DNA Gel-extraction ki(中文)
分子生物学实验技术实验内容讲解
2006年《分子生物学实验技术》实验内容一、RT-PCR（一）总RNA的提取实验安排：每两人抽提一管。
为了使操作同步以节省时间，各组样品请一起离心。
操作步骤：1、将100μl液体样品加入1.5ml Ep管中，再加入900μl冰预冷的LS-Biotragents TM（苯酚和异硫氰酸胍的混合物）。
2、将样品剧烈混合后，在室温放置5min。
3、加入200μl氯仿，颠倒Ep管混和两次，并剧烈振荡混和10s。
4、在4℃条件下，以10000×g离心15min。
5、将上层水相转移到一个新的Ep管中，加入等体积的异丙醇（Isopropanol）并混匀，然后在4℃放置至少10min。
6、在4℃条件下，以10000×g离心15min后，小心并尽可能地去除全部上清夜。
7、用1ml 75%乙醇洗涤RNA沉淀和管壁。
8、将RNA沉淀进行干燥（不能完全干燥）处理后，用10μl无RNase污染的水（RNase-Free Water）将RNA溶解并于-20℃保存。
注意事项：1、所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。
2、所用的塑料材料，如吸头、离心管等需用0.1% DEPC水浸泡过夜。
3、配制的溶液应尽可能用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。
然后用高压灭菌除去残留的DEPC。
不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22μm滤膜过滤除菌。
4、操作人员需在超净工作台上操作，并戴一次性口罩、手套，实验过程中手套要勤换。
（二）反转录实验安排：每人做一管。
反应体系（20μl）：按下列顺序加样反应条件：42℃ 1h注意事项：1、加样时，一般从体积大的开始加，样品最后加。
如在一般的PCR反应体系中，应先加水、Buffer、dNTPs、引物，最后加酶和模板。
2、液体应直接加到管底，且每加一种试剂后应更换新的吸头。
3、加完所有试剂后，应用手指轻弹混匀，然后低速离心数秒以收集管壁上沾有的液体。
Thermo-Scientific-GeneJET-Gel-Extraction-Kit(k069)-product-information
保存和稳定性：试剂盒要保存在室温下（15-25度）。
建议将纯化柱保存在4度，可储存多于一年。
任何在保存过程中产生的沉淀都可以在37度恒温中溶解，然后在使用之前冷却至室温。
说明书The GeneJET™Gel Extraction Kit，设计的目的是从在TAE 或者TBE缓冲液里电泳的标准或者低熔点的琼脂糖凝胶中，高效快速回收纯化DNA片段。
这个试剂盒以便利的旋转层析柱的基础上，应用了基于二氧化硅薄膜的专利技术。
试剂盒可以用于纯化20-25bp大小的DNA片段。
在100bp–10kb DNA 片段大小范围内，回收率提高到95%。
每个GeneJET 纯化柱可纯化高达25μg DNA，可用高达1克的琼脂糖凝胶。
整个过程只用15分钟，分离的DNA片段将用于普遍的下游应用，包括连接反应，限制性设计，PCR，测序和分子标记。
原理：目的DNA片段经琼脂糖凝胶电泳后分割，将其置于微型离心管中，用Binding Buffer 溶解后上柱，Binding Buffer中的促溶剂可以溶解琼脂糖，变性蛋白质，促进DNA结合到层析柱的硅膜上。
另一点方便的是，Binding Buffer中含有颜色指示剂，可以检测DNA结合最好时的溶液PH，杂质经过简单的清洗步骤就可以去除。
纯化的DNA用Elution Buffer 从层析柱中洗脱出来，回收的DNA可用于下游应用。
重要的注意事项:2、加入乙醇后，在盒子的复选框中标记，以注明完成的步骤。
3、每次用之前，检验Binding Buffer是否生成沉淀。
假如有沉淀，将溶液置于37度使其溶解，然后冷却至25度。
4、用Binding Buffer时要带手套，因为里面含有刺激性物质。
5、当提取的DNA直接用于测序时，不能使用重复利用的电泳缓冲液。
额外的材料和需要的设备：96-100%乙醇异丙醇3 M醋酸钠，PH5.2（可能不用）微型离心机1.5或2毫升微型离心管加热器或水浴锅开始前多注意事项：1、开始操作前阅读注意事项。
PCR产物的TA克隆(DNA的胶回收和连接) PCR实验技术
PCR产物的TA克隆(DNA的胶回收和连接)
【实验原理】
1.DNA片段回收方法：DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中，通上一定电压进行电泳，不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。
切下带有所需DNA片段的凝胶，用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片段回收纯化。
2.利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3’T突出端的载体，在连接酶作用下，可以把PCR产物插入到质粒载体的多克隆位点，可用于PCR产物的克隆和测序。
商品化的T载体有很多。
本实验采用TaKaRa公司的pMDTM18-T Simple Vector。
这个载体以pUC19载体为基础，消除了pUC18载体上的多克隆酶切位点，经EcoRⅤ酶切后在两侧的3＇端添上“T”制备而成（见附录1）。
由于本载体上消除了多克隆酶切位点，克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。
【试剂与器材】
（一）试剂
1.pMDTM18-T Simple Vector Kit（Takara公司）。
2.TAE电泳缓冲液
3.琼脂糖（Agarose）
4.6×电泳加样缓冲液：0.25％溴粉蓝，40％(w/v) 蔗糖水溶液，贮存于4℃。
1 / 9。
Gel Extraction Spin Protocol(中文)
琼脂糖凝胶回收操作步骤（离心柱型）●快速- - 用<10分钟从琼脂糖凝胶中回收DNA●可靠- - 优化的缓冲液保证了DNA纯度●优质- - 纯化DNA适于任何下游应用●安全- - 无需有机溶剂2．储存条件及稳定性◆自购买之日起，所有BNT胶回收试剂盒组分在22-25C下都能保质至少24个月。
请确保未使用时结合缓冲液瓶盖紧盖。
★如缓冲液中出现沉淀，于37℃温育即可溶解。
3．结合能力■每个HiBind DNA离心柱能结合多至~ 20 μg DNA■纯化次数基于琼脂糖凝胶浓度及DNA片段大小。
一般来说，<100bp的DNA片段或从>2%的琼脂糖凝胶中回收DNA需要附加的结合缓冲液以达到试剂盒预期的使用次数。
（结合缓冲液能单独购买，货号为Binding-200）。
4．开始回收前强烈建议在开始本操作之前熟悉整个操作步骤。
如果所有步骤都严格遵守，BNT胶回收试剂盒是简单、快捷、可靠的回收方法。
5.BNT胶回收操作步骤（离心柱型）使用者自备材料：▼50 - 55C水浴▼至少耐转速10，000g的微量离心管▼无核酸酶的1.5ml离心管▼无菌去离子水（或TE缓冲液）▼无水乙醇（96%-100%乙醇）▼保护性眼罩▼5M醋酸钠pH5.2⑴进行琼脂糖胶/ EB电泳分离不同DNA片段。
可使用所有类型或级别的琼脂糖。
强烈推荐使用新制TAE或TBE缓冲液作为电泳缓冲液。
不要重复使用电泳缓冲液，其pH会升高，降低回收得率。
⑵各条带分离到恰当位置时，用宽的干净锋利手术刀片仔细切下含有目的片段的琼脂糖胶，尽量切除DNA片段周围多余的琼脂糖胶以使凝胶体积最小。
⑶估计凝胶块体积，将其置于1.5ml微量离心管中称重。
假设凝胶密度为1g/ml，凝胶体积如下推算：质量为0.3g的凝胶块体积为0.3ml。
加入与凝胶等体积的结合缓冲液。
将混合物置于50-65℃7min，或直到凝胶完全溶解。
在溶解过程中每2-3min摇振以促进混合。
琼脂糖凝胶中DNA片段的分离和回收
玻璃奶法
实验原理：
• 玻璃奶(Glassmilk)：无毒、无味、无腐蚀作用的 白色硅颗粒，能专一性结合0.2kb至50kb大小的 DNA（双链、单链、线性、环状或超螺旋），不 结合RNA、蛋白质、寡核苷酸、有机溶剂、去污 剂及其他可能抑制酶活性的有机或无机物。 • DNA与玻璃奶结合原理：在高盐状态下，玻璃奶 周围的负电荷被打破，并允许DNA的磷酸负电荷 与玻璃奶特异性结合。在低盐（H2O/1×TE）时 溶解分离。
DEAE滤膜插片法
• 将DEAE纤维素膜裁成小条活化处理。 • 电泳后在目的条带前切一刀，将比条带略宽的 DEAE纤维素膜插入切口，不留气泡，继续电泳 一会儿，条带上的DNA被膜片截留。 • 取出膜片冲洗后转移到离心管中加缓冲液65度保 温洗脱，直到膜上没有DNA了，将溶液用酚氯仿 抽提沉淀。 • 这个方法不适合做较大的DNA，因为洗脱比较困 难。
DNA 结合率影响因素：
• 盐浓度：
– DNA<100bp:高盐状态下结合率高。 – DNA>100bp:低盐状态下结合率高。
• pH值：
– pH<7.0:结合率高。
应 用：
• 从琼脂糖凝胶中分离纯化DNA片段； • 从DNA反应物中纯化目的DNA片段，如回 收纯化PCR产物、酶切连接反应中的DNA 片段； • 从探针制备反应中去除未标记上的核苷酸 以及小的DNA片段（比如引物）； • DNA浓缩，去盐及去除杂质。
5．涡旋震荡悬浮Ultra-Sep Beads，加入10 µl Ultra-Sep Beads到样品EP管中。50～ 55℃温育10min或时间至完全熔解。在温浴 过程中，每隔2 min震荡EP管悬浮UltraSep Beads。 注意观察胶完全熔解后胶/ Binding Buffer混 合物的pH值。当混合物pH＞8.0则DNA的 产量将会显著减少。如果混合物变为橙色 或红色，则加入5 µl 5M NaAC（pH5.2）以 降低pH值。加入NaAC后混合物的颜色应该 变为淡黄色。
EZNA Gel Extraction Kit
MicroElute Gel Extraction Kit 100bp-20kb 80-85% Poly-Gel DNA Extraction Kit 100bp-20kb 60-80%
Poly-Gel RNA Extraction Kit 30bp-10kb 85-90%
货号和次数
D2500/1-00(5) D2500/1-01(50) D2500/1-02(200)
简易说明书
离心操作方案 1. 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段，推荐使用新鲜的TAE/TBE Buffer和新配制的胶。 2. 片段完全分离后，在紫外灯下迅速切取所需条带，DNA在紫外灯下爆光时间不超过30s。 3. 称取凝胶块的重量,按照每1g凝胶加入1ml Binding Buffer对应量，加入适量体积的Binding
E.Z.N.A.TM Gel Extraction Kit
Cat. No: D2500,D2501
实验前准备 1. 调节水浴的温度为55-65°C。 2. 按下表用无水乙醇稀释SPW Wash Buffer，并于室温保存。
D2500-00,D2501-00: 加入20ml无水乙醇 D2500-01,D2501-01: 加入100ml无水乙醇 D2500-02,D2501-02: 每瓶中加入100ml无水乙醇
O me g a中 国 区 订 货/技 术 支 持 tel:020-32058425 fax:020-32058915
E.Z.N.A.TM Gel Extraction Kit
Cat. No: D2500,D2501 快速流程图
电 泳 后 ， 切 下 凝 胶; 称重后，加入等体积Binding Buffer 5 5 - 6 0 ° C水 浴 溶 解 凝 胶
1.基因克隆的步骤
基因克隆的步骤一、RNA的提取1. 提取RNA前将洗净干燥的瓷研钵放入-70℃预冷10 min；2. 从液氮罐中取出样品组织放入预冷的研钵中，加液氮淹没后立即研磨，边研磨边加液氮，整个过程都不要使液氮挥干；3. 趁冷，将样品粉末50-80 mg加入1.5 mL离心管后再加入1 mL Trizol，样品体积应不超过所使用Trizol体积的10%，然后按照Trizol试剂盒说明操作；4. 室温静止5-15 min。
对于某些蛋白、多糖或脂含量很高的细胞或组织Trizol裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物，需12000g、4℃离心10 min，然后吸取澄清的Trizol裂解产物至一新的离心管中；5. 每mL Trizol中加0.2 mL氯仿。
小心盖上离心管，剧烈地涡旋振荡15 sec，室温（24℃）静置3-5 min；（必需步骤）6. 12000 g、4℃离心15 min，此时混合物分成三部分：底层为苯酚-氯仿层，中间层，上层水相层，RNA完全存在水相中；7. 把小于80%的水相层（每mL Trizol约可吸0.5-0.55 mL）转移至一新的离心管中，并弃去下面的有机相（小心避免吸到中间层）。
往水相中加入异丙醇来沉淀RNA，每使用1 mL Trizol，便加500 uL的异丙醇，颠倒混匀，室温下孵育样品10 min；8. 4℃、12000 g离心样本10 min弃去上清，每mL Trizol加入1 mL 75%乙醇，涡旋混匀，室温沉淀10 min后，7500 g、4℃离心5 min，弃上清。
再用离心机甩一下（5000rpm，离心1 s）；9. 小心吸走乙醇，短暂地在室温下置2-5 min，让RNA团风干，不要用离心干燥装置或真空干燥装置，因为过度干燥会导致很难用水重新溶解RNA，然后在55-60℃温浴10 min，然后-70℃保存。
[RNA]（ng/uL）=A260×40×稀释倍数[DNA]（ng/uL）=A260×50×稀释倍数纯DNA：OD260/OD280≈1.8（＞1.9，表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染）纯RNA：1.7＜OD260/OD280＜2.0（＜1.7时表明有蛋白质或酚污染；＞2.0时表明可能有异硫氰酸残存）二、M-MLV RT反转录1. oligo dT 1 uL + dNTP（2.5 mM）4 uL + 1-5 ug total RNA + 水= 12 uLHeat mixture to 65℃ for 5 min and quick chill on ice；2. 上述12 uL液体+ 5×Buffer 4 uL + 0.1 M DTT 2 uL + RNase OUT 1 uLMix contents of the tube，incubate at 37℃for 2 min3. 上述19 uL液体加M-MLV RT 1 uLIncubate tube at 25℃for 10 min；Incubate 50 min at 37℃；70℃for 15 min。
Silica bead gel extraction-说明书
注意事项：1、需要对浓缩的漂洗缓冲液进行稀释：Concentrated Washing Buffer: 15 mlDistilled water: 285 mlEthanol (95-100%): 300 mlTotal Volume: 600 ml2、TBE可能抑制DNA在硅胶珠上的连接。
TBE转化缓冲液能够中和TBE缓冲液的抑制作用，因此，从TBE琼脂糖凝胶中纯化DNA片段时应该使用。
3、干燥不会对硅胶粉末悬浮液（silica powder suspension）造成损坏。
如果长期储存过程中，悬浮液变干，则向管中加入去离子水，使固体和液体的数量相当，重新可用。
4、如果试剂盒不经常使用，或者多人共用一个试剂盒，将硅胶粉末悬浮液（silica powder suspension）中的硅胶分装到几个小管，并储存于-20度。
保存：Silica Bead DNA Gel Extraction Kit使用前应保存于4度。
稀释后的漂洗缓冲液应保存于-20度。
如果不经常使用，硅胶粉末悬浮液（silica powder suspension）应该分装，暂不使用的小管应该储存于-20度。
纯化步骤注意：所有纯化步骤在常温下进行；离心速率>12000×g。
A:从凝胶中纯化DNA第一步：切胶；称重；（尽量避免紫外照射）；第二步：按照3:1的体积比，向胶溶液中加入连接缓冲液（Binding Buffer）。
55度加热5min 直至凝胶完全溶解；溶解过程中每隔几分钟翻转混合；检查溶液颜色，黄色表明达到DNA连接的最优pH值。
如果颜色变成橙色或紫色，加入10uL 3M乙酸钠(pH=5.2)，混匀。
此时溶液颜色变成黄色。
注意：如果从TBE琼脂糖凝胶中回收DNA，加入1/2体积的TBE转化缓冲液，和4.5倍体积的连接缓冲液。
第三步：将重悬的硅胶粉末悬浮液（silica powder suspension）加入到DNA/连接缓冲液中。
地高辛标记与检测DNA试剂盒说明书
地高辛标记与检测D N A试剂盒DIGDNALabelingandDetectionKit采用地高辛-dUTP进行随机引物DNA标记，碱性标记，利用NBT/BCIP酶联免疫，随时即用。
此试剂盒可对10ng-3μgDNA进行25次标记反应，可检测10×10cm2面积的杂交膜50张指导手册1前言1.1内容表1前言1.1内容表1.2试剂盒成分2.介绍2.1产品简介3.操作步骤和所需材料3.1在你开始前3.2流程图3.3地高辛标记DNA3.4标记效率的确定3.5DNA的转移和固定3.6杂交3.7免疫检测3.8DNA印记的洗脱和再杂交1.2试剂盒的成分瓶号标记内容包括功能1 无标记对照DNA12 无标记对照DNA23 DNA稀释缓冲液2管1mL50μg/mL鱼精DNA,10mMTris-HCl,1mMEDTA,pH8.0在25℃澄清溶液4 DIG标记的对照DNA20μL5μg/mL质粒pBR328DNA（用BamHI线性化）澄清溶液用于确定标记效率5 六聚核苷酸混合物6 标记用混合物7 DNA聚合酶1大片段标记级8 抗地高辛的碱性磷酸酶结合物200μL750U/mL从羊中获取的，Fab段，结合碱性磷酸酶澄清溶液9 NBT/BCIP10 封阻试剂附加仪器与所需试剂除了上表中列出的试剂外，你必须准备一些溶液。
在下表中，你可以找到不同操作程序需要准备的设备概要。
在每个操作程序的前面提供了详细的信息。
操作程序仪器设备试剂3.3DIG-DNA标记水浴灭菌的双蒸水0.2MpH8.0灭菌的EDTA3.4标记效率的半定量带正电荷的尼龙膜* 地高辛洗涤和封阻缓冲组合*TE缓冲液或者洗涤缓冲液马来酸缓冲液检测缓冲液3.5DNA转移和固定紫外光盒或者商业化可用于紫外交联的其他设备2×SSC或者10×SSC3.6杂交尼龙膜，带正电荷*杂交袋*，或者耐热的塑料袋或者滚筒瓶（分子杂交炉）注意：当用地高辛杂交缓冲液工作时，不要用开口的托盘。
PH0208 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒实验操作步骤原理
片段未回收或回收率低
凝胶体系 pH 太高
太高，DNA 不能与吸附柱有效结合，用少量 NaAc pH2.5 将溶液颜色调至黄色 吸附柱上的 DNA 在低盐和高 PH 条件下被有
洗脱缓冲液 pH 不合适
效洗脱。其最大洗脱率 PH 在 7.0-8.5 之间。 如用灭菌水洗脱，保证 PH 在其范围内 洗脱体积不能低于 30ul，并保证洗脱液加到 吸附柱中间位置 紫外线对 DNA 的破坏会导致连接后的转化
洗脱体积太小
切胶时紫外线照射时间过长，DNA 变性
效率大大降低。切胶时尽量使用长波紫外线 （360nm）并提高切胶速度 漂洗液 PW 两次漂洗后，离心 2 分钟必不可
回收产物中含有乙醇 回收后的片段无法正常进行后续实验，如连 接后的转化效率低
少；离心后开盖室温放置 2 分钟有助于残余 乙醇挥发 PCR 产物更易出现如此情况，小片段尤甚。 这种现象出现的原因不详，可能与片段 GC 含量和序列有关。如果出现这种现象，以下
使用参考
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 1. 将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量。 2. 向胶块中加入 3 倍体积溶胶液 PN （如果凝胶重为 100mg，其体积可视为 100 ul，则加入 300 ul 溶胶液），55℃水浴放置 10 分钟， 其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
试剂组分Байду номын сангаас
Componets 溶胶液 PN 3M NaAc pH5.2 漂洗液 PW 洗脱缓冲液 EB 吸附柱 CA1 收集管（2 ml） 说明书 100T 100 mL 500μl 25 mL 15 mL 100 个 100 个 1份 200T 200 mL 500μl 2×25 mL 15 mL 2×100 个 2×100 个 1份
DNA的重组与转座培训
DNA的重组与转座培训DNA的重组与转座培训DNA的重组与转座是生物学中一项重要的技术，用于改变生物体的基因组，以实现特定的目的。
在这篇文章中，我们将详细介绍DNA的重组与转座技术，并提供相关实验操作的培训。
1. DNA的重组DNA的重组是指将来自不同来源的DNA片段进行重新组合，形成新的DNA序列。
这种技术的应用非常广泛，可以用于产生具有特定功能的蛋白质、疫苗的研发以及疾病的基因治疗等领域。
实验操作：步骤1：准备工作- 准备试管、酶切体系、反应缓冲液和DNA片段等。
- 温度、时间和酶切酶的浓度都是影响DNA重组效率的重要因素，所以需要根据具体实验来确定。
步骤2：酶切反应- 将待重组的DNA片段用限制性内切酶切剪，产生可粘性末端。
- 确保酶切反应的温度和时间符合要求。
步骤3：连接反应- 将两个经酶切的DNA片段混合，在酶切缓冲液中加入连接酶。
- 反应温度和时间的选择与步骤2类似。
步骤4：DNA重组产物的分离与提取- 通过琼脂糖凝胶电泳分离连接反应产物，并使用Gel Extraction Kit提取感兴趣的目标DNA。
2. 转座转座是指某些特殊的DNA序列（转座子）具有自主移动性，可以在基因组内发生位置的改变。
这种现象在进化中起到重要作用，并且可以被利用于基因突变的研究和修饰。
实验操作：步骤1：获得转座子DNA- 转座子可以在细菌、真核生物或植物中找到。
根据实验需要，可以使用PCR扩增或基因组DNA提取方法获得转座子DNA。
步骤2：构建转座载体- 选择合适的载体，将转座子DNA连接到载体上，并转化到适当的宿主细胞中，以扩增转座子。
步骤3：转座实验操作- 将转座载体引入到目标细胞中。
- 通过选择合适的培养基和筛选条件，筛选出带有转座子的目标细胞。
3. 实验操作的注意事项- 实验室操作要根据具体的实验方案和操作手册进行，严格按照操作流程进行。
- 培养容器、试剂和仪器要经过严格消毒，在实验操作时保持无菌环境。
DNA片段纯化
DNA片段纯化1、割胶回收（OMEGA·E.Z.N.A TM Gel Extraction Kit）OMEGA·E.Z.N.A TM Gel Extraction Spin Protocol：(1)电泳、割胶；（最好使用新鲜的电泳缓冲液）(2)加入等体积的Binding Buffer (XP2)，55~60℃温育7min或至胶完全溶解，其间每2~3min振荡一次；（胶溶后，如颜色为橙或红色，则需加5μl 5M醋酸钠，pH5.2，使颜色变为浅黄）(3)将HiBind® DNA column放入2ml收集管；(4)在column上加700 μl胶融液，10,000×g室温离心1min；注1：胶融液转入column后，可先在室温放置2min；注2：该步需重复一次；注3：OMEGA柱子的吸附能力为25 μg DNA。
(5)弃滤过液，column放入原收集管；(6)在column上加300 μl Binding Buffer (XP2)，10,000×g室温离心1min，弃滤过液，column放入原管；(7)在column上加700 μl SPW Wash Buffer（无水乙醇稀释），10,000×g室温离心1min,弃滤过液，column放入原管；（SPW Wash Buffer必须为室温）(8)OPTIONAL：重复步骤(7)；(9)弃滤过液，空的column以最高速（≥ 13,000×g）离心2min；(10)将column放入干净的1.5 ml离心管，想柱中心加30 ~ 50 μl Elution Buffer，室温放置1min，最高速（≥ 13,000×g）离心1min以洗脱DNA。
注：洗脱步可以分两次，每一次加入20μl 65℃预热的ddH20，放置2-3min后，13000 rpm离心1 min。
如加入ddH20后4℃放置过夜亦可增加洗脱效率。
从琼脂糖凝胶中回收DNA
7. 加入DR-1 Buffer的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。 注：当分离小于400bp的DNA片段时， 应在此溶液中再加入终浓度为20%的 异丙醇。 8. 将试剂盒中的Spin Column安置于 Collection Tube上。 9. 将步骤7的溶液转移至Spin Column中， 12,000rpm离心1分钟，弃滤液。 注：如将滤液再加入Spin Column中离 心一次，可以提高DNA回收率。
五、实验结果与讨论
1. 实验结果 2. 讨论
附I： TaKaRa Agrose Gel DNA Purification Kit Ver2.0回收DNA 的操作步骤
1. 使用TAE或TBE缓冲液制作琼脂糖 凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖 凝胶电泳。 2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼 脂糖凝胶。应注意尽量切除不含目 的DNA部分的凝胶，尽量减少凝胶 体积，提高DNA回收率。 注: 切胶时不要将DNA长时间暴露 于紫外灯下，以防DNA损失。
五、注意事项
切胶时不要将DNA长时间暴露于紫外灯下， 以防DNA损失。 胶块一定要充分融化,否则会严重影响 DNA的回收率。 混合振荡操作不要过于剧烈。 灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60゜C 使用时有利于提高洗脱效率。 DNA需长期保存时，建议使用Elution Buffer。 纯化的DNA用于序列分析时，最好使用灭 菌的双蒸水进行DNA的洗脱。
10.将500µ L的Rinse A加入Spin Column 中， 12,000rpm离心30秒，弃滤液。 11.将700µL的Rinse B加入Spin Column 中，12,000rpm离心30秒，弃滤液。 12.重复步骤11。 13.将Spin Column安置于新的1.5mL的离 心管上，在Spin Column膜的中央处加 入25µ L的灭菌蒸馏水或Elution Buffer， 室温静置1分钟。 注：把灭菌蒸馏 水或Elution Buffer加热至60゜C使用 时有利于提高洗脱效率。 14.12,000rpm离心1分钟洗脱DNA。
PCR产物的TA克隆(DNA的胶回收和连接) PCR实验技术
PCR产物的TA克隆(DNA的胶回收和连接)【实验原理】1.DNA片段回收方法：DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中，通上一定电压进行电泳，不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。
切下带有所需DNA片段的凝胶，用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片段回收纯化。
2.利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3’T突出端的载体，在连接酶作用下，可以把PCR产物插入到质粒载体的多克隆位点，可用于PCR产物的克隆和测序。
商品化的T载体有很多。
本实验采用TaKaRa公司的pMDTM18-T Simple Vector。
这个载体以pUC19载体为基础，消除了pUC18载体上的多克隆酶切位点，经EcoRⅤ酶切后在两侧的3＇端添上“T”制备而成（见附录1）。
由于本载体上消除了多克隆酶切位点，克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。
【试剂与器材】（一）试剂1.pMDTM18-T Simple Vector Kit（Takara公司）。
2.TAE电泳缓冲液3.琼脂糖（Agarose）4.6×电泳加样缓冲液：0.25％溴粉蓝，40％(w/v) 蔗糖水溶液，贮存于4℃。
5.溴化乙锭(EB)溶液母液：配制成10mg/mL，用铝箔或黑纸包裹容器，储于室温即可。
6.70%乙醇7.胶回收试剂盒（Omega公司）（二）器材水平式电泳装置,电泳仪,台式高速离心机, 恒温水浴锅, 微量移液枪, 微波炉或电炉,紫外透射仪, 凝胶成像系统或其它照相设备。
【操作方法】（一）胶回收试剂盒回收PCR产物（以Omega公司Gel Extraction Kit为例）1.当目的片段DNA完全分离时，转移凝胶至紫外灯上尽可能快地切下目的片段。
2.凝胶块转移至1.5ml离心管(离心管已经称重了)中，称重得出凝胶块的重量。
近似地确定其体积（假设其密度为1g/ml）。
碧云天DNA凝胶回收试剂盒D0056说明书
DNA 凝胶回收试剂盒产品编号 产品名称包装 D0056DNA 凝胶回收试剂盒50次产品简介：碧云天的DNA 凝胶回收试剂盒(DNA Gel Extraction Kit)，是一种用于从DNA 琼脂糖凝胶中回收目的DNA 的试剂盒。
本试剂盒采用了融胶液，可以使琼脂糖凝胶完全融化。
同时采用了一种新型的离子交换柱，在特定条件下，使DNA 能在离心过柱的瞬间，结合到DNA 纯化柱上，在一定条件下又能将DNA 充分洗脱，从而实现DNA 的快速纯化。
无需酚氯仿抽提，无需酒精沉淀，通常12个样品只需不足20分钟即可完成。
每个DNA 纯化柱可以结合的DNA 量的上限约为15微克。
适用于从DNA 琼脂糖凝胶(agarose gel)电泳后割取的含有目的DNA 的凝胶块中快速提取DNA 。
该目的DNA 通常为PCR 产物、质粒DNA 酶切出来的DNA 片段、超螺旋质粒DNA 单酶切后的线性化产物和DNA 连接产物等。
本试剂盒适用于纯化100bp-10kb DNA 。
长至30个碱基的引物均可被完全去除。
DNA 回收效率通常为60-90%。
接近100bp 或10kb 的DNA 片段回收效率要略低一些，大于10kb 的DNA 回收效率迅速下降。
另外如果样品中DNA 含量特别低也会导致回收效率下降。
本试剂盒纯化所得DNA 可直接用于酶切，连接，转化细菌，测序，PCR ，杂交等后续操作。
每个试剂盒足够用于50个平均重量不超过400微克的凝胶样品。
包装清单：产品编号 产品名称 包装 D0056-1 溶液I (融胶液) 20mlD0056-2 溶液II (洗涤液) 26ml (第一次使用前加入39ml 无水乙醇)D0056-3 溶液III (洗脱液)3mlD0056-4DNA 纯化柱及废液收集管50套 —说明书1份保存条件：室温保存，一年有效。
注意事项：第一次使用前在溶液II (洗涤液)中加入39ml 无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
爱德基游离DNA提取试剂盒使用说明书
游离DNA提取试剂盒使用说明书【产品名称】通用名称：游离DNA提取试剂盒英文名称：Cell Free DNA Extraction Kit【包装规格】24人份/盒、48人份/盒、96人份/盒【预期用途】用于核酸的提取、富集、纯化等步骤。
其处理后的产物用于临床体外检测使用。
【实验原理】本试剂盒采用具有分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，在特定的盐离子浓度和pH值条件下，磁珠特异的吸附小片段的游离DNA，不吸附基因组DNA。
能够更好的适用于产前无创诊断和癌症基因分析诊断。
【主要组成成分】另需要准备的试剂及注意事项无水乙醇（分析纯）、超纯水或去离子水。
【储存条件及有效期】试剂盒储存在常温，有效期12个月。
【适用仪器】高速冷冻离心机、真空负压装置及真空泵【样品要求】1用装有EDTA抗凝剂的采血管取病人或孕妇（孕12-24周）5 mL全血，上下颠倒混匀，4℃运输。
2 在离心机中3000 rpm 的转速下，离心10min 分离血清。
按2mL/支收集血清,直接进入下一步实验或-20℃储存。
●使用前用无水乙醇稀释漂洗液，做好标记√。
●现配制80%乙醇：取20mL超纯水，加入80mL的无水乙醇，上下颠倒混匀。
【实验步骤】1. 血清/血浆样本预处理取1mL血清/血浆12000rpm 离心10 min，收集上清，用于游离核酸的提取。
注意:也可将血清/血浆样本在6000×g下离心30min以去除剩余的血细胞和细胞碎片。
2.蛋白酶K处理2.1 按照下表指示顺序，添加试剂到15mL离心管：试剂体积血浆/血清体积1mL 2mL 4mL 10ml蛋白酶K(20mg/mL) 20μL 40μL 80μL 200µL20%SDS 130μL 260μL 520μL 1040µLtotal 1.15mL 2.30mL 4.60mL 11.24 ml注意：不要将SDS直接加到蛋白酶K中，以避免蛋白酶K失去活性。
DNA Gel-extraction ki(中文)
玻璃奶胶回收试剂盒2.产品优势BNT 玻璃奶胶回收试剂盒具有以下优点：●快速 - - 用 < 20 min 从琼脂糖凝胶中回收DNA ●可靠 - - 优化的缓冲液保证了DNA 纯度 ●优质 - - 纯化DNA 适于任何下游应用 ●安全 - - 无需有机溶剂 ●灵便 - - 无需繁复技术3.储存条件及稳定性◆自购买之日起，所有BNT 玻璃奶胶回收试剂盒组分在22-25℃下都能保质至少24个月。
请确保未使用时结合缓冲液瓶盖紧盖。
4.结合能力■ 5ul BNT 微珠能结合多至5 -10ug DNA■ 纯化次数基于琼脂糖凝胶浓度及DNA 片段大小。
一般来说， < 100bp 的DNA 片段或从 > 2% 的琼脂糖凝胶中回收DNA 需要附加的结合缓冲液以达到试剂盒预期的使用次数。
（结合缓冲液能单独购买，货号为Binding-200）。
5.使用者自备材料： ▼50 - 55℃ 水浴▼至少耐转速10，000 g 的微量离心管 ▼无核酸酶的1.5ml 离心管 ▼无菌去离子水（或TE 缓冲液） ▼无水乙醇（96%-100%乙醇） ▼保护性眼罩6.BNT玻璃奶胶回收步骤⑴进行琼脂糖胶/ EB电泳分离不同DNA片段。
可使用所有类型或级别的琼脂糖。
强烈推荐使用新制TAE缓冲液作为电泳缓冲液。
不要重复使用电泳缓冲液，其pH会升高，降低回收得率。
也可使用TBE，但必须新制。
⑵各条带分离到恰当位置时，在紫外光盒中仔细切下含有目的片段的琼脂糖胶，尽量切除DNA片段周围的琼脂糖胶。
不要让DNA暴露在紫外光下超过30秒。
使用UV光时，总是使用保护性眼罩。
⑶估计凝胶块体积，将其置于1.5ml微量离心管中称重。
假设凝胶密度为1g/ml，凝胶体积如下推算：质量为0.2g的凝胶块体积为0.2ml。
加入与凝胶等体积的Ultra-Sep结合缓冲液。
通过震荡重悬BNT微珠，将10ul Ultra-Sep微珠转移至样品中。
将混合物置于50-65C10min，或直到凝胶完全溶解。
Thermo-Scientific-GeneJET-Gel-Extraction-Kit(k069)-product-information
保存和稳定性：试剂盒要保存在室温下（15-25度）。
建议将纯化柱保存在4度，可储存多于一年。
任何在保存过程中产生的沉淀都可以在37度恒温中溶解，然后在使用之前冷却至室温。
说明书The GeneJET™Gel Extraction Kit，设计的目的是从在TAE 或者TBE缓冲液里电泳的标准或者低熔点的琼脂糖凝胶中，高效快速回收纯化DNA片段。
这个试剂盒以便利的旋转层析柱的基础上，应用了基于二氧化硅薄膜的专利技术。
试剂盒可以用于纯化20-25bp大小的DNA片段。
在100bp–10kb DNA 片段大小范围内，回收率提高到95%。
每个GeneJET 纯化柱可纯化高达25μg DNA，可用高达1克的琼脂糖凝胶。
整个过程只用15分钟，分离的DNA片段将用于普遍的下游应用，包括连接反应，限制性设计，PCR，测序和分子标记。
原理：目的DNA片段经琼脂糖凝胶电泳后分割，将其置于微型离心管中，用Binding Buffer 溶解后上柱，Binding Buffer中的促溶剂可以溶解琼脂糖，变性蛋白质，促进DNA结合到层析柱的硅膜上。
另一点方便的是，Binding Buffer中含有颜色指示剂，可以检测DNA结合最好时的溶液PH，杂质经过简单的清洗步骤就可以去除。
纯化的DNA用Elution Buffer 从层析柱中洗脱出来，回收的DNA可用于下游应用。
重要的注意事项:2、加入乙醇后，在盒子的复选框中标记，以注明完成的步骤。
3、每次用之前，检验Binding Buffer是否生成沉淀。
假如有沉淀，将溶液置于37度使其溶解，然后冷却至25度。
4、用Binding Buffer时要带手套，因为里面含有刺激性物质。
5、当提取的DNA直接用于测序时，不能使用重复利用的电泳缓冲液。
额外的材料和需要的设备：96-100%乙醇异丙醇3 M醋酸钠，PH5.2（可能不用）微型离心机1.5或2毫升微型离心管加热器或水浴锅开始前多注意事项：1、开始操作前阅读注意事项。
Geneaid GenepHlowTM Gel PCR 通用型DNA 纯化回收试剂盒说明书
完整说明书(英文)下载如果您是第一次使用本产品或对本产品的操作步骤不熟悉，请您经由扫描QR code 下载并详阅完整说明书一、从琼脂糖凝胶中回收DNA 片段1. 凝胶融解将单一的目的DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分，凝胶重量不超過300 mg ）放入干净的离心管中． 向胶块中加入500 μl 溶液Gel/PCR, 55-60ºC 水浴放置10-15分钟，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解．注意：凝胶完全融解后应呈现黄色，即可进行后续操作。
如果胶完全融解后溶液的颜色为紫色，请使用10 μl 3M 乙酸钠（pH 5.0）将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作．（溶液Gel/PCR 中含有pH 指示剂，当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色，此时DNA 才能够有效的与膜结合，当pH 值偏高时溶液的颜色变为紫色，需要进行调整．）2. 吸附将吸附柱DFH 放入2 ml 收集管中． 待溶液温度降至室温后，将所得溶液加入吸附柱ＤＦＨ中，以14-16,000 ×g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中．3. 漂洗向吸附柱DFH 中加入400 μl 漂洗液W1，以14-16,000 ×g 离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中． 向吸附柱DFH 中加入600 μl 漂洗液Wash （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），静置1分钟后以14-16,000 ×g 离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱DFH 放入收集管中． 以14-16,000 ×g 离心3分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除．注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切，PCR 等）实验．4. 洗脱将吸附柱DFH 放入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl 洗脱缓冲液EB ，（如果回收的目的片段>5 kb ，则洗脱缓冲液EB 应置于60ºC 水浴预热），室温放置2分钟． 以14-16,000 ×g 离心2分钟收集DNA 溶液．注意：1. 为了增加DNA 回收率，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，室温放置２分钟，以14-16,000×g 离心2 分钟，将DNA 溶液收集到离心管中． 2. 如果使用ddH 2O 做洗脱液，需保证其pH 值≥8.0，pH 值低于8.0会降低洗脱效率．Instruction Manual Download完整说明书(英文)下载如果您是第一次使用本产品或对本产品的操作步骤不熟悉，请您经由扫描QR code 下载并详阅完整说明书二、从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 (回收DNA进行测序实验)1. 凝胶融解 将单一的目的DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分，凝胶重量不超過300 mg ）放入干净的离心管中． 向胶块中加入500 μl 溶液Gel/PCR, 55-60ºC 水浴放置10-15分钟，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解．注意：凝胶完全融解后应呈现黄色，即可进行后续操作．如果胶完全融解后溶液的颜色为紫色，请使用10 μl 3M 乙酸钠（pH 5.0）将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作．（溶液Gel/PCR 中含有pH 指示剂，当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色，此时DNA 才能够有效的与膜结合，当pH 值偏高时溶液的颜色变为紫色，需要进行调整．）2. 吸附将吸附柱DFH 放入2 ml 收集管中． 待溶液温度降至室温后，将所得溶液加入吸附柱DFH 中，以14-16,000 ×g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中．3. 漂洗向吸附柱DFH 中加入600 μl 漂洗液Wash （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），静置1分钟后以14-16,000 ×g 离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱DFH 放入收集管中． 重复向吸附柱DFH 中加入600 μl 漂洗液Wash （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），以14-16,000 ×g 离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱DFH 放入收集管中，以14-16,000 ×g 离心3分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除．注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、ＰＣＲ等）实验．4. 洗脱将吸附柱DFH 放入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl 洗脱缓冲液EB ，（如果回收的目的片段>5 kb ，则洗脱缓冲液EB 应置于60ºC 水浴预热），室温放置2分钟． 以14-16,000 ×g 离心2分钟收集DNA 溶液．注意：1. 为了增加DNA 回收率，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，室温放置２分钟，以14-16,000×g 离心2 分钟，将DNA 溶液收集到离心管中． 2. 如果使用ddH 2O 做洗脱液，需保证其pH 值≥8.0，pH 值低于8.0会降低洗脱效率．Instruction Manual Download完整说明书(英文)下载如果您是第一次使用本产品或对本产品的操作步骤不熟悉，请您经由扫描QR code 下载并详阅完整说明书三、从PCR 反应液或酶切反应液中回收DNA 1. 样品前处理取20-100 μl PCR 反应液或酶切反应液加入1.5 ml 离心管中，向其中加入五倍体积溶液Gel/PCR ，充分混匀（无需去除石蜡油或矿物油）． 注意： 如PCR 反应体系为50 μl （不包括石蜡油体积），则加入250 μl 溶液Gel/PCR ． 樣品混匀后溶液应呈现黄色，即可进行后续操作． 如果溶液的颜色为紫色，请加入10 μl 3M 乙酸钠（pH 5.0）将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作． 2. 吸附将吸附柱DFH 放入2 ml 收集管中． 将上一步所得溶液加入吸附柱DFH 中，以14-16,000 ×g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中． 注意：吸附柱容积为750 μl ，若样品体积大于750 μl 可分批加入．3. 漂洗向吸附柱DFH 中加入600 μl 漂洗液Wash （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），静置1分钟后以14-16,000×g 离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱DFH 放入收集管中． 以14-16,000×g 离心3分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除． 注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切，PCR 等）实验．4. 洗脱将吸附柱DFH 放入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl 洗脱缓冲液EB ，（如果回收的目的片段>5 kb ，则洗脱缓冲液EB 应置于60ºC 水浴预热），室温放置2分钟． 以14-16,000 ×g 离心2分钟收集DNA 溶液．注意：1. 为了增加DNA 回收率，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，室温放置２分钟，以14-16,000×g 离心2 分钟，将DNA 溶液收集到离心管中． 2. 如果使用ddH 2O 做洗脱液，需保证其pH 值≥8.0，pH 值低于8.0会降低洗脱效率．Instruction Manual Download。
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玻璃奶胶回收试剂盒
2.产品优势
BNT 玻璃奶胶回收试剂盒具有以下优点：
●快速 - - 用 < 20 min 从琼脂糖凝胶中回收DNA ●可靠 - - 优化的缓冲液保证了DNA 纯度 ●优质 - - 纯化DNA 适于任何下游应用 ●安全 - - 无需有机溶剂 ●灵便 - - 无需繁复技术
3.储存条件及稳定性
◆自购买之日起，所有BNT 玻璃奶胶回收试剂盒组分在22-25℃下都能保质至少24个月。
请确保未使用时结合缓冲液瓶盖紧盖。
4.结合能力
■ 5ul BNT 微珠能结合多至5 -10ug DNA
■ 纯化次数基于琼脂糖凝胶浓度及DNA 片段大小。
一般来说， < 100bp 的DNA 片段或从 > 2% 的琼脂糖凝胶中回收DNA 需要附加的结合缓冲液以达到试剂盒预期的使用次数。
（结合缓冲液能单独购买，货号为Binding-200）。
5.使用者自备材料： ▼50 - 55℃ 水浴
▼至少耐转速10，000 g 的微量离心管 ▼无核酸酶的1.5ml 离心管 ▼无菌去离子水（或TE 缓冲液） ▼无水乙醇（96%-100%乙醇） ▼保护性眼罩
6.BNT玻璃奶胶回收步骤
⑴进行琼脂糖胶/ EB电泳分离不同DNA片段。
可使用所有类型或级别的琼脂糖。
强烈推
荐使用新制TAE缓冲液作为电泳缓冲液。
不要重复使用电泳缓冲液，其pH会升高，降低回收得率。
也可使用TBE，但必须新制。
⑵各条带分离到恰当位置时，在紫外光盒中仔细切下含有目的片段的琼脂糖胶，尽量切除
DNA片段周围的琼脂糖胶。
不要让DNA暴露在紫外光下超过30秒。
使用UV光时，总是使用保护性眼罩。
⑶估计凝胶块体积，将其置于1.5ml微量离心管中称重。
假设凝胶密度为1g/ml，凝胶体
积如下推算：质量为0.2g的凝胶块体积为0.2ml。
加入与凝胶等体积的Ultra-Sep结合缓冲液。
通过震荡重悬BNT微珠，将10ul Ultra-Sep微珠转移至样品中。
将混合物置于50-65C10min，或直到凝胶完全溶解。
在溶解过程中每2min摇振以促进混合。
对于小于400bp的DNA片段或>2%的琼脂糖凝胶，使用凝胶块体积或质量3倍的结合缓冲液。
重要：待凝胶完全溶解后，监测凝胶/结合缓冲液混合物的pH值。
pH > 8.0会导致DNA 产量明显降低。
若混合物颜色变成橙色或红色，请加入5ul 5M醋酸钠（pH5.2），降低pH值。
经此调整，凝胶/结合缓冲液混合物应当变成浅黄色。
⑷室温下，于微量离心管中以10，000Xg离心1min沉淀微珠。
弃去液体。
⑸加入300ul Ultra-Sep结合缓冲液洗涤微珠，通过涡振重悬沉淀微珠。
以10，000Xg离心
1min。
弃去液体。
注意：额外的结合缓冲液可以单独订购，见产品目录或致电客服以获得详细信息。
⑹加入700ul用无水乙醇稀释的DNA洗涤缓冲液，涡振重悬沉淀微珠。
10，000Xg离心1min
沉淀微珠。
注意：DNA洗涤缓冲液必须在使用前用无水乙醇稀释。
请参照瓶上标签指导。
⑺弃去液体并完全去除微量离心管中的液体。
使沉淀在空气中干燥10-15min。
此步骤对于
良好DNA得率很关键。
⑻向管中加入15-50ul洗脱缓冲液（10mMTris，pH8.5）（根据终产品需要的浓度添加）。
通
过涡振重悬沉淀。
在50℃水浴中温育5min。
10，000Xg离心1min沉淀微珠。
⑼仔细将上清液移至干净管中。
上清液中现已含有纯化的DNA。
这是结合DNA 的80-90%。
可选地，可以进行第二次洗脱，这能得到残余的DNA，但浓度更低。
注意：从Ultra-Sep 微珠洗脱DNA的效率依赖于pH值。
如果用水洗脱DNA，确保pH大约在7.5 - 8.0。
⑽DNA产量和质量：将样品进行恰当稀释，测定260nm和280nm的吸光度。
DNA浓度如下计算：260DNA浓度=吸光度260X50X稀释倍数g/ml。
一般大于500bp的片段纯化得率>80%。
50-500bp片段得率为55%-80%。
吸光度260：吸光度280比值表示核酸纯度。
该值大于1.8表示核酸纯度>90%。
可选地，有时通过琼脂糖凝胶/EB电泳能最好地确定得率（和质量）。