大鼠肝脏组织病理切片的制作和 HE 染色

大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE 染色

步骤如下：

（一）固定与修块

取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面

刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。

（二）脱水与透明

1．75%乙醇50分钟

2．85%乙醇50分钟

3．95%乙醇（I）30分钟

4．95%乙醇（II）30分钟

5．100%乙醇（I）30分钟

6．100%乙醇（II）30分钟

7 1/2 二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟

8．二甲苯（I）20分钟

9．二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定）

若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织

块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。

（三）浸蜡、包埋与修蜡块

1．浸蜡：将60℃恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将

组织块转入石蜡里，放置于60℃恒温箱120分钟。

2．包埋：将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺

序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上，包埋时蜡盒底部

要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。

3．修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘

之间的距离不得小于2mm。

（四）切片

在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹

匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8μm，将切片在55℃左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37℃烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。

（五）脱蜡、染色与脱水

倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓

度的影响。全过程约需要60分钟。

1．脱蜡

（1）二甲苯（I）15分钟

（2）二甲苯（II）15分钟

（3）100%乙醇2分钟

（4）95%乙醇（I）1分钟

（5）95%乙醇（II）1分钟

（6）蒸馏水浸洗1分钟

2．染色

（7）苏木精30秒钟

（8）自来水冲洗60秒。（显微镜下观察效果）

（9）伊红（着色即可）10秒钟

（10）蒸馏水浸洗1分钟

3．脱水

（10）95%乙醇（I）1分钟

（11）95%乙醇（II）1分钟

（12）100%乙醇2分钟

（13）二甲苯（I）2分钟

（14）二甲苯（II）3-5分钟

（六）封片

将载玻片取下，滴加1~2滴中性树胶，用镊子夹住盖玻片的一角，盖上盖玻

片，之后倾斜载玻片，多余的中性树胶用筒纸吸干，室温下保存。

2．简要版：肝组织HE染色切片制作过程

(1)取材与固定：取大鼠肝右叶固定部位组织块，立即投入10％甲醛中，固

定48h。

(2)脱水透明：组织修片，梯度酒精脱水，后二甲苯中透明。动物组织切

成0．2-0．5cm的薄片，依次经过70％酒精2h--*80％酒精2h一95％酒精(I、II各2h) 和无水酒精(I、II各1h)脱水，二甲苯透明(I、II各lh)，以置换组织内的酒

精溶液。

(3)浸蜡包埋：将脱水透明好的组织块置入融化的石蜡内，使石蜡浸入组

织并置换出其中的二甲苯。将浸蜡的组织置于包埋器内，并滴入液化蜡进行组织

包埋，后置于冰面上待其凝固。

(4)切片与贴片：将蜡块固定于切片机上，切成5 u m厚的切片，在45"C

的水面上展平后铺在涂有防脱剂的载玻片上，置于65℃烤箱烤3h。

(5)脱蜡：切片置入二甲苯I、Ⅱ各15分钟，不同浓度酒精(100％5min

一95％5s一80％5s一70％5s)置换出其中的二甲苯，最后用PBS液洗净。

(6)HE染色：将石蜡切片放入苏木精中染色5min一蒸馏水洗净一1％稀盐酸

分化一流水中充分冲洗返蓝，约20min；伊红染色5min，流水冲洗干净。

(7)脱水、透明：染好的切片经梯度酒精脱水(70％、80％、95％、100％各5min)，

二甲苯透明(I、II各5min)。

(8)封固：在载玻片上加一滴中性树胶，然后覆盖一片清洁的盖玻片封片。

光学显微镜下观察组织病理变化，以i00倍放大率观察切片。