流程
(process and main assembly of HPLC)
高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、数
高效液相色谱法(HPLC)
high performance liquid chromatograph
2019/2/26
概述
高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代 初发展起来的一种新型分离分析技术，它是在经典液 相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采 用了高压驱动流动相 、高效固定相和高灵敏度检测 器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动 化的特点。
（动画）
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• 流动相的预处理：
• 在使用前必须进行脱气处理，以防止在洗脱过程 中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低 而产生气泡
• • • • 抽真空脱气 吹氦脱气 加热回流脱气 超声波脱气
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流动相的洗脱方式
• 等强度洗脱（isocratic):样品的组成较简单， 各组分的分配系数值相差不大。在同一分析周 期内流动相的组成保持恒定。 • 梯度洗脱（gradient)：样品的组成较复杂，各 组分的分配系数值相差大，即宽分配比的组分
梯度洗脱的作用 1．梯度洗脱的特点
（1）提高分离度，加快分析速度； （2）改善峰形, 减少拖尾, （3）提高检测的灵敏度， 有利于痕 量组分的检测； （4）增加峰容量； （5）强烈滞留的组分不容易残留在柱
上, 保持柱性能长期良好；
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(2)梯度淋洗装置
外梯度: 利用两台高压 输液泵，将两种不同极 性的溶剂按一定的比例 送入梯度混合室，混合 后进入色谱柱。 内梯度:一台高压泵, 通 过比例调节阀,将两种或 多种不同极性的溶剂按 一定的比例抽入高压泵 中混合。
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•高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱，
提高色谱柱的塔板数，以高压驱动流动相，使得经
典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以
在几个小时甚至几十分钟内完成。
1971年科克兰等人出版了《液相色谱的现代实践》 一书，标志着高效液相色谱法 (HPLC)正式建立。
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柱内径1-3cm，固定相粒径>100μm 且不均匀 常压输送流动相 柱效低（H↑，n↓） 分析周期长 无法在线检测
2．HPLC：分离和分析
柱内径2-6mm，固定相粒径<10μm（球形，匀浆装柱） 高压输送流动相 柱效高（H↓，n↑） 分析时间大大缩短 可以在线检测 2019/2/26
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手动进样器、六通阀、定量环
Load
Inject
六通阀定量环
定量环
进柱
通废液口
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2．梯度洗脱的主要条件
① A 流动相/弱溶剂组成； ② B 流动相/强溶剂组成； ③ 梯度时间；
强溶剂 A%
④ 梯度曲线：线性、凸型或凹型等。
time
5
2
1
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2.进样系统
流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通 阀进样装置，其结构如图所示：
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相同：兼具分离和分析功能，均可以在 线检测 主要差别：分析对象的差别和流动相的 差别
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2．流动相差别 GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、 改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用
• 1970年后，适合分离生物大分子的填料 又成为研究的热点。1980年后，改善分 离的选择性成为色谱工作者的主要问题， 人们越来越认识到改变流动相的组成提 高选择性的关键。
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一、HPLC与经典LC区别
主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段 1．经典LC：仅做为一种分离手段
3．操作条件差别 GC： 加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小） 2019/2/26
第三节 高效液相色谱仪
高效液相色谱仪的结构示意图：一般可分为五个主 要部分：高压输液系统，进样系统，分离系统,
检测系统和数据处理及控制系统。此外还配有
辅助装置：如梯度淋洗，自动进样及数据处理等。
2019/2/26
2019/2/26 据采集和控制系统
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(二).主要部件
1.高压输液系统 高压输液泵:主要部件之一，压力：15～35 MPa。
为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10 μm），液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高 速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性
二、HPLC与GC差别
1．分析对象 GC： 能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及 高聚物的样品不可检测 占有机物的20% HPLC： 溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热 稳定性的限制 , 分子量大、难气化、热稳定性差 及高分子和离子型样品均可检测 ,用途广泛，占有 机物的80%
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梯度洗脱（gradient)
梯度洗脱（溶剂程序）：在同一个分析周期内按 一定的程序改变流动相的组成,从而改变流动相 极性、离子强度、pH，来调整组分的k值，改变 分离因子α值，以达到最短时间内得到最佳分离 的目的。 ●梯度洗脱的特点 ●梯度洗脱的主要条件 ●梯度洗脱的基本原理
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2019/2/26
发展：
1960年代，由于气相色谱对高沸点有机物分析的局限性， 为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质，气相 色谱的理论和方法被重新引入经典液相色谱。20世纪60 年代末科克兰（Kirkland）、荷瓦斯(Horvath)、莆黑斯、 哈伯、里普斯克等人开发了世界上第一台高效液相色谱 仪，开启了高效液相色谱的时代。