江北区GPS监控 GPS 定位 安防 GPSONE 手机免费GPS概要
GPS导航使用说明
GPS导航使用说明1.功能介绍：GPS导航系统主要具有以下功能：-定位功能：通过GPS技术，可以准确地确定当前位置，包括经度、纬度和海拔高度。
-地图显示：导航系统可以显示当前位置、目的地和沿途的街道、道路和地标等。
-路线规划：根据用户的起点和目的地，导航系统可以自动规划最佳路径，并提供详细的导航指引。
-声音导航：导航系统可以通过语音提示告知用户下一步操作，如左转、右转、保持直行等。
-实时交通信息：部分导航系统可以提供实时路况信息，包括交通堵塞、道路工程和事故等。
-兴趣点：用户可以并导航到附近的兴趣点，包括餐厅、加油站、酒店、景点等。
2.安装和操作：使用GPS导航系统需要进行以下几个步骤：-启动：打开导航设备或应用程序，并允许GPS导航系统获取设备的位置信息。
-设置目的地：输入目的地的地址或名称，导航系统将自动规划最佳路径。
-导航开始：在确认目的地后，导航系统将开始提供导航指引。
根据需要，可以选择声音导航或只使用地图显示进行导航。
-路途调整：如果需要中途停留或改变目的地，可以通过导航系统的设置选项进行调整。
-导航结束：当到达目的地时，导航系统会自动停止引导，并根据需要提供其他导航或路线选择。
3.注意事项：-更新地图：GPS导航系统的地图需要定期更新，以确保获得最新的道路和地理信息。
建议根据使用频率至少每年进行一次地图更新。
-防止干扰：使用GPS导航系统时，确保设备处于无阻挡的位置，避免遮挡物干扰GPS信号接收。
-路况监测：如果导航系统提供实时交通信息功能，可以及时了解道路上的交通情况，并做出相应的路线调整。
-安全驾驶：在使用GPS导航系统的过程中，要时刻保持专注驾驶，遵守交通规则，不要因为关注导航设备而忽视路况和交通安全。
总而言之，GPS导航系统是一个非常方便实用的工具，可以帮助用户准确定位自己的位置，并提供最佳的路线规划和导航指引。
尽管使用GPS 导航系统相对简单，但仍需注意安装、操作和更新地图等细节，以确保正常使用并确保行车安全。
DGPS、AGPS和GPSOne的区别
DGPS(Difference Global Positioning System英文单词的缩写)，即差分全球定位系统。
由于当前GPS全球卫星定位系统精度不能满足人们定位导航的需要，因此，研究人员提出了差分定位系统的概念。
其方法是在已精确测定坐标的参照物上设置GPS接收机，并和移动台上的GPS接DGPS知识详解什么是DGPS？DGPS(Difference Global Positioning System英文单词的缩写)，即差分全球定位系统。
由于当前GPS 全球卫星定位系统精度不能满足人们定位导航的需要，因此，研究人员提出了差分定位系统的概念。
其方法是在已精确测定坐标的参照物上设置GPS接收机，并和移动台上的GPS接收机同步观测不少于四颗的同一组卫星，求得该时刻的差分修正数(位置差分、伪距差分、相位平滑伪距差分和相位差分等修正数)，通过无线电数据链把这些改正数实时播发给在附近工作的移动台(用户)或事后传送给移动台(用户)，由移动台(用户)用所收到的差分改正数对其GPS定位数据进行实时修正，其目的是消除公共误差项，有效地减弱相关误差的影响，进而获得更精确的定位结果，提高定位精度。
DGPS相对于GPS能为用户的导航定位精度带来数量级的提高，在飞机精密进场着陆、无人机、弹道轨迹测量、车辆定位导航等航空、航天、航海及车载领域得到应用。
DGPS的分类DGPS是克服SA的不利影响，提高GPS定位精度的有效手段，可达到Ⅲ级及以上精度。
根据DGPS基准站发送的信息方式可将差分GPS定位分为三类，即：位置差分、伪距差分和相位差分。
根据DGPS的区域一般可分为区域DGPS、广域DGPS和全球DGPS，目前，全球DGPS正在探索中。
位置差分、伪距差分和相位差分这三类差分方式的工作原理是相同的，都是由基准站发送修正数，由用户站接收并对其测量结果进行改正，以获得精确的定位结果。
所不同的是，发送修正数的具体内容不一样，其差分定位精度也不同。
重庆地名GPS数据
107.026703 107.016876 107.013962 107.017609 107.014908 107.035721 107.004906 107.030479 107.014259 107.027863 107.010567 107.000702 107.005074 107.003235 107.001556 107.004433 107.005379 107.003014 107.001389 107.001945 107.004944 107.00383 107.004349 107.001816 107.001984 107.004303 107.003105 107.00396 107.009193 107.017006 107.021088 107.017433 107.004387 107.003143 107.004257 107.014992 107.010567 107.013405 107.002197 107.023056 107.021172 107.023575 107.020912 107.012245 107.012497 107.007652 107.004349 107.002548 107.014687 107.010788 107.0131 107.016106 107.023186 107.022758
N 31.055904 31.08882 30.645718 30.654259 30.65177 30.608683 30.613876 30.616108 30.625893 30.63662 30.640955 30.643272 30.641298 30.674473 30.656361 30.632286 30.764164 30.784164 30.772877 30.767899 30.726185 30.743008 30.742235 30.759357 30.718502 30.710949 30.706444 30.702709 30.702238 30.699234 30.688248 30.729876 30.7479 30.745197 30.749401 30.716957 30.795107 30.794891 30.852013 30.835276 30.833645 30.793091 30.799913 30.796223 30.803131 30.799011 30.794464 30.782532 30.781158 30.793949 30.891581 30.889477 30.881065
gpsOne简介
场景
开阔环境（终端能收到3 颗以上GPS卫星信号） 半开阔环境（终端只能 收到3颗以下GPS卫星信 号） 室内/外定位（无卫星信 号，但无线信号较好）
定位误差
5~50m
30~200m
70~300m
MCS
CS
使用多个基站扇区中心的加权平均
使用目前服务基站扇区中心位置
室内定位（无线信号不 足以实现AFLT计算）
室内定位（信号不良）
500~1500m
取决于扇区覆盖区 域大小 （150~3000）
BS Region
Default
使用SID和NID区域内所有基站组成的 矩形的中心点，误差很大
（3）WARN站信息
WARN站是指在全国10个城市设置的GPS接收机，用于接收GPS卫星信 息，协助终端完成AGPS定位的GPS信息搜索。
（4）GPS卫星的信号
GPS卫星信号是GPS定位的基础。gpsOne定位技术所支持的GPS定位方 法均需要GPS卫星采集的数据作为计算依据。
gpsOne定位基本原理
（ 5 ） PDE 根 据 终端测量进行定 位计算
定位流程
用户终端启动主动的MSA方式，发起cdma2001x或EVDO网络 拨号，TCP/IP与PDE建立连接，上报终端当前收到的无线网络信 息。
（1）PDE根据终端上报的信息进行BS Lookup,找到当前服务基站，再对上报的邻区PN列 表进行PN Lookup，根据PN查找结果，决定选择计算方法（从AFLT、MCS、CS、 BS Region中选择），写成用户位置初步运算，确定用户所在地区的范围。 （2）PDE启用AGPS方式，通过网络把GPS星历信息发送给终端，辅助终端进行GPS定 位计算。 （3）终端根据PDE下发的AGPS辅助信息进行测量，把测量结果和无线网络信息进行测 量，把测量结果和无线网络信息返回给PDE. （4）PDE根据终端上报的信息，尝试进行GPS、Hybrid等定位方法的计算。 （5）PDE比较前后两次计算结果的水平误差，选择水平误差最小的定位结果，并返回给
GSMGPRSGPS定位追踪器使用手册
GSM/GPRS/GPS定位追踪器使用手册序言.非常感谢您购买我们的102型GPS定位跟踪器。
使用手册将详细的说明如何操作本产品。
因此务必请您在使用产品前认真的阅读本份使用手册。
如有更改,恕不另行通知。
每次更改将统一在最新的一次产品销售中发布。
生产商对于使用手册其中的过失和疏漏不承担法律责任。
目录1 简介---------------------------------------------------------------------------------- 32 应用领域---------------------------------------------------------------------------------- 33 硬件3.1 前面---------------------------------------------------------------------------------------- 33.2 后面----------------------------------------------------------------------------------------- 33.3 侧面--------------------------------------------------------------------------------------- 33.4 底面----------------------------------------------------------------------------------------- 43.5 内部---------------------------------------------------------------------------------------- 44 规格描述------------------------------------------------------------------------------------- 45 使用说明5.1 SIM卡的放置-------------------------------------------------------------------------------- 55.2 电池和充电器------------------------------------------------------------------------------ 55.3 设备启动------------------------------------------------------------------------------------ 65.4 初始化设置---------------------------------------------------------------------------- 65.5 设置密码------------------------------------------------------------------------------------- 65.6 授权设置------------------------------------------------------------------------------------ 75.7 单次定位------------------------------------------------------------------------------------- 75.8 自动连续定位------------------------------------------------------------------------------- 75.9 监听---------------------------------------------------------------------------------------- 75.10 “定位模式”和“监听模式”的转换---------------------------------------------- 75.11 电子栅栏-------------------------------------------------------------------------------- 85.12 移位报警------------------------------------------------------------------------------ 85.13 超速报警--------------------------------------------------------------------------------- 85.14 IMEI码查询--------------------------------------------------------------------------- 95.15紧急报警-------------------------------------------------------------------------------- 95.16 底电报警------------------------------------------------------------------------------ 95.17隐藏号码定位------------------------------------------------------------------------- 95.18 设置平台短信中心号-------------------------------------------------------------------- 95.19 GPRS的设置--------------------------------------------------------------------------- 96 警告注意------------------------------------------------------------------------ 117 故障处理方法----------------------------------------------------------------------- 111 简介本产品基于GSM/GPRS网络和GPS卫星定位系统,通过短信息或互联网对远程目标进行定位或监控.。
GPS定位监控系统-通用版V1.0_使用说明书
GPS车辆监控系统(标准版) V1.0用户使用说明书目录目录 (2)关于本手册 (5)1.引言 (5)1.1.编写目的 (6)1.2.背景 (6)1.3.术语和缩写 (6)2.系统概述 (6)2.1.系统菜单概述 (6)3.安装 (8)3.1.运行环境 (9)3.1.1.硬件需求 (9)3.1.2.支持软件 (9)3.2.安装过程 (9)4.操作说明 (13)4.1.功能操作说明 (13)4.1.1.系统登录 (13)4.1.2.权限控制 (14)4.1.3.锁定 (14)4.1.4.注销 (15)4.1.5.退出 (15)4.1.6.同步基本资料 (16)4.1.7.连接通讯服务器 (16)4.1.8.系统配置 (16)4.1.9.地图操作 (21)4.1.10.回传设置 (25)4.1.11.断开油路 (27)4.1.12.恢复油路 (27)4.1.13.主动监听 (28)4.1.14.解除报警 (28)4.1.15.终端设置 (29)4.1.16.车辆跟踪 (30)4.1.17.车辆实时状态 (31)4.1.18.指令发送状态 (32)4.1.19.发出短语数据 (32)4.1.20.收到短语数据 (32)4.1.21.车辆报警数据 (32)4.1.23.电子围栏 (33)4.1.24.搜索车辆 (35)4.1.25.范围查车 (36)4.1.26.车辆报警 (37)4.1.27.车辆处警 (38)4.1.28.信息发送 (41)4.1.29.历史信息 (42)4.1.30.车辆信息 (46)4.1.31.轨迹回放 (48)4.1.32.车辆巡检 (50)4.1.33.车辆里程统计 (50)4.1.34.插件管理 (51)4.1.35.单次定位 (52)4.1.36.电子围栏设置查询 (52)4.1.37.计划指令设置 (53)4.1.38.计划运行日志查询 (58)4.1.39.操作日志查询 (59)4.1.40.登录WebGPS (60)4.1.41.报表查看 (60)4.2.贷款功能操作说明............................................................................. 错误!未定义书签。
中国电信gpsOne定位业务Android手机使用指南
中国电信gpsOne定位业务Android手机使用指南随着智能机的推广，用户越来越青睐于使用智能机，但是智能机的设置开放也致使因终端移动网络、定位功能设置不正确而导致定位失败的增加。
目前多合作方反馈智能机的定位成功率较非智能机定位成功率低。
本文对中国电信精定位（gpsOne）业务，定位终端设备要求进行说明，并针对安卓系统手机使用gpsOne定位业务的正确设置方法进行详细说明。
1gpsOne定位业务用户侧注意事项定位业务的成功需要平台侧、用户侧、网络侧的配合。
定位成功需要用户侧配合或满足的条件有：A、被定位终端支持gpsOne定位；B、被定位终端必须设置正确（本文第二部分详细说明）；C、被定位号码状态正常，不能是欠费、停机、空号的手机号码；D、被定位号码需要开通移动上网功能；E、被定位号码需要开通短信功能；F、被定位时不能占线（语音或数据通道占用）；G、被定位终端保持开机状态；以上所有条件必须全部满足才能定位成功，所以用户在使用定位业务时，一定要注意所列事项，以保证定位条件。
2网络设置智能终端有很多的设置是开放的，给用户带来更多方便，但也相对增加了对用户的使用技术要求。
在gpsOne定位业务中，要求定位终端必须开启移动网络和GPS功能，本节将以华为C8600为例详细介绍设置方法。
2.1移动网络开启与设置用户在使用gpsOne定位业务时，必须将移动网络开启，并且将接入点设置使用CTWAP连接网络。
详细步骤：步骤一：打开设置页面。
方法：在应用页面或menu菜单中点击设置按钮打开设置页面，如下图。
步骤二：选择设置页面中“无线和网络”，在打开的“无线和网络设置”页面，选择“移动网络”打开移动网络设置页面，如下图。
步骤三：接入点设置。
选择移动网络设置页面中“接入点名称”，打开联网设置页面，选取“中国电信WAP 设置CTWAP ”并确认，如下图。
步骤四：移动数据网络开启。
选择移动网络设置页面中的“数据服务”，打开“网络应用管理”页面，选择“数据服务”开启数据网络。
Gpsone使用手册
Gpsone使用手册Gpsone使用说明手册（内部资料，不得外传）gpsone说明手册目录1.支持gpsone定位的手机2.gpsone定位服务的客户3.手机如何开通定位业务4.常见问题解释5.售后问题汇总6.个人定位器常见问题解答1、可以定位的手机型号？2、gpsone定位服务的客户（一）对弱势群体的追踪：1、小孩子，现在市面上就有很多书包式的跟踪器，让家长在办公室里面就知道自己的孩子身在何处，而且这也有安全的道理在里面，如防绑架等等。
2、老人，就有一种老人用的专用定位拐仗等，让老人随身带的产品，老人带上此类产品以后，方便家人找到目标，也可以在他如摔倒，突然发病的紧急情况的时候，可以按配在老人身上的老人GPS定位器紧急按钮，可以让家人以最快的速度找到目标。
3.孕妇，现在的科技已经可以让GPS定位系统与胎心监视器连接起来，达到全面监控胎儿健康情况的目的。
（二）对贵重物品的跟踪：1、货物跟踪，现在跟踪器，可以放在货物内部（不能全金属屏蔽），就可以实现对货物的运动路线进行跟踪，起到防盗，监控的作用2、车辆监控防盗，现在定位跟踪器，已经可以实现对车辆调度和车辆监控。
车辆防盗等功能，配合拥有全国详细电子地图的定位平台，让客人对自己的目标车辆动向了如指掌。
3、手机如何开通定位业务用户将UIM卡装到支持定位之星的CDMA手机中,接着进入联通无限业务，在定位之星的菜单里，找出“用户服务”的子菜单，然后在里边开通定位之星功能并输入我公司提供的援权号后进行授权服务商代码登记。
操作示例：按联通炫键，进入“联通无限”，选择“定位之星”，进入定位之星业务：在该菜单中选择“用户服务”，出现如下界面：选择“注册被定位功能”，出现如下界面：选择“我的授权服务商”，出现如下界面：选择“增加授权服务商”,在出现的申明文件的最下面输入服务提供商的代码（客服人员提供给你的），如下界面：然后按“确定”，再翻到页尾，会出现“提交”两个字，也有时会出现如下界面如果是“提交”就点提交，如果是“援权”就点援权：确定后，出现如下界面：到这里绑定平台的步骤就全部完成了，如果中途出现任何不一样的地方，请联系我们客服人员或者出售手机的地方或者手机厂商。
中国电信人员定位GPSONE业务简介简化
中国电信广西分公司 2021年1月21日
目录
第一部分：背景 第二部分：产品介绍 第三部分：优势亮点
人员定位发展趋势
➢当前移动数据增值业务中短信等消息类业务还占据着主要地位的同时， 定位业务已经初显端倪。社区矫正人员、老年人、儿童、游客、外勤人 员、巡线人员、护林人员、安防人员都已成为人员定位的客户群体，并 伴随着定位业务精度的不断提高、业务功能的不断丰富以及定位业务产 业链的逐步完善，定位业务必然会迈入快速增长的阶段。
人员定位行业应用前景广泛
外勤人员 售后服务 巡线司法 老人儿童 物流快递
目录
第一部分：市场需求 第二部分：产品介绍 第三部分：优势亮点
人员定位（GPSone）业务
➢中国电信人员定位（GPSone）管理系统是基于卫星定位、基站定位、无 线数据通信技术的动态监控综合服务平台。它针对需定位人员，利用 GPSONE定位技术、地理信息系统技术(GIS)、CDMA无线数据通信技术等高 新技术，有效满足政企管理部门在定位管理等方面的需求。
B/S架构 GPSOne定位 历史轨迹
人员定位管理系统功能模块
地图 定位
执勤 管理
中国电信 人员定位 管理系统
消息 管理
统计 查询
系统 管理
定时定位手动定位 短信定位
人员定位管理系统建设意义
定位技术－GPSOne
➢定位精度高：平均定位精度为5 - 50米。 ➢定位灵敏度高：在有CDMA信号覆盖的地方均可定位。 ➢多种定位技术的完美组合：采用无线网络辅助GPS定位和CDMA三角运算定位混合 定位模式，农村、郊区通过GPS定位，室内、地下停车场、高楼林立等GPS定位困 难时采用CDMA三角辅助定位。
MT200-GPS定位追踪器使用说明书
MT200-GPS Positioning trackerUser Manualcontent1.Product Overview and Appearance Introduction 3Product specifications 3button 3Function indicator light 4the belt 4Accessories 52.First use 5How to use the belt 5Charge 7turn on/off 7Parameters set up 83.Instruction and function applications 81. Change password 82. Authorized number 93. Monitoring function 104. Two-way communication 105. SOS emergency calling 116. Real time tracking 117. Tracking regularly by GPRS 118. GPRS data logger 129. Geo-fence 1210. Time zone setting 1311. Low battery alarm and Power on/off automatically 1412. Timing turn on/off tracker 1413. Belt on/off alarm 1414. Leave the home alarm 144.Problems & Diagnostics 161. Product Overview and Appearance IntroductionThe GPS Tracker has the advantages ofwaterproof IP67,low powerconsumption, Long Standby Time(22-24 days) and easy to use. apply to correct the crowd.Product specificationsbuttonMICSpeaker5VTX DXGNDFunction indicator lightRed/yellow– Power indicationThe red light is always on Power chargingThe green light is always on Power charging finishedBlue– GSM indication0.3s on and 0.3s off GSM module is initializing or calling inAlways on GSM network is not registered1s on and 3s off GSM network is registered0.1s on and 3s off GSM network is registered and connected to the server by GPRS Always off GSM in power save modeGreen– GPS indication0.3s on and 0.3s off GPS module is initializing or waiting for the SOS button press toconfirm the calling in number as the authorized numberAlways on Button being pressed1s on and 3s off GPS module is working normally but hasn't fixed position0.1s on and 3s off GPS module is working normally and has fixed positionAlways off GPS module stops workingthe beltAccessoriesScrew driverCharge cablemicro Charge cablePower BankAC adapter2 .First useHow to use the belt——Install the card requirements●Ensure that your tracker has a working SIM card.√● Please make sure SIM card has enough credit.● Please make sure that the SIM is not locked and do not require a passwordto operate.● Please make sure the SIM card is supporting caller ID display.——Install the card steps ：❶ ❷1、open the Rubber back cover2、Open the SIM card cover with a screwdriver ❸3、Open the metal cover of the card slot, insert the SD card and SIM card, and fastenthe metal card cover4、Install the SIM card cover and lock the screw——adjust to suitable size and fixed the belt.❶❷1、Select the suitable size point2、Screwdriver fixed lock headNote:When the lock edge must be aligned with the size point,The screw can come into contact with the wrist strap❸❹3、Insert the plug into the lock4、Complete installation——unlock the belt.1、The key is aligned with the locking hole2、press it on firmly.❸3、opens the lockCharge.Power bank charging1、Tracker charging interface2、Rechargeable contacts areconnected to the charging interfaceof the tracker and The mobilepower supply is mounted on thetracker.turn on/off1、power onWhen you pull the switch that is after the SIM metal card cover, the machine can be powered on2、soft switch button to turn on❶❷1、Press soft key for 3 seconds2、Turn on or off after vibrationNote:The tracker can be turned off when the wrist strap is disconnected Parameters set upTracker supports APP setup software by smart phone or by sending command via SMS or by pc. After setup, please turn the tracker on and positioning in an open environment, please do it every time after turn the tracker on.3.Instruction and function applications1. Change passwordDescription: change user’s passwordSMS Command：$SMS,******;W001,######;!SMS Command explain：$SMS，default password；W001,new password;! Explain:******: user password, the range of 6 digits, default password is 000000######: new password, the range of 6 digits.Note:please switch to the English input method when you input a command by smart phone;tracker will only accept commands from a user with the correct password. Command will be ignored if with wrong password.Example:$SMS,000000;W001,123456;!Read password：$SMS,000000;R001;!Clear password：$SMS,000000;C001;!2. Authorized numberSet the authorized number by SMSDescription: Set authorized phone number and its related functionsSMS Command：$SMS,000000;W010,NO.,Phone Number,ABC;!Explain：NO. authorized number’s serial number range of: 1~3Phone Number authorized number range of: 0~19 charactersA when the parameter ‘A’ is 0, it means disable Geo-fence alarm,otherwise it means enable Geo-fence alarm. Default is 0range of: 0~1B when the parameter ‘B’ is 0, it means disable monitoringfunction, otherwise it means enable monitoring function. Defaultis 0range of: 0~1C when the parameter ‘C’ is 0, it means disable SOS emergencycalling function, otherwise it means enable SOS emergencycalling function. Default is 0range of: 0~1For example：Set the 1st authorized number is 138******** and enable monitoring function.$SMS,000000;W010,1,138****0000,010;!Read authorized No.1 and it’s related authority：$SMS,000000;R010,1;!Clear authorized No.1 and it’s related authority：$SMS,000000;C010,1;!Read all authorized number：$SMS,000000;R010;!Clear all authorized number：$SMS,000000;C010;!Easy authorized phone no. setup by callingTracker only supports three authorized numbers; we can set the authorized number by phone call if there are not set authorized number fully (this function only supports to set the authorized number, not included its related functions). Set as follows：1、Any non-authorized number calls to the tracker over than 10 seconds, thetracker will hang up the line automatically and the yellow light will blink for30 seconds.2、During these 30 seconds, press SOS button less than 3 seconds, and thensuccessfully set this call-in number as a new authorized number and send an SMS to this number to inform the setting is OK.3. Monitoring functionIf enable monitoring function, when the authorized number call to the tracker, it will answer the call automatically and shut down the speaker and the background voice of the tracker will be listened.Note:Please make sure the SIM card installed supports displaying caller ID when you want to enable this function.4. Two-way communicationThe first method：If you turn the monitoring function off when set authorized number, use this authorized number call to tracker, bell will ring, at this time, press the CALLbutton (less than 3s) to answer the phone call, so you can speak each other. The Second methods：If the authorization number was set with the CALL function, Press SOS button for 3 seconds or longer, the device will make a call to authorized numbers one by one and it will stop to make a call if call is answered.5. SOS emergency callingPress SOS button for 3 seconds or longer, tracker will send SOS alarm SMS to all authorized numbers.6. Real time trackingThe tracker will reply a location SMS if there is any authorized number makes a phone call to it.7. Tracking regularly by GPRSDescription: Enable this functionSMS Command：$SMS,000000;W002,APN,Username,Password;W003,IP,Port;W005,X;W009,Y;!Explain：Access point name ofrange of: 0~29 charactersAPN：networkUsername：accesses port’ user name range of: 0~29 charactersPassword：Accesses port’s password range of: 0~29 charactersIP：server’ IP address range of: 0~29 charactersPort：server’s port range of: 0~65535range of: 0~65535, default is 0, unit is 30 X：GPRS upload intervalsecondsExample: if X is 2, and 2*30s=60s, so it means the GPRS upload interval is 60 seconds.Y：GPRS upload mode range of: 0~20：means disable GPRS function，1：means upload by TCP，2：means upload by UDPdefault is 0Example：$SMS,000000;W002, cmnet,;W003,192.168.1.1,8088;W005,1;W009,1;!Read tracking regulary by GPRS:$SMS,000000;R002;R003;R005;R009;!Clear tracking regulary by GPRS:$SMS,000000;C002;C003;C005;C009;!8. GPRS data loggerTracker has build in 8M bytes memory for GPRS data save.1、When GPRS interval tracking can not upload to server, data will be automatically stored in the memory2、After that, once the GPRS reconnected, tracker will send the data to server again.Note: real time data will be sent first, the priority of the stored data is low.9. Geo-fenceDescription：Two ways to set the Geo-fence：1、When you know the exact latitude and longitude , the longitude and latitude can be filled in command directly.2、tracker will get the newest position automatically to be fence center if there is no available GPS position.After set the Geo-fence:when the tracker moves in/out the preset geo-fence, it will send a SMS alarm to the authorized phone number (enable the Geo-fence function when you set the authorized number), and if GPRS is connected, tracker will send this alarm data to server via GPRS.SMS Command：$SMS,000000;W018,NO.,name,lat,lng,radius;!explain：NO. serial number of geo-fence, range of: 1 to 5name name of geo-fence, range of: 0-9 characterslat center’s latitude, range of: -90.00000000~90.00000000, unit: degreeslng center’s longitude, range of:-180.00000000~180.00000000, unit: degrees radius geo-fence’s radius, range of: 0.0~1.79E+308, unit: metersNote: The geo-fence is a perfect circle based on the preset radius and centre. Example：$SMS,000000;W018,1,school,22.12345,114.12345,10.50;!$SMS,000000;W018,1,home,,,10.50;!1、Read Geo-fence：$SMS,000000;R018,1;!2、Clear Geo-fence：$SMS,000000;C018,1;!3、Clear all Geo-fence：$SMS,000000;C018;!10. Time zone settingSMS Command：$SMS,000000;W020,X;!Description: Set the SMS time zoneExplain：X: time zone’s value, range of:-720~780, default: 0, unit: minutesFor example：$SMS,000000;W020,480;!1 hour is equal to 60 minutes, and Beijing is GMT+8, 60*8=480(parameter), so this command means 480 is the time zone in Beijing.Read time zone：$SMS,000000;R020;!Clear time zone：$SMS,000000;C020;!11. Low battery alarm and Power on/off automatically1、When the battery level is lower than 15%, it will send SMS to all authorized numbers or send alarm data to server.2、Tracker will be off automatically if the battery level is 0%.3、during charging,tracker will automatically switch on when battery level is higher than 15%, and send a warning SMS to all authorized number.12. Timing turn on/off trackerDescription：set the time of turn on/offSMS Command：$SMS,000000;W038,on time,off time;!explain：Example：$SMS,000000;W038,08:00,20:00;! Turn on time:08:00，turn off time:20:00。
gpsone
gpsoneGPSOne是一种基于全球定位系统（GPS）的定位技术，它能够提供全球范围内的准确位置信息。
本文将探讨GPSOne技术的原理、应用领域以及优势等方面内容，以帮助读者更好地理解和利用这一技术。
首先，我们来了解一下GPSOne技术的基本原理。
GPSOne利用卫星信号实现位置定位。
全球定位系统常用于导航、定位以及移动通信等领域。
它由一组维持在轨道上的卫星以及地面控制站组成。
卫星发射无线信号，接收设备接收并解析这些信号以确定自己的位置。
在GPSOne中，移动设备上的GPS芯片接收卫星发射的信号，并通过三角测量的方法计算出自身的位置坐标。
这些位置坐标随后可以传输到移动通信网络中的服务提供商，以便提供相关的位置服务。
GPSOne在许多领域有着广泛的应用。
首先，它在移动通信领域扮演着重要的角色。
通过将GPSOne技术融入到移动设备中，用户可以方便地获取到自己的位置信息，这对于提供个性化的服务非常重要。
例如，基于位置的广告和推荐系统可以利用GPSOne技术将特定地点的优惠信息发送给用户。
此外，GPSOne还可以用于紧急呼叫和定位服务，以提供更快捷和精确的救援服务。
其次，GPSOne技术在导航和地图应用中起到关键作用。
通过结合导航软件和GPSOne技术，用户可以随时获得导航指引，找到最佳的驾车或步行路线。
此外，一些地图和定位应用可以通过GPSOne技术实时更新交通信息，帮助用户避免拥堵和道路封闭。
此外，GPSOne技术在物流和供应链管理中也发挥了重要作用。
通过GPSOne技术，物流公司可以实时跟踪货物的位置，提高运输效率并降低遗失率。
供应链管理系统也可以利用GPSOne技术来跟踪货物的流动，确保供应链的可见性和透明度。
GPSOne技术具有许多优势。
首先，它可以提供高精度的位置信息。
GPSOne技术的定位误差通常在几米以内，可以满足大部分应用的需求。
其次，GPSOne技术具有全球覆盖的能力。
无论你身处世界的哪个角落，只要有可见的卫星，就可以获得准确的位置信息。
GPS基础知识
GPS基础知识GPS基础知识.txt有谁会对着自己的裤裆傻笑。
不敢跟他说话却一遍一遍打开他的资料又关上。
用了心旳感情，真旳能让人懂得很多事。
╮如果有一天,我的签名不再频繁更新,那便证明我过的很好。
GPS基础知识驾车出行，在陌生的道路上，该往哪个方向走，哪条路最近，是停车问路还是低头看地图？都不用。
移动GPS卫星导航系统将给你包打天下。
一、GPS相关基础知识GPS即全球定位系统（Global Positioning System），简单地说，这是一个由覆盖全球的24颗卫星组成的卫星系统。
这个系统可以保证在任意时刻，地球上任意一点都可以同时观测到4颗卫星，以保证卫星可以采集到该观测点的经纬度和高度，以便实现导航、定位、授时等功能。
GPS全球卫星定位系统由三部分组成：空间部（GPS星座）、地面控制部分（地面监控系统）、用户设备部分（GPS 信号接收机）。
由于GPS系统受美国政府拥有和控制，在非常时期（如战争期间），民用GPS服务可能会受到影响。
1、定位导航技术的发展按照定位导航所依赖的参照物，定位导航技术的发展分为两个阶段：被动利用参照物阶段和主动建立参照物阶段。
被动利用参照物阶段：人类综合利用星历知识、指南针和航海表来进行导航和定位。
主动建立参照物阶段：二十世纪后，随着科学技术水平的不断提高，人类的思维从被动地利用宇宙中的参照物（如星体）扩展到主动地建立和利用人为的参照物来开发更精密的导航定位系统。
根据人为参照物的位置不同，主动阶段又可分为地基导航系统和空基导航系统。
（地基导航系统：地基导航系统主要由在世界各地适当地点建立的位于地面的无线电参考站组成，接收机通过接收这些参考站发射的无线电电波并由此计算接收机到发射站的距离。
目前大约有100种不同类型的地基导航系统正在运行，其中最著名的有劳兰系统（Loran C/D）、奥米加系统（OMEGA）、甚高频全向无线电信标系统（VORTAC）等。
由于地基导航系统的无线电发射参考站都建立在地球表面上，因此它们只能用来确定物体的水平位置，即只能进行二维定位，给出位置的经纬度信息。
中国电信gpsone第三方定位业务平台操作简要 说明
中国电信gpsone第三方定位业务平台操作简要说明第一、平台登录地址：第二、登录账号密码：根据分配的账号和密码登录第三、需对IE浏览器做设置才能够正常显示地图，进行操作。
IE浏览器的设置：打开IE-打开菜单栏“工具”，依次选择——internet选项——安全——自定义级别——其他，“跨域浏览窗口和框架”选择启用，“通过域访问数据源”选择启用。
第四、打开平台地址，登录账号密码，具体的操作演示过程：1、登陆后的第一个界面是越界报警的提示；2、点击平台菜单栏的地图定位，右侧有已开通被定位的终端列表，选择一个或多个终端进行定位，约10-15秒得出定位结果；屏幕中间的地图上会显示红旗，表示定位成功。
3、电子围栏设置，设置电子围栏后与定时定位任务配合，达到定时定位，即可实现越界报警的功能。
4、中心点设置：中心点设置的意思就是，每一个新开的账号，默认打开的地图界面是广西地图，若想显示当地地图，通过中心点设置以后，便可以实现以后每次登陆后，呈现的地图界面为预设的中心点。
5、点击第三个菜单，短信管理：短信管理主要提供发送和接受短信的功能，用于发送通知等信息，以及接收反馈。
6、点击第四个菜单，统计查询：统计查询主要提供对历史记录的相关报表导出为文档的功能，用于打印、留底存档等。
7、点击第五个菜单，客户管理：主要提供管理人员对平台及终端的管理，比如新增二级机构。
同时，一个重要的功能就是定时定位任务的设置，设置完成后配合电子围栏，实现越界报警。
8、第六个菜单，个人设置：主要设置一些基本信息。
9、第七个菜单，系统管理：主要用于给客户管理中设置的机构分配权限；10、第八个菜单，文档下载：主要用于下载平台操作手册等文档。
翼定位功能介绍
翼定位功能介绍一、背景随着定位技术的不断提升，定位业务正逐步被应用到各行业领域中，需求也在不断扩展。
这其中，除了已被市场熟知并广泛使用的定位导航功能外，在车辆定位管理、人员定位管理、船舶定位管理等各方面都有了明显的需求。
中国电信在定位技术上有着明显优势。
与竞争对手相比，中国移动和中国联通目前主要从事都是GPS定位和基站粗定位的单业务发展模式。
并没有有效的将拥有的定位技术和定位能力整合起来。
而中国电信一方面具备了竞争对手的GPS、基站粗定位的技术以外，还具备了gpsOne的精定位技术，是竞争对手所做不到的能力。
通过将这三种能力综合起来形成统一的定位应用能力，与各行业领域的业务需求相结合，可以充分发挥能力优势，形成强有力竞争的行业应用产品。
目前车辆定位服务市场，广东省企业车辆保有量约400万辆，其中物流行业车辆约54万辆，市场规模庞大。
广东省目前全省行业应用攻坚任务100万的目标市场任务，其中党政军（25万）、交通物流（20万）占据45%的份额。
与定位业务相关的行业应用预计占据目前市场的40%左右。
在目前交通运输的定位管理是终端定位管理市场中最为普遍的需求。
物流行业具有典型的联网性、移动性、协作性，业务过程需要频繁的信息交互，对通信以及信息技术的需求较高，市场空间巨大。
据统计，我国每年物流行业在途司机的移动通信收入达200亿元，车辆定位的业务收入达到42亿元；但大部分中小型物流企业存在信息化程度低，建设力量薄弱，以外购为主的问题。
物流行业信息化提升需求迫切，企业对于自由的车辆管理或者货物运输管理要求越来越高，为物流企业实现全业务流程的透明化管理，最终实现物流与信息化的统一则显得更加关键，且市场空间广阔。
人员定位管理的市场商机也越来越多，治安管理部门对巡逻保安人员的监控、快速消费品行业对外勤销售人员的监管、管道巡检企业对于巡检工作监督、工商管理企业对于工商管理人员的巡检监督，以及针对老人、小孩的关爱型定位业务等等需求形成了人员定位的庞大市场需求。
防水型GPS定位跟踪器
防水型GPS定位跟踪器一、产品名称产品名称:GPS防水定位器产品型号:PA110-i062二、产品外观三、产品技术指标工作电压：8V-36VDC电源反接特性1000V工作电流：40mA@12VDC平均值省电工作电流：30mA@12VDC平均值终端尺寸：69X 58 X 26mm工作温度：－25℃ ～＋70℃工作湿度：0～95%GPS灵敏度：Tracking:-160dBmGPS定位精度：5.0m SEP，2.5m CEP GPS通道数：50通道GPS冷启动时间：34秒@Open Sky,averageGPS温启动时间：32秒@Open Sky,averageGPS热启动时间：1.5秒@Open Sky,averageGSM频率：900/1800MHz自适应【注：实际工作电流会因工作环境的差异而发生变化。
】四、产品功能1. 宽压供电本产品采用宽压供电输入设计，具备过压，过流保护，防反接保护，抗浪涌功能，完全兼容12V、24V车辆需求。
优良的电源设计保证了GPS车载系统的可靠性和耐用性。
2. 车辆远程控制当车辆发生警情或车主有需要时，监控中心可以控制锁死或恢复您车辆的油路或电路。
3. 自动巡检监控终端在工作状态时会每隔24小时巡检一次，向监控中心报告车辆状态和当前位置。
4. 远程跟踪通过监控中心，可以对车辆进行定时，定距，固定间隔跟踪。
定时是根据设定的时间间隔向中心回报车辆的最新位置和状态。
定距是根据设定的距离间隔向中心回报车辆的最新位置和状态。
固定间隔是根据设定的固定时间间隔向中心回报车辆的最新位置和状态，不受次数限制。
5. 里程统计通过车台的里程计接口，可以随时查询到车辆的行驶里程数。
6. 超速报警当车台检测到车速超过预设的最大速度，一定时间后（时间间隔可设定），会向中心发送“超速报警”。
如果车速小于规定的速度值后会自动停止发送报警信息。
7. 越界报警当车辆行驶范围超出预设区域时会报警。
区域范围由监控中心设置。
gps测量仪手机版
GPS测量仪手机版1. 引言随着科技的快速发展，全球定位系统（GPS）的应用越来越广泛。
GPS测量仪作为一种测量和导航设备，在许多行业中起到了关键作用。
为了满足移动性和便携性的需求，现在已经有了许多手机版的GPS测量仪。
本文将介绍GPS测量仪手机版的功能、特点以及应用领域。
2. 功能和特点2.1 实时定位和导航功能GPS测量仪手机版具备实时定位和导航功能，可以帮助用户准确地确定自己的位置并提供导航路线。
这对于户外运动爱好者、地理测量师和野外工作者来说非常重要。
用户可以通过手机屏幕上的地图实时跟踪自己的位置，并获得准确的导航指引。
2.2 数据采集和处理功能GPS测量仪手机版可以帮助用户进行数据采集和处理。
用户可以通过手机摄像头拍摄现场照片，或者通过附加的外部传感器收集环境数据，例如温度、湿度和气压等。
这些数据可以与GPS定位数据进行关联，为用户提供全面的信息。
2.3 数据共享和导出功能GPS测量仪手机版还具备数据共享和导出功能，可以将采集到的数据共享给他人或导出到其他设备。
用户可以通过邮件、社交媒体或云存储等方式与他人共享数据。
同时，用户还可以将数据导出到计算机或其他设备进行进一步处理和分析。
3. 应用领域3.1 野外工作和测绘对于野外工作者和地理测量师来说，GPS测量仪手机版是一种非常实用的工具。
他们可以使用手机版的GPS测量仪进行位置定位和导航，同时还可以进行数据采集和处理。
这大大提高了工作效率，并减少了人为错误。
3.2 户外运动和探险对于户外运动爱好者和探险者来说，GPS测量仪手机版可以帮助他们在野外保持方向和找到正确的路线。
他们可以通过手机屏幕上的地图实时跟踪自己的位置，并根据导航指引选择最佳的行进路径。
此外，他们还可以记录行程和经历，与他人分享自己的户外探险。
3.3 灾害救援和应急响应在灾害救援和应急响应中，GPS测量仪手机版可以帮助救援人员确定受灾地区的准确位置，并规划最短和最安全的救援路线。
最新GPSONE定位原理介绍.PPT课件
调用GPSONE的方式1—WAP方式
MS终端
LCS客户端
1）WAP服务请求
MPC
用户数据库
2）WAP请求应答，要求确认 3) 同时发出定位请求
4)请求对定位用户鉴权
PDE
6) StartPositioningProcessResponse
8) WAP服务请求位置
7) IS801交互 9）返回定位请求
移动基站定位—CellId
特点： ✓成本低、定位误差受环境影响200米~几公里， ✓在效区或农村基站分布较少地带无法定位或定位误差太大 ✓通过网络侧采集用户当前所在的基站Cell信息以获取用户当前位置 ✓采集的基站信息包括位置更新、呼叫处理、短消息传送等 ✓不需要大规模更换设备，成本低
CDMA三角定位—AFLT
位置计算服务器根据手机信号可以获知手机在与哪些基站联系，并可以查询 到这些基站的经纬度 位置计算服务器利用CDMA终端接收到不同基站发出的信号到达该终端的时 间差，通过定位算法计算经纬度 其他蜂窝电话网络如GSM/GPRS也有类似自定位技术，但由于CDMA是唯一 全网同步（通过GPS）网络，因此定位精度最高。
特点：
• 在定位精度、定位灵敏度、终端 耗电及启动速度方面比传统GPS均 有显著提高。 • 每次定位时间间隔较长（15S） • 网络需要进行改造，增加位置服 务器等设备 • 室内等卫星信号不好的地方依然 无法定位
定位系统根据用户 在网络内所处的小 区或基站，标识终 端位置。终端有可 能在小区内的任何 位置，因此定位精 度完全取决于小区 的大小
GPSONE的特点
定位精度高： 平均定位精度为5 - 50米。
定位灵敏度高：在有CDMA信号覆盖的地方均可定位。且 gpsOne系统的基础设施辅助设备提供了比常 规GPS定位高出20dB的灵敏度。
国内三种主流人员定位技术对比
只要员工手机能正常通信，即可进行定位管理，员工无法实施破坏。 定位管理的实施会给外勤人员管理带来巨大的变化。员工虚假报销、消极怠 工等行为无处遁形。这种变化足以促使每个员工做出破坏定位实施的行为。而破 坏行为极其简便又无法辨别是否主观故意。这会使得企业的定位管理系统迅速陷 入瘫痪(据我们接触众多客户的经验，这一变化产生一般历时 2-6 个月)。
关于选择卫星定位与基站定位方式的选择： 万特锐科技的企效通位置管理系统，采用基站定位技
术，不需要投入任何硬件设备，系统可靠不可破坏。并可为 客户提供全员、长时间、真实使用环境下测试服务。客户试 用不满意客户无任何损失。
卫星定位产品需要投入大量资金购买硬件，定位极易被 人为破坏。只能试用一两部手机，不能提供批量试用。这种 试用方法无法模拟群体使用的行为特点和使用环境很难发 现系统性缺陷。在正式使用中再发现问题，也因为硬件已经 投入没有回旋余地。
附件一 :
中国人员定位技术特点对比
GPS 卫星
定位原理 精度对比
卫星定位
精度高（20-70）
GPSONE
卫星+网络
不稳定（介于 20-800）
中国移动 LBS
定位
移动通信基站，小 区三角定位
精度较高（20-200）
耗电量比较
很大，需要手机为 GPS 模块 很大，需要手机为 GPS 模块提供高 定 位 不 消 耗 手 机 电
其他类似案例：河南宇通客车、天津可口可乐、蒙牛
5.2 不消耗手机电力
定位依靠基站数据锁定手机位置，不消耗手机电力。GPS、GPSONE 等技术消 耗手机电量巨大，常使得员工手机很快就消耗完手机电力，影响业务开展。
GPS.GPSONE 定位方式需被定位手机接收卫星信号后，并以手机上网的形式 将位置信息传输至服务器，所以，每次定位时都会耗费很大电量。
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中国农业科学 2009,42(10:3693-3699 Scientia Agricultura Sinica doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2009.10.039收稿日期:2008-10-13; 接受日期:2009-07-22基金项目:国家“ 863”计划专题课题项目(2006AA02Z458 、河南科技大学博士科研启动基金(09001350 作者简介:闫文朝(1978- ,男,河南淅川人,博士,研究方向为原虫分子遗传学与免疫学。
E-mail :ywchao11@。
通信作者索勋(1963- ,男,河北张家口人,教授,研究方向为寄生虫免疫学。
E-mail :suoxun@转染技术在顶复门原虫研究中的应用闫文朝 1,王天奇 1,索勋 2,赵战勤 1,韩利方 1(1河南科技大学动物科技学院,河南洛阳 471003; 2中国农业大学动物医学院,北京 100193摘要:自 1993年转染技术首次在弓形虫中成功报道以来,顶复门原虫的转染研究得到了快速发展,不仅在弓形虫、疟原虫和住肉孢子虫等实现了稳定转染,而且在体外细胞上生长效率较低的柔嫩艾美耳球虫也相继实现了瞬时转染和稳定转染。
顶复门原虫转染技术的日渐成熟及其在顶复门原虫研究中的应用,为顶复门原虫基因功能和免疫学等领域研究提供了新思路和新的有力工具。
本文结合本课题组近几年来的研究成果,综述了转染技术及其在顶复门原虫基因表达调控、基因功能、耐药性分子机理、药物敏感性试验和免疫学等研究中应用的最新进展。
关键词:转染;顶复门原虫;基因功能;活载体疫苗Transfection Technology and Its Application in theInvestigation of Apicomplexan ProtozoaYAN Wen-chao1, WANG Tian-qi1, SUO Xun2, ZHAO Zhan-qin1, HAN Li-fang1(1College of Animal Science and Technology, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, He’nan ;2College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193Abstract: Since transient transfection of Toxoplasma gondii was first reported in 1993, stable transfections of apicomplexa such as T. gondii, Plasmodium species and Sarcocystis neurona have been achieved later, moreover, both the in vitro transient and in vivo stable transfection systems of Eimeria tenella, which do not undergo re-cycling of any life cycle stages, has been developed successfully. With the rapid development of transfection technology in Apicomplexan parasites, genetic manipulation provides a powerful tool for the study of the biochemical and cell biology of Apicomplexa. This paper has reviewed the latest progress of transfection technology and its application in gene regulation, the function of gene, the nature of drug resistance, drug sensitivity test and immunology of Apicomplexan parasites in combination with the related researches in authors’ laboratory in past years.Key words: transfection; apicomplexan protozoa; function of gene; live vaccine vector1 引言1993年首次报道刚地弓形虫 (Toxoplasma gondii, T. gondii和鸡疟原虫(Plasmodium gallinaceum, P. gallinaceum 的瞬时转染后 [1-2],刚地弓形虫和疟原虫不同物种的稳定转染也成功实现 [3-4]。
刚地弓形虫的转染效率高达 50%,转染技术比较成熟,非常容易实现外源基因在刚地弓形虫内的稳定表达 [5-7]。
而在疟原虫中,只有啮齿类疟原虫如伯氏疟原虫(Plasmodium berghei, P. berghei 的转染效率较高,基因操作比较容易可行 , 而其它疟原虫特别是恶性疟原虫(Plasmodium falciparum, P. falciparum虽然实现了瞬时转染和稳定转染,但由于在红细胞外期的裂殖子存活的生命周期较短,多采用红细胞内裂殖生殖阶段进行转染,而转染载体需要通过 4层膜(红细胞膜、带虫空泡膜、虫体细胞膜和虫体核膜屏障才能到达虫体的细胞核内,因此转染效率极低,仅为 10-6,严重制约着转染技术在疟原虫基因功能和细胞生物学特性研究中的应用 [8-10]。
另外,目前在顶复门原虫的其它种中 , 脑住肉孢子虫 (Sarcocystis neurona, S.neurona、柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella, E. tenella 等也成功实现了稳定转染 [11-13],犬新孢子虫 (Neospora3694 中国农业科学 42卷caninum, N. caninum 、环形泰勒虫 (Theileria annulata, T. annulata、牛巴贝斯虫(Babesia bovis, B.bovis 和尼氏艾美耳球虫(Eimeria nieschulzi, E. nieschulzi 等也成功实现了瞬时转染 [14-18]。
不同顶复门原虫转染取得突破和进展,使转染技术成为研究顶复门原虫入侵、致病性、宿主特异性、代谢等相关基因功能、研制新型疫苗(如活载体疫苗和 DNA 疫苗和筛选新的药物靶基因等方面的有力工具。
2 转染技术转染技术是将外源基因导入真核细胞内,并在细胞内表达的一种技术。
转染技术通常可分为两大类,一类是瞬时转染,另一类是稳定转染。
前者外源基因不整合到宿主染色体内,宿主细胞内可存在多个拷贝,产生高水平表达,但持续时间短。
瞬时转染多用环形质粒转染和报告分子(如黄色荧光蛋白。
后者外源基因既可整合到宿主染色体内,也可作为一种游离体(episome 存在。
往往线性外源片段比环形质粒整合效率高,另外还需要选择性标记分子(主要包括药物筛选基因和荧光蛋白基因和相应的筛选手段,才能实现稳定转染。
转染技术是研究基因表达调控和基因功能等方面有力的工具。
转染载体和转染方法是转染技术的两大核心部分,合理构建转染载体和选择合适的转染方法对转染研究的成功至关重要。
重组刚地弓形虫表达黄色荧光蛋白的转染技术路线如下:2.1 转染载体用于疟原虫、弓形虫和其它原虫的一般转染载体是由顶复门原虫的启动子、3′ 端转录终止调控序列以及在二者之间的一个完整的开放阅读框组成 [3,11,19]。
根据研究目标可以选择持续性表达的强启动子,也可以选择阶段特异性表达的启动子;对3′ 端转录终止调控序列要求不太严格,只要用于同一个虫种的转染,不同基因启动子可以共用一个3′ 端转录终止调控序列; 插入的外源基因必须在启动子和3′ 端转录终止调控序列之间形成一个正确的开放阅读框,避免移码问题。
将以上顶复门原虫转染载体必需元件通过分子生物学方法插入原核克隆载体如 pUC19、pBluescript SK(+/-中,形成原核生物和顶复门原虫之间的穿梭载体,这种载体可以在大肠杆菌如DH5α内复制扩增,可以方便地构建、检测和扩增正确的顶复门原虫转染载体。
插入的外源基因可以是报告分子(如黄色荧光蛋白或药物抗性基因(如 hDHFR-TS ,在报告基因或药物抗性基因的5′ 或3′ 端可融合其它外源蛋白基因,通过用荧光显微镜、流式细胞仪检测转染体或进行药物筛选,方便地筛选出阳性的转染克隆。
另外,可以在启动子的3′ 端融合信号肽序列,引导报告分子、外源蛋白或报告分子与外源蛋白的复合体分泌或打靶到虫体的不同部位 [20]。
这种常规的转染载体转染虫体后得到的阳性克隆,往往是随机整合到宿主的染色体基因组内;而用环形质粒转染,则在药物压力下能以附加体形式在宿主细胞内进行复制、转录和表达 [21]。
10期闫文朝等:转染技术在顶复门原虫研究中的应用 3695为了实现转染载体在原虫基因组内定点整合,达到特定基因突变或替换目标,需要在上述常规转染载体启动子和3′ 端转录终止调控序列两侧插入与虫体目标基因序列相同的 DNA 片段, 长度为 600~3 000 bp, 转染后使转染载体与虫体基因组序列通过单交换或双交换进行同源重组,整合到原虫基因组的特定区域。
据文献报道, 线性载体比环形载体的同源重组效率高。
相对于随机整合的转染载体,同源重组载体的转染效率较低,但为了进行特异位点的整合,使用同源重组载体仍不失为一种好方法 [22]。
另外,利用转座系统如 piggyBac 也可以实现转染载体在宿主细胞基因组中的定点整合,并且转染效率较高 [23]。
对单表达框载体来说,如果在启动子后面插入多个基因,可能会导致开放阅读框太大,影响外源蛋白表达;或者由于多个蛋白距离较近,在空间折叠等方面相互干扰,影响蛋白的活性或功能。
为了克服以上缺点,可以把多个外源基因分配到同一载体的 2个表达框内。
在疟原虫和住肉孢子虫研究中就有成功的设计。
在脑住肉孢子虫转染研究中, 2个表达框分别载有黄色荧光蛋白和弓形虫的乙胺嘧啶抗性基因,成功获得了稳定转染 [11]。
这种载体特别适于稳定转染,一个表达框表达报告基因或药物筛选基因,另一个表达框表达外源蛋白,通过流式细胞仪或药物筛选,可以很快拿到稳定转染虫系。