普鲁士蓝染色试剂盒(核固红法)使用说明

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普鲁士蓝染色-核固红法

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电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
使用方法：使用前试剂 A1 和 A2 等量混合均匀，即为 Perls 染色试剂 A。现配现用。
石蜡切片： 1、常规脱蜡至水。 2、蒸馏水洗 1 分钟。 3、试剂 A 染色 15-40 分钟。 4、蒸馏水充分冲洗 2-5 分钟。 5、核固红试剂 B 淡染细胞核 5-10 分钟。 6、水冲洗。 7、常规脱水透明。 8、中性树胶封片。
贝博 Perls 普鲁士蓝染色试剂盒常用于显示局部组织内的各种出血性病变。在判断含铁血黄素沉积时，用 Perls 染色可以得到证实，可以很好的区分含铁血黄素和其他色素。本试剂盒稳定性好，可以长期保存，应用范围广。
本试剂盒复染液采用最经典最常用的核固红复染液。
试剂盒以外自备试剂和仪器 ● 10%中性福尔马林
普鲁士蓝染色试剂盒
（Perls 染色）（核固红法）
货号：BB-44371
试剂盒储存条件：室温避光保存。
试剂盒组成：
产品组份规格
试剂 A1：Perls 试剂 A1 试剂 A2：Perls 试剂 A2 试剂 B：核固红试剂 B
使用说0ml*2 25 ml 25 ml 50 ml 1
● 纯水
● 4%多聚甲醛
● 乙醇
使用方法：
使用注意事项： ● 脱蜡要干净。 ● 组织固定采用 10%中性福尔马林。 ● 试剂 A 临用前配制，现配现用，不可提前配制。 ● 整个操作过程采用的容器要干净，避免采用金属铁制品。 ● 实验过程中用到的水为纯水或双蒸水，包括清晰容器玻片等。 ● 避免使用酸性固定剂。 ● 染色时间应根据样本情况调整。

普鲁士蓝染色步骤

普鲁士蓝染色步骤
普鲁士蓝染色的步骤包括：
1. 切片：将待染色的组织切成3~5微米的薄片。

2. 烤片：将切片放入烤片机中，在70℃下烤制30分钟。

3. 捞片：将烤好的切片放入水浴锅中，温度设置为49℃，浸泡20秒后取出。

4. 脱蜡、复水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中脱蜡，然后放入无水乙醇、75%乙醇、蒸馏水中复水。

5. 染色：将切片放入普鲁士蓝染色工作液中，完全覆盖组织，室温染色1小时。

染色后，用自来水冲洗切片，去除多余的染料。

6. 复染：将切片放入普鲁士蓝染液C中，室温染色3~5分钟。

染色后，用自来水冲洗至切片流水无色。

7. 脱水封片：将切片经3次无水乙醇脱水，每次5分钟，再经二甲苯透明5分钟，然后以中性树胶封片。

以上是普鲁士蓝染色的基本步骤，每一步都需要仔细操作以保证染色效果。

阿尔新蓝染液(固核红)(pH2.5)使用说明书

在正常血管壁上产生一定数量的非硫酸化酸性粘液但在间皮瘤中出现过量的非硫酸化酸性粘液在动脉粥样硬化损伤早期会增加
杭州昊鑫生物科技股份有限公司
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阿尔新蓝染液（固核红）(pH2.5)
阿尔新蓝染液（Alcian Blue staining solution）
阿尔新蓝染液可对酸性粘液和乙酸粘蛋白进行染色。在正常血管壁上产生一定数量的非
2)对于冰冻切片
PBS 漂洗 2 min。
Hale Waihona Puke 3)对于培养细胞用 4%多聚甲醛固定 10 min 以上；PBS 洗涤 2×2 min。
2. 阿尔新蓝染液
对于上述处理好的样品
1) 将切片置于阿尔新蓝染液(pH2.5)中 30min；
2) 流动的自来水冲洗 2min，蒸馏水漂洗；
3) 用核固红染液复染 5min；
温馨提示
为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，戴手套等。
储存温度
避光储存于室温。
包装清单
货号
品名
包装
HCY128A
阿尔新蓝染液(pH2.5)
100mL
HCY128B
核固红染液
100mL
说明书
1份
1
4) 流动的自来水冲洗 1min，蒸馏水漂洗；
5) 脱水、透明后，用树脂封片剂封片。
结果
粘蛋白类染为亮蓝；核染为红色。
注意事项
1. 需自备 4%多聚甲醛、梯度乙醇、二甲苯，中性树胶或其它封片剂。
2. 进一步鉴定酸性粘蛋白，需要使用其他 pH 值的染液。
3．第一次使用本试剂盒时建议先取 1~2 个样品做预实验。
硫酸化酸性粘液，但在间皮瘤中出现过量的非硫酸化酸性粘液，在动脉粥样硬化损伤早期会

普鲁士蓝染色试剂盒的染色原理

普鲁士蓝染色试剂盒的染色原理
首先，普鲁士蓝是一种阳离子染料，可以与阴离子物质发生结合。

它的颜色为深蓝色，对于电镜染色或组织切片的染色非常适用。

其次，普鲁士蓝染色试剂盒的染色原理与铁离子的还原反应有关。

普鲁士蓝染色试剂盒中包含了还原剂和氧化剂。

还原剂将铁离子还原为两价的铁离子，而氧化剂将两价的铁离子氧化为三价的铁离子。

铁离子在试剂盒中的相互转变过程中，会和普鲁士蓝结合形成普鲁士蓝染料。

这种染料具有很强的颜色稳定性和耐光性。

在实际的染色过程中，首先需要准备待染物样本，通常是细胞切片或组织切片。

然后将待染物样本浸入染色试剂盒中，使其充分浸透。

接着，将样本置于特定条件下进行染色反应。

染色反应的条件通常包括温度、反应时间以及试剂盒中存在的其他化学物质的浓度等。

染色反应进行的时间越长，染色的深度越深。

染色反应进行的温度越高，染色的速度越快。

普鲁士蓝染色试剂盒中的其他化学物质对染色反应的影响也非常重要。

例如，存在过量的铁离子会抑制染色反应的进行，而存在过量的氧化剂会使染色淡化。

最后，染色完成后，需要通过温和洗涤、脱水和固定来清洁和稳定染色结果。

这样可以去除多余的染色物质，使染色结果更加清晰和稳定。

总而言之，普鲁士蓝染色试剂盒的染色原理主要涉及阳离子染料的结合特性，以及铁离子的还原和氧化反应。

这种染色方法适用于电镜染色和组织切片的染色研究中，具有简单、快速、稳定等优点。

核固红染色液(0.2%)

Leagene。

com 北京雷根生物技术有限公司
核固红染色液(0.2%)
简介：
核固红(Nuclear fast red)又称细胞核坚牢红，分子式为C14H8NNaO7S，分子量为357.27，微红至深棕色粉末，溶于乙醇和水。

核固红染色液(0.2%)是由核固红、氧化剂组成，常用于细胞核染色。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、根据实验具体要求操作。

2、一般复染细胞核时间控制在5～10min。

染色结果：细胞核呈不同程度的红色。

相关：编号
名称
DC0096 Storage Nuclear fast red stain(0.2%)100ml RT 避光使用说明书1份
编号名称
DA0059 甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)
DA0072 中性红染色液(1%)
DE0001 碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)
DG0005 糖原PAS染色液
DH0006 苏木素伊红(HE)染色液
PS0013 RIPA裂解液(强)
TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。

钌红染色液

精品文档-可编辑简介：
钌红(R u t h e n i u m R e d)分子式为R u
3O
2
C l
6
.14(N H
3
)，C A S号为
11103-72-3，分子量为786.35，外观为红色晶体，可用做电压敏感的钙离
子通道抑制剂。

L e a g e n e钌红染色液
在植物病虫害组织切品染色中，可将宿主植物组织中菌丝体和孢子染成红色。

本试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：
编号
名称
DM0201 Storage
钌红染色液10ml RT 避光
使用说明书1分
操作步骤(仅供参考)：
1、制备好的切片入钌红染色液中，浸染1-3m i n。

2、对于较难染色的样本，应适当延长染色时间。

染色结果：
注重事项：
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

相关：
菌丝体和孢子红色
编号名称
DB0082改良番红O-固绿软骨染色液
DG0005糖原PAS染色液
DH0006苏木素伊红(HE)染色液
DJ0001普鲁士蓝染色液(核固红法)
DM0002姬姆萨染色液(1:9)
PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)
TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)。

核固红染色液配制及使用方法

北京华越洋生物提供QQ:1733351176
核固红染色液(0.1%)
核固红染色液是组织切片染色中常用的复染液，染色后细胞核呈红色。

本产品为工作液，可直接使用。

染色液可重复使用多次，但染色效果会逐渐降低。

使用方法：
1、切片脱蜡至水，可进行其他染色，染色后蒸馏水洗2-5min。

2、将组织切片浸入核固红染色液，也可以直接滴加到样本上染色5-10分钟(浅染细胞核)，染色时间可根据染色深度做相应调整。

3、自来水中冲洗去除多余的染色液。

4、常规脱水透明，中性树胶封固。

注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净。

2、第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。

3、染色过程推荐浅染，通常能够分辨细胞核即可，颜色过深有可能影响细胞颜色。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产地：国产
提示：本品仅用于科研实验，不能用作医疗及临床诊断。

保存：室温避光保存，有效期至少一年。

关键词：核固红染色液(0.1%)
核固红染色液(0.1%)相关染色产品:
北京华越洋生物提供QQ:1733351176
北京华越洋生物提供QQ:1733351176。

铁染色

红细胞内外铁粒染色一、原理：骨髓细胞外铁及有核红细胞中铁粒与亚铁氰化钾作用后，呈普鲁士兰阳性反应。

二、试剂：1、4%低铁氰化钾25ml（低铁氰化钾1g+蒸馏水25ml配成4%低铁氰化钾）2、4%HCL 25ml。

（+蒸馏水 ml即4％HCL）染色时1、2液混合即可。

3、1%核固红(核固红配制时，用5%硫酸铝溶解)25g硫酸铝+500 ml蒸馏水即5%硫酸铝,1g核固红+100ml5%硫酸铝即1%核固红.三、方法：1、干燥血片或骨髓片，用福尔马林37℃薰蒸固定5分钟水洗(蒸馏水)2、入4%低铁氰化钾盐酸混合液37℃(先预热20分钟)，置入血片或骨髓片40分钟水洗待干3、入1%核固红复染15~20分钟，水洗待干。

(蒸馏水)四、结果判定：铁粒幼细胞：胞质内出现兰色颗粒的幼红细胞。

环铁粒幼细胞：幼红细胞质内的兰色颗粒在6个以上，并围绕于核周排列成环形者。

铁粒红细胞：含有兰色铁颗粒的红细胞。

红细胞外铁：根据铁量的多少以“0”—“++++”表示，正常人一般为“+”—“++”（观察骨髓小粒）“0”：无铁粒可见“+”：有少数铁粒或偶见到铁小珠“++”：有铁粒小珠和少数小块“+++”：有很多的铁粒小珠和少数铁小块“++++”：有很多的铁粒、小珠并有小块红细胞内铁：计数100个有核红细胞，以含铁粒红细胞百分数报告。

正常人一般铁粒幼红细胞占40%，以I、II型为主，无环形铁粒幼红细胞。

“+”仅含1个铁颗粒“++”含2-5个铁颗粒“+++”含6-9个铁颗粒“++++”含10个以上铁颗粒五、临床意义：1.鉴别缺铁性与非缺铁性贫血：缺铁性贫血时，细胞外铁消失，铁粒幼红细胞减少，平均为3%，因此铁染色可作为诊断缺铁性贫血及指导铁剂治疗的重要方法。

2.诊断铁粒幼红细胞性贫血：铁粒幼细胞性贫血时，细胞外铁显著增多（++++），其所含铁颗粒的数目也较多，颗粒也粗大。

因此本染色可作为诊断铁粒幼细胞性贫血的重要方法。

出现较多的环形铁粒幼细胞，可占幼红细胞的15%以上。

普鲁士蓝测定法-定义说明解析

普鲁士蓝测定法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分:普鲁士蓝测定法是一种常用的分析化学方法，用于测定溶液中的亚铁离子（Fe2+）的浓度。

该方法以其简单、快速和准确的特点而被广泛应用于环境监测、化学分析和生物科学研究等领域。

在普鲁士蓝测定法中，普鲁士蓝（Prussian Blue）作为指示剂，通过与亚铁离子形成可见光谱的深蓝色沉淀来进行浓度的测定。

普鲁士蓝是一种由亚铁离子和氰酸根离子所组成的无机化合物，其具有较高的稳定性和灵敏度。

本文旨在全面介绍普鲁士蓝测定法的原理、步骤和应用，并对其进行评价和展望。

首先，我们将详细阐述普鲁士蓝测定法的原理，包括指示剂的选择和反应机理。

随后，我们将介绍该方法的具体步骤，包括样品的处理和浓度计算等。

最后，我们将探讨普鲁士蓝测定法在不同领域的应用，例如环境水质监测和医学诊断等。

通过对该方法的全面分析和综合评价，我们可以更好地了解普鲁士蓝测定法的优势和局限性，并为未来的研究提供一些建议和展望。

综上所述，本文将对普鲁士蓝测定法进行深入的探讨和总结，旨在为读者提供一个关于该方法的全面介绍，并推动其在实际应用中的进一步发展和运用。

1.2 文章结构文章结构部分的内容可以描述普鲁士蓝测定法长文的整体框架和各个部分的内容摘要。

文章结构如下：1. 引言：本部分介绍普鲁士蓝测定法的概述，包括其基本原理、步骤和应用范围。

同时，描述文章的结构和各个部分的内容概要。

2. 正文：2.1 普鲁士蓝测定法的原理：该部分详细解释普鲁士蓝测定法的基本原理，包括反应机理和主要的化学反应过程。

同时，探讨普鲁士蓝与待测物质之间的关系和相互作用。

2.2 普鲁士蓝测定法的步骤：本节介绍普鲁士蓝测定法的具体操作步骤，包括实验所需试剂和仪器设备，以及每个步骤详细的操作流程。

同时，说明每个步骤的目的和原理，并提供实验中可能遇到的注意事项。

2.3 普鲁士蓝测定法的应用：该部分列举普鲁士蓝测定法在不同领域中的应用案例，包括环境分析、化学分析和生物医学研究等。

普鲁士蓝染色试剂盒学习课件.docx

普鲁士蓝染色试剂盒(PERLS STAIN，伊红法)
产品简介：
Perls 普鲁士蓝是非常经典的组织化学反响，是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法，其染色原理为：亚铁氰化钾溶液使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸别离出来，三价铁与亚铁氰化钾反响，生成一种不溶解的蓝色化合物即三价铁的亚铁氰化物普鲁士蓝，所以该反响被称为普鲁士蓝反响。

三价铁的亚铁氰化物是一种很稳定的化合物，在反响后可用红色染色剂进展复染，如核固红、伊红、中性红等。

含铁血黄素〔Hemosiderin〕是一种血红蛋白源性色素，为金黄色或棕黄色颗粒，因其含铁、金黄色，故称为含铁血黄素。

当红细胞被巨噬细胞吞噬后，在溶酶体酶的作用下，血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。

Perls 普鲁士蓝反响〔Prussian blue reaction〕又称为含铁血黄素染色，即经过亚铁氰化钾和稀酸处理后可以产生蓝色，常见于吞噬细胞内会间质内，主要显示三价铁盐。

Perls stain 常用于显示局部组织内各种出血性病变，常见于吞噬细胞内。

在判断含铁血黄素沉积时，用Perls 反响可以得到证实，该染色方法可以很好的区分含铁血黄素和其他色素。

该染色液稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀、应用范围广、可以进展复染。

普鲁士蓝染色试剂盒〔Perls stain，伊红法〕，其复染液采用伊红染色液，也是常用的复染液，该复染液染色时间较核固红染色液要短。

保存：RT避光保存，有效期 1 年。

关键词：普鲁士蓝染色试剂盒(PERLS STAIN，伊红法)
普鲁士蓝染色试剂盒(PERLS STAIN，伊红法)相关染色产品:。

普鲁士蓝染色试剂盒说明书

普鲁士蓝染色试剂盒(Perls stain，核固红法) ----北京华越洋生物GT355-H 含铁血黄素（Hemosiderin）是一种血红蛋白源性色素，为金黄色或棕黄色颗粒，因其含铁、金黄色，故称为含铁血黄素。

当红细胞被巨噬细胞吞噬后，在溶酶体酶的作用下，血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。

Perls stain 常用于显示局部组织内各种出血性病变，常见于吞噬细胞内。

在判断含铁血黄素沉积时，用Perls 反应可以得到证实，该染色方法可以很好的区分含铁血黄素和其他色素。

该染色液稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀、应用范围广、可以进行复染。

该染色液的复染液采用核固红，是最经典、最常用的复染液。

产品洯成：规格2×50ml 2×100ml StoragePerls stain A 25ml 50ml RT避光Perls stain B 25ml 50ml RT临用前，取A1、A2等量混合，即为试剂(A)Perlsstain，不宜提前配制。

试剂(B): 核固红染色液50ml 100ml RT 避光使用说明书 1 份自备材料：1、10%的中性福尔马林2、系列乙醇3、蒸馏水4、4%的多聚甲醛操作步骤（仅供参考）：（一）石蜡切片染色1、组织固定于10%中性福尔马林，常规脱水包埋。

2、切片厚度4um，常规脱蜡至水。

3、蒸馏水水洗1min。

4、切片入Perls stain（见注意事项4），浸染15-30min。

5、蒸馏水充分冲洗2-5min。

6、入核固红染色液，淡染细胞核5-10min。

7、自来水冲洗1-5s。

8、常规脱水透明，中性树胶封固。

（二）冰冻切片染色1、无需脱蜡，直接迅速用蒸馏水冲洗2～3min。

2、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。

（三）细胞染色1、4%多聚甲醛固定10～20min。

2、自来水冲洗2 次，每次2min。

3、蒸馏水冲洗2 次，每次2min。

普鲁士蓝实验报告

一、实验目的1. 了解普鲁士蓝染色的原理和操作步骤。

2. 掌握利用普鲁士蓝染色观察组织中铁元素分布的方法。

3. 提高实验操作技能，培养严谨的科学态度。

二、实验原理普鲁士蓝是一种亚铁氰化铁，具有较强的亲和力，可以与组织中的铁元素结合形成蓝黑色沉淀。

在酸性条件下，切片内的高铁盐与亚铁氰化钾反应生成亚铁氰化铁，进而与组织中的铁元素结合，形成蓝黑色沉淀。

通过显微镜观察，可以观察到组织中铁元素的分布情况。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 人肝组织切片- 亚铁氰化钾- 氯化铁- 核固红染液- 固定液- 20倍样本体积的固定液- 石蜡切片- 冰冻切片- 显微镜2. 实验仪器：- 烧杯- 移液器- 离心机- 显微镜- 显微摄影仪四、实验步骤1. 样本准备：- 将人肝组织切片置于20倍样本体积的固定液中固定24小时以上，常温运输。

- 固定时间不宜过长，以免组织结构变形，切勿冷冻结冰。

- 石蜡切片常温运输，冰冻切片-20℃运输。

2. 染色：- 将固定好的切片置于烧杯中，加入适量的亚铁氰化钾溶液，在室温下进行染色。

- 染色时间约为30分钟。

3. 核固红染色：- 将染色好的切片用蒸馏水冲洗干净。

- 加入核固红染液，室温下进行染色。

- 染色时间约为10分钟。

4. 脱水封片：- 将染色好的切片用无水乙醇进行脱水处理。

- 最后用中性树胶封片。

5. 显微镜观察：- 将封片后的切片置于显微镜载物台上，使用显微镜观察。

- 观察组织中铁元素的分布情况，记录观察结果。

五、结果与分析1. 铁元素、含铁血黄素呈蓝色，细胞核呈红色。

2. 在显微镜下观察，可见肝组织内存在蓝色颗粒，为铁元素、含铁血黄素的沉积。

3. 铁元素主要分布在肝细胞内的线粒体、溶酶体等细胞器中。

六、讨论1. 普鲁士蓝染色是一种简单、快速、灵敏的染色方法，可用于观察组织中铁元素的分布。

2. 实验过程中，固定时间的控制对组织结构的影响较大，应严格按照实验要求进行固定。

3. 染色过程中，亚铁氰化钾和氯化铁的浓度、染色时间等因素会影响染色效果，应进行优化。

蓝色荧光细胞核染色分析试剂盒产品说明书(中文版)

蓝色荧光细胞核染色分析试剂盒产品说明书（中文版）主要用途蓝色荧光细胞核染色分析试剂是一种旨在通过使用荧光染料DAPI与细胞核DNA特异性结合，并发出荧光检测信号，用于分析和观察细胞核形态或DNA含量以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种细胞核（动物、人体、植物、昆虫等）的观察。

产品即到即用，性能稳定，荧光清晰。

技术背景作为细胞DNA染色剂之一的4,6-二咪基－4-联苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole；DAPI）特异性地与DNA双螺旋的凹槽部分发生相互作用，从而与DNA的双链紧密结合。

结合后产生的荧光基团的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好是UV（紫外光）的激发波长356nm，使得DAPI成为一种常用的荧光检测信号，并作为双重染色或重叠染色的主要染色剂之一。

产品内容清理液（Reagent A）毫升固定液（Reagent B）毫升扩张液（Reagent C）毫升染色液（Reagent D）毫升抗淬灭剂（Reagent E）毫升产品说明书1份保存方式保存固定液（Reagent B）、染色液（Reagent D）和抗淬灭剂（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent D）和抗淬灭剂（Reagent E）避免光照；有效保证6月用户自备微型台式离心机：用于悬浮细胞的操作盖玻片：用于染色后封片荧光显微镜：用于观察细胞核DNA染色实验步骤一、贴壁细胞染色1．准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，每孔铺满率达70％（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项6）2．小心抽掉细胞培养液3．小心加入xx微升清理液（Reagent A）4．小心抽掉清理液（Reagent A）5．小心沿着孔壁加入xx微升－20℃预冷的固定液（Reagent B），覆盖培养孔表面6．在4℃冰箱里孵育6分钟7．小心抽掉固定液（Reagent B）8．小心沿着孔壁加入xx微升清理液（Reagent A），覆盖培养孔表面9．在室温下孵育5分钟10．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A）11．小心加入xx微升通透液（Reagent C），覆盖培养孔表面12．在室温下孵育5分钟13．小心抽掉xx微升通透液（Reagent C）14．小心加入xx微升清理液（Reagent A），覆盖培养孔表面15．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A），空气中晾干（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）16．小心加入xx微升染色液（Reagent D），覆盖培养孔表面17．室温下孵育10分钟，避免光照18．小心抽掉xx微升染色液（Reagent D）19．小心加入xx微升清理液（Reagent A），覆盖培养孔表面20．即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核呈现蓝色）二、悬浮细胞染色1．将悬浮细胞（1 X 106细胞）移入到1.5毫升离心管2．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）3．小心抽掉上清液4．小心加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群5．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）6．小心抽掉清理液（Reagent A）7．轻轻指弹，松动细胞颗粒群8．一滴一滴加入xx微升－20℃预冷的固定液（Reagent B），混匀细胞颗粒群9．在4℃冰箱里孵育6分钟10．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）11．小心抽掉固定液（Reagent B）12．小心加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群13．在室温下孵育5分钟14．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）15．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A）16．小心加入xx微升通透液（Reagent C），混匀细胞颗粒群17．在室温下孵育5分钟18．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）19．小心抽掉xx微升通透液（Reagent C）20．小心加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群21．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）22．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A）（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）23．小心加入xx微升染色液（Reagent D），混匀细胞颗粒群24．室温下孵育10分钟，避免光照25．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）26．小心抽掉xx微升染色液（Reagent D）27．小心加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群28．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）29．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A）30．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群31．移出5微升到载玻片上，放上盖玻片32．即刻在荧光显微镜下进行观察：激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核呈现蓝色）三、载玻片染色1．准备1个细胞载玻片2．小心加上xx微升清理液（Reagent A）3．小心抽掉清理液（Reagent A）4．小心加上xx微升－20℃预冷的固定液（Reagent B），覆盖载玻片表面5．在4℃冰箱里孵育6分钟6．小心抽掉固定液（Reagent B）7．小心加上xx微升清理液（Reagent A），覆盖载玻片表面8．在室温下孵育5分钟9．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A）10．小心加上xx微升通透液（Reagent C），覆盖载玻片表面11．在室温下孵育5分钟12．小心抽掉xx微升通透液（Reagent C）13．小心加上xx微升清理液（Reagent A），覆盖载玻片表面14．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A），空气中晾干15．重复实验步骤13至14一次（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）16．小心加上xx微升染色液（Reagent D），覆盖载玻片表面17．室温下孵育10分钟，避免光照18．小心抽掉xx微升染色液（Reagent D）19．小心加上xx微升清理液（Reagent A），覆盖载玻片表面20．小心抽掉xx微升清理液（Reagent A）21．小心加上xx微升抗淬灭液（Reagent E）22．盖上盖玻片23．即刻在荧光显微镜下进行观察：激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核呈现蓝色）注意事项1．本产品为100次（4个24孔培养板）和200次（载玻片）操作规格2．本产品友好使用于双重染色或重叠染色3．染色液（Reagent D）为半通透性染料4．操作时须戴手套5．操作时，避免污染母液6．本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整试剂溶液：7．本产品可用于悬浮细胞或细胞脱离处理后染色8．本公司提供系列细胞核染色分析试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定荧光清晰。

PH0532 Hoechst 33342 PI 双染试剂盒操作手册

PH0532|Hoechst 33342/PI 双染试剂盒（Hoechst 33342/PI Detection Kit ）货号：PH0532规格：100T 存储：4℃保存，有效期一年◆产品简介荧光染料Hoechst 33342能少许进入正常细胞膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst 33342比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA 的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA 结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将Hoechst 33342排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。

而PI 染料是不能进入细胞膜完整的正常细胞和凋亡细胞中，即活细胞对PI 染料拒染，而坏死细胞由于膜完整性在早期即已破损，可被PI 染料染色。

根据这些特性，用Hoechst 33342结合PI 染料对凋亡细胞进行双染色，就可在流式细胞仪上将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。

在双变量流式细胞仪的散点图上，这三群细胞表现分别为：正常细胞为低蓝色/低红色（Hoechst 33342+/PI+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（Hoechst 33342++/PI+），坏死细胞为低蓝色/高红色（Hoechst 33342+/PI++）。

◆注意事项【试剂盒以外需自备仪器和试剂】荧光显微镜或流式细胞仪、低速离心机、微量移液器、1.5mL Microtube 、载玻片、盖玻片1、在红色荧光对兰色荧光散点图上，还可见到细胞凋亡区向细胞坏死区迁移的轨迹，可能是凋亡细胞的DNA 进一步降解的缘故。

试剂组成规格保存Heochst 33342染液1.0mL 4℃，避光Propidium Iodide （PI ）500μL 4℃，避光10×Buffer A 10mL 4℃注：Buffer A 工作液配制用：双蒸水将10×Buffer A 稀释10倍。

普鲁士蓝染色试剂盒（增强型）说明书

普鲁士蓝染色试剂盒（增强型）货号：G1428规格：4×2ml （试用装）/4×10ml/4×20ml 保存：-20℃，避光，有效期6个月产品组成：试剂名称4×2ml 4×10ml 4×20ml 保存试剂(A):Perls 染色工作液试剂(A1):Perls A 液1ml5ml 10ml RT,避光试剂(A2):PerlsB 液1ml 5ml 10ml RT 临用前按照1：1混匀即为Perls 染色工作液。

试剂(B)：孵育工作液试剂(B1):孵育浓缩液0.2ml 1ml 2×1ml 4℃，避光试剂(B2):孵育稀释液 1.8ml 9ml 18ml RT临用前按照1：9混匀即为孵育工作液。

试剂(C)：增强工作液试剂(C1):增强A 液 1.9ml 9.5ml 19ml -20℃，避光试剂(C2):增强B 液0.1ml0.5ml1ml4℃，避光临用前按照19：1的比例混匀即为增强工作液。

试剂(D):复染液2ml 10ml 20ml RT,避光产品说明：Perl's 铁染色法是检测细胞和组织中非血红素铁的常用组织化学方法之一，通过形成蓝色的普鲁士蓝沉淀检测骨髓及肝、脾、肾等组织细胞中的铁离子，然而，对于含铁不丰富的器官，如脑组织，运用此法常常由于蓝色沉淀形成过少而无效。

普鲁士蓝染色试剂盒（增强型）利用级联放大的原理对阳性信号进行了放大显示，适用于含铁较不丰富或铁沉积较少的组织铁染色。

自备材料：恒温箱或水浴锅、湿盒、1*PBS 、蒸馏水操作步骤:(仅供参考)1、组织石蜡包埋切成3-7um 的切片2、切片常规脱蜡复水。

试剂盒从冰箱取出复温20min 至室温（25-30℃），湿盒注水置于37℃恒温箱预热20min 。

3、按照1：1的比例配置Perls 染色工作液，滴加到切片上至完全覆盖组织，置于湿盒内37℃孵育20min 。

4、取出切片，蒸馏水轻轻冲洗三次，每次10s ，按照1：9配置孵育工作液。

PH0532-Hoechst 33342PI 双染试剂盒使用手册

PH0532|Hoechst33342/PI双染试剂盒（Hoechst33342/PI Detection Kit）货号：PH0532规格：100T存储：4℃保存，有效期一年试剂组成规格保存Heochst33342染液 1.0mL4℃，避光Propidium Iodide（PI）500μL4℃，避光10×Buffer A10mL4℃注：Buffer A工作液配制用：双蒸水将10×Buffer A稀释10倍。

◆产品简介荧光染料Hoechst33342能少许进入正常细胞膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst33342比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将Hoechst33342排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。

而PI染料是不能进入细胞膜完整的正常细胞和凋亡细胞中，即活细胞对PI染料拒染，而坏死细胞由于膜完整性在早期即已破损，可被PI染料染色。

根据这些特性，用Hoechst33342结合PI染料对凋亡细胞进行双染色，就可在流式细胞仪上将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。

在双变量流式细胞仪的散点图上，这三群细胞表现分别为：正常细胞为低蓝色/低红色（Hoechst33342+/PI+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（Hoechst33342++/PI+），坏死细胞为低蓝色/高红色（Hoechst33342+/PI++）。

◆注意事项【试剂盒以外需自备仪器和试剂】荧光显微镜或流式细胞仪、低速离心机、微量移液器、1.5mL Microtube、载玻片、盖玻片1、在红色荧光对兰色荧光散点图上，还可见到细胞凋亡区向细胞坏死区迁移的轨迹，可能是凋亡细胞的DNA进一步降解的缘故。

2、用Heochst33342染料与细胞孵育的时间不宜过长，一般控制在20min之内为宜。

核固红染液配制方法

核固红染液配制方法
嘿，朋友们！今天咱就来讲讲核固红染液的配制方法。

这可是个很
重要的事儿呢，就好像厨师要知道怎么调配美味的调料一样。

咱先准备好需要的东西，这就好比要去打仗，得先把武器装备好。

核固红、蒸馏水，这俩可是主角呀！然后呢，咱就开始动手啦。

把一定量的核固红慢慢地放到蒸馏水里，就像给汤加调料一样，不
能一下子倒太多，得慢慢搅拌均匀。

这过程可得细心点儿，就像绣花
一样，不能马虎。

要是不小心倒多了或者搅拌不均匀，那可就麻烦啦，就好比汤的味道怪怪的。

然后呢，继续搅拌呀搅拌，让核固红充分溶解在蒸馏水里。

这时候
你就想象一下，核固红就像小精灵一样，在蒸馏水里欢快地游来游去，最后均匀地分布在每一个角落。

等完全溶解好了，咱这核固红染液可就差不多配制好啦！这就像是
精心烹饪的一道菜终于出炉了。

不过可别高兴得太早，还得检查检查呢，看看浓度合不合适呀，有没有杂质呀。

哎呀，你说这配制核固红染液是不是也挺有意思的？就像做一件艺
术品一样，得用心去雕琢。

而且这可不是随便玩玩的，这关系到后面
的实验效果呢！要是染液没配好，那后面的结果能准确吗？那肯定不
行呀！
所以呀，大家在配制核固红染液的时候一定要认真仔细，不能有一丝马虎。

这就跟盖房子一样，基础不打好，房子能牢固吗？肯定不能呀！咱得保证每一步都做到位，这样才能得到完美的核固红染液。

怎么样，听我这么一说，是不是对核固红染液的配制方法有了更清楚的了解啦？是不是觉得也没那么难啦？哈哈，那就赶紧去试试吧，相信你们一定能配制出超级棒的核固红染液！加油哦！。

普鲁士蓝染色步骤

普鲁士蓝染色步骤
普鲁士蓝染色是一种常用的染色方法，以下是普鲁士蓝染色的步骤：
1. 准备样本：选择需要染色的组织或细胞样本，并进行固定处理，以保持其形态结构和细胞膜完整性。

2. 脱水：将样本在一系列浓度逐渐增加的乙醇溶液中脱水，通常从低浓度的乙醇（例如70%）开始，逐渐升级到较高浓度的乙醇（例如100%）。

3. 渗透：将脱水后的样本置于乙醇溶液中进行渗透处理，以便样本能够更好地与染色剂作用。

常用的渗透试剂包括丙酮和二甲苯。

4. 染色：将渗透后的样本放置于普鲁士蓝染色液中，通常是由硫酸亚铁和稀盐酸混合而成的。

样本需要在染色液中浸泡一段时间，以使普鲁士蓝与样本中的铁离子结合形成可见的蓝色沉淀。

5. 漂洗：将染色后的样本用蒸馏水冲洗，以去除多余的染色剂和盐酸残留。

6. 脱色：在经过漂洗后，可以使用酸性醇溶液脱色样本。

常用的酸性醇溶液包括酸醇溶液（一般为1%醋酸、95%乙醇和蒸馏水的混合物）或者酸性甲醇溶液（一般为1%醋酸和99%甲醇的混合物）。

脱色的时间需根据样本的含铁量进行调整。

7. 脱水：将脱色后的样本在乙醇溶液中进行脱水，与步骤2中的脱水过程类似。

8. 渗透：将脱水后的样本进行渗透处理，与步骤3相同。

9. 封片：将渗透后的样本置于合适的封片介质中，如Canada balsam或普鲁士蓝嵌片胶，然后用封片玻片封住样本。

10. 镜检：将封好的样本镜检放置于显微镜下观察，利用光学显微镜即可看到染色的效果。

以上就是普鲁士蓝染色的步骤，通过这一方法可以对含铁物质进行染色，形成蓝色沉淀，从而观察和研究样本中的铁元素分布情况。