生物指示剂使用记录
3M压力灭菌用生物指示剂的使用方法
3M压力灭菌用生物指示剂的使用方法压力灭菌用生物指示剂1262该压力蒸汽灭菌生物培养指示剂用于压力蒸汽灭菌效果的生物监测(包括下排气锅和预真空锅);通过培养基颜色变化，反应嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌生物监测结果。
1. 将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于一标准测试包中;2. 按照国家规范, 分别将测试包放于锅内不同位置;3. 灭菌完毕, 取出该生物指示剂;4. 挤破内含的安瓿, 与一支对照管一起放于56℃培养锅内培养;48小时后阅读结果。
结果阅读：1.培养后指示管不变色(呈紫色), 表示灭菌通过;2.培养后指示管变色(呈黄色), 表示灭菌不通过,(必须及时查出灭菌失败原因)。
3.同时培养的对照管应为阳性(呈黄色), 如阴性,可能的原因为: 培养条件不符合要求; 生物指示剂有问题; (应及时查出阴性原因)。
注意事项：1. 灭菌完毕, 含生物指示剂的包裹很热并有一定压力; 需至少冷却10分钟以上, 否则可能引起塑料管内的安瓿破裂, 飞溅的碎片导致损伤;2. 只有对照管为阳性, 其生物监测结果才算有效。
3. 贮存于室温: 15-30℃; 相对湿度为35-60%;避免靠近灭菌器和化学消毒剂。
1292该生物指示剂可用以121℃下排气和132℃预真空压力蒸汽灭菌锅。
3MATTESTTM压力蒸汽灭菌生物培养指示剂(快速)在与3M ATTEST 290 培养锅共用时, 通过酶活性的灭活与否，探测嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌结果。
使用方法:1、在生物指示剂标签上注明灭菌器锅号, 负荷数量, 灭菌日期; 不要在指示剂的瓶或盖上另贴一个标签。
将生物指示剂放于一个标准测试包内，并置于最难灭菌的位置。
2、将含有生物指示剂的测试包放在灭菌器最难灭菌的位置，通常是灭菌器底层，近门或排气口上面。
3、正常装载。
4、灭菌循环完毕, 取出生物指示剂。
5、灭菌结束后，从灭菌器内取出含有生物指示剂的测试包，打开散热5分钟后才能取出生物指示剂。
生物指示剂管理规程完整
范文范例参考指导目的建立生物指示剂管理规程，规范生物指示剂进厂质量验收、储存、使用和销毁程序，保证生物指示剂质量安全有效。
范围本规程适用于公司确认与验证及监控生物指示剂使用管理。
责任生物指示剂使用部门负责采购申请填写及按照说明书要求使用、储存、销毁生物指示剂，质量部QA负责监督和检查执行情况。
内容1. 生物指示剂概念生物指示剂（BI）：系一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。
用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细菌的抱子。
2. 生物指示剂形式2.1 一定数量的抱子附着在惰性载体上，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等。
2.2 抱子悬浮液密封于安瓿中。
3. 生物指示剂特性3.1 具有较高的耐受性、贮存稳定性、批与批之间的一致性、无致病性、易于培养和制备的细菌芽抱。
3.2 耐受性要高于灭菌前产品中污染菌的耐受性。
3.3 符合地方、国内、国际相关法规要求。
3.4 可根据灭菌程序的设计要求而制备。
4. 生物指示剂分类4.1 第一类生物指示剂：由微生物抱子和载体包装而成。
4.2 第二类生物指示剂：由可接种在产品表面或内部的抱子悬液构成。
4.3 第三类生物指示剂：包含微生物恢复生长培养基的类型。
5生物指示剂选择6. 生物指示剂管理流程合格7. 生物指示剂米购、验收、质量信息登记7.1生物指示剂使用部门根据年度验证总计划内容及临时需求说明填写生物指示剂购买申请，采购部门根据申请从有资质的生产厂家及供应商处购得相应生物指示剂，购买的生物指示剂应附有相应的合格质量检验报告单。
7.2 生物指示剂进厂验收部门为库房，库房人员应该仔细核对品名、规格、批号、数量、生产日期、有效期、生产厂家，检查外包装应完好，封口严密，标签完整，内容清晰，核对无误后填写《物料验收记录》（1））和《物料台账》（1），不合格的生物指示剂退回厂家处理。
7.3 生物指示剂质量信息登记部门为领用部门，登记内容包括生物指示剂名称，生产厂家，生产批号及生产日期，失效日期，Z值，储存环境和销毁方法。
生物指示剂管理规程(精编文档).doc
【最新整理，下载后即可编辑】目的建立生物指示剂管理规程，规范生物指示剂进厂质量验收、储存、使用和销毁程序，保证生物指示剂质量安全有效。
范围本规程适用于公司确认与验证及监控生物指示剂使用管理。
责任生物指示剂使用部门负责采购申请填写及按照说明书要求使用、储存、销毁生物指示剂，质量部QA负责监督和检查执行情况。
内容1.生物指示剂概念生物指示剂（BI）：系一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。
用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细菌的孢子。
2.生物指示剂形式2.1 一定数量的孢子附着在惰性载体上，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等。
2.2 孢子悬浮液密封于安瓿中。
3.生物指示剂特性3.1 具有较高的耐受性、贮存稳定性、批与批之间的一致性、无致病性、易于培养和制备的细菌芽孢。
3.2 耐受性要高于灭菌前产品中污染菌的耐受性。
3.3 符合地方、国内、国际相关法规要求。
3.4 可根据灭菌程序的设计要求而制备。
4. 生物指示剂分类4.1 第一类生物指示剂：由微生物孢子和载体包装而成。
4.2 第二类生物指示剂：由可接种在产品表面或内部的孢子悬液构成。
4.3 第三类生物指示剂：包含微生物恢复生长培养基的类型。
7. 生物指示剂采购、验收、质量信息登记7.1 生物指示剂使用部门根据年度验证总计划内容及临时需求说明填写生物指示剂购买申请，采购部门根据申请从有资质的生产厂家及供应商处购得相应生物指示剂，购买的生物指示剂应附有相应的合格质量检验报告单。
7.2 生物指示剂进厂验收部门为库房，库房人员应该仔细核对品名、规格、批号、数量、生产日期、有效期、生产厂家，检查外包装应完好，封口严密，标签完整，内容清晰，核对无误后填写《物料验收记录》（1））和《物料台账》（1），不合格的生物指示剂退回厂家处理。
7.3 生物指示剂质量信息登记部门为领用部门，登记内容包括生物指示剂名称，生产厂家，生产批号及生产日期，失效日期，Z值，储存环境和销毁方法。
灭菌设备的灭菌效果验证记录(湿热生物指示剂法).
灭菌设备的
灭菌效果验证记录
方法：生物指示剂法
设备名称：立式压力蒸汽灭菌锅
型号：YXQ-LS-50S11
福建闽东力捷迅药业有限公司
福建闽东力捷迅药业有限公司
灭菌设备验证记录
编号：REC-ZK009-(00)
验证日期：年月日报告日期：年月日灭菌设备负载：（空载、满载）灭菌参数温度：℃，时间： min
培养条件：温度：℃，时间： h
2支管均显黄色，判定该此灭菌效果合格；灭菌锅内任意一个测试点的培养结果显黄色，即判定为灭菌不合格；若阳性对照2支中有一支培养结果显紫色，说明生物指示剂质量存在问题，实验重做。
结论：
复核人：检验人：。
生物指示剂管理规程
生物指示剂管理规程
目的：为安全、合理地使用生物指示剂（BI），对生物指示剂进行控制管理。
范围：用于灭菌法验证所用的生物指示剂。
责任人：质量检验部部长生物指示剂管理员验证人员检验员
内容：
1 购买：生物指示剂应从有资质的生产厂家购得，购买的生物指示剂应附有相应的质量报告，内容包括微生物种类、含量、D值、有效期等。
2 质量复核：
2.1 生物指示剂在使用前要进行质量复核，进行微生物数量的确认。
2.2. 微生物数量确认：将原生物指示剂的所有含有微生物的部分转移到生理盐水中，稀释后进行计数，与质量报告中的数量进行比较。
2.3 微生物复核报告应包含以下内容：含菌量确认、生厂商、菌名、批号、标示含菌量、D值、效期、稀释过程、稀释倍数、计数结果、每个生物指示剂的含菌量、是否合格等。
可以将生物指示剂的产品质量报告或其复印件与上述文件一起存放。
3 保存与使用
3.1 生物指示剂严格按说明书要求存放。
3.2 检验合格的生物指示要经过批准和发放后才可以使用。
3.3 所用的生物指示剂严格按说明书要求使用。
3.4 领用时要登记领用人、日期、数量。
生物指示剂复核记录
记录编号：
检验
人：复核人：。
高压蒸汽灭菌生物指示剂原始记录
3同时培养的对照管应为阳性（呈黄色），如阴性，可能原因为：培养条件不符合，生物指示剂有问题。
注意事项：
1.灭菌完毕，含生物指示剂的包裹很热并有一定压力；需至少冷却10分钟以上，否则可能引起塑料管内的安瓿破裂，飞溅的碎片导致损伤。
2.只有对照管为阳性，其生物监测结果才算有效。
高压蒸汽灭菌生物指示剂原始记录
仪器编号： 温 度： ℃
检验日期： 湿 度： %RH
使用原理
压力蒸汽灭菌指示剂用于压力蒸汽灭菌效果的生物监测，通过培养基颜色变化，反应嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌生物监测结果。
操作步骤
1.将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于一标准测试包；
2.按照国家规范，分别将测试包放于锅内两条垂直直径的顶点及中心点；
3.121℃20min灭菌完毕后，取出该生物指示剂；2019年 月 日- 2019年 月 日
4.挤破内含的安瓿，与一支对照管放于56℃培养；2019年 月 日- 2019年 月 日
结果观察
□灭菌通过（指示管不变色，仍为紫色） ；□灭菌不通过（指示管变黄色）
1培养后指示管不变色（呈紫色），表示灭菌通过；
3.贮存于室温：15-30℃；相对湿度为35-60％；避免靠近灭菌器和化学消毒剂。
使用仪器: SHP-300E智能生化培养箱F-072（有效期至2019.04.23，校准因子＋0.35℃，设定培养箱温度56.4℃）
检验: 校核:
Mesalabs-EZS6生物指示剂说明书
Mesalabs-EZS/6生物指示剂说明书型号：EZS/6菌种：嗜热芽孢脂肪杆菌7953（1）生物指示剂用途：蒸汽灭菌培养：EZTest 培养基，55-60℃培养。
所提供的细菌培养基符合促生长能力的需求。
纯度：使用标准平板计数技术时没有污染的证据生产批号：S-459 生产日期：2013年12月19日失效日期：2015年12月19日热冲击计数：2.2×106孢子量/支载体尺寸：6mm×19mm抗力分析： D值（2）存活时间杀灭时间121℃蒸汽 2.2 9.71 23.12（3）Z值：16.9℃使用指导：注意：灭菌之后，玻璃安瓿内的生物指示剂热且带有压力。
应至少冷却10分钟。
冷却少于10分钟安瓿可能破碎以及热的液体所导致的伤害。
A 灭菌过程使用生物指示剂1.从包装盒中取适量的指示剂。
2.从标签上鉴别生物指示剂的信息。
3.将生物指示剂放在代表性装载的合适测试包装中。
4.将测试包装放置在灭菌器的最大挑战区域，通常是在靠近门排水口上方的架子上。
如果没有使用测试包，将生物指示剂放置在装载的水平位置。
5.按正常过程进行装载。
6.将带有生物指示剂的包装从灭菌器移除后应给与足够的时间进行冷却，至少10分钟以上。
7.将生物指示剂从测试的装载中取出。
8.灭菌后当标签上的化学指示剂由蓝色变为黑色。
与没有进行灭菌的生物指示剂进行区别。
注意：黑色不能表明接受过灭菌。
B 培养55-60℃的条件将满足指示剂的培养条件。
为了使指示剂解触培养基，将指示剂以垂直位置放置在塑料破碎器里面。
轻轻地挤压破碎器破坏玻璃安瓿。
将与培养基接触的生物指示剂放置在培养箱的架子上，立即进行培养。
C 解释说明：1.在培养至8小时，12小时，18小时和24小时检查生物指示剂的颜色变化。
出现黄色表明有细菌生长。
没有变化表明经过了适当的灭菌。
2.一旦发生阳性试验（变为黄色）第一时间应记录下来。
通知医院人员（例如疾病控制中心）。
3.建议的培养时间是24小时（符合US FDA/RIT协议）。
生物指示剂培养基的正确使用方法
生物指示剂培养基的正确使用方法
生物指示剂培养基是一种用于检测灭菌过程中是否存在细菌存
活的试剂。
正确使用生物指示剂培养基能够有效保证灭菌质量，以下是正确使用方法：
1.选择适当的生物指示剂培养基，不同类型的生物指示剂培养基对应不同类型的细菌，应根据实际需要选择合适的试剂。
2.准备样品，将需要进行灭菌的样品放入灭菌器中，按照灭菌器使用说明书进行操作。
3.将生物指示剂培养基放入灭菌器中，放置的位置应与样品相同，以确保生物指示剂受到与样品相同的灭菌条件。
4.将灭菌器进行灭菌，按照灭菌器使用说明书进行操作，确保灭菌器内部温度、压力等参数达到要求。
5.取出生物指示剂培养基，培养一段时间后观察结果。
如果发现有细菌生长，说明灭菌不彻底，需要重新进行灭菌。
需要注意的是，生物指示剂培养基只能用于检测灭菌过程中是否存在细菌存活，不能用于检测细菌的菌量和种类。
此外，生物指示剂也只是一种辅助工具，不能代替实际的灭菌验证方法。
因此，在进行灭菌验证时，应结合多种方法，如物理化学指标、生物指示剂等，进行全面检测。
- 1 -。
压力蒸汽灭菌生物指示剂
压力蒸汽灭菌生物指示剂压力蒸汽灭菌生物指示剂是由嗜热指肪杆菌(ATCC 7953)芽孢菌片、恢复培养基和外管组成。
菌片含菌量为5.0× ,5.0× cfu/片。
生物指示剂的抗力符合国际标准和国家标准的规定:既在121?饱和蒸汽作用下，存活时间?3.9min，杀灭时间?19min，D 10 值1.3,1.9min。
【适用范围】适用于 121?下排气式压力蒸汽灭菌器、132?,134?预真空或脉动真空压力蒸汽灭菌136?台式或卡式压力蒸汽灭菌器灭菌效果的监测和制药工业、医院制剂生产等器、134?,各行业使用的压力蒸汽灭菌器灭菌效果的监测。
【使用方法】，，，1 使用时，将生物指示剂放入标准检测包的中心或待灭菌物品包的中心，置于灭菌器的难消毒的位置按规定的灭菌温度和时间进行灭菌处理。
2 灭菌完毕，即刻将生物指示剂取出，盖朝上垂直握于手中，用专门工具夹碎管内安瓶，让培养液流出浸没菌片，置于56?恒温培养箱内或配套的微型培养器内培养24小时观察初步结果，48小时观察最终结果，按规定每月至少用生物指示剂进行一次灭菌效果监测。
【结果判定】培养后生物指示剂中的溴甲酚紫培养液由紫色澄清液体变为黄色澄清液体即表示有菌生长，判定为灭菌不合格;培养液仍为紫色澄清液体为无菌生长，同时阳性对照管中的嗜热脂肪杆菌生长正常即培养液由紫色澄清液体变为黄色澄清液体，判定为灭菌合格。
【注意事项】1将生物指示剂管从灭菌器内取出或从冰箱内取出后，需在室温下放10min左右，再夹碎安瓿，以免过热或过冷夹碎外管。
2液体培养基的pH值低于7.0或高于7.5，均可使嗜热脂肪杆菌不能生长;3 培养温度须在56?,65?之间，否则可导致嗜热脂肪杆菌生长不良，或不能生长。
4 灭菌处理后，生物指示剂中的液体培养基颜色与压力蒸汽灭菌前比较会变浅，呈显浅紫色，这种变化属正常现象。
5 用恢复培养液在56?培养时间过长(72小时以上)，阳性对照管中培养液的黄色容易消退，培养液逐渐干燥，应注意每天观察，随时记录培养结果。
环氧乙烷灭菌生物指示剂检测方法
环氧乙烷灭菌生物指示剂检测方法编制
校对
审核
批准
1 / 2
环氧乙烷灭菌生物指示剂检测方法
一、公司的一次性使用注射器、溶药器、输液器、袋式输液器、注射针、
输液针等产品的灭菌均采用环氧乙烷灭菌，灭菌效果采用生物指示剂监测。
二、生物指示剂采用枯草杆菌黑色变种芽孢（ATCC9372）
三、生物指示剂应在无菌室内分装密封后按生物指示剂灭菌布点图的位置，
在产品装入灭菌柜时，同时放入灭菌柜与产品同时灭菌。
四、灭菌作用时间完后，取回生物指示剂，在无菌室内用镊子在酒精灯火
焰上烧红后，将菌片接种于普通肉汤管内，于37℃下培养7天，观察记录结果。
如肉汤管清亮，无混浊，表示无菌生长，（-）阴性，为灭菌合格；如肉汤管内混浊，表示有菌生长，（+）阳性，为灭菌不合格。
每次检测时应设置3片未经灭菌的对照菌片，同时接种于普通肉汤管内，在同条件下培养，观察结果，（+）阳性，对照成立。
五、营养肉汤培养基处方
牛肉膏5g、蛋白胨10g、氯化钠5g溶于1000ml蒸馏水中，完全溶解后用试管分装（5ml/管）压力蒸汽灭菌后备用。
温馨提示：最好仔细阅读后才下载使用，万分感谢！。
M压力灭菌用生物指示剂的使用方法
M压力灭菌用生物指示剂的使用方法集团标准化小组：[VVOPPT-JOPP28-JPPTL98-LOPPNN]压力灭菌用生物指示剂1262该压力蒸汽灭菌生物培养指示剂用于压力蒸汽灭菌效果的生物监测(包括下排气锅和预真空锅);通过培养基颜色变化，反应嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌生物监测结果。
1.将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于一标准测试包中;2.按照国家规范,分别将测试包放于锅内不同位置;3.灭菌完毕,取出该生物指示剂;4.挤破内含的安瓿,与一支对照管一起放于56℃培养锅内培养;48小时后阅读结果。
结果阅读：1.培养后指示管不变色(呈紫色),表示灭菌通过;2.培养后指示管变色(呈黄色),表示灭菌不通过,(必须及时查出灭菌失败原因)。
3.同时培养的对照管应为阳性(呈黄色),如阴性,可能的原因为:培养条件不符合要求;生物指示剂有问题;(应及时查出阴性原因)。
注意事项：1.灭菌完毕,含生物指示剂的包裹很热并有一定压力;需至少冷却10分钟以上,否则可能引起塑料管内的安瓿破裂,飞溅的碎片导致损伤;2.只有对照管为阳性,其生物监测结果才算有效。
3.贮存于室温:15-30℃;相对湿度为35-60%;避免靠近灭菌器和化学消毒剂。
1292该生物指示剂可用以121℃下排气和132℃预真空压力蒸汽灭菌锅。
?3MATTESTTM压力蒸汽灭菌生物培养指示剂(快速)在与3MATTEST290培养锅共用时,通过酶活性的灭活与否，探测嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌结果。
使用方法:?1、在生物指示剂标签上注明灭菌器锅号,负荷数量,灭菌日期;不要在指示剂的瓶或盖上另贴一个标签。
将生物指示剂放于一个标准测试包内，并置于最难灭菌的位置。
2、将含有生物指示剂的测试包放在灭菌器最难灭菌的位置，通常是灭菌器底层，近门或排气口上面。
3、正常装载。
4、灭菌循环完毕,取出生物指示剂。
5、灭菌结束后，从灭菌器内取出含有生物指示剂的测试包，打开散热5分钟后才能取出生物指示剂。
灭菌验证中关于生物指示剂
灭菌验证中关于生物指示剂关于生物指示剂生物指示剂系一类特殊的活微生物制品。
可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。
用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细菌的孢子。
（一）制备生物指示剂用微生物的基本要求不同的灭菌方法使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的微生物必须具备以下特性：①菌种的耐受性应大于需灭菌产品中所有可能污染微生物的耐受性；②菌种应无致病性；③菌株应稳定。
存活期长，易于保存；④易于培养。
若使用休眠孢子，生物指示剂中休眠孢子含量要在90%以上。
（二）生物指示剂的制备生物指示剂的制备应按一定的程序进行，制备前，需先确定所用微生物的特性，如D值（微生物的耐热参数，系指一定温度下，将微生物杀灭90%所需的时间，以分表示）等。
菌株应用适宜的培养基进行培养。
培养物应制成悬浮液，其中孢子的数量应占优势，孢子应悬浮于无营养的液体中保存。
生物指示剂中包含一定数量的一种或多种孢子，可制成多种形式，通常是将一定数量的孢子附着在惰性的载体上，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等；孢子悬浮液也可密封于安瓿中；有的生物指示剂还配有培养基系统。
生物指示剂应选用合适的材料包装，并设定有效期。
载体和包装材料在保护生物指示剂不被污染和损耗的同时，还应保证灭菌剂穿透并能与生物指示剂充分接触。
载体和包装应设计原则是便于贮存、运输、取样、转移接种。
有些生物指示剂可直接将孢子接种至液体灭菌物或具有与其相似的物理和化学特性的替代品中。
使用替代品时，应用数据证明二者的等效性。
（三）生物指示剂的应用在灭菌程序的验证中，尽管可通过灭菌过程某些参数的监控来评估灭菌效果，但生物指示剂的被杀灭程度，则是评价一个灭菌程序有效性最直观的指标。
可使用市售的标准生物指示剂，也可使用由日常生产污染菌监控中分离的最耐受微生物制备的孢子。
在生物指示剂验证试验中，需确定孢子在实际灭菌条件下的耐受性，并测定孢子的纯度和数量。
验证时，生物指示剂的微生物用量应比日常检出的微生物污染量大，耐受性强，以保证灭菌程序有更大的安全性。
SMP-QC-0031-00生物指示剂标准管理规程
1.0 目的1.1规范生测组对生物指示剂的接收、质量检查、储藏、使用、销毁标准操作规程。
2.0 范围2.1验证或监控用生物指示剂的管理。
3.0 职责3.1质量控制（QC）部对本操作规程实施负责。
4.0 定义生物指示剂简称BI，是一类特殊的活微生物制品，是对特定灭菌工艺有一定耐受性并且能够定量测定灭菌效力的微生物制剂，可用于确定灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。
5.0 规程5.1生物指示剂管理流程图：5.2生物指示剂的接收5.2.1根据验证要求，确定所需要的生物指示剂。
新购入的生物指示剂应由生测组组长接收，购买的生物指示剂应附有相应的质量报告，内容包括微生物种类、孢子量、D 值、有效期等，仔细检查生物指示剂包装是否破损，有破损的剔出，核对生物指示剂的有效期，过期的剔出，核对生物指示剂是否与计划的相一致，不可用的剔出。
5.2.2登记：核对无误后及时填写《生物指示剂接收与发放记录》(R-SMP-QC-0031-02)内容包括生物指示剂名称、批号、数量、规格、生产厂家、接收日期、接收人、领用日期、领用人等。
5.3生物指示剂质量检验：测试内容包括含指示剂菌种形态学鉴别（Gram染色和芽孢染色）、载菌量检测和D值测定。
5.3.1生物指示剂菌种形态学鉴别（Gram染色和芽孢染色）5.3.1.1革兰氏染色操作步骤见《菌种鉴定标准操作规程》（SOP-QC-0009-00）。
5.3.1.2芽孢染色5.3.1.2.1染色试剂：5％孔雀绿水溶液、0.5％番红液5.3.1.2.2染色步骤5.3.1.2.2.1在载玻片上滴上一滴的超纯水，用无菌接种环挑取一颗菌落均匀涂开；5.3.1.2.2.2将载玻片通过酒精灯火焰上方快速来回 2～3 次使之干燥、固定；5.3.1.2.2.3涂片冷却后，滴加5％孔雀绿水溶液，微火加热，使冒蒸汽，但不干涸（随时补加染液）保持 5min；5.3.1.2.2.4倾去染液，待载玻片冷却后用已灭菌去离子水冲洗涂片至孔雀绿不再褪色为止；5.3.1.2.2.5在涂片上方滴加 0.5％番红液复染 1min 后水洗；5.3.1.2.2.6用滤纸吸干后镜检。
生物指示剂挑战性实验记录140g
生物指示剂挑战性实验记录检验依据：《臭氧发生系统验证》O3-V-VP-01一、实验器具：二、实验方法：1、测试前的准备工作：1.1将JK401机组新风阀关闭，启动风机运行，设定频率在40HZ；1.2四楼洁净区卫生已清洁完毕，岗位已在无人状态下，并且洁净区的温度＜24℃，相对湿度＞70%（臭氧消毒所需温湿度条件）；1.3检查洁净区内应无暴露的物料、中间产品、成品和易被臭氧氧化、腐蚀的橡胶、塑料等制品，应采取防护措施，防止臭氧氧化破坏；1.4按臭氧发生系统操作规程操作。
检查并全开臭氧发生器中的O3出气阀门和冷却水出水阀门，以保证O3气体出气和冷却水排放全部畅通；1.5检查臭氧发生器的冷却水进水压力和进水温度，应控制进水温度＜35℃，进水压力0.1～0.3MPa，打开HVAC机组和臭氧发生器的冷却水进水控制阀门；1.6检查臭氧发生单元的“电流调节”按钮，并应使其在最小处（mix），相对应的电流表应显示为0；1.7接通臭氧发生系统电源，“富氧关”按钮上的红灯指示灯应正确显示（亮），电源电压应正常显示（220V）；1.8将臭氧发生器的时间设定为3.5H，以免在测试不同杀菌时间与杀菌率关系时，造成自动停机;1.9在药检中心无菌室内超净工作台上，将枯草芽胞杆菌黑色变种芽胞菌片放置于无菌培养皿（无培养基）中，每个培养皿放置1片，共放 7 个培养皿（培养皿应预先进行编号，以确定杀菌时间），盖上平皿盖，用牛皮纸包扎好；2、杀菌实验：2.1将包扎好的枯草芽胞杆菌黑色变种芽胞菌片培养皿，通过传递窗传入洁净区，放置在内包间正中央地面上；2.2全部移开平皿盖（注意防止对培养基平皿污染），人员撤离出洁净区，准备臭氧消毒；2.3按下绿色“富氧开”启动按钮，“富氧开”绿色按钮指示灯亮，相应的“富氧关”红色按钮指示灯灭，“臭氧关”红色按钮指示灯亮，“时间定时器”通电开始计时；2.4打开外接压缩空气阀门，调节并控制气源静态压力应≤0.25MPa（气源静态压力是指臭氧发生单元未工作时，压缩空气压力。